Nghiên cứu trích ly flavonoid và xác định một số đặc tính sinh hóa của dịch chiết lá đu đủ

LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa học 2015-2019 đánh giá khả kết hợp lý thuyết với thực hành, giúp sinh viên củng cố kiến thức đƣợc trang bị vận dụng vào thực tế cách có hiệu Đƣợc trí Trƣờng Đại học Lâm Nghiệp Việt Nam Viện Công nghệ sinh học – Trƣờng Đại học Lâm Nghiệp, tiến hành khóa luận tốt nghiệp “Nghiên cứu trích ly Flavonoid xác định số đặc tính sinh hóa dịch chiết Đu đủ” Trong trình thực hồn thành khóa luận, tơi nhận đƣợc quan tâm, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi Ban giám hiệu Trƣờng đại học Lâm Nghiệp, Viện Công nghệ Sinh học Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến giúp đỡ quý báu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PGS TS Hà Văn Huân ThS Nguyễn Thị Thu Hằng, thầy giáo giáo tận tình hƣớng dẫn, bảo q trình thực tập hồn thành khóa luận Xin gửi lời cảm ơn đến cán Trung tâm Thông tin – Thƣ viện Trƣờng Đại học Lâm Nghiệp cung cấp cho nhiều tài liệu quý báu cần thiết có liên quan đến khóa luận Mặc dù cố gắng khn khổ thời gian kinh nghiệm cịn hạn chế nên khóa luận chắn khơng tránh khỏi nhiều thiếu sót Kính mong nhận đƣợc đóng góp q báu thầy giáo, cô giáo, bạn bè đồng nghiệp để khóa luận đƣợc hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 01 tháng 04 năm 2019 i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH v ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu Đu đủ 1.1.1 Phân loại, nguồn gốc 1.1.2 Phân bố 1.1.3 Đặc tính sinh học Đu đủ 1.1.4 Công dụng Đu đủ y dược 1.2 Các hoạt chất có tác dụng sinh học Đu đủ 1.2.1 Flavonoid 1.2.2 Các hợp chất thuộc nhóm axit hữu 1.2.3 Các hợp chất có hoạt tính sinh học khác 10 1.3 Các nghiên cứu chiết xuất chất có hoạt tính sinh học từ Đu đủ 11 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 11 1.3.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 13 PHẦN MỤC TIÊU, NỘI DUNG, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 15 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 2.3 Vật liệu nghiên cứu 15 2.3.1 Vật liệu thực vật, vi sinh vật 15 2.3.2 Môi trường nuôi cấy vi khuẩn sử dụng nghiên cứu 16 2.3.3 Hóa chất thiết bị 16 2.3.4 Địa điểm bố trí thí nghiệm 17 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 17 2.4.1 Phương pháp luận 17 ii 2.4.2 Phương pháp nghiên cứu cụ thể 17 Phần KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 28 3.1 Kết xác định độ ẩm tạo nguyên liệu bột khô Đu đủ 28 3.2 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng yếu tố công nghệ đến khả trích ly Flavonoid 29 3.2.1 Ảnh hưởng nồng độ Ethanol đến hàm lượng Flavonoid 29 3.2.2 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng Flavonoid 31 3.2.3 Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi Ethanol đến hàm lượng Flavonoid 31 3.2.4 Ảnh hưởng thời gian chiết Ethanol đến hàm lượng Flavonoid 32 3.3 Định tính Flavonoid phản ứng hóa học đặc trƣng 34 3.4 Kết xác định số đặc tính sinh hóa Đu đủ: 35 3.4.1 Xác định hàm lượng axit toàn phần 35 3.4.2 Xác định hàm lượng đường tổng 36 3.4.3 Xác định hàm lượng vitamin C 37 3.5 Kết xác định tính kháng vi sinh vật kiểm định dịch chiết Đu đủ 38 Phần 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 4.1 Kết luận 41 4.2 Kiến nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 PHỤ LỤC 46 iii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Phân loại nguồn gốc Đu đủ Bảng 2.1 Môi trƣờng LB 16 Bảng 3.1 Định tính Flavonoid phản ứng hóa học đặc trƣng 34 Bảng 3.2 Kết xác định hàm lƣợng đƣờng tổng 36 Bảng 3.3 Hoạt tính kháng số chủng vi sinh vật kiểm định dịch chiết Đu đủ 38 iv DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Lá Đu đủ Hình 1.2 Cấu trúc loại Flavonoid Hình 2.1 Các dạng Đu đủ 16 Hình 2.1 Quy trình chiết xuất flavonoid tồn phần 19 Hình 2.2 Đồ thị đƣờng chuẩn glucose 24 Hình 3.1 Độ ẩm Đu đủ 28 Hình 3.2 Bột khơ Đu đủ 29 Hình 3.3 Ảnh hƣởng nồng độ Ethanol hàm lƣợng Flavonoid 30 Hình 3.4 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến hiệu suất trích ly Flavonoid 31 Hình 3.5 Ảnh hƣởng tỷ lệ nguyên liệu/ dung mơi Ethanol đến hiệu suất trích ly Flavonoid 32 Hình 3.6 Ảnh hƣởng thời gian chiết Ethanol đến hiệu suất trích ly Flavonoid 33 Hình 3.7 Định tính Flavonoid chiết xuất từ Đu đủ 34 Hình 3.8 Hàm lƣợng axit tồn phần Đu đủ 35 Hình 3.9 Xác định hàm lƣợng đƣờng tổng 36 Hình 3.10 Hàm lƣợng vitamin C đu đủ 37 Hình 3.11 Hoạt tính kháng số chủng vi sinh vật kiểm định dịch chiết Đu đủ 39 v ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Đu đủ (Carica papaya Linn) loại ăn đƣợc trồng nƣớc vùng nhiệt đới Lá Đu đủ đƣợc chứng minh có khả chống oxy hóa mạnh, có hoạt tính kháng khuẩn tốt Ngồi ra, Đu đủ cịn có khả kháng viêm, giảm đau Dịch chiết Đu đủ có tác dụng ức chế số dòng tế bào ung thƣ ngƣời nhƣ ung thƣ dày, ung thƣ phổi, ung thƣ máu, điều hòa miễn dịch Ở Việt Nam, Đu đủ trồng nhiều tỉnh đồng bằng, dọc theo sông, loại đất phù sa Các tỉnh trồng nhiều đu đủ nhƣ: Hà Nội, Hƣng Yên, Hà Nam, Vĩnh Phúc, Tiền Giang, Cần Thơ, tỉnh Tây Nguyên,… Diện tích trồng đu đủ nƣớc khoảng 10000 – 17000 hecta với sản lƣợng khoảng 200 – 350 nghìn Đu đủ loại dễ trồng, sớm, suất cao, đa tác dụng: thân, lá, đƣợc sử dụng cho nhiều mục đích khác Ngồi việc lấy tƣơi, dùng làm nguyên liệu cho chế biến, Đu đủ đƣợc trồng để lấy nhựa, dùng làm thức ăn chăn nuôi Trong dân gian đu đủ đƣợc sử dụng để sát khuẩn, kháng nấm, kháng viêm, chữa sốt rét, trừ giun sán,…Đã có nhiều cơng trình nghiên cứu hoạt tính sinh học đu đủ khẳng định Đu đủ có khả chống oxy hóa mạnh Là hoạt tính chống oxy hóa tác dụng hợp chất thuộc nhóm phenol Bên cạnh Đu đủ có hoạt tính kháng khuẩn tốt, phổ kháng rộng (kháng nhiều loại vi khuẩn gram âm, gram dƣơng, loại nấm) Ngồi ra, Đu đủ cịn có khả kháng viêm, giảm đau Đặc biệt, ngƣời dân Việt Nam thƣờng sử dụng Đu đủ để ức chế phát triển tế bào ung thƣ Một số hoạt chất có tác dụng chống oxi hố, kháng viêm Đu đủ Flavonoid Flavonoid nhóm hợp chất đƣợc gọi “những ngƣời thợ sửa chữa sinh hóa thiên nhiên” nhờ vào khả sửa chữa phản ứng thể chống lại hợp chất khác dị ứng nguyên, virus chất sinh ung thƣ Việt Nam đƣợc đánh giá nƣớc đứng thứ 16 giới phong phú đa dạng sinh vật Điều góp phần khơng nhỏ cho phát triển ngành y học cổ truyền nƣớc ta, bên cạnh đóng góp vai trị lớn ngành y học đại Hiện nhà khoa học quan tâm đến hợp chất có hoạt tính sinh học thực vật Do đó, tơi lựa chọn Đu đủ làm nguyên liệu cho đề tài: “Nghiên cứu trích ly Flavonoid xác định số đặc tính sinh hóa dịch chiết Đu đủ” Bên cạnh đó, để làm rõ khác biệt hàm lƣợng chất có hoạt tính sinh học ba loại Đu đủ (non, bánh tẻ, già), vật liệu thực vật đƣợc sử dụng khoá luận ba loại Đu đủ thời kỳ phát triển khác PHẦN TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu Đu đủ Họ Đu đủ (Caricaceae) giới gồm có chi 45 loài, phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới [2] Ở Việt Nam có chi loài chi Carica, loài Carica papaya Linn Một số giống Đu đủ đƣợc trồng Việt Nam bao gồm: giống đu đủ ta, đu đủ Mẽico, So Lo, Trung Quốc, Thái Lan, Đài Loan Tại Hà Nội, có giống Đu đủ Đài Loan đƣợc trồng rải rác nhiều huyện: Gia Lâm, Đơng Anh, Sóc Sơn, Thạch Thất,… Đu đủ thƣờng đƣợc biết đến với giá trị thực phẩm dinh dƣỡng tồn giới Các tính chất Đu đủ phận khác tiếng hệ thống y học cổ truyền Trong thời gian vài thập kỷ qua đạt đƣợc tiến đáng kể hoạt động sinh học dƣợc liệu áp dụng đu đủ Hiện Đu đủ đƣợc coi ăn dinh dƣỡng có giá trị Đu đủ có dƣợc tính điều trị bệnh khác Các phận khác Đu đủ bao gồm lá, hạt, mủ trƣng bày có giá trị dƣợc liệu Thân, Đu đủ chứa nhiều mủ Mủ từ đu đủ chƣa chín có chứa enzyme papain chymopapain 1.1.1 Phân loại, nguồn gốc Bảng 1.1 Phân loại nguồn gốc Đu đủ Thực vật (Plantae) Giới (regnum) Nhánh Angiospermae Nhánh Eudicots Nhánh Rosids Bộ (ordo) Brassicales Họ (familia) Caricaceae Chi (genus) Carica Loài (species) C papaya Chi Đu đủ (Carica) có lồi Đu đủ (Carica papaya) thuộc Họ đu đủ (Caricaceae hay Papayaceae) Loài có nguồn gốc vùng nhiệt đới Châu Mỹ Đây thân thảo to, khơng có nhánh, cao từ 3–10 m Lá to hình chân vịt, cuống dài, đƣờng kính 50–70 cm, có khoảng khía Hoa trắng hay xanh, đài nhỏ, vành to năm cánh Quả Đu đủ to trịn, dài, chín mềm, hạt màu nâu đen tùy loại giống, có nhiều hạt [38] 1.1.2 Phân bố Cây Đu đủ đƣợc trồng lần Mexico có xuất văn minh cổ điển Trung Mỹ Hiện đu đủ loài ăn nhiệt đới đƣợc trồng rộng rải Miền Nam Hoa Kỳ (Floria US Virgin Islands), Mexico, nƣớc Trung Mỹ, nƣớc Nam Mỹ, Châu Phi, Châu Á, Châu Đại Dƣơng tiểu bang Hawaii Mỹ Năm 1526, nhà báo Oviedo ngƣời Tây Ban Nha lần mô tả Đủ đu bờ biển nƣớc Panama Colombia Từ ngƣời Tây Ban Nha giới thiệu loài đến Châu Phi, Châu Á Châu Úc Cây đu đủ du nhập vào Việt Nam qua Philiippines [3, 24] Ở Việt Nam có hai giống Đu đủ nội địa truyền thống giống Đu đủ thịt đỏ giống Đu đủ thịt vàng Hiện có nhiều giống đƣợc lai tạo nhập nội chủ yếu giống Đu đủ lai F1 với suất, sản lƣợng chất lƣợng cao với nhiều màu sắc thị khác nhƣ đỏ, vàng, tím… Đu đủ loại ăn nhiệt đới dễ trồng, có suất cao phẩm chất ngon nên đƣợc nhiều nƣớc khai thác để cung cấp tƣơi làm nguyên liệu chế biến sản phẩm trái cơng nghiệp 1.1.3 Đặc tính sinh học Đu đủ Đu đủ đơn, mọc thành chùm thân Lá lớn có cuống dài phiến rộng 30 – 60 cm, mỏng, mềm, chia thành – 11 thùy thùy chia làm nhiều thùy nhỏ Lá đu đủ dễ bị gãy, rách Hình 1.1 Lá Đu đủ 1.1.4 Công dụng Đu đủ y dược Lá Đu đủ non có tác dụng tốt cho ngƣời bệnh tim: Lá Đu đủ chứa chất Alkaloid gọi carpaine thay đƣợc chất digitalin trị bệnh tim Dịch chiết Đu đủ điều trị bệnh sốt xuất huyết có hiệu quả: Từ năm 2002 bệnh sốt xuất huyết thƣờng bệnh số xuất huyết Dengue hoành hành mạnh Malaysia, năm có 20.000 ngƣời bị nhiễm bệnh Trong điều trị bệnh sốt xuất huyết Tây y theo cách truyền thống truyền nƣớc truyền máu kết hợp với điều trị hỗ trợ quản lý nhiễm trùng bệnh nhân điều trị theo cách thƣờng khơng có hiệu cao Chữa tiêu chảy: Các enzyme Đu đủ giúp bảo vệ tồn hệ thống tiêu hóa từ miệng đến đại tràng, làm giảm axit hình thành ruột Giảm sƣng sốt xuất huyết: Các Đu đủ có chứa enzyme giúp giảm sƣng thể, nhƣ đau cúm liên quan đến sốt virus dengue Giải vấn đề không dung nạp gluten: Lá Đu đủ giúp thể phân hủy protein gluten tiêu hóa tốt Chống ung thƣ: Các chất chống oxy hóa Đu đủ vơ hữu ích việc giúp thể chống lại bệnh nhƣ ung thƣ mà không gây phản ứng phụ [29] Loại bỏ triệu chứng thèm đƣờng: Thèm đƣờng vấn đề nghiêm trọng, gây tác hại nghiêm trọng ảnh hƣởng đến sức khỏe Tiêu thụ Đu đủ nhƣ loại trà làm cho bạn đẩy lùi thèm ăn loại thực phẩm có nhiều carbohydrate đủ thời kỳ phát triển khác khác Trong hàm lƣợng vitamin C bánh tẻ cao (54,912 mg/100g) , lƣợng vitamin C non thấp 40,995mg/100g già 46,42mg/100g Nhƣ vậy, nồng độ vitamin C đu đủ cao Vitamin thành phần quan trọng, cần thiết cho phát triển, trì thực hoạt động chức thể ngƣời Tuy nhiên, vitamin đƣợc tổng hợp chủ yếu thể thực vật vi sinh vật, ngƣời động vật hầu nhƣ tự tổng hợp đƣợc vitamin Nhu cầu vitamin thể nhƣng thiết phải đƣợc cung cấp đầy đủ thức ăn có từ động vật, thực vật, vi sinh vật thiếu vitamin ngƣời động vật mắc bệnh 3.5 Kết xác định tính kháng vi sinh vật kiểm định dịch chiết Đu đủ Trong dân gian, Đu đủ thƣờng đƣợc sử dụng để chữa số bệnh viêm da địa, đau dày, tàn nhang,…đây bệnh liên quan tới chủng vi khuẩn có khả gây viêm nhiễm bên bên thể Tiến hành kiểm tra hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết Đu đủ chiết xuất từ Đu đủ nồng độ 50mg/ml 5mg/ml chủng vi sinh vật kiểm định Kết nhận đƣợc cho thấy dịch chiết Đu đủ có hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cao Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định Đu đủ hiệu với vi khuẩn Hoạt tính kháng thấp với vi khuẩn E.coli Salmonella Hoạt tính kháng cao vi khuẩn Bacillus cereus Shigella Bảng 3.3 Hoạt tính kháng số chủng vi sinh vật kiểm định dịch chiết Đu đủ Vi khuẩn Bacillus cereus Đƣờng kính vịng kháng (cm) 2,8 ± 0,037 Vi khuẩn E.coli 1,5 ± 0,012 Vi khuẩn Salmonella 1,6 ± 0,034 Vi khuẩn Shigella 2,6 ± 0,044 Chủng vi sinh vật 38 A B h C Lá non (2,6cm) D Hình 3.11 Hoạt tính kháng số chủng vi sinh vật kiểm định dịch chiết Đu đủ A: Đƣờng kính vịng kháng vi khuẩn Bacillus cereus B: Đƣờng kính vịng kháng vi khuẩn E.coli C: Đƣờng kính vịng kháng vi khuẩn Salmonella D: Đƣờng kính vịng kháng vi khuẩn Shigella 39 Qua Bảng 3.3 Hình 3.11, hoạt tính kháng số chủng hợp chất Flavonoid tƣơng đối cao, hàm lƣợng Flavonoid nhƣng tính kháng khác chủng vi sinh vật cụ thể: tính kháng thấp vi khuẩn E coli với đƣờng kính vịng kháng 1,5cm vi khuẩn Samonella với đƣờng kính vịng kháng 1,2cm Tính kháng cao vi khuẩn Bacillus cereus có đƣờng kính 2,8 cm vi khuẩn Shigella với đƣờng kính vịng kháng 2,6 cm 40 Phần 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận - Đã xác định đƣợc độ ẩm trung bình Đu đủ giai đoạn phát triển khác nhau: non 84,58%; bánh tẻ 79,62% già 75,023% - Đã tối ƣu đƣợc trình trích ly Flavonoid Đu đủ Khảo sát ảnh hƣởng yếu tố cơng nghệ đến q trình trích ly Flavonoid, kết xác định đƣợc nồng độ ethanol 90%, tỷ lệ NL/DM =1/15, nhiệt độ 60oC thời gian 36h điều kiện tối ƣu để trích ly Flavonoid từ Đu đủ - Đã xác định đƣợc hàm lƣợng axit toàn phần Đu đủ, hàm lƣợng axit tồn phần trung bình non 0,461%; bánh tẻ 0,6% già 0,328% - Đã xác định đƣợc hàm lƣợng đƣờng tổng trung bình non 1,867 ±0,21; bánh tẻ 2,586 ± 0,292; già 2,908 ± 0,154 - Đã xác định đƣợc hàm lƣợng vitamin C theo thời kỳ phát triển Đu đủ khác nhau: Lá non hàm lƣợng vitamin C thấp (40,995mg/100g), hàm lƣợng vitamin C bánh tẻ cao (54,912 mg/100g), già 46,42mg/100g - Đã xác định đƣợc hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định dịch chiết Đu đủ: Khả kháng vi sinh vật kiểm định dịch chiết Đu đủ thể với đƣờng kính vòng kháng vi sinh vật cao, ức chế sinh trƣởng vi khuẩn E.coli, Salmonella, Bacillus cereus Shigella 4.2 Kiến nghị Tiếp tục xác định thêm vitamin A, E,… Nghiên cứu sử dụng thêm phƣơng pháp trích ly khác nhƣ phƣơng pháp hầm hay ngấm kiệt siêu âm để q trình trích ly thu nhận Flavonoid từ Đu đủ đạt hiệu cao 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO I TIẾNG ANH Ali, Essa, MM & Rahman, MS 2012, Nutritional and medicinal values of papaya (Carica papaya L.) in Natural Products and Their Active Compounds on Disease Prevention Nova Science Publishers, Inc., pp 307-324 Aravind G, Debjit Bhowmik, Duraivel S., Harish G (2013) “Traditional use and healing of papaya” Journal of Medicinal Plants Research, vol Morton J (1987) “Papaya” p 336–346 Fruits of warm climates Tajul AY, Boshra V, (2013), “Papaya - An Innovative Raw Material for Food and Pharmaceutical Processing Industry” Health and the Environment Journal, Vol 4, No.1 Ayoola GA, Coker HAB, Adesegun SA, Adepoju-Bello AA, Obaweya K., Ezennia EC, Atangbayila (2008) “Phytochemical screening and Antioxidant activity of selected medicinal plants used for the treatment of malaria in southwest Nigeria” Tropical Journal of Pharmaceutical Research, (3) Aysun Ozkan, Hamide gubbuk, Gunes Esma, Ayse Erdogan (2011) “The Antioxidant capacity of different papaya fruit juices (Carica papaya L.) was grown under greenhouse conditions in Turkey” Turkish Journal of Biology, 619-625 Dai J, R J Mumper, “Plant Phenolics: Extraction Analysis and Their Antioxidant and Anticancer Properties” Molecules 2010.15: p 7313-7352 Grotewold E, (2006)” The Science of Flavonoids” New York: Springer Science Business Media Inc Higdon, Jane, Ph.D (2006) “Vitamin C” Đại học bang Oregon, Trung tâm thông tin vi dinh dƣỡng 10 Ikeyi Adachukwu P, Ann O, Eze Faith U, (2013), “phytochemical analysis of paw-paw (carica papaya) leaves”, International journal of life science biotechnology and pharma research, Vol 2, No 11 Indranil Bhattacharjee, Soroj Kumar Chattarjee, Anupam Ghosh, Goutam Chandra (2011) “Antimicrobial activity of some plant extracts used in traditional Indian folk medicine” Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 165-169 12 J B Harborne and C.A.Williams, (2000) “Review: Advances in flavonoid research since 1992” Phytochemistry 55: p 481 -504 13 Kalpna Rakholiya, Sumitra Chanda (2012) “Invitro interaction of certain antimicrobial agents in combination with plant extracts against some strains of pathogenic bacteria” Asia Pacific Tropical Medicine Journal, 876-880 14 Maisarah AM, Nurul Amira B., Asmah R Fauziah O (2013) “Antioxidant analysis of different parts of Carica papaya” Journal of International Food Research, 20 (3), 1043-1048 15 McCully KS (1998) “Homocysteine, folate, vitamin B6, and cardiovascular disease” The Journal of the American Medical Association 279:392-3 16 Mohamad F M Bukhori, A N Rahman, N Khalid, A H Rashid, and M M Diah, “The Supercritical fluid extraction of alkaloids from papaya (Carica papaya L var Eksotika) leaves” Borneo Journal of Resource Science & Technology 4(2), pp 35– 49, 2014 17 Moses Alo, Ukpai Agwu Eze, Chukwudi Anyim (2012) “Invitro antimicrobial activity of indica magnifera extract, papaya and guava leaves on salmonella typhi isolated” World Journal of Public Health, (1): 18 “Niacin” PubChem Public Chemical Database” The PubChem Project USA: National Center for Biotechnology Information 19 Noriko Otsuki, Nam H Đằng, Emi Kumagai, Akira Kondo, Satoshi Iwata, Chikao Morimoto (2010) “Carica juice extract of papaya leaves exhibited anti- tumor activity and immune efects” Journal of Ethnopharmacology 127, 760- 767 20 Okunola A, Alabi, Muyideen T Haruna, Chinedu P Anokwuru, Tomisin Jegede, Harrison Abia, Victor U Okegbe Babatunde E ESAN (2012) “Comparative study on antimicrobial properties of fresh and dried leaf extract of Carica papaya L on bacterial and clinical fungal íolation” Advances in Applied Research Science (5), 3107-3114 21 “Pantothenic Acid” Linus Pauling Institute at Oregon State University Micronutrient Information Center 22 Peterson J J, Beecher G R, Bhagwat S A, Dwyer J T, Gebhardt S E, Haytowitz D B, “Flavanones in grapefruit, lemons, and limes: A compilation and review of the data from the analytical literature” Journal of Food Composition and Analysis, 2006, 19, 74–80 23 Re R, Pellegrini N, Proteggente A, Pannala A, Yang M, Rice Evans, “Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization asay” Free radical biology and medicine 1999 26: p.1231 – 1237 24 Rehman Z U (2006) “Citrus peel extract – A natural source of antioxidant” Food Chemistry, 99, 450–454 25 Richards, Oscar W (1938) “The Stimulation of Yeast Proliferation By Pantothenic Acid” (PDF) Journal of Biological Chemistry 113 (2): 531–536 26 Segovia R G, (2008) “Effect of the flavonoid quercetin on inflammation and lipid peroxidation induced by Helicobacter pylori in gastric mucosa of guinea pig” Journal of Gastroenterol 43: p 441-447 27 Suresh K, Deepa P, Harisaranraj R Vaira Achudhan V (2008) “Antimicrobial and Phytochemical Investigation of the Leaves of Carica papaya L, Cynodon dactylon (L.) Pers, Euphorbia hirta L, Melia azedarach L and Psidium guajava L.” Ethnobotanical Leaflets 12: 1184-1191 28 Swain J, Goldstein J L (1963), “Methods in polyphenol chemistry” Proceedings of the plant phenolics group symposium, Oxford 29 Thảo TT Nguyễn, Paul N Shaw, Marie-Odile PARAT Amitha K Hewavitharana (2013) “Carica's anti-cancer activity” Molecular Nutrition & Food Research 153-164 II TIẾNG VIỆT 30 Lại Thị Ngọc Hà, Vũ Thị Thƣ (2009) “Stress oxi hóa chất chống oxi hóa tự nhiên” Tạp chí Khoa học Phát triển 31 Trần Thanh Hà, Trịnh Thị Điệp (2012) “Cycloratane triterpene initial phân lập từ Đu đủ (Carica papaya L.)” Tạp chí Hóa học, tập 50 (4A), 166169 32 Nguyễn Quốc Khang, Hà Thị Thanh Bình (1999) “Góp phần nghiên cứu số hoạt tính sinh học flavonoid Đu đủ (Carica papaya L.)” Tạp chí Dược học, số 6, 15-17 33 Phạm Kim Mãn (2001) “Nghiên cứu thuốc Panacrin ức chế u đƣợc dùng điều trị ung thƣ” Tạp chí Dƣợc liệu, 6, 58-62 34 Đỗ Thị Thảo (2006) “Nghiên cứu khả phòng chống ung thƣ chất hóa học số thuốc Việt Nam” Luận án tiến sĩ sinh học 35 Nguyễn Duy Thịnh (2004) “Giáo trình Cơng Nghệ chè” Trƣờng Đại Học Bách Khoa Hà Nội 36 Ngô Văn Thu Trần Hùng (2011) “Dƣợc liệu học” Nhà xuất Y học Bộ Y tế 37 Đỗ Thị Hoa Viên (2007) “Nghiên cứu khảo sát hoạt chất flavonoid mơ Prunus armeniaca (họ Rosaceae)” Tạp chí Khoa học công nghệ 45(2): 49- 53 III WEB 38 https://en.m.wikipedia.org/wiki/Papaya PHỤ LỤC PHỤ LỤC 01 Kết xác định đồ thị chuẩn glucose Bảng Kết dựng đồ thị đƣờng chuẩn glucose Ống số 10 Hàm lƣợng glucose (mg/ml) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 Nƣớc cất (ml) 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 OD540nm 0,207 0,21 0,226 0,28 0,31 0,35 0,42 0,48 0,52 Hình Phản ứng màu đƣờng glucose với DNS nhiệt độ cao PHỤ LỤC 02 Xác định ảnh hƣởng số yếu tố q trình trích ly Flavonoid Bảng Độ ẩm Đu đủ Khối Khối lƣợng mẫu sau sấy(g) lƣợng Khối Khối Khối mẫu lƣợng lƣợng lƣợng Độ ẩm trƣớc mẫu sau mẫu sau mẫu sau H (%) khi sấy sấy sấy sấy(g) lần (g) lần (g) lần (g) 10,0427 1,4608 1,4596 1,4590 84,46 10,0625 1,6980 1,6964 1,6968 83,13 10,0356 1,3903 1,3875 1,3885 86,16 10,0068 2,1202 2,1187 2,1169 78,83 bánh 10,1466 2,2118 2,2111 2,2099 78,21 10,0259 1,8214 1,8197 1,8191 81,84 10,0833 2,5234 2,5223 2,5229 74,98 10,0741 2,4650 2,4643 2,4639 75,51 10,0269 2,5457 2,5449 2,5451 74,61 Lá non Lá tẻ Lá già Giá trị độ ẩm trung bình H (%) 84,58 ± 0,518 79,62 ± 0,941 75,023 ± 0,45 Bảng Ảnh hƣởng nồng độ Ethanol đến hàm lƣợng Flavonoid Khối Nồng độ ethanol Lá (%) 60% 80% 90% lƣợng bột Đu đủ khô (g) Hàm lƣợng Hiệu suất trích Flavonoid thu ly theo TLKTĐ đƣợc (g) (%w/w) Non 0,0682 ± 0,072 1,364 Bánh tẻ 0,1531 ± 0,043 3,062 Già 0,2045 ± 0,02 4,090 Non 0,0779 ± 0,012 1,558 Bánh tẻ 0,1623 ± 0,032 3,246 Già 0,2123 ± 0,03 4,246 Non 0,0845 ± 0,034 1,690 Bánh tẻ 0,1715 ± 0,046 3,430 Già 0,2175 ± 0,034 4,350 Bảng Ảnh hƣởng nhiệt độ trích ly Flavonoid Khối Nhiệt độ (oC) Lá lƣợng bột Đu đủ khơ (g) Lạnh (4oC) Nhiệt độ phịng (30oC) Nóng (60 oC) Hàm lƣợng Hiệu suất trích Flavonoid thu ly theo TLKTĐ đƣợc (g) (%w/w) Non 0,0526 ± 0,034 1,052 Bánh tẻ 0,0676 ± 0,02 1,352 Già 0,1003 ± 0,042 2,006 Non 0,0587 ± 0,033 1,174 Bánh tẻ 0,0911 ± 0,014 1,822 Già 0,1506 ± 0,053 3,012 Non 0,0723 ± 0,051 1,446 Bánh tẻ 0,0129 ± 0,032 2,580 Già 0,223 ± 0,05 4,46 Bảng Ảnh hƣởng tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi Ethanol đến hàm lƣợng Flavonoid Tỷ lệ nguyên liệu : dung môi ethanol (g/ml) 1/10 1/15 1/20 Lá Khối lƣợng bột Đu đủ khô (g) Hàm lƣợng Flavonoid thu đƣợc (g) Hiệu suất trích ly theo TLKTĐ (%w/w) Non 0,0712 ± 0,048 1,424 Bánh tẻ 0,1421 ± 0,05 2,842 Già 0,1678 ± 0,026 3,356 Non 0,0937 ± 0,007 1,874 Bánh tẻ 0,1692 ± 0,063 3,384 Già 0,2411 ± 0,041 4,822 Non 0,0843 ± 0,065 1,686 Bánh tẻ 0,1563 ± 0,039 3,126 Già 0,223 ± 0,034 4,460 Bảng Ảnh hƣởng thời gian chiết Ethanol đến hàm lƣợng Flavonoid Thời gian (h) 12 24 36 Lá Khối lƣợng bột Đu đủ khô (g) Hàm lƣợng Flavonoid thu đƣợc (g) Hiệu suất trích ly theo TLKTĐ (% w/w) Non 0,0782 ± 0,05 1,564 Bánh tẻ 0,1421 ± 0,04 2,842 Già 0,198 ± 0,012 3,960 Non 0,0856 ± 0,033 1,712 Bánh tẻ 0,1612 ± 0,03 3,224 Già 0,2351 ± 0,017 4,702 Non 0,0992 ± 0,054 1,984 Bánh tẻ 0,1833 ± 0,011 3,666 Già 0,2501 ± 0,03 5,002 PHỤ LỤC 03 Kết xác định số đặc tính sinh hóa Đu đủ Kết xác định hàm lƣợng axit toàn phần Đu đủ - Lá bánh tẻ: - Lá non: a b a - Lá già: a b Hình Xác định hàm lƣợng axit toàn phần a: dung dịch trƣớc chuẩn độ b: dung dịch sau chuẩn độ b\ Bảng Kết xác định hàm lƣợng axit tồn phần Loại Thể tích Nồng độ Nồng độ axit Ký hiệu Khối NaOH axit toàn toàn phần mẫu lƣợng mẫu 0,1N phần trung bình (g) chuẩn (%w/w) (%w/w) độ (ml) Lá non Lá bánh tẻ Lá già N1 10,0628 3,5 0,466 N2 10,0261 3,3 0,441 N3 10,0786 3,6 0,478 BT1 10,0127 4,2 0,562 BT2 10,0559 4,7 0,626 BT3 10,0643 4,6 0,612 G1 10,0742 2,7 0,359 G2 10,0633 2,5 0,332 G3 10,0322 2,2 0,293 0,461 ± 0,0188 0,600 ± 0,034 0,328 ± 0,033 Bảng Hàm lƣợng vitamin C theo thời kỳ phát triển Đu đủ Loại Lá non Lá bánh tẻ Lá già Kí hiệu mẫu Thể Khối Tổng thể Thể tích tích Iot lƣợng tích dịch mẫu lấy 0,001N mẫu mẫu chuẩn chuẩn (g) (ml) độ (ml) độ (ml) N1 N2 N3 BT1 BT2 BT3 G1 G2 G3 5,0012 5,0133 5,011 5,032 5,0101 5,0221 5,006 5,021 5,008 100 100 100 100 100 100 100 100 100 10 10 10 10 10 10 10 10 10 2,3 2,4 2,3 3,1 3,2 3,1 2,7 2,6 2,6 Nồng độ vitamin C (mg/100g) 40,47 42,127 40,39 54,21 56,206 54,32 47,46 45,57 45,69 Nồng độ vitamin C TB (mg/100g) 40,995 ± 0,98 54,912 ± 0,121 46,24 ± 0,058 ... gian chiết Ethanol) - Xác định số đặc tính sinh hóa dịch chiết Đu đủ (Xác định hàm lƣợng axit toàn phần, Xác định hàm lƣợng đƣờng tổng, Xác định hàm lƣợng vitamin C) - Xác định khả kháng số vi sinh. .. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu tách chiết hợp chất Flavonoid xác định đƣợc hàm lƣợng số chất có tính sinh hóa có dịch chiết Đu đủ, tạo tiền đề khoa học cho nghiên cứu nhằm... lựa chọn Đu đủ làm nguyên liệu cho đề tài: ? ?Nghiên cứu trích ly Flavonoid xác định số đặc tính sinh hóa dịch chiết Đu đủ? ?? Bên cạnh đó, để làm rõ khác biệt hàm lƣợng chất có hoạt tính sinh học