NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG GÂY BỆNH HOẠI TỬ GAN TỤY CẤP CỦA MỘT SỐ LOÀI VI KHUẨN VIBRIO TRÊN TÔM NUÔI NƯỚC LỢ TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC . LUẬN VĂN THẠC SĨ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM  TRẦN ANH TUẤN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG GÂY BỆNH HOẠI TỬ GAN TỤY CẤP CỦA MỘT SỐ LOÀI VI KHUẨN VIBRIO TRÊN TÔM NUÔI NƯỚC LỢ TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI - 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM  TRẦN ANH TUẤN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG GÂY BỆNH HOẠI TỬ GAN TỤY CẤP CỦA MỘT SỐ LỒI VI KHUẨN VIBRIO TRÊN TƠM NI NƯỚC LỢ TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC CHUN NGÀNH: NI TRỒNG THUỶ SẢN MÃ SỐ: 60.62.03.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS PHAN THỊ VÂN HÀ NỘI - 2014 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Trần Anh Tuấn Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin chân thành cảm ơn đến Ban lãnh đạo, Phòng Hợp tác Quốc tế Đào tạo - Viện nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản 1, Ban Giám hiệu Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Cơ quan Thú y vùng III ủng hộ, giúp đỡ tạo điều kiện để tơi hồn thành tốt khóa học Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới cô giáo hướng dẫn, TS Phan Thị Vân, người tận tình định hướng, bảo giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn Qua đây, xin cảm ơn Ban giám đốc Trung tâm Nghiên cứu Quan trắc cảnh báo mơi trường Phịng ngừa dịch bệnh khu vực phía Bắc – Viện nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản cán thuộc đề tài “Tôm khẩn cấp năm 2013” tạo điều kiện tốt để thực đề tài Lời cảm ơn chân thành xin gửi tới gia đình, bạn bè đồng nghiệp, người giúp đỡ động viên học tập sống Hà Nội 20 tháng 11 năm 2014 Tác giả luận văn Trần Anh Tuấn Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN .ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số đặc điểm đối tượng nghiên cứu 1.1.1 Đặc điểm phân loại hình thái vi khuẩnVibrio 1.1.2 Đặc tính phân bố ni cấy 1.1.3 Đặc tính sinh hóa 1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh vi khuẩn Vibrio spp tôm 1.2.1 Trên giới 1.2.2 Ở Việt Nam 15 1.3 Tình hình hội chứng gan tụy cấp tơm ni nước lợ 18 1.3.1 Tình hình hội chứng gan tụy cấp giới 18 1.3.2 Tình hình hội chứng hoại tử gan tụy cấp Việt Nam 18 1.4 Các nghiên cứu liên quan đến tượng hoại tử gan tụy tôm nuôi 20 1.4.1 Hoại tử gan tụy tôm MBV HPV 20 1.4.2 Hoại tử gan tụy tôm vi khuẩn ký sinh nội bào (Necrotizing Hepatopancreatitic, NHP) 20 1.4.3 Hoại tử gan tụy vi bào tử trùng 21 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii 1.4.4 Hoại tử gan tụy độc chất 21 1.4.5 Bệnh hoại tử gan tụy cấp 23 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tượng nội dung nghiên cứu 27 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 27 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 27 2.2 Thời gian, địa điểm nghiên cứu 27 2.2.1 Thời gian nghiên cứu 27 2.2.2 Địa điểm nghiên cứu 27 2.3 Vật liệu phương pháp nghiên cứu 27 2.3.1 Xác định AHPND 27 2.3.2 Phân lập định danh vi khuẩn (Frerichs Millar (1983, 1993) 30 2.3.3 Xác định độc lực vi khuẩn: 33 2.3.4 Thử kháng sinh đồ (Kibry-Bauer) 36 2.4 Phương pháp xử lí số liệu 36 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 37 3.1 Xác định có mặt vi khuẩn tôm bị AHPND 37 3.2 Xác định chủng vi khuẩn Vibrio độc lực 40 3.3 Thử kháng sinh đồ chủng Vibrio độc lực xác định 46 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 51 Kết luận 51 Đề xuất 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv DANH MỤC BẢNG STT TÊN BẢNG TRANG Bảng 1.1 Đặc điểm sinh hoá số loài vi khuẩn Vibrio spp tác nhân gây bệnh động vật thuỷ sản (Buller, 2004) Bảng 2.1 Cách thực đọc phản ứng sinh hóa 32 Bảng 3.1 Kết phân lập vi khuẩn 37 Bảng 3.2 Kết phân tích mẫu theo phương pháp mơ 39 Bảng 3.3 Kết tái phân lập vi khuẩn phân tích mơ học thí nghiệm 41 Bảng 3.4 Kết tái phân lập vi khuẩn phân tích mơ học thí nghiệm 42 Bảng 3.5 Kết tái phân lập vi khuẩn thí nghiệm 44 Bảng 3.6 Kết phân tích mơ bệnh học thí nghiệm 45 Bảng 3.7 Tính nhạy, trung bình số lồi vi khuẩn số loại kháng sinh 47 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nơng nghiệp Page v DANH MỤC HÌNH STT TÊN HÌNH TRANG Hình 1.1:Vi khuẩn V parahaemolyticus Hình 1.2: Vi khuẩn V vulnificus Hình 1.3: Vi khuẩn V harveyi Hình 1.4: Vi khuẩn V alginolyticus Hình 1.5: Khuẩn lạc vi khuẩn V harveyi Hình 1.6: Khuẩn lạc vi khuẩn V Parahaemolyticus Hình 1.7: Nhuộm gram vi khuẩn V.Vulnificus Hình 1.8: Phản ứng Indol V parahaemolyticus Hình 1.9: Dấu hiệu nhận biết AHPND theo phương pháp mơ bệnh học 24 Hình 2.1: Bố trí thí nghiệm 36 Hình 3.1: Tỷ lệ phận lập lồi Vibrio Nghệ An 38 Hình 3.2: Tỷ lệ phận lập lồi Vibrio Nam Định Hình 3.3: Hình ảnh soi vi khuẩn kính hiển vi 39 Hình 3.4: Thử sinh hóa V paraheamolyticus tái phân 45 Hình 3.5: Tổ chức mơ tôm bị AHPND 46 Hình 3.6: Kháng sinh đồ V.paraheamolyticus (12.020) 49 Hình 3.7: Kháng sinh đồ V vulnificus V.paraheamolyticus (13.014) 49 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT AHPND: Acute Hepatopancreatic Necrosis Dsease CTVK: Công thức vi khuẩn ĐBSCL: Đồng Bằng Sông Cửu Long EMS: Early Mortality Syndrome HPV: Hepatopancreatic Pavovirrus IHHNV: Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus IMNV: Infectious Myonecrosis Virus MBV: Monodon Baculovirus NACA: Network of Aquaculture Centres in Asia-Pacific NHP: Necrotizing Hepatopancreatitis NTTS: Nuôi Trồng Thủy Sản PCR: Polymerase Chain Reaction Thuốc BVTV: Thuốc Bảo vệ thực vật TSV: Taura Syndrome Virus Viện NCNTTS: Viện Nghiên Cứu Nuôi Trồng Thủy Sản YHV: Yellow Head Virus Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nơng nghiệp Page vii MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Nuôi tôm nước lợ hình thức ni quan trọng đem lại giá trị kinh tế cao, chiếm 40% tổng giá trị sản phẩm ni trồng thủy sản nước ta Trong lồi nuôi nước lợ, tôm sú tôm thẻ chân trắng lồi ni phổ biến địa bàn nước ta với gần 80% tổng diện tích ni trồng nước lợ (FAO, 2012) Hình thức ni đóng vai trị to lớn tổng giá trị nuôi trồng thủy sản tiêu thụ nước giá trị xuất sang nhiều nước giới Tuy nhiên, người nuôi tôm nước lợ phải đối mặt với nhiều loại dịch bệnh nguy hiểm gây thiệt hại lớn, phải kể đến bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND) Đây loại dịch bệnh xuất nước ta từ năm 2010, gây chết tôm sú tôm thẻ chân trắng hàng loạt địa bàn Đồng song Cửu Long Trong năm tiếp theo, 2011 2012, dịch bệnh tiếp tục lan rộng nhiều tỉnh khác, tập trung Trà Vinh, Sóc trăng, Kiên Giang số tỉnh ven biển phía Bắc: Hải Phịng Quảng Ninh, Bắc Trung bộ: Thanh Hóa Nghệ An, Nam Trung bộ: Quảng Ngãi, Bình Định, Khánh Hịa, Ninh Thuận Bình Thuận Do diện tích tơm mắc bệnh lớn tôm chết tập trung chủ yếu giai đoạn 20 - 30 ngày tuổi, cỡ tôm phát bệnh người nuôi thường xử lý xả bỏ nên gây thiệt hại lớn Đặc biệt năm 2012, nước có khoảng 100.776 diện tích ni tơm nước lợ bị thiệt hại dịch bệnh có tới 46.093 diện tích ni tơm nước lợ xác định bị chết hội chứng hoại tử gan tụy (Tổng cục Thủy sản, 2012) Trong thời gian qua, có nhiều nghiên cứu thực nhằm xác định nguyên nhân gây dịch bệnh Một số nghiên cứu hội chứng Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nơng nghiệp Page có liên quan trực tiếp đến thuốc bảo vệ thực vật tảo độc, đó, số nghiên cứu khác lại cho có mối quan hệ chặt chẽ việc sử dụng thức ăn chế phẩm sinh học nuôi trổng thủy sản với hội chứng hoại tử gan tụy Tuy nhiên, nhiều nghiên cứu gần tìm thấy nhiều loại vi khuẩn tôm bị hội chứng hoại tử gan tụy cấp tất vùng ni tơm vi khuẩn Vibrio chiếm thành phần chủ yếu phổ biến loài V parahaemolyticus, V vulnificus,V harveyi Cụ thể là, nghiên cứu giáo sư Lightner cộng (2013) chủng vi khuẩn V parahaemolyticus tác nhân gây hội chứng Với mục đích làm rõ liên quan nhóm vi khuẩn Vibrio đến bệnh hoại tử gan tụy cấp, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu khả gây bệnh hoại tử gan tụy cấp số loài vi khuẩn vibrio tơm ni nước lợ số tỉnh phía Bắc” Đây đề tài nhỏ thuộc đề tàii “Nghiên cứu nguyên nhân, tác nhân gây hội chứng hoại tử gan tụy tôm sú tôm thẻ chân trắng biện pháp khắc phục” Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn giao cho Viện nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản chủ trì năm 2013 Mục tiêu nghiên cứu Xác định loài vi khuẩn Vibrio độc lực tôm sú, tôm thẻ chân trắng bị AHPND Nội dung nghiên cứu - Xác định có mặt vi khuẩn tơm bị AHPND - Xác định chủng vi khuẩn Vibrio độc lực - Thử kháng sinh đồ chủng Vibrio độc lực xác định Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số đặc điểm đối tượng nghiên cứu 1.1.1 Đặc điểm phân loại hình thái vi khuẩnVibrio Hệ thống phân loại (Ackermann, 1984): Ngành Proteobacteria Lớp Gammaproteobacteria Bộ Vibrionales Họ Vibrionaceae Veron, 1965 Giống Vibrio Pacini, 1854 Loài Vibrio spp Hình thái: Đặc điểm chung lồi vi khuẩn thuộc giống Vibrio: Gram âm, hình que thẳng uốn cong, kích thước 0,3-0,5x1,4-2,6 µm; chúng khơng hình thành bào tử chuyển động nhờ tiêm mao nhiều tiêm mao mảnh Hình 1.1:Vi khuẩn V parahaemolyticus Hình 1.2: Vi khuẩn V vulnificus Học viện Nơng nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page (Buller, 2004) (Buller, 2004) Hình 1.3: Vi khuẩn V harveyi Hình 1.4: Vi khuẩn V alginolyticus (Buller, 2004) (Buller, 2004) 1.1.2 Đặc tính phân bố ni cấy Ngoài tự nhiên vi khuẩn Vibrio phân bố phổ biến môi trường nước biển vùng nước lợ ven biển; tìm thấy chúng tầng nước, vùi trầm tích đáy bám bề mặt sinh vật sống vùng nước Vibrio vi khuẩn đặc trưng cho vùng nước biển ấm, phát triển mạnh nhiệt độ 20-300C (Bùi Quang Tề cộng sự, 2004) Trong môi trường nuôi cấy tất loài vi khuẩn thuộc giống Vibrio cần muối NaCl để phát triển, nồng độ muối cho phép môi trường nuôi cấy thường 1-2 % TCBS mơi trường chọn lọc lồi vi khuẩn Vibrio, sau 18-24h ni cấy hình thành khuẩn lạc với kích thước khoảng 2–5mm, có màu vàng (V cholerae, V alginolyticus, V fluvialis) xanh (V parahaemolyticus, V harveyi, V vulnificus) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page Hình 1.5: Khuẩn lạc vi khuẩn V harveyi (Buller, 2004) Hình 1.6: Khuẩn lạc vi khuẩn V Parahaemolyticus (Buller, 2004) 1.1.3 Đặc tính sinh hóa Các lồi vi khuẩn thuộc giống Vibrio yếm khí tuỳ tiện, hầu hết oxy hố lên men mơi trường O/F Glucose, khơng có khả sinh H2S mẫn cảm với Vibriostat (0/129) (Bùi Quang Tề cộng sự, 2004) Hình 1.7: Nhuộm gram vi khuẩn Hình 1.8: Phản ứng Indol V.Vulnificus (Buller, 2004) V parahaemolyticus (Buller, 2004) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page Bên trái: (-); Bên phải: (+) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page Bảng 1.1 Đặc điểm sinh hố số lồi vi khuẩn Vibrio spp tác nhân gây bệnh động vật thuỷ sản (Buller, 2004) Đặc điểm sinh hóa Nhuộm Gram Di động Phản ứng Oxydase Phát sáng Phát triển nhiệt độ 40C Phát triển 370C Phát triển 0%NaCl Phát triển 3%NaCl Phát triển 7%NaCl Nhậy cảm 0/129 (10 µg) Nhậy cảm 0/129(150 µg) Màu khuẩn lạc trênTCBS Thử O/F Glucose β galactosidase Arginine dihydrolase Lysine Decarboxylase Orinithine Decarboxylase Phản ứng Citrate Phản ứng Urease Khử Nitrate NO3→NO2 Indol Sinh H2S Methyl red Voges-Proskauer (V-P) Dịch hóa Gelatin Axit hố¸ Arabinose Axit hố¸ Glucose Axit hố¸ Inositol Axit hố¸ Mannitol Axit hố¸ Salicin Axit hố¸ Sorbitol Axit hố¸ Sucrose + + + + + + S S xanh +/+ + + + + + + S S xanh +/+ + + + + + + d + + - + + + + + + + - + + + + + R S vàng +/+ + + d + + + + + + + + + + + S S vàng +/+ + + + + d + + + + + + + Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp + + + + S S xanh +/+ + + + + + + - + + + + S S +/+ + D Page Chú thích: - Vibrio parahaemolyticus - Vibrio anguillarum - Vibrio harveyi - Vibrio vulnificus - Vibrio alginolyticus - Vibrio salmonicida " + " > 90 % chủng phản ứng dương " - " < 90 % chủng phản ứng âm “ d " 11 - 89 % chủng phản ứng dương “ R ": Không mẫn cảm “ S ": Mẫn cảm n: Chưa có số liệu 1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh vi khuẩn Vibrio spp tôm 1.2.1 Trên giới Dịch bệnh xảy thiệt hại to lớn động lực thúc đẩy quan tâm nghiên cứu nhiều nhà khoa học với nhu cầu cấp thiết sản xuất mà thời gian ngắn, hàng loạt thành tựu nghiên cứu bệnh tôm công bố áp dụng Dựa vào tác nhân gây bệnh, nhà khoa học chia bệnh thủy sản thành bệnh chủ yếu sau: Bệnh virus, bệnh vi khuẩn, bệnh nấm, bệnh ký sinh trùng số bệnh yếu tố vô sinh gây tôm Trong số tác nhân gây bệnh tôm nuôi vi khuẩn tác nhân thường gặp, coi có ảnh hưởng kinh tế lớn tới trang trại ni tơm tồn giới (Venkateswara Rao cộng sự, 2010) Trong điều kiện ao ni có mật độ cao, đầu tư thức ăn lớn, tượng ô nhiễm thường xuyên xảy tạo điều kiện thuận lợi cho vi khuẩn phát triển gây tác hại Theo thống kê Sindermann Lighter (1988), bệnh tôm vi khuẩn gây chiếm 45,5% tổng số loại bệnh, virus Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page chiếm 25,3%, nấm chiếm 2,7%, ký sinh trùng chiếm 26,5% Bệnh vi khuẩn chủ yếu bệnh Vibrio gây ra, chúng báo cáo hệ thống ni tơm tồn giới gồm có 14 loài: Vibrio harveyi, V splendidus, V parahaemolyticus, V alginolyticus, V anguillarum, V vulnificus, V campbelli, V fischeri, V damsella, V pelagicus, V orientalis, V ordalii, V mediterrani V logei Theo Venkateswara Rao cộng sự, 2010, Vibriosis bệnh vi khuẩn có liên quan đến tỉ lệ chết tơm ni tồn giới Sự nhiễm vi khuẩn Vibrio thường xuất trại sản xuất giống, dịch bệnh lại hay xảy ao ni tơm Sự bùng phát dịch bệnh xảy yếu tố môi trường gây nên nhân lên nhanh chóng mật độ vi khuẩn nhiễm mức thấp máu tôm xâm nhập vi khuẩn vào rào cản vật chủ (Sizemore Davis, 1985) Nghiên cứu tác nhân gây bệnh Vibrio tôm sú (P monodon), Jiravanichpaisal (1995) cho có đường xâm nhập vi khuẩn xâm nhập vào gan tụy xâm nhập vào biểu mô phụ Sự xâm nhập theo đường gan tụy lại mạnh thường xảy giai đoạn ấu trùng tơm giống, xâm nhập theo đường biểu mô phụ xảy chủ yếu tơm trưởng thành Điều giai đoạn tơm trưởng thành, hoạt động kháng khuẩn mạnh ống gan tụy (Stewart, 1980) Theo Anderson (1988), bề mặt thể tôm bị tổn thương tạo điều kiện thuận lợi cho vi khuẩn Vibrio xâm nhập qua đường Khi nghiên cứu bệnh Vibrio trại sản xuất tôm giống, Adam (1991) nhiều tác giả khác cho rằng: Tôm ấu trùng hậu ấu trùng bị nhiễm khuẩn nặng gây tượng phát sáng chết hàng loạt Lightner cộng (1996) thông báo, số bệnh gây ấu trùng tơm, bệnh phát sáng bệnh nhiễm trùng tồn thân gây thiệt hại lớn Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page nhất, tượng phát sáng bóng tối dấu hiệu đặc thù bệnh Ngoài ra, theo Tonguthai (1995), ấu trùng tôm bị bệnh phát sáng thể trở nên yếu ớt, chuyển màu trắng nhợt lắng xuống đáy, tỷ lệ chết lên tới 100% đến ngày, bệnh phát sáng xuất trại sản xuất việc ngăn ngừa bể ương ni khó khăn đợt sản xuất bị thất bại hồn tồn Tiến hành giải phẫu ấu trùng tơm bị nhiễm bệnh phát sáng quan sát kính hiển vi cho thấy vi khuẩn nhiễm dày đặc khoang máu ấu trùng phát quang gần chết (Pitogo, 1995) Nghiên cứu tác nhân gây bệnh phát sáng ấu trùng tôm sú, Baticados (1988) nhiều tác giả khác có chung nhận định: V harveyi coi vi khuẩn chủ yếu gây bệnh phát sáng Tác nhân gây bệnh V harveyi tồn tự nhiên mơi trường nước biển, tìm thấy chúng thành viên bậc thấp (Ruby and Nealson, 1978) Khi bệnh phát sáng xảy bể ương ấu trùng tôm, số lượng vi khuẩn Vibrio tăng dần theo thời gian Tuy vậy, Lightner (1996) cho ấu trùng tơm sú bị phát sáng nhiễm mật độ cao loại vi khuẩn V harveyi, V parahaemolyticus V vulnificus Theo Pẽna cộng (2001), vi khuẩn gây bệnh phát sáng V harveyi gây tỉ lệ chết cao tơm sú (Penaeus monodon) ni Philippin lồi diện ao nuôi với tỷ lệ cao, chiếm 65,5% Liên quan tới tần số xuất Vibriosis tôm nuôi số trang trại Ấn Độ, theo Otta cộng (2000) V alginolyticus chiếm tỉ lệ cao từ 7,8% đến 50%, sau V harveyi 13% - 23%, V parahaemolyticus 6,6% - 11,5% số loài khác Khi nghiên cứu khả gây bệnh vi khuẩn Vibrio tôm, nhiều tác giả khẳng định hầu hết vi khuẩn Vibrio tác nhân gây bệnh thứ cấp Theo Lightner (1998), thể tơm có khả đề kháng với vi khuẩn Vibrio, tôm khỏe tồn lượng vi Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 10 khuẩn này, chúng chờ hội để tăng số lượng độc lực gây bệnh cho tôm Các nghiên cứu bệnh tôm Châu Á cho thấy có kết hợp vi khuẩn Vibrio với tác nhân khác virus, ký sinh trùng gây tác hại tổng hợp tôm Theo Chanratchakool (1995), vi khuẩn Vibrio tác nhân hội công vào tôm nuôi tôm bị nhiễm virus đốm trắng, nghiên cứu mẫu bệnh phẩm ngồi việc tìm thấy tiểu thể virus cịn có số lượng lớn vi khuẩn Vibrio Theo nhiều báo cáo nghiên cứu bệnh vi khuẩn Vibrio nhiễm tôm Châu Á dịch bệnh ngày trở nên phổ biến trang trại nuôi tôm thuộc quốc gia này; Theo Daud (1992), mầm bệnh vi khuẩn phổ biến tôm he Philippine V ordalii, V anguillarum, V vulnificus, V harveyi V splendilus Theo Kou cộng (1998) Đài Loan lồi vi khuẩn Vibrio tìm thấy gồm: V tubiashii, V anguillarum, V harveyi, V mereis V damsela Ruangpan Kitao (1991) phân lập xác định loài Vibrio (V parahaemolyticus, V alginolyticus, V vulnificus, V fluvialis Vibrio spp) từ tôm sú bị bệnh nuôi Thái Lan Nghiên cứu phân bố vi khuẩn Vibrio tự nhiên cho thấy, lượng đáng kể vi khuẩn Vibrio tồn nước biển, bể ương ấp đặc biệt ruột tôm bố mẹ Trong ruột tôm bố mẹ, vi khuẩn Vibrio nhiễm với mật độ 2x109 cfu/g, chiếm từ 63 - 67% khoảng 16 - 18% tổng số vi khuẩn Vibrio tác nhân gây bệnh phát sáng (Pitogo, 1998) Ruangpan (1995) cho rằng, số lượng vi khuẩn Vibrio tồn phát triển bể ấp ao nuôi phụ thuộc vào mật độ nuôi, ao ni tơm mật độ cao số lượng vi khuẩn cao so với ao nuôi mật độ thấp Một số loài vi khuẩn Vibrio tác nhân gây bệnh nguy hiểm cho tôm nuôi, chúng vi khuẩn hội bình thường chúng ln tồn môi trường ương nuôi Khi điều kiện sống có thay đổi bất lợi yếu Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 11