Nghiên cứu mối liên quan giữa nồng độ folat, homocystein huyết thanh và một số đa hình gen MTHFR ở phụ nữ có bất thường sinh sản

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRỊNH THỊ QUẾ NGHI£N CøU MốI LIÊN QUAN GIữA NồNG Độ FOLAT, HOMOCYSTEIN HUYếT THANH Và MộT Số ĐA HìNH GEN MTHFR PHụ Nữ Có BấT THƯờNG SINH SảN LUN N TIN S Y HỌC HÀ NỘI – 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRỊNH THỊ QUẾ NGHI£N CøU MèI LI£N QUAN GI÷A NåNG Độ FOLAT, HOMOCYSTEIN HUYếT THANH Và MộT Số ĐA HìNH GEN MTHFR PHụ Nữ Có BấT THƯờNG SINH SảN Chuyên ngành : Hóa sinh Y học Mã số: 62720112 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Tạ Thành Văn TS Đoàn Thị Kim Phượng HÀ NỘI – 2021 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận án này, trước hết, tơi xin bày tỏ lòng tri ân sâu sắc tới GS TS Tạ Thành Văn, Chủ tịch Hội đồng Trường, Trưởng Bộ môn Hóa sinh Trường Đại học Y Hà Nội TS BS Đồn Thị Kim Phượng, Phó chủ nhiệm Bộ mơn Y sinh học - Di truyền, PGĐ Trung tâm Di truyền lâm sàng hệ gen, Trường Đại học Y Hà Nội, người thầy tận tụy giúp đỡ, động viên hướng dẫn tơi q trình học tập, nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo Sau Đại Học, tồn thể q Thầy Cơ, cán Bộ mơn Hóa Sinh, Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ q trình thực luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến Thầy Cơ, bác sỹ nội trú Bộ môn Y sinh học – Di Truyền, Trường Đại học Y Hà Nội giúp đỡ tơi việc thu thập phân tích mẫu mơn Đồng thời, tơi bày tỏ lịng biết ơn đến Ban Giám Đốc, cán Trung tâm xét nghiệm Bệnh viện đa khoa MEDLATEC hỗ trợ giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Xin gửi lời cảm ơn đến đối tượng tham gia nghiên cứu gia đình họ giúp tơi có số liệu luận án Cuối cùng, xin ghi nhớ cơng ơn sinh thành, ni dưỡng tình u thương bố mẹ ủng hộ, động viên chồng, hai anh chị em gia đình, người ln bên tơi, chỗ dựa vững để yên tâm học tập hoàn thành luận án Xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Học viên Trịnh Thị Quế LỜI CAM ĐOAN Tôi Trịnh Thị Quế, nghiên cứu sinh Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Hóa sinh Y học, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn GS.TS Tạ Thành Văn TS Đồn Thị Kim Phượng Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Tác giả luận án Trịnh Thị Quế DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tên viết tắt Ý nghĩa APC Activated Protein C Protein C hoạt hóa AUC Area Under Cuver Diện tích đường cong BAC Balanced Accuracy Độ xác cân BM Bookmarker informedness Dự đoán cân đối độ nhạy độ đặc hiệu BTSS Bất thường sinh sản CI Confidence Interval Khoảng tin cậy CMIA Chemiluminescent Miễn dịch hóa phát quang Microparticle Immunoassay Cs Cộng Hệ số biến thiên CV Coefficient of Variation FAD Flavin Adenine Dinucleotide Hb Hemoglobin Hct Hematocrit Hcy Homocystein IgF1 Insulin-like Growth Factor -1 Yếu tố tăng trưởng giống Insulin Lox1 Lectin like Oxidized LDL Là acid amin chứa lưu huỳnh Thụ thể LDL-1 bị oxy hóa receptor-1 MCH Mean Corpuscular Lượng Hb trung bình hồng cầu Hemoglobin MCHC Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration Nồng độ Hb trung bình hồng cầu MCP1 Monocyte Chemoattractant Chất gây xơ vữa động mạch Protein MCV Mean Corpuscular Volume Thể tích trung bình hồng cầu MTHFR NCBI Methylenetetrahydrofolate Là enzym tham gia q reductase trình chuyển hóa Hcy National Center for Trung tâm thông tin công nghệ Biotechnology Information sinh học quốc gia Mỹ Nhóm nghiên cứu NNC NPV Negative Predictive Value Giá trị dự đoán âm tính OR Odds Ratio Tỷ suất chênh PKC Protein Kinase C Enzym chuyển hóa Proteine PPV Positive Predictive Value Giá trị dự đốn dương tính ROC Receiver Operating Đồ thị biểu diễn tỷ lệ dương tính Characteristic dựa tỷ lệ dương tính sai ngưỡng khác RPL Recurrent Pregnancy Loss Mất thai tái phát SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn SNP Single Nucleotide Đa hình đơn nucleotide Polymorphisms SPC Speccificity Độ đặc hiệu Tổ chức Y tế giới TCYTTG TGF Transforming Growth Factor Yếu tố thay đổi tăng trưởng TNF Tumor Necrosis Factor Yếu tố hoại tử khối u TPO-Ab Thyroperoxidase Antibodies Kháng thể kháng tuyến giáp TPR True Positive Tỷ lệ dương tính (độ nhạy) Rate (sensitivity) VCAM Vascular Cell Adhesion Phân tử kết dính tế bào mạch máu Molecule Cell MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bất thường sinh sản 1.1.1 Vô sinh 1.1.2 Các bất thường thai sản 1.1.3 Nguyên nhân bất thường sinh sản 1.1.4 Cơ chế liên quan đến bất thường sinh sản 12 1.2 Vai trò homocystein, folat đa hình gen MTHFR 16 1.2.1 Vai trò homocystein 16 1.2.2 Vai trò folat 22 1.2.3 Đa hình gen MTHFR 26 1.3 Các phương pháp định lượng nồng độ homocystein, folat xác định đa hình gen MTHFR 30 1.3.1 Các phương pháp định lượng nồng độ Hcy 30 1.3.2 Các phương pháp xét nghiệm folat 32 1.3.3 Các phương pháp phát đa hình gen MTHFR 33 1.4 Các nghiên cứu mối liên quan homocystein, folat đa hình gen MTHFR 35 1.4.1 Các nghiên cứu mối liên quan nồng độ homocystein, folat huyết đa hình gen MTHFR người khỏe mạnh 35 1.4.2 Các nghiên cứu mối liên quan nồng độ Hcy, folat đa hình gen MTHFR phụ nữ có bất thường sinh sản 36 1.4.3 Các nghiên cứu mối liên quan nồng độ Hcy, folat huyết đa hình gen MTHFR số bệnh lý khác 38 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 2.1 Đối tượng nghiên cứu 40 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn đối tượng nghiên cứu 40 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 40 2.1.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 41 2.2 Phương pháp nghiên cứu 41 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 41 2.2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu 41 2.3 Thu thập mẫu biến số nghiên cứu 44 2.3.1 Các bước tiến hành 44 2.3.2 Biến số nghiên cứu 45 2.4 Trang thiết bị, dụng cụ hóa chất nghiên cứu 46 2.4.1 Trang thiết bị, dụng cụ 46 2.4.2 Hóa chất 46 2.5 Quy trình kỹ thuật 47 2.5.1 Quy trình xét nghiệm Hcy, folat 47 2.5.2 Kiểm soát chất lượng báo cáo kết 48 2.5.3 Phát đa hình gen MTHFR 49 2.6 Xử lý phân tích số liệu 52 2.6.1 Xử lý số liệu 52 2.6.2 Xây dựng ngưỡng cắt tối ưu cho chẩn đoán tăng nồng độ homocystein folat huyết 52 2.7 Xây dựng mơ hình tiên lượng 53 2.8 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 53 2.9 Các biện pháp tránh sai số 54 2.10 Sơ đồ nghiên cứu 54 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 56 3.1 Đặc điểm nhóm đối tượng nghiên cứu 56 3.2 Nồng độ homocystein, folat huyết đa hình gen MTHFR 57 3.2.1 Nồng độ homocystein folat huyết nhóm nghiên cứu 57 3.2.2 Đánh giá đa hình gen MTHFR 57 3.2.3 Đa hình gen MTHFR đối tượng nghiên cứu 65 3.3 Mối tương quan nồng độ Hcy folat huyết theo đa hình gen MTHFR 71 3.3.1 So sánh nồng độ Hcy theo đa hình gen MTHFR 71 3.3.2 So sánh nồng độ folat theo đa hình gen MTHFR 72 3.3.3 Mối tương quan nồng độ Hcy folat với tổ hợp đa hình vị trí C677T A1298C gen MTHFR 72 3.3.4 Mối tương quan nồng độ Hcy folat huyết 74 3.3.5 Đánh giá mơ hình nghiên cứu 75 Chương 4: BÀN LUẬN 88 4.1 Nồng độ folat, homocystein huyết bệnh nhân có tiền sử thai chết lưu tái diễn 90 4.2 Sự liên quan nồng độ folat, homocystein huyết đa hình gen MTHFR bệnh nhân có tiền sử thai chết lưu tái diễn 113 KHUYẾN NGHỊ 126 HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO .127 CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CÓ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 128 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Quy định thai chết lưu số nước Bảng 2.1: Hằng số C liên quan đến sai sót loại I II 42 Bảng 2.2: Ước tính cỡ mẫu theo đa hình gen liên quan đến thai chết lưu tái phát theo mức sai sót loại I II 42 Bảng 2.3: Ước tính cỡ mẫu theo biến thiên homocystein liên quan đến sẩy thai và/hoặc thai chết lưu tương ứng với mức sai sót loại I II 43 Bảng 2.4 Kết tính cỡ mẫu tương ứng cho nhóm với mức α, β 43 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng 49 Bảng 2.6 Chu kì nhiệt phản ứng realtime PCR 49 Bảng 2.7 Trình tự mồi phản ứng sequencing .51 Bảng 2.8 Chu kì nhiệt sequencing 51 Bảng 3.1 Đặc điểm tuổi nhóm nghiên cứu 56 Bảng 3.2 So sánh nồng độ Hcy folat huyết theo tuổi .56 Bảng 3.3 So sánh kết Hcy folat nhóm bệnh nhóm chứng .57 Bảng 3.4 Tỷ lệ xuất alen C T vị trí 677 65 Bảng 3.5 Phân bố kiểu gen MTHFR C677T nhóm nghiên cứu 65 Bảng 3.6 Nguy thai chết lưu tái diễn theo đa hình gen MTHFR vị trí 677 66 Bảng 3.7 Tỷ lệ xuất alen C vị trí 1298 68 Bảng 3.8 Phân bố kiểu gen MTHFR A1298C nhóm nghiên cứu 68 Bảng 3.9 Nguy có bệnh theo đa hình MTHFR vị trí 1298 69 Bảng 3.10 Ảnh hưởng đa hình gen kết hợp vị trí đa hình gen MTHFR 70 Bảng 3.11 Nồng độ Hcy (μmol/L) theo đa hình gen MTHFR 71 Bảng 3.12 Nồng độ folat (ng/mL) theo đa hình gen MTHFR 72 ... 1.4.2 Các nghiên cứu mối liên quan nồng độ Hcy, folat đa hình gen MTHFR phụ nữ có bất thường sinh sản 36 1.4.3 Các nghiên cứu mối liên quan nồng độ Hcy, folat huyết đa hình gen MTHFR số bệnh... nồng độ Hcy, folat đa hình gen MTHFR phụ nữ có bất thường sinh sản Đã có nhiều nghiên cứu mối liên quan nồng độ Hcy, folat huyết đa hình gen MTHFR đối tượng có bất thường sinh sản giới Tuy nhiên... TRỊNH THỊ QUẾ NGHI£N CứU MốI LIÊN QUAN GIữA NồNG Độ FOLAT, HOMOCYSTEIN HUYếT THANH Và MộT Số ĐA HìNH GEN MTHFR PHụ Nữ Có BấT THƯờNG SINH SảN Chuyờn ngnh : Húa sinh Y học Mã số: 62720112 LUẬN ÁN