Phân lâp gen diacylglycerol acyltransferase DGAT mã hóa một enzyme đóng vai trò quan trọng trong sinh tổng hợp triacylglycerol ở loài cây trẩu vernicia montana

LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận này, em xin cảm ơn thầy cô môn Công nghệ Gen Tế bào, Viện Công Nghệ Sinh Học - Trƣờng Đại học Lâm Nghiệp Việt Nam tạo điều kiện tốt giúp em hoàn thành đề tài tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến Ts Bùi Thị Mai Hƣơng ngƣời quan tâm, dìu dắt tận tình hƣớng dẫn em suốt trình làm luận án tốt nghiệp Đƣợc đồng ý Nhà trƣờng, Viện Công nghệ sinh học - Trƣờng Đại học Lâm Nghiệp hƣớng dẫn T.s Bùi Thị Mai Hƣơng, em thực khóa luận tốt nghiệp với đề tài: “Phân lập gen diacylglycerol acyltransferase (DGAT) mã hóa enzyme đóng vai trị quan trọng sinh tổng hợp triacylglycerol loài Trẩu (Vernicia montana)” Đồng thời, xin gửi lời cám ơn tới tất bạn sinh viên lớp K59-CNSH đóng góp ý kiến, giúp đỡ, động viên khuyến khích tơi suốt thời gian học tập thực luận án tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn ! i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG iv DANH MỤC CÁC HÌNH iv ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN I TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1 Giới thiệu Trẩu 1.2 Diacylglycerol acyltransferase (DGAT) nghiên cứu ứng dụng 1.2.1 Giới thiệu diacylglycerol acyltransferase 1.2.2 Những nghiên cứu ứng dụng diacylglycerol acyltransferase PHẦN II MỤC TIÊU, NỘI DUNG, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Mục tiêu 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.3 Đối tƣợng, phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Đối tƣợng nghiên cứu 2.3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.3 Cách tiến hành 10 PHẦN III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 14 3.1 Kết tách chiết ADN tổng số 14 3.2 Kết nhân gen DGAT1 Trẩu nhăn nghiên cứu kỹ thuật PCR…… 14 3.3 Phân tích kết trình tự gen DGAT1 Trẩu nhăn (Vernicia Montana) 16 PHẦN IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 4.1 Kết luận 41 4.2 Kiến nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO ii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Viết đầy đủ Ký hiệu chữ viết tắt DGAT Diacylglycerol acyltransferase g Gram l Lít ml Milliliter mm Millimeter N Nitơ nm Nanometer OD Optical density CTAB Hexadecyltrimet bromide hylammonium SDS Sodium dodecyl sulphate PVP Polyvinyl pyrrolidone iii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần đệm tách A (100ml) Bảng 2.2 Thành phần đệm tách B (100ml) DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1 ADN tổng số Trẩu 14 Hình 3.2 Kết PCR gen đoạn gen DGAT1 Trẩu M: Marker 15 Hình 3.3 Kết PCR đoạn gen DGAT1 Trẩu M: Marker 16 iv ĐẶT VẤN ĐỀ Cải tạo giống trồng công nghệ gen đƣợc coi phƣơng pháp tiên tiến thành công nhiều lồi trồng nơng – lâm nghiệp (Jame, 2006) Tỷ lệ lâm nghiệp biến đổi gen đƣợc trồng giới ngày gia tăng Bằng kỹ thuật chuyển gen nhà nghiên cứu thuộc Biotechnology Foundation Laboratories, ĐH Thomas Jefferson, Hoa Kỳ xác định đƣợc phƣơng pháp làm gia tăng hàm lƣợng dầu thuốc biến đổi gen, cách cho thể gen Arabidopsis thaliana, diacylglycerol acyltransferase (DGAT) DGAT mã hóa enzyme đóng vai trị quan trọng sinh tổng hợp triacylglycerol Chính cải biên làm gia tăng gấp 20 lần hàm lƣợng triacylglyceride tích lũy thuốc Đặc biệt, cải biên gen DGAT làm cho hàm lƣợng dầu tăng 5,8% xét trọng lƣợng khô lá, khoảng lần hàm lƣợng dầu bình thƣờng Một nguồn sản xuất NLSH có giá trị kinh tế Trẩu nhăn (Vernicia montana) chiếm tỷ lệ lớn lƣợng dầu Dầu Trẩu chứa acid béo chủ yếu α-eleostearic (70 – 80%) Đây dạng acid béo chƣa no với nối đơi có khả oxy hố mạnh, nên dầu mau khơ Khi khơ kết thành màng có tính chất chống ẩm chịu đƣợc thời tiết biến đổi cao, sức co giãn tốt, có tác dụng chống gỉ Cho nên dầu Trẩu có vai trị quan trọng chế biến Sơn, keo Ngoài dầu Trẩu đƣợc dùng để pha chế nhiên liệu sinh học, dầu diesel sinh học Xuất phát từ sở trên, tiến hành xây dựng đề tài giai đoạn đầu là: “Phân lập gen diacylglycerol acyltransferase (DGAT1) mã hóa enzyme đóng vai trị quan trọng sinh tổng hợp triacylglycerol loài Trẩu (Vernicia montana)” PHẦN I TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1 Giới thiệu Trẩu  Nguồn gốc Cây Trẩu có tên khoa học là: Vernicia montana Giới : Plantae Bộ : Malpighiales Họ : Euphorbiaceae Chi : Vernicia Loài :Vernicia montana  Đặc điểm sinh học Trẩu hay gọi Trẩu nhăn (danh pháp khoa học: Vernicia montana) lồi mộc địa Đơng Nam Á Hoa Nam Cây trẩu thƣờng mọc vùng đất khô, nƣớc rừng thƣa ven rừng rậm, thƣờng đƣợc trồng nhiều tỉnh phía Bắc tới Nghệ An, Hà Tĩnh để làm cho bóng mát để lấy hạt Thu hái vỏ vào mùa xuân, hạt lấy già Cây trung bình cao 10– 15 m Lá trẩu to dài khoảng 15 cm, rộng 10 cm, có xịe thành ba dẻ, mặt có lơng tơ rậm; mặt dƣới Hoa trẩu đơn tính, sắc trắng, ngả màu đỏ tía Hoa mọc thành chùm, thơm Trái trẩu hình trứng, nhọn đằng chỏm, tròn đằng cuống, lớn khoảng cm Vỏ nhăn nheo, có lơng tơ; mặt vỏ có rãnh dọc ngang Trái trẩu chia thành múi; trẩu chín trái ngả sang màu vàng Mỗi trái thƣờng có ba hạt Hạt trẩu hình bầu dục, sần sùi, dài khoảng 25 mm, rộng khoảng 20 mm Trẩu sinh trƣởng nhanh, điều kiện thích hợp tuổi có cao 4-5m Cây bắt đầu hoa, kết giai đoạn sau 6-7 năm tuổi Mùa hoa tháng 3-5, mùa chín tháng 9-10 Hoa thụ phấn nhờ côn trùng Tuổi thọ khoảng 35-50 năm lâu hơn, tuỳ thuộc điều kiện môi trƣờng sống chế độ canh tác  Thành phần hóa học Nhân chiếm 50-70% trọng lƣợng hạt Hàm lƣợng dầu nhân cao (46 – 65%) Các số lý hoá dầu: Tỷ trọng (ở 15 0C): 0,9208-0,9450; số chiết quang (ở 350C): 1,504-1,517; số iod: 149,5-170,58; số xà phòng: 193,38-196,73; số acid: 1,4 Dầu chứa acid béo chủ yếu axit stearic (70 – 80%) Đây dạng acid béo chƣa no với nối đơi có khả oxy hố mạnh, nên dầu mau khơ Sau ép dầu, khơ bã cịn lại chứa tới 50% protein thô, 7,5% tro, 3% cellulose số hợp chất khác (trong có saponin)  Giá trị sử dụng Dầu trẩu có đặc tính quan trọng mà số dầu khác khơng có tính chịu nhiệt độ cao, chịu nƣớc chịu mặn Chính vậy, ngun liệu q việc chế biến sơn cách nhiệt, sơn trang trí, sơn chống axit, sơn mơi trƣờng có sức phá hủy mạnh kể sơn dùng Quốc phòng Do tính chất đặc biệt cơng dụng lớn nhƣ nêu trên, dầu trẩu sản phẩm có giá trị Trong cơng nghiệp, dầu trẩu đƣợc dùng làm sơn cao cấp, (sơn ô tô, máy bay, tầu thuyền…), sơn cách điện, cách nhiệt, chất dẻo, cao su nhân tạo, xà phòng, da nhân tạo, vải sơn, vải dầu, sơn mỹ thuật, mực in… Khô dầu dùng làm phân bón làm thức ăn gia súc sau khử độc tố Vỏ dùng làm than hoạt tính Gỗ màu trắng, mềm dễ bị mối mọt, nên dùng làm bột giấy làm củi đun Những nghiên cứu gần Đại học Lâm nghiệp cho biết, gỗ trẩu xử lý để sản xuất đồ mộc dạng ván ghép 1.2 Diacylglycerol acyltransferase (DGAT) nghiên cứu ứng dụng 1.2.1 Giới thiệu diacylglycerol acyltransferase Theo số liệu Bộ Nông nghiệp Mỹ, sản lƣợng nhiên liệu sinh học toàn cầu tăng gấp ba lần từ 4,8 tỷ ga lơng (18,16 tỷ lít) năm 2000 lên khoảng 16 tỷ ga lơng (60,56 tỷ lít) năm 2007, nhƣng chiếm chƣa đến 3% lƣợng cung ứng nhiên liệu cho phƣơng tiện giao thơng tồn cầu Thế hệ nhiên liệu sinh học đƣợc chiết xuất từ loại lƣơng thực nhƣ ngơ, mía đậu tƣơng Mặc dù thân thiện với môi trƣờng so với nhiên liệu hóa thạch, nhiên liệu sinh học phải đối mặt với số hậu khơng đƣợc dự tính trƣớc Các tác động bao gồm giá cao thị trƣờng lƣơng thực tồn cầu nhiều diện tích canh tác đƣợc chuyển sang dùng để trồng nhiên liệu để sản xuất lƣơng thực, ngồi cịn có tàn phá rừng Braxin Inđơnêxia để lấy đất trồng nhiên liệu Các nhà khoa học tìm kiếm phƣơng pháp nhằm đẩy mạnh sản lƣợng từ số trồng nhiên liệu sinh học theo cách làm cho sản lƣợng dầu cao Gen DGAT1 mã hóa cho protein định vị màng, có khối lƣợng khoảng 20kDa (Heping Cao.,2011) DGAT mã hóa enzyme đóng vai trị quan trọng sinh tổng hợp triacylglycerol (Cases et al.,1998) DGAT “một mục tiêu đầy hứa hẹn để làm tăng hàm lƣợng dầu axit oleic loại trồng khác nữa” Hình 1: Sơ đồ tổng hợp triacylglycerol Hình 2: Sơ đồ tổng hợp triacylglycerol 1.2.2 Những nghiên cứu ứng dụng diacylglycerol acyltransferase Một nghiên cứu đƣợc ý Các nhà khoa học nơng nghiệp Mỹ xác định đƣợc gen then chốt định hàm lƣợng dầu ngô, phát gây tác động lớn đến ngành công nghiệp nhiên liệu sinh học phát triển nhanh Gen nằm Nhiễm sắc thể gen ngơ, theo cơng trình nghiên cứu đƣợc đăng Tạp chí Nature Genetics Nó mã hóa enzym xúc tác mang tên DGAT1-2, nơi thực bƣớc cuối Query 2935 TTTGACCTTTTACCACATTTTCAACAACTGAGGGGAGGCACATTTTGTCAAGTAA T ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| 2990 | Sbjct 2747 TTTGACCTTTTACCACATTTTCAACAACTGAGGGGAGGCACATTTTGTCAAGTAACTTTT 2806 Query 2991 TTTTGTGATATTTTAGGACAGACC-TTTTCAGTAATTTGAAGATAGGGG-T-TGGGAGGT 3047 |||| | || |||| || ||| || |||| ||||||| || ||||||| | |||||| Sbjct 2807 TTTTTTAATTTTTTGGGCCAGCCCTTTTTTTGTAATTTAAAAATAGGGGGTGGGGGAGGG 2866 Query 3048 GG-TCTTAT-AGGTAGTCAC-TAGAATGTTTTGTTTGTT-CCC-TAACATATGAAGTGC- 3101 || | || | ||| |||| | | ||| ||||| |||| ||| ||| || ||| || Sbjct 2867 GGTTTTTTTAAGGGAGTCCCATGGAAATTTTTGGGTGTTCCCCAAAACTTAGAAAG-GCT 2925 Query 3102 TTTGGTTATCTTAACTTTGTCAAGGGCCTCTAATTCTCTTCTTTG-ATCATTGT-AGCCA 3159 ||||||| |||| | ||||||||||||| ||||| | || |||| | || ||| ||||| Sbjct 2926 TTTGGTTTTCTTGAAATTGTCAAGGGCCTTTAATTTTTTTTTTTGGACCA-TGTAAGCCA 2984 Query 3160 AGTTATCCTCGAACTGCATCCATTCGAAA-GGGTTGGGTGGTTCGTCAATTTGTTAAGTT 3218 |||| ||||||||||||||||||| |||| |||| ||||||||||||||||||| ||||| Sbjct 2985 AGTTTTCCTCGAACTGCATCCATTGGAAAGGGGTGGGGTGGTTCGTCAATTTGTCAAGTT 3044 Query 3219 AATAATATTTACAGGATTCATGGGATTTATCATAGAACAAGTAAGAGAAATCTATGTTCA 3278 ||| |||||| |||||||| ||||||||||||||||||||||||| ||||| |||||||| Sbjct 3045 AAT-ATATTTTCAGGATTCCTGGGATTTATCATAGAACAAGTAAGGGAAATTTATGTTCA 3103 Query 3279 AAACTAGCTTTCCATCTTCTTTTTGCTGTTTTGGGAAATTGGCTCATGCATTTTTGACTT 3338 ||||||||||||| | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| | Sbjct 3104 AAACTAGCTTTCCCTTTTCTTTTTGCTGTTTTGGGAAATTGGCTCATGCATTTTTGACAT 3163 Query 3339 GGTTGTGGGCTTCATCTGCAGTATATCAATCCTATCGTTCAGAATTCACAACATCCTTTA 3398 ||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||| Sbjct 3164 GGTTGTGGGCTTCATCTGCAGTATATCAATCCTATTGTTCAGAATTCACAACATCCTTTA 3223 Query 3399 AAAGGGGATCTCTTATATGCCATTGAGAGGGTTTTGAAGCTCTCAGTTCCGAATTTATAT 3458 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 3224 AAAGGGGATCTCTTATATGCCATTGAGAGGGTTTTGAAGCTCTCAGTTCCGAATTTATAT 3283 Query 3459 GTCTGGCTTTGCATGTTCTACTGCTTTTTTCACCTATGGTGAGTTCAttttttttttttC 3518 29 Query 3519 TCTTTCTAAATCTCATGAAGTACATTTCACCATCTTTTAAATGTTTTCAATGATTGCCAT 3578 |||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 3342 TCTTCCTAAATCTCATGAAGTACATTTCACCATCTTTTAAATGTTTTCAATGATTGCCAT 3401 Query 3579 GAAAGTTGTATTTTTCTTCTGATGTTGCAGAGGTAAATAGTAGACTAA-A -GTTGT-T 3633 |||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||| | ||||| | Sbjct 3402 GAAAGTTGTATTTTTCTTCTGATGTTGCAGAGATAAATAGTAGACTAATAGTTGTTGTAT 3461 Query 3634 GT GAGGTGATAGTGGACTATAGTAGTTGTATTTTTGTTTACCTCATACATTTTATG 3689 || |||||||||||||||||| |||||||||||||| || ||||| ||||||||||| Sbjct 3462 GTCGCAGAGGTGATAGTGGACTATTGTAGTTGTATTTTT-TTCACCTC-TACATTTTATG 3519 Query 3690 TGCAGTTAGTTATTCCGGTAACTTGCTTAGATCACTCAGTGCCATATATTAGGCTGATTT 3749 ||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||| Sbjct 3520 TGCAGTTAGTTATTCTGGTAACTTGCTTAGATCACTCAGTGCCATATATTTGGCTGATTT 3579 Query 3750 TTTAGTTTTATGCGTTTTGGTTATGATGATCGATTGATGTAATAAGTTTTGCAAATCCTT 3809 |||||||||||||||||||| ||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 3580 TTTAGTTTTATGCGTTTTGGCTATAATGATCGATTGATGTAATAAGTTTTGCAAATCCTT 3639 Query 3810 CATTGAATAATGTACTTAATTGACCATTAACCCAAAATGAATTTGCTAGTAAATTTTTTC 3869 ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||| Sbjct 3640 CATTGAATAATGTACTTAATTGACCATTAACCCAAAATGAATTTGCTTGTAAATTTTTTC 3699 Query 3870 TAACCAACAACTCAATTTGAATTGTGTGTGAACTGTGAACCTCTCTGGTTGTGCCGTTGT 3929 || ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 3700 TACCCAACAACTCAATTTGAATTGTGTGTGAACTGTGAACCTCTCTGGTTGTGCCGTTGT 3759 Query 3930 GGGAAATTCATTAGAACTACGCTATTTTGGGATCTTTGTAGAATTTGGTGTAAATTCACT 3989 ||||||||||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||| || Sbjct 3760 GGGAAATTCATTAGAACTATGCTATTTTGGGATCTTTGTAGAATTTGGTGTAAATTCGCT 3819 Query 3990 GTTTATCTAGGAAGAGAGAGAGGAACTATAGGATTAGGTTCATCTCTTATACAAGCTTTG 4049 |||||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 3820 GTTTATATAGGAAGAGAGAGAGGAACTATAGGATTAGGTTCATCTCTTATACAAGCTTTG 3879 Query 4050 ATTCTTTCAACCAAGACACAGTATTTGAGGTGCATTATTGTTGCATATGGAAATGCA - 4106 30 Query 4107 GGTTAAATATACTTGCTGAGCTCCTTCGCTTTGGTGATAG 4146 |||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||| Sbjct 3940 TAGACTAGCACGCATGAATCGGTTAAATATACTTGCTGAGCTCCCTCGCTTTGGTGATAG 3999 Query 4147 AGAGTTCTATAAAGATTGGTGGAATGCAAGGACAGTTGAGGAGGTAAAAGTTTATAATTT 4206 ||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4000 AGAGTTCTATATAGATTGGTGGAATGCAAGGACAGTTGAGGAGGTAAAAGTTTATAATTT 4059 Query 4207 GGGTAGTGTTTTCCTTTGGGCATATCTTTCAACAATCCTTTGCTTATCTCAAATGTAAAT 4266 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4060 GGGTAGTGTTTTCCTTTGGGCATATCTTTCAACAATCCTTTGCTTATCTCAAATGTAAAT 4119 Query 4267 GTTGGCATGCACCTTTGTGGATTTGTGGCTTTCATCAGTATTGGAGAATGTGGAATATGG 4326 ||||||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4120 GTTGGCATGCACCTTTGTGGA -TTCATCAGTATTGGAGAATGTGGAATATGG 4170 Query 4327 TATGTTTCCTTACCTAAAAATAATGCATTTTATTAGTCTTTGC-TCTATGTAGATGATAG 4385 ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||||| | Sbjct 4171 TATGTTTCCTTACCTAAAAATAATGCATTTTATTAGTCTTTGCTTCTATGTAGATGATTG 4230 Query 4386 TTGTATTCATATCTTTGGCTCTTTT-ACTTTATTTTATTTTTGGGGTTGCTG-TTG-TAA 4442 ||||||||||||||||||||||||| || |||||| || ||| ||| ||||| ||| ||| Sbjct 4231 TTGTATTCATATCTTTGGCTCTTTTTAC-TTATTTAATATTTTGGGATGCTGATTGATAA 4289 Query 4443 TATATGTAGCTTGA-TACATCGCATTTTTTCACTGGCATATTCAGATATTAAAATCTTGT 4501 |||||||||||||| || | |||| ||| |||||||||||||| || |||||| ||| || Sbjct 4290 TATATGTAGCTTGAATATACCGCA-TTTATCACTGGCATATTCCGAAATTAAATTCTGGT 4348 Query 4502 TTGAGATATACTACATGCTTGGTTTTTGGAACTGCT-AGTATGAT-CAGCCT-ATGAAAT 4558 | ||| | ||| ||||| ||| ||||| | || || ||| |||| |||||| || ||| Sbjct 4349 TGGAG-TCTAC-ACATGGCTGG-TTTTGAACCT-CTAAGTTTGATCCAGCCTAATTGAAT 4404 Query 4559 TTGGTTTAAGCATCTTTGAAAATGATATATAtttttttAAAATCATGTTTAGCATTTGTC 4618 ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4405 CTGGTTTAAGCATCTTTGAAAATGATATATATTTTTTTAAAATCATGTTTAGCATTTGTC 4464 Query 4619 TTTGGATTAGAGAATAATGTGCTTTACAATGTTTAAATTAAGCTACAATTCCTAAATTTT 4678 31 Query 4679 TGGTAGAATTTTACATTTCTAATAGTGTGGAGTATTCTTTGGGTTGCTTCATTAGGGGGT 4738 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4525 TGGTAGAATTTTACATTTCTAATAGTGTGGAGTATTCTTTGGGTTGCTTCATTAGGGGGT 4584 Query 4739 CAAGTATCCATGTGCATGTGTACAATCATTTACAAGTGTGCTTTTATATAGGTTGTTGAG 4798 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4585 CAAGTATCCATGTGCATGTGTACAATCATTTACAAGTGTGCTTTTATATAGGTTGTTGAG 4644 Query 4799 TTCTAATTGTATTGTCGAATTTGGTGATAATAAATGCCAGATATGCTGGTGTTACAGAAA 4858 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4645 TTCTAATTGTATTGTCGAATTTGGTGATAATAAATGCCAGATATGCTGGTGTTACAGAAA 4704 Query 4859 GAAACATGCATGTACGCATGGCACTCACACACACATATACAAAGGGTTGGTCAATCATGT 4918 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4705 GAAACATGCATGTACGCATGGCACTCACACACACATATACAAAGGGTTGGTCAATCATGT 4764 Query 4919 TACTGATGGAATCCTATTGATTGCAGCCTGTTCATAAGTGGATGGTTCGCCATATCTACT 4978 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4765 TACTGATGGAATCCTATTGATTGCAGCCTGTTCATAAGTGGATGGTTCGCCATATCTACT 4824 Query 4979 TTCCATGCTTGCGGCATAAAATACCAAGGGTAATTCTGCCTCTCACTTCAGAGTTCAATG 5038 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4825 TTCCATGCTTGCGGCATAAAATACCAAGGGTAATTCTGCCTCTCACTTCAGAGTTCAATG 4884 Query 5039 AGTTCTTGATTGTTGCCATGAAACTGATGTTTCCTTTTGATGTATTATTATCTCTGCATT 5098 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4885 AGTTCTTGATTGTTGCCATGAAACTGATGTTTCCTTTTGATGTATTATTATCTCTGCATT 4944 Query 5099 TGTCACCATTTCATAATTTCCTTCCGGTAATCCATGATGGGAGCCTTACTGTGCGCCATA 5158 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 4945 TGTCACCATTTCATAATTTCCTTCCGGTAATCCATGATGGGAGCCTTACTGTGCGCCATA 5004 Query 5159 TACATGCATCAATTAGATTTCAAAATATTCTAAAACCTTGCACAGAGTTTGATGTAGGGC 5218 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5005 TACATGCATCAATTAGATTTCAAAATATTCTAAAACCTTGCACAGAGTTTGATGTAGGGC 5064 Query 5219 GCATGAGAGCTTTCAAAGTTCTGAATTAACAGAGCCTCACTTCTTATTCTATTTAAGTTG 5278 32 Query 5279 GAAAGCAATGGTTTCATCTTAAAATATTCTTTCAAGGGTATTTTCAAGCTTTAAAGGCTG 5338 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5125 GAAAGCAATGGTTTCATCTTAAAATATTCTTTCAAGGGTATTTTCAAGCTTTAAAGGCTG 5184 Query 5339 GAGAATTAGGCTGAAAAGAAGAATGATGTTTCTTACAGTTTAGGGACTGTCGAGGTGTGG 5398 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5185 GAGAATTAGGCTGAAAAGAAGAATGATGTTTCTTACAGTTTAGGGACTGTCGAGGTGTGG 5244 Query 5399 GTAGGATTAAAAGTGATATATACATTTCAAGGGTACATGCAAGTAACTGCTGCCGTTTTG 5458 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5245 GTAGGATTAAAAGTGATATATACATTTCAAGGGTACATGCAAGTAACTGCTGCCGTTTTG 5304 Query 5459 GCAACTGTGAAAGCTATTACAACTAAGAATTGGAAACCGTCTATGATAAATACTGGATGA 5518 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5305 GCAACTGTGAAAGCTATTACAACTAAGAATTGGAAACCGTCTATGATAAATACTGGATGA 5364 Query 5519 TATTTAATTATTTATAAATGTTGCTTTGATAACAACAGTTCTTTTAGTACATCTACATCT 5578 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5365 TATTTAATTATTTATAAATGTTGCTTTGATAACAACAGTTCTTTTAGTACATCTACATCT 5424 Query 5579 GATAAATGTGCCCTGGTGTTGATTTTTACAATGTAAGGCTTTAGATTCCTCGTGAGACGA 5638 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5425 GATAAATGTGCCCTGGTGTTGATTTTTACAATGTAAGGCTTTAGATTCCTCGTGAGACGA 5484 Query 5639 TGATGTTTGTCGTATAAATTaaaaaaaaaaaTGGATAGAAAATAGCAAATATAGCAGTTG 5698 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5485 TGATGTTTGTCGTATAAATTAAAAAAAAAAATGGATAGAAAATAGCAAATATAGCAGTTG 5544 Query 5699 TGTCTGTTGATATTGATTTCAATTCTTTTGAAAAGGTGTTAGGTTGAAGTGTAGGCCTCT 5758 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5545 TGTCTGTTGATATTGATTTCAATTCTTTTGAAAAGGTGTTAGGTTGAAGTGTAGGCCTCT 5604 Query 5759 AGGAGTACGTATGAACCGCTGGTGTCTGAATGACTAGCTTTTATCTGTCATATCCTTAAA 5818 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5605 AGGAGTACGTATGAACCGCTGGTGTCTGAATGACTAGCTTTTATCTGTCATATCCTTAAA 5664 Query 5819 ATTGAACAACCTACATGAATCTTCGAGATTTTGATGACCTGCTTGTTATTTGACCAAACA 5878 33 Query 5879 TGTTCTTGTTGTTTTATATAGTTAAAGTCAACCTTATTACCATCTTTTTGGTTGTCGCTC 5938 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5725 TGTTCTTGTTGTTTTATATAGTTAAAGTCAACCTTATTACCATCTTTTTGGTTGTCGCTC 5784 Query 5939 ACAATTGTTCCATCTTTTCGCAATGATGCAGGGGGTGGCCTTATTAATTACTTTCTTCGT 5998 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5785 ACAATTGTTCCATCTTTTCGCAATGATGCAGGGGGTGGCCTTATTAATTACTTTCTTCGT 5844 Query 5999 TTCAGCAGTATTTCATGAGGTATGGGAGGTTGACTTCTGTGTAGCAATTTTCAGTTGTCC 6058 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5845 TTCAGCAGTATTTCATGAGGTATGGGAGGTTGACTTCTGTGTAGCAATTTTCAGTTGTCC 5904 Query 6059 AGTTTATGATGTCATAGCAACAAGCTGATGTGTTGTTTCATATGTTCATTCTTATGTCCT 6118 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5905 AGTTTATGATGTCATAGCAACAAGCTGATGTGTTGTTTCATATGTTCATTCTTATGTCCT 5964 Query 6119 TGCTGTACAAGAATGAAACTGTTGTTCCAATGCACATACTTCCTGTGAGATGCAACAATA 6178 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 5965 TGCTGTACAAGAATGAAACTGTTGTTCCAATGCACATACTTCCTGTGAGATGCAACAATA 6024 Query 6179 GATTTAGTATTGTCAAGTTTTTCTGTAGGATGTCAGGTGCTGGAGTGACTTATGTTTTGA 6238 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 6025 GATTTAGTATTGTCAAGTTTTTCTGTAGGATGTCAGGTGCTGGAGTGACTTATGTTTTGA 6084 Query 6239 ACTTATTAGAATCAATTTCCATTATGAAACAGGTGGTTTTGCGCAATATCATGCTTGAGA 6298 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 6085 ACTTATTAGAATCAATTTCCATTATGAAACAGGTGGTTTTGCGCAATATCATGCTTGAGA 6144 Query 6299 ATTGCACAAGAATCGTGATAGGATATGGAAAAGCAAGCAACCTTCCTCTGGGAACATTAT 6358 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 6145 ATTGCACAAGAATCGTGATAGGATATGGAAAAGCAAGCAACCTTCCTCTGGGAACATTAT 6204 Query 6359 ACAGTCAACAGCTAATGTTTGTGGATTAATTCAATAGTAGAAATGCTGGCATCTGTCAAT 6418 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 6205 ACAGTCAACAGCTAATGTTTGTGGATTAATTCAATAGTAGAAATGCTGGCATCTGTCAAT 6264 Query 6419 GAAGTGAATTGGTTGGTTATGATGAGGACAAAGAGAAACCCAAATGATGAATTCCCAGTA 6478 34 Query 6479 TTTGTATAATAATTGGCAGGGTTGGTGAGGGTAATGTTTtagaaataagtgaaaagggaa 6538 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 6325 TTTGTATAATAATTGGCAGGGTTGGTGAGGGTAATGTTTTAGAAATAAGTGAAAAGGGAA 6384 Query 6539 aaagcagagtagtagatagatagttaaaagaaaaaaaGATAGTTTGATATGCCTTTACTA 6598 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 6385 AAAGCAGAGTAGTAGATAGATAGTTAAAAGAAAAAAAGATAGTTTGATATGCCTTTACTA 6444 Query 6599 TTTAACATTGTAAAATATTGCATTTGACACTGACAAATGCTAGATGTTAGGATAGAGTGT 6658 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 6445 TTTAACATTGTAAAATATTGCATTTGACACTGACAAATGCTAGATGTTAGGATAGAGTGT 6504 Query 6659 CTTAATGCTGATCTGATTGGATAGCATGGTCATCGCCGCAAACATCAGTTGCAATTGAAA 6718 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 6505 CTTAATGCTGATCTGATTGGATAGCATGGTCATCGCCGCAAACATCAGTTGCAATTGAAA 6564 Query 6719 ATCATCATTTCTCTCACCTAGATTCTCATGCCCATGTCAGAGGGTAAGAAAATGGCTTTT 6778 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 6565 ATCATCATTTCTCTCACCTAGATTCTCATGCCCATGTCAGAGGGTAAGAAAATGGCTTTT 6624 Query 6779 GATTGCATCCTTTTCTGAACATCTCATGGAGAATATGGATCTAAGACAAGGCAACTGAAG 6838 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 6625 GATTGCATCCTTTTCTGAACATCTCATGGAGAATATGGATCTAAGACAAGGCAACTGAAG 6684 Query 6839 GGAAAAACATTTATAAAATGTTTTTAATAGATTGCAGTTATGACTTAGTTGAGATTAGTG 6898 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 6685 GGAAAAACATTTATAAAATGTTTTTAATAGATTGCAGTTATGACTTAGTTGAGATTAGTG 6744 Query 6899 GGTTCAC-ACTCATACCTGCACAGTC-ATGCTTCCAGTCTTCATGGTCAAGACAACTTTG 6956 ||||||| | |||| |||| ||||| | ||| ||||| ||||||||| | |||| |||| Sbjct 6745 GGTTCACCATTCAT-CCTGACCAGTCCAAGCTACCAGT-TTCATGGTCTAAACAAATTTG 6802 Query 6957 TCGAAAATGTATTTTTG-CAATTACT-GT-TATTGCACCTTGT-AG-TTACCT-A-CT-T 7008 | ||||||| ||||| || ||| || ||| |||| ||| || |||||| | || | Sbjct 6803 TACTAAATGTAATTTTGGCACGTACCCGTATATGCCACCATGTGAGGTTACCTTAACTGT 6862 Query 7009 GTATTA-GCATATCATAGAGTGATA-TGCC-TTTTAAG-TTCCTTATATTTAATTATAGT 7064 | |||| |||| | | |||| |||| |||| ||||||| ||||| | |||||| |||||| Sbjct 6863 G-ATTATGCAT-T-ACAGAGGGATAATGCCCTTTTAAGGTTCCTGA-ATTTAAATATAGT 35 6918 Query 7065 TTTTTATTTTGTGCTTGCATTTACAGTTGTGCATTGCTGTTCCTTGCCACATATTCAAGC 7124 ||||| |||| |||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 6919 TTTTTTTTTTTTGCTTGCA-TTACAGTTGTGCATTGCTGTTCCTTGCCACATATTCAAGC 6977 Query 7125 TCTGGGCTTTTATTGGAATAATGTTTCAGGTGATCTATGAAGCAAGTTTATTTTAATTAG 7184 ||||||||||||||||||||||||||||||| |||||| ||| ||||||||||||||||| Sbjct 6978 TCTGGGCTTTTATTGGAATAATGTTTCAGGTAATCTAT-AAG-AAGTTTATTTTAATTAG 7035 Query 7185 AATTTGGGTTCACTGCATGGAGATCCCTAGTTCAAGTCCCACTGGGGTGGGGTAGGGTGG 7244 ||||||||||| ||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||| | |||| Sbjct 7036 AATTTGGGTTC-CTGCATGGAGATCCCAGGTTCAAGTCCCACTGGGGTGGGGTGGAGTGG 7094 Query 7245 GTATGGAGGGACTACCTTCTATTATGTAAGGCTATTGGGACCAGGTCCACCGAGCCTCCT 7304 || ||||||||||||||||||||||||| ||| |||||||| |||||| ||||||||| Sbjct 7095 GTGTGGAGGGACTACCTTCTATTATGTA-GGCCC-TGGGACCATGTCCACTGAGCCTCCT 7152 Query 7305 GTTC-ATGTCGGG -TGTTT-GCTCTAGAGT-GATTGAAGTTATACAGGACATGA 7354 | | || | ||| ||||| |||||||||| |||||||||||| |||||||||| Sbjct 7153 GATAGATTTAGGGGAAAAAATGTTTTGCTCTAGAGTGGATTGAAGTTATGCAGGACATGA 7212 Query 7355 TGTCACTGAAATTTGCTGCTTTCGCTGTTTGAATCAGATTCCTTTGGTCGGGATCACAAA 7414 ||||| ||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 7213 TGTCAATGAAATTTGCTGCTTTCCCTGTTTGAATCAGATTCCTTTGGTCGGGATCACAAA 7272 Query 7415 TTACCTTCAAAACAAGTTCAGAAGCTCAATGGTAAGtttttattttttCACAATTCACAT 7474 ||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 7273 TTACCTTCAAAACAAATTCAGAAGCTCAATGGTAAGTTTTTATTTTTTCACAATTCACAT 7332 Query 7475 CTTATTTCCCAAATTATTTTAGCTTATTTGTCTTTTAAGCATCATTCTTCTGAGACAAAA 7534 ||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||| |||||||||||||| Sbjct 7333 CTTATTTCCCAAATTATTTTAGCTTATTTATCTTTTAAGCATCATACTTCTGAGACAAAA 7392 Query 7535 GTGAACCATAGTGAAATATCATAGAAGAGCAAAGTCGCTGCTAACTGAGCATTAACACTT 7594 |||||||||||||||| |||||||||| |||||||||||||||||||||||||| |||| Sbjct 7393 ATGAACCATAGTGAAATGTCATAGAAGAACAAAGTCGCTGCTAACTGAGCATTAATACTT 7452 Query 7595 ATCAAGGTGGTTTTCTCAACAGTTAGCCAAGAAAGCCTTTGCACACAAAGGCAAAGGCAT 7654 ||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 7453 ATCAAGGTGGTTTTCTCAACAGTTAGCTAAGAAAGCCTTTGCACACAAAGGCAAAGGCAT 36 7512 Query 7655 GGGGCTCAAACCCAGGCTTATAACATATTTAAAGTGTATAGTTCACTGTCTTCACTCTGG 7714 || ||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||| ||||| ||||||||| Sbjct 7513 GGAGCTCAAACCCAGGCTTATAACATATTTGAAGTGTATAGTTCGCTGTCCTCACTCTGG 7572 Query 7715 GAATTCGGCTTAGTCACTATCTATGTCCACCTTTTCGGCTTAGGTTATTCAGTTCCCATG 7774 | ||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||| Sbjct 7573 GGATTTGGCTTAGTCACTATCTATGTCCACCTTTTCGGCTTAGGTTACTCAGTTCCCATG Query 7775 CTCTGTCCCCTTTTTT-AACTTGTG 7632 7798 || ||||||||||||| |||||||| Sbjct 7633 CTGTGTCCCCTTTTTTTAACTTGTG 7657 Nhƣ vậy, từ kết blast nhận đƣợc xác gen DGAT1 Trẩu nhăn Vernicia Montana với hệ số tƣơng đồng 95% so với Trẩu trơn Vernicia fordii (Trên ngân hàng gen quốc tế NCBI) Và trình tự gen DGAT1 Trẩu Vernicia Montana đƣợc thể nhƣ sau: ATGACAATCCCTGAAACGCCGGATAATTCCACGGATGCTACCACCAGTGGCGCTGCTGA GTCCTCTTCCGATCTTAGCCTTTCGCTTCGACGGAGGAGGACTGCTTCCAACTCCGATG GAGCTGTCGCGGAATTGGCTTCCAAGATTGATGAGTTGGAATCTGATGCCGGAGGAGGC CAGGTGATTAAGGATCCGGGAGCAGTAATGGATTCGGGGACTTTGAAAAGTAATGGAAA AGATTGCGGAACCAATAAGGATAGGATTGAAAATCGTGAGAATCGTGGAGGATCGGATG TTAAATTCACGTATCGGCCGTCGGTGCCGGCTCACCGGGCGCTCAAGGAGAGTCCGCTT AGCTCTGATAATATATTTAAACAAGTACGGATTTTTTAAAATAACTTTAATCGCTTCTT ATTATTAGCTGATTAACGCTTGAATTTTCCCATTGAATTGATGCATGGCAATGGGTAGG TAAAAGTTCATCAGGTACTGGTTTCTAAGTGGATTTCTTTGTTAGCTATAAATGAAATT TGTTTAATCTTTTGACTTTTCTTTGTTTTACTTTTAACGGAAGTTTATTTGCATTTGTT TAGATTTTATTTTTGTCTAGTGATTGATTGTACTAAGTTGGTGAAGTTATGGTTTTGGG ACCATTTTATTGATTTTAACCTGTTTTGGGAATCCTTAAATGAACACCTTTGAAAATAA TAACTTGAATTAAGATGGATGCATAATTCTTAATTAATTAGTATTTACATTTTATGTCA GAGTCATGCAGGTCTCTTCAATCTCTGTATAGTAGTGCTTGTAGCGGTTAACAGTCGGC TTATCATTGAAAATATAATGAAGGTTTGTCTTTTCCATTTGCACTTTACACTTCATAGC AATACGGTTGAATGGTGGTTGGTACTTTTTTTTTTTTTTTTTTGGTGGGGTCAGGAAAA AAAAGGCTTAAAATTTAGGGAAAAAAAGGTTTTTGCAAAAGGGTGGGTAAATAAAAACG GGGTTTGGGTTTATTTCAAAATCGTTAAAAAACGGGCCCCTTTTAAGGGGGGGGAAAAA ATACCTTTGGAGTTTTTTTTCTATTCAAAGGGAAAAAAATAAAAAAAAATTTTATTTTT CCAAAGGCGGTTTGAAATTTTTGGGGTCAAAATAAATTTTTGATAGAAAAAAGGCATAG CTTTTGGGGTTTCTGTTGAAGTTTTACCCCCCCAAAATTTTCTATCTAGTTGAGAAGTT GGCCTGTCGGAAGTATATATCTGCACCCGTAAGTGTTCCTTATCCAACTATTTTGTGTA TTTCTAACAGTAGGCTGGCTTACTAAAGAATCTTACGAAAAAAAAATAATTCCAATAAA 37 GATATTGAACTGGTTTGAAATTAACTTCTACTTTGATATTGCAGACTGTTGTTTTTCTT CATATTCTTTTCTCCTCAACAGCAGTTTTATACCCTGTTTCTGTGATTCTCAGGTTTTT TACTTTGCTTTGCATTTTTTTTTATTTTTACTGCAAAATTTAGCCACATATAGCTGTCT GTTTAAAACACTTCAAAATACTGTTGGCATATCTATTTCCTCTTGATTAAATTTCTTTA TTCTATGAAAAAAAAAATATTGAACAGTTGCATTCCACTTCAAAATCACTTAAAGAATG TGTGAAGTATGAGAAATTTGTGTTGAAAGCAAACATTGTTTATAAACACACATTTGGGT CCTGGAATGATTTTTTAATAGGGAATTGAACATCTTGTAAATATTATGGTCAGTAGCCA GAGTGGCCTGCATTCCATAGCTTCTTTTGTGTCCCTCTCTCTGGCATTGCAAATTCTTA AGTTTTGCAAACTTTTCAGTTTGCCTTTCAACATTGGATTTGGCTTCCTTGTCTCCATC TCTCTTCCTCTCTATCTATATGTAGAACGCCAGGAAGATTATGTGATATTAGGTGTTTT GTCTGTTGCTAAATTCCTTTTTTTTTTGAGCATTATGTTAATGGAATATCTTATATTCT GCGGAGTATCATTCTTGTCTTAGTAATCAACAAGGGTGTTAAAATGCTTAATCATTCTT CTTACTGATTTTTGCAGTTGTGAATCTGCTGTTTTGTCCGGTGTCGCATTGATGCTCTT TGCTTGTATCGTGTGGTTGAAATTGGTATCTTATGCACATACAAACTTTGATATGAGAG CAATTGCTAACTCAGTTGATAAGGTACAAAAGTAATTGTTTTGTGAACTCCATTGATGC TTGAAAATGTTCTTCAGTTTTTCTTTACTAGAATTCATATTTTTCCTTGCCCACCCCCA CCCAAGGAATAAATTTCTTCAGCCTGGATGGATTTTTCCATCTGCAACAATCTTTATGA ACAAAATGGCCATCACTCATTCAATGTAGTTCTGCTTGATGGCAGGGAGATGCGCTATC CAATGCTTCGAGTGCAGAGTCCTCTCATGATGTTAGCTTCAAGAGTTTGGTTTATTTCA TGGTTGCTCCCACATTGTGTTACCAGGTAGCTGATCATATTTCTTCCATCGATAAACGG AGAATTTTTGTATTTGCAGTTATTTAAGAATATCAATGCTCATTGGTCATCTTGGCATT ACTTGCTCATGCTGTTTCTTTTAATTTAACTATTTTTGTTTGATACTTATATGCATAAG ATGATTGGCACAATTATTATTCATTCAAAGCTAGTATATTTAAAATTATTAATTTGATT TCTAGCTGTACCTCATGTTTTCTAGCTCATCATTTGACCTTTTACCACATTTTCAACAA CTGAGGGGAGGCACATTTTGTCAAGTAACTTTTTTTTTTAATTTTTTGGGCCAGCCCTT TTTTTGTAATTTAAAAATAGGGGGTGGGGGAGGGGGTTTTTTTAAGGGAGTCCCATGGA AATTTTTGGGTGTTCCCCAAAACTTAGAAAGGCTTTTGGTTTTCTTGAAATTGTCAAGG GCCTTTAATTTTTTTTTTTGGACCATGTAAGCCAAGTTTTCCTCGAACTGCATCCATTG GAAAGGGGTGGGGTGGTTCGTCAATTTGTCAAGTTAATATATTTTCAGGATTCCTGGGA TTTATCATAGAACAAGTAAGGGAAATTTATGTTCAAAACTAGCTTTCCCTTTTCTTTTT GCTGTTTTGGGAAATTGGCTCATGCATTTTTGACATGGTTGTGGGCTTCATCTGCAGTA TATCAATCCTATTGTTCAGAATTCACAACATCCTTTAAAAGGGGATCTCTTATATGCCA TTGAGAGGGTTTTGAAGCTCTCAGTTCCGAATTTATATGTCTGGCTTTGCATGTTCTAC TGCTTTTTTCACCTATGGTGAGTTCATTATTTTTTTCTCTTCCTAAATCTCATGAAGTA CATTTCACCATCTTTTAAATGTTTTCAATGATTGCCATGAAAGTTGTATTTTTCTTCTG ATGTTGCAGAGATAAATAGTAGACTAATAGTTGTTGTATGTCGCAGAGGTGATAGTGGA CTATTGTAGTTGTATTTTTTTCACCTCTACATTTTATGTGCAGTTAGTTATTCTGGTAA CTTGCTTAGATCACTCAGTGCCATATATTTGGCTGATTTTTTAGTTTTATGCGTTTTGG CTATAATGATCGATTGATGTAATAAGTTTTGCAAATCCTTCATTGAATAATGTACTTAA TTGACCATTAACCCAAAATGAATTTGCTTGTAAATTTTTTCTACCCAACAACTCAATTT GAATTGTGTGTGAACTGTGAACCTCTCTGGTTGTGCCGTTGTGGGAAATTCATTAGAAC TATGCTATTTTGGGATCTTTGTAGAATTTGGTGTAAATTCGCTGTTTATATAGGAAGAG AGAGAGGAACTATAGGATTAGGTTCATCTCTTATACAAGCTTTGATTCTTTCAACCAAG 38 GCACAATATTTGAGGTGCATTATTGTTGCATATGGAAATGCAAGATAGACTAGCACGCA TGAATCGGTTAAATATACTTGCTGAGCTCCCTCGCTTTGGTGATAGAGAGTTCTATATA GATTGGTGGAATGCAAGGACAGTTGAGGAGGTAAAAGTTTATAATTTGGGTAGTGTTTT CCTTTGGGCATATCTTTCAACAATCCTTTGCTTATCTCAAATGTAAATGTTGGCATGCA CCTTTGTGGATTCATCAGTATTGGAGAATGTGGAATATGGTATGTTTCCTTACCTAAAA ATAATGCATTTTATTAGTCTTTGCTTCTATGTAGATGATTGTTGTATTCATATCTTTGG CTCTTTTTACTTATTTAATATTTTGGGATGCTGATTGATAATATATGTAGCTTGAATAT ACCGCATTTATCACTGGCATATTCCGAAATTAAATTCTGGTTGGAGTCTACACATGGCT GGTTTTGAACCTCTAAGTTTGATCCAGCCTAATTGAATCTGGTTTAAGCATCTTTGAAA ATGATATATATTTTTTTAAAATCATGTTTAGCATTTGTCTTTGGATTAGAGAATAATGT GCTTTACAATGTTTAAATTAAGCTACAATTCCTAAATTTTTGGTAGAATTTTACATTTC TAATAGTGTGGAGTATTCTTTGGGTTGCTTCATTAGGGGGTCAAGTATCCATGTGCATG TGTACAATCATTTACAAGTGTGCTTTTATATAGGTTGTTGAGTTCTAATTGTATTGTCG AATTTGGTGATAATAAATGCCAGATATGCTGGTGTTACAGAAAGAAACATGCATGTACG CATGGCACTCACACACACATATACAAAGGGTTGGTCAATCATGTTACTGATGGAATCCT ATTGATTGCAGCCTGTTCATAAGTGGATGGTTCGCCATATCTACTTTCCATGCTTGCGG CATAAAATACCAAGGGTAATTCTGCCTCTCACTTCAGAGTTCAATGAGTTCTTGATTGT TGCCATGAAACTGATGTTTCCTTTTGATGTATTATTATCTCTGCATTTGTCACCATTTC ATAATTTCCTTCCGGTAATCCATGATGGGAGCCTTACTGTGCGCCATATACATGCATCA ATTAGATTTCAAAATATTCTAAAACCTTGCACAGAGTTTGATGTAGGGCGCATGAGAGC TTTCAAAGTTCTGAATTAACAGAGCCTCACTTCTTATTCTATTTAAGTTGGAAAGCAAT GGTTTCATCTTAAAATATTCTTTCAAGGGTATTTTCAAGCTTTAAAGGCTGGAGAATTA GGCTGAAAAGAAGAATGATGTTTCTTACAGTTTAGGGACTGTCGAGGTGTGGGTAGGAT TAAAAGTGATATATACATTTCAAGGGTACATGCAAGTAACTGCTGCCGTTTTGGCAACT GTGAAAGCTATTACAACTAAGAATTGGAAACCGTCTATGATAAATACTGGATGATATTT AATTATTTATAAATGTTGCTTTGATAACAACAGTTCTTTTAGTACATCTACATCTGATA AATGTGCCCTGGTGTTGATTTTTACAATGTAAGGCTTTAGATTCCTCGTGAGACGATGA TGTTTGTCGTATAAATTAAAAAAAAAAATGGATAGAAAATAGCAAATATAGCAGTTGTG TCTGTTGATATTGATTTCAATTCTTTTGAAAAGGTGTTAGGTTGAAGTGTAGGCCTCTA GGAGTACGTATGAACCGCTGGTGTCTGAATGACTAGCTTTTATCTGTCATATCCTTAAA ATTGAACAACCTACATGAATCTTCGAGATTTTGATGACCTGCTTGTTATTTGACCAAAC ATGTTCTTGTTGTTTTATATAGTTAAAGTCAACCTTATTACCATCTTTTTGGTTGTCGC TCACAATTGTTCCATCTTTTCGCAATGATGCAGGGGGTGGCCTTATTAATTACTTTCTT CGTTTCAGCAGTATTTCATGAGGTATGGGAGGTTGACTTCTGTGTAGCAATTTTCAGTT GTCCAGTTTATGATGTCATAGCAACAAGCTGATGTGTTGTTTCATATGTTCATTCTTAT GTCCTTGCTGTACAAGAATGAAACTGTTGTTCCAATGCACATACTTCCTGTGAGATGCA ACAATAGATTTAGTATTGTCAAGTTTTTCTGTAGGATGTCAGGTGCTGGAGTGACTTAT GTTTTGAACTTATTAGAATCAATTTCCATTATGAAACAGGTGGTTTTGCGCAATATCAT GCTTGAGAATTGCACAAGAATCGTGATAGGATATGGAAAAGCAAGCAACCTTCCTCTGG GAACATTATACAGTCAACAGCTAATGTTTGTGGATTAATTCAATAGTAGAAATGCTGGC ATCTGTCAATGAAGTGAATTGGTTGGTTATGATGAGGACAAAGAGAAACCCAAATGATG AATTCCCAGTATTTGTATAATAATTGGCAGGGTTGGTGAGGGTAATGTTTTAGAAATAA GTGAAAAGGGAAAAAGCAGAGTAGTAGATAGATAGTTAAAAGAAAAAAAGATAGTTTGA 39 TATGCCTTTACTATTTAACATTGTAAAATATTGCATTTGACACTGACAAATGCTAGATG TTAGGATAGAGTGTCTTAATGCTGATCTGATTGGATAGCATGGTCATCGCCGCAAACAT CAGTTGCAATTGAAAATCATCATTTCTCTCACCTAGATTCTCATGCCCATGTCAGAGGG TAAGAAAATGGCTTTTGATTGCATCCTTTTCTGAACATCTCATGGAGAATATGGATCTA AGACAAGGCAACTGAAGGGAAAAACATTTATAAAATGTTTTTAATAGATTGCAGTTATG ACTTAGTTGAGATTAGTGGGTTCACCATTCATCCTGACCAGTCCAAGCTACCAGTTTCA TGGTCTAAACAAATTTGTACTAAATGTAATTTTGGCACGTACCCGTATATGCCACCATG TGAGGTTACCTTAACTGTGATTATGCATTACAGAGGGATAATGCCCTTTTAAGGTTCCT GAATTTAAATATAGTTTTTTTTTTTTTGCTTGCATTACAGTTGTGCATTGCTGTTCCTT GCCACATATTCAAGCTCTGGGCTTTTATTGGAATAATGTTTCAGGTAATCTATAAGAAG TTTATTTTAATTAGAATTTGGGTTCCTGCATGGAGATCCCAGGTTCAAGTCCCACTGGG GTGGGGTGGAGTGGGTGTGGAGGGACTACCTTCTATTATGTAGGCCCTGGGACCATGTC CACTGAGCCTCCTGATAGATTTAGGGGAAAAAATGTTTTGCTCTAGAGTGGATTGAAGT TATGCAGGACATGATGTCAATGAAATTTGCTGCTTTCCCTGTTTGAATCAGATTCCTTT GGTCGGGATCACAAATTACCTTCAAAACAAATTCAGAAGCTCAATGGTAAGTTTTTATT TTTTCACAATTCACATCTTATTTCCCAAATTATTTTAGCTTATTTATCTTTTAAGCATC ATACTTCTGAGACAAAAATGAACCATAGTGAAATGTCATAGAAGAACAAAGTCGCTGCT AACTGAGCATTAATACTTATCAAGGTGGTTTTCTCAACAGTTAGCTAAGAAAGCCTTTG CACACAAAGGCAAAGGCATGGAGCTCAAACCCAGGCTTATAACATATTTGAAGTGTATA GTTCGCTGTCCTCACTCTGGGGATTTGGCTTAGTCACTATCTATGTCCACCTTTTCGGC TTAGGTTACTCAGTTCCCATGCTGTGTCCCCTTTTTTTAACTTGTGCCGAATTTATATG TCTGGCTTCCACTTTGGTGAAGATACATGGATTCCAGTGAGGGATTCAGCCTGAAAGGG AAGGTGGCATGTCGGTCTTAGCATCAAAGGTCATAGGGTTCTACTCGTCTTGAAAGACC C 40 PHẦN IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận - Đã tách chiết đƣợc ADN tổng số loài Trẩu nhăn Vernicia montana - Nhân thành công gen DGAT1 đoạn gen DGAT1 loài Trẩu nhăn Vernicia montana - Đã thiết kế thành công cặp mồi để nhân gen DGAT1 hai mẫu Trẩu nhăn Vernicia montana - Xác định đƣợc trình tự nucleotide gen DGAT1 loài Trẩu nhăn Vernicia montana 4.2 Kiến nghị - Tiếp tục tiến hành xác định trình tự mARN gen DGAT1 với loài Trẩu nhăn Vernicia Montana để xác định xác đoạn exon intron gen - Đƣa trình tự gen DGAT1 lồi Trẩu nhăn Vernicia montana lên ngân hàng gen Quốc tế để phục vụ nghiên cứu 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng việt Lê Mộng Chân, Lê Thị Huyên (2000) Thực vật rừng, NXB Nông nghiệp Phạm Xuân Hoàn, Triệu Văn Hùng, Phạm Văn Điển, Nguyễn Trung Thành, Võ Đại Hải (2004) Một số vấn đề lâm học nhiệt đới, NXB Nông nghiệp II Tài liệu tiếng anh Bouvier-Nave P, Benveniste P, Oelkers P, Sturley SL, Schaller H (2000) Expression in yeast and tobacco of plant cDNAs encoding acyl CoA:diacylglycerol acyltransferase Eur J Biochem 267:85-96 Cao et al (2011).Structure-Function Analysis of Diacylglycerol Acyltransferase Sequences from 70 Organism BMC Research notes, 4:249 Cases S, Smith S.J, Zheng Y.W, Myers H.M, Lear S.R, Sande E, Novak S, Collins C, Welch CB, Lusis AJ, Erickson SK, Farese RV Jr, (1998) Identification of gene encoding an acyl CoA:diacylglycerol acyltransferase, a key enzyme in triacylglycerol synthesis Proc Natl Acad Sci USA, 95:1301813023 Maud Hinchee & William Rottmann & Lauren Mullinax & Chunsheng Zhzang & Shujun Chang & Michael Cunningham & leslie Pearson & Narender Nehra(2009) Short-rotation woody crops for bioenergy and biofuels applications,In Vitro Cell.Dev.Biol.-Plant, Springerlink.com http://dx.doi.org/10.111/j.1467-7652.2009.00458.x http://www.lamdong.gov.vn Saha S, Enugutti B, Rajakumari S, Rajasekharan R: Cytosolic triacylglycerol biosynthetic pathway in oilseeds (2006) Molecular cloning and expression ofpeanut cytosolic diacylglycerol acyltransferase Plant Physiol 141 :1533-1543 10 Sambrook, J and Russell, D W., (2001) Molecular Cloning, A Laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York 11 Sedjo R A Biotechnology in forestry (2001).Considering the cost and benefits Resour Future 145: 10-12 12 Shockey JM, Gidda SK, Chapital DC, Kuan JC, Dhanoa PK, Bland JM, Rothstein SJ, Mullen RT, Dyer JM (2006) Tung tree DGAT1 and DGAT2 have nonredundant functions in triacylglycerol biosynthesis and are localized to different subdomains of the endoplasmic reticulum Plant Cell 18:2294-2313 13 Smith SJ, Cases S, Jensen DR, Chen HC, Sande E, Tow B, Sanan DA, RaberJ, Eckel RH, Farese RV Jr (2000) Obesity resistance and multiple mechanismsof triglyceride synthesis in mice lacking Dgat Nat Genet 25:87- 90 14.V.M Nieto and J Rodriguez (2003), “Species descriptions” in J.A Vozzo, Tropical Tree Seed Manual: 743 15 Wang H (2006) Preliminary review biotechnologie in forestry, including genetic modification FAO coporate document repository (1),pp 1-12 16 www.tinhdauvietnam.vn 17 Xu J, Francis T, Mietkiewska E, Giblin EM, Barton DL, Zhang Y, Zhang M, Taylor DC (2008) Cloning and characterization of an acyl-CoAdependent diacylglycerol acyltransferase (DGAT1) gene from Tropaeolum majus, and a study of the functional motifs of the DGAT protein using sitedirected mutagenesis to modify enzyme activity and oil content Plant Biotechnol J 6:799-818 18 Zheng P, Allen WB, Roesler K, Williams ME, Zhang S, Li J, Glassman K, Ranch J, Nubel D, Solawetz W, Bhattramakki D, Llaca V, Deschamps S, Zhong GY, Tarczynski MC, Shen B (2008) A phenylalanine in DGAT is a keydeterminant of oil content and composition in maize Nat Genet, 40:367-372 ... lập gen diacylglycerol acyltransferase (DGAT1 ) mã hóa enzyme đóng vai trị quan trọng sinh tổng hợp triacylglycerol loài Trẩu (Vernicia montana) ” PHẦN I TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1 Giới thiệu Trẩu. .. hàm lƣợng dầu thuốc biến đổi gen, cách cho thể gen Arabidopsis thaliana, diacylglycerol acyltransferase (DGAT) DGAT mã hóa enzyme đóng vai trị quan trọng sinh tổng hợp triacylglycerol Chính cải... ADN tổng số loài Trẩu nhăn Vernicia montana - Nhân thành công gen DGAT1 đoạn gen DGAT1 loài Trẩu nhăn Vernicia montana - Đã thiết kế thành công cặp mồi để nhân gen DGAT1 hai mẫu Trẩu nhăn Vernicia