Nghiên cứu cơ chể phân tử kháng ung thư của bài thuốc nam địa long (luận án tiến sĩ sinh học))

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ MỸ NƯƠNG NGHIÊN CỨU CƠ CHẾ PHÂN TỬ KHÁNG UNG THƯ CỦA BÀI THUỐC NAM ĐỊA LONG LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Tp Hồ Chí Minh – Năm 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ MỸ NƯƠNG NGHIÊN CỨU CƠ CHẾ PHÂN TỬ KHÁNG UNG THƯ CỦA BÀI THUỐC NAM ĐỊA LONG Chuyên ngành: Di truyền học Mã số chuyên ngành: 62 42 70 01 Phản biện 1: PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương Phản biện 2: PGS.TS Đỗ Thị Hồng Tươi Phản biện 3: TS Bùi Thị Kim Lý Phản biện độc lập 1: PGS.TS Đỗ Thị Hồng Tươi Phản biện độc lập 2: TS Võ Nguyễn Thanh Thảo NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS Hồ Huỳnh Thùy Dương Tp Hồ Chí Minh – Năm 2019 Lời cam đoan Tôi xin cam đoan luận án tiến sĩ “Nghiên cứu chế phân tử kháng ung thư thuốc Nam Địa Long” cơng trình nghiên cứu riêng tôi, hướng dẫn cán hướng dẫn, PGS.TS Hồ Huỳnh Thùy Dương Các kết nghiên cứu luận án hoàn toàn chưa công bố tác giả khác NCS Nguyễn Thị Mỹ Nương Lời cảm ơn Để đường học vấn dài bây giờ, nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ động viên Nhân đây, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Người hỗ trợ nghiên cứu đề tài luận án, để hoàn tất bậc học cuối Đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến cô PGS.TS Hồ Huỳnh Thùy Dương, người mở ý tưởng hướng nghiên cứu chế tác động thuốc mà nhóm chúng tơi đeo đuổi 10 năm Trong khoảng thời gian này, cô hỗ trợ học tập lẫn công việc giảng dạy trường, giúp đỡ phát triển kỹ nghiên cứu, khả sư phạm góp phần hình thành nhân sinh quan Tôi học hỏi nhiều từ thông tuệ tinh thần nghiên cứu khoa học nghiêm túc cô Tôi chân thành cám ơn anh chị, bạn, em thuộc Phịng thí nghiệm Sinh học phân tử, Bộ môn Di truyền Dù nước ngồi hay cơng tác Bộ mơn, người trực tiếp hỗ trợ nhiều việc thực phương pháp thực nghiệm, thảo luận vấn đề, hỗ trợ tìm kiếm tài liệu hỗ trợ công việc Tôi xin cám ơn bạn Bùi Hồng Bảo Ngọc hỗ trợ phân tích liệu microarray IPA Các anh chị, bạn, em người chia sẻ với tơi buồn vui, khó khăn sống động viên tơi nhanh chóng hồn thành luận án Tôi xin chân thành cám ơn Thầy Đinh Minh Hiệp anh chị, bạn, em MHG Cám ơn thầy dõi theo bước sẵn sàng hỗ trợ Cám ơn người động viên giúp đỡ Tôi xin chân thành cám ơn quý thầy cô, anh chị em công tác trường ĐH Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM, đặc biệt quý thầy cô Khoa Sinh học – Công nghệ sinh học Tôi xin cám ơn Trường, Khoa, Phịng Khoa học Cơng nghệ, Phịng đào tạo Sau Đại học ưu tiên hỗ trợ cho việc học tập nghiên cứu Tôi xin cám ơn thầy phịng thí nghiệm Khoa giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Tôi xin cám ơn tài trợ kinh phí cho đề tài nghiên cứu khoa học thuộc nội dung luận án từ ĐH Quốc gia TP.HCM Sở Khoa học - Cơng nghệ TP.HCM (chương trình Vườn ươm NCKH) Tôi xin cám ơn quỹ học bổng Vallet Toshiba hỗ trợ cho trình học tập Tôi xin gửi lời cảm ơn đến cô, anh chị, em Công ty TNHH CNSH Khoa Thương hỗ trợ nhiều kỹ thuật qRT-PCR hóa chất, thiết bị kỹ thuật Tôi xin cám ơn Khoa Dược, Bệnh viện Y học cổ truyền TP.HCM cung cấp nguyên liệu thuốc, sắc thuốc kiểm tra chất lượng thuốc Tôi xin cám ơn Trung tâm Sâm Dược liệu, khoa Hóa – trường ĐH Khoa học Tự nhiên hỗ trợ việc kiểm tra chất lượng thuốc Tơi xin đồng cám ơn Phịng Vi sinh- Dược khoa Y học cổ truyền thuộc ĐH Y dược TP.HCM, công ty Roche Việt Nam hỗ trợ máy móc, sở vật chất cho việc thực vài nội dung luận án Sau xin dành lời cám ơn sâu sắc đến ba mẹ, anh chị em gia đình, ln hỗ trợ, động viên chăm sóc tơi Cám ơn ba mẹ ủng hộ cho việc học tập Cám ơn ba mẹ ln gương sáng để hình thành nên chăm chỉ, cần cù, hăng say lao động, tinh thần trách nhiệm tín nghĩa tơi MỤC LỤC Lời cam đoan Lời cảm ơn MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ viii MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 UNG THƯ THEO QUAN NIỆM HIỆN ĐẠI 1.1.1 Các đặc điểm bệnh sinh tế bào ung thư 1.1.2 Một số đường tín hiệu tế bào ung thư 1.1.2.1 Stress mạng lưới nội chất (ER stress) .8 1.1.2.2 Đáp ứng stress oxy hóa thơng qua đường NRF2 12 1.1.2.3 Điều hòa chu kỳ tế bào 12 1.1.2.4 Con đường đáp ứng với tổn thương DNA qua protein p53 15 1.1.2.5 Con đường tín hiệu apoptosis .17 1.1.3 Các liệu pháp điều trị ung thư 20 1.2 Y HỌC CỔ TRUYỀN TRONG HỖ TRỢ VÀ ĐIỀU TRỊ VỀ UNG THƯ .23 1.2.1 Quan niệm ung thư YHCT 23 1.2.2 Tiềm năng, thách thức định hướng phát triển YHCT 24 1.2.3 Kiểm soát chất lượng thuốc 26 1.2.4 Các nghiên cứu chế thuốc YHCT điều trị ung thư 27 1.2.5 Bài thuốc Nam Địa Long .31 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 35 2.1 VẬT LIỆU 35 2.1.1 Bài thuốc 35 2.1.2 Các dòng tế bào ung thư 35 2.1.3 Nguyên bào sợi 36 i 2.2 PHƯƠNG PHÁP .36 Phương pháp phân tích định tính, định lượng thuốc 36 2.2.1 2.2.1.1 Phương pháp kiểm tra mức độ nhiễm khuẩn 37 2.2.1.2 Phương pháp sắc ký lớp mỏng 37 2.2.1.3 Phương pháp xác định hàm lượng hợp chất phenol tổng 38 2.2.1.4 Phương pháp xác định hàm lượng flavonoid tổng .39 2.2.1.5 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 39 Phương pháp nuôi cấy tế bào 40 2.2.2 2.2.2.1 Phương pháp cấy chuyền tế bào 40 2.2.2.2 Phương pháp xác định mật độ tế bào sống/chết trypan blue 41 Phương pháp khảo sát khả gây độc tế bào 42 2.2.3 2.2.3.1 Phương pháp SRB (Sulforhodamine B) 42 2.2.3.2 Phương pháp xCELLigence 43 2.2.3.3 Tính tốn số gây độc tế bào chọn lọc (selective index, SI) .44 2.2.3.4 Phương pháp phân tích isobologram 44 Phương pháp phân tích biểu gene tế bào 45 2.2.4 2.2.4.1 Phương pháp tách chiết RNA .45 2.2.4.2 Phương pháp cDNA microarray 46 2.2.4.3 học Dự đốn đường tín hiệu thuốc phần mềm tin sinh .47 2.2.4.4 Phương pháp qRT-PCR 48 2.2.4.5 Phương pháp WB 49 Phương pháp khảo sát khả cảm ứng apoptosis 50 2.2.5 2.2.5.1 Xác định chu kỳ tế bào flow cytometry 50 2.2.5.2 Phương pháp nhuộm kép AO-EB 50 2.2.5.3 Phương pháp khảo sát phân mảnh DNA gene 51 2.2.6 Phương pháp phân tích số liệu 52 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ 53 3.1 NGHIÊN CỨU KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG CỦA BÀI THUỐC .53 3.1.1 Kiểm tra chất lượng nguyên liệu thành phần thuốc .53 3.1.2 Kiểm tra chất lượng thuốc 55 3.2 TÁC ĐỘNG GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ CỦA BÀI THUỐC 59 ii 3.2.1 Tác động gây độc tế bào ung thư thuốc NĐL 60 3.2.2 Tác động gây độc tế bào theo thời gian NĐL tế bào MCF-7 nguyên bào sợi 61 3.3 VAI TRÒ PHỐI HỢP CỦA CÁC VỊ TRONG TÁC ĐỘNG GÂY ĐỘC TẾ BÀO MCF-7 CỦA NĐL 64 3.4 PHÂN TÍCH SỰ BIỂU HIỆN CÁC GENE CỦA MCF-7 BẰNG cDNA MICROARRAY 67 3.5 DỰ ĐOÁN CƠ CHẾ TÁC ĐỘNG CỦA NĐL BẰNG TIN SINH HỌC 71 3.5.1 Phân tích làm giàu, giải chức gene (GOEA: gene ontology enrichment analysis) phần mềm DAVID 71 3.5.2 Dự đoán chế tác động NĐL dựa liệu microarray phần mềm IPA .74 3.6 XÁC NHẬN CON ĐƯỜNG TÍN HIỆU TẾ BÀO ĐƯỢC KÍCH HOẠT BỞI NĐL BẰNG qRT-PCR VÀ WB 81 3.6.1 Xác nhận kết cDNA microarray qRT-PCR 81 3.6.2 Khảo sát thay đổi biểu biện gene mức mRNA qRT-PCR.82 3.6.3 Khảo sát thay đổi biểu biện gene mức protein WB 86 3.6.4 Kết kiểm tra kiểu hình tế bào 91 CHƯƠNG 4: THẢO LUẬN 94 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 110 KẾT LUẬN 110 KIẾN NGHỊ 111 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ 112 TÀI LIỆU THAM KHẢO 113 PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT AO Acridine orange BN Bồ ngót CI Chỉ số phối hợp (Combination index) Ci Chỉ số tế bào (Cell index) DAVID Cơ sở liệu cho giải, minh họa khám phá tích hợp (Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery) DĐVN Dược điển Việt Nam ĐC Đối chứng ĐĐ Đậu đen ĐL Địa long ĐX Đậu xanh EB Ethidium bromide ER stress Stress mạng lưới nội chất ER Mạng lưới nội chất (endoplasmic reticulum) FBS Huyết thai bò (fetal bovine serum) Fc Số lần thay đổi biểu gene xác định cDNA microarray (fold change) FDA Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa kỳ (The Food and Drug Administration) GOEA Phân tích làm giàu, giải chức gene (gene ontology enrichment analysis) HPLC Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (High-performance liquid chromatography) IC50 Nồng độ ức chế sinh trưởng 50% quần thể tế bào Inh% Phần trăm ức chế sinh trưởng (Percentage of growth inhibition) IPA Phân tích đường tín hiệu tế bào (Ingenuity Pathways Analysis) iv NĐL Nam Địa Long NST Nhiễm sắc thể PBS Muối đệm phosphate (phosphate buffered saline) PI Propidium iodide qRT-PCR Phương pháp realtime RT-PCR định lượng (Quantitative reverse transcription polymerase chain reaction) ROS Gốc oxy hoạt tính (Reactive oxygen species) SI Chỉ số gây độc tế bào chọn lọc (Selective index) SRB Sulforhodamine B UPR Đáp ứng với protein không gấp cuộn (Unfolded protein response) YHCT Y học cổ truyền WB Western blot WHO Tổ chức Y tế giới (World Health Organization) v ESR2 CREL RELA HO-1 PUMA GRP78 HSPA1 HSPA2 DR6 TRAIL TRAIL-R4 CAS7 CAS9 CAT SOD1 SOD2 GPX1 TNF A GDF15 FAM129A NUPR1 1,49 1,04 0,93 5,70 1,88 0,93 1,72 1,06 0,97 1,44 1,67 0,54 1,49 1,11 1,28 0,74 1,62 1,91 5,66 5,06 1,04 3,46 0,76 0,57 6,59 1,17 0,93 1,04 1,01 0,97 1,27 1,62 1,06 1,17 1,77 2,08 1,47 2,22 2,14 4,92 2,46 1,67 1,28 1,22 1,21 4,79 6,87 1,21 1,41 1,49 1,84 4,59 1,66 1,23 1,37 1,40 1,09 1,75 3,12 6,36 6,02 1,75 2,08 ± 1,20 1,01 ± 0,23 0,90 ± 0,32 5,69 ± 0,90** 3,31 ± 3,10 1,02 ± 0,16 1,39 ± 0,34 1,19 ± 0,27 1,26 ± 0,50 2,44 ± 1,87 1,65 ± 0,03 1,08 ± 0,56 1,30 ± 0,17 1,41 ± 0,33 1,59 ± 0,43 1,10 ± 0,37 1,87 ± 0,31* 2,39 ± 0,64* 5,65 ± 0,72** 4,52 ± 1,84* 1,49 ± 0,39 2,36 0,83 1,65 13,45 8,75 14,03 1,23 0,59 1,88 4,53 12,04 0,75 2,57 1,35 1,79 1,37 6,68 1,67 39,67 55,33 3,84 2,33 1,33 1,39 5,54 5,50 10,48 0,84 0,58 1,25 1,25 1,32 0,46 2,41 1,92 3,53 1,07 2,03 5,35 41,64 45,25 14,12 3,41 1,01 1,91 9,13 6,02 7,94 0,73 0,69 1,26 1,53 0,91 0,69 0,99 1,41 2,00 1,47 2,79 3,32 24,76 32,00 5,03 2,70 ± 0,61* 1,06 ± 0,25 1,65 ± 0,26* 9,37 ± 3,96* 6,76 ± 1,75** 10,82 ± 3,05** 0,93 ± 0,27 0,62 ± 0,06* 1,46 ± 0,36 2,44 ± 1,82 4,76 ± 6,31 0,64 ± 0,15 1,99 ± 0,87 1,56 ± 0,31 2,44 ± 0,95 1,30 ± 0,21 3,83 ± 2,50 3,45 ± 1,84 35,36 ± 9,23* 44,20 ± 11,70** 7,66 ± 5,63* 2,60 0,74 0,74 18,64 11,55 13,36 4,32 2,03 3,66 1,80 3,01 1,08 2,73 0,35 0,24 0,81 0,61 0,18 11,55 26,54 2,93 1,43 0,60 1,09 9,32 17,88 7,36 0,66 0,26 2,25 1,79 1,80 0,66 2,01 0,59 0,57 0,90 1,44 0,45 27,10 33,36 3,43 2,04 0,97 1,57 24,25 6,41 9,45 1,51 1,60 1,59 1,75 2,17 0,99 1,93 0,97 0,68 0,84 0,35 0,30 19,84 44,63 1,78 2,03 ± 0,58 0,77 ± 0,18 1,14 ± 0,41 17,40 ± 7,54* 11,95 ± 5,74* 10,06 ± 3,05** 2,16 ± 1,91 1,30 ± 0,92 2,50 ± 1,05 1,78 ± 0,03*** 2,33 ± 0,62* 0,91 ± 0,22 2,23 ± 0,44* 0,64 ± 0,31 0,50 ± 0,23 0,85 ± 0,05* 0,80 ± 0,57 0,31 ± 0,14* 19,49 ± 7,78** 34,84 ± 9,14** 2,71 ± 0,85* Bảng PL3.9 Phần trăm quần thể tế bào pha khác chu kỳ tế bào Pha Sub-G1 G1 S G2/M Sub-G1 G1 S G2/M Sub-G1 G1 S G2/M Sub-G1 G1 S G2/M Đối chứng Lần Lần Lần TB ± ĐLC Lần 24 h 2,92 0,97 0,29 1,39 ± 1,37 0,65 35,43 30,6 38,02 34,68 ± 3,77 33,55 21,66 22,15 22,58 22,13 ± 0,46 26,05 23,77 26,86 28,44 26,36 ± 2,38 22,35 36 h 0,33 0,57 1,52 0,81 ± 0,63 3,74 45,52 48,98 47,29 47,26 ± 1,73 45,75 24,46 21,21 20,51 22,06 ± 2,11 21,4 21,19 18,81 18,69 19,56 ± 1,41 18,72 48 h 1,19 0,39 0,35 0,64 ± 0,47 4,88 51,7 49,37 48,93 50,00 ± 1,49 55,33 23,87 19,37 19,87 21,04 ± 2,47 12,22 15,4 17,06 17,85 16,77 ± 1,25 22,19 60 h 2,55 1,94 7,21 3,90 ± 2,88 35,8 60,78 59,56 57,48 59,27 ± 1,67 39,16 18,4 18,01 17,08 17,08 ± 0,68 13,82 14,47 15,03 14,51 14,67 ± 0,31 8,83 NDL Lần Lần TB ± ĐLC 0,58 0,62 0,62 ± 0,04 32,53 32,14 32,74 ± 0,73 22,06 23,16 23,76 ± 2,06 26,45 23,54 24,11 ± 2,11 3,52 2,29 3,18 ± 0,78 48,89 52,59 49,08 ± 3,42 21,37 21,01 21,26 ± 0,22 16,07 16 16,93 ± 1,55 4,23 6,01 5,04 ± 0,90 56,87 52,42 54,87 ± 2,26 15,9 19,79 15,97 ± 3,79 13,24 10,25 15,23 ± 6,21 32,94 37,39 35,38 ± 2,26 40,44 41,81 40,47 ± 1,33 14,13 11,2 13,05 ± 1,61 8,51 8,16 8,50 ± 0,34 PHỤ LỤC KẾT QUẢ KIỂM TRA NGUYÊN LIỆU BÀI THUỐC KẾT QUẢ KIỂM NGHIỆM NAM ĐỊA LONG 1.1 Định tính: 1.1 Phương pháp hóa học: Kiểm tra diện hợp chất flavonoid 1 - Dung dịch cồn Phản ứng Cyanidin Dung dịch cồn + FeCl3 Dung dịch cồn + Chì acetat Dung dịch cồn + NaOH Ống 2: ml dung dịch cồn + một ít bột Mg + HCl đậm đặc → dung dịch phải có màu đỏ - Ống 3: ml dịch lọc + giọt TT FeCl3 5% → dung dịch phải có màu xanh rêu - Ống : ml dịch lọc + giọt TT Pb(CH3COO)2 5% → dung dịch phải có tủa trắng đục - Ống 5: ml dịch lọc + giọt TT NaOH 5% → dung dịch phải tăng đậm màu Kiểm tra hợp chất acid amin Lấy 10 ml dung dịch Nam địa long chia vào ống nghiệm để thực hiện phản ứng - Ống (ống chứng): ml dung dịch Nam địa long - Ông 2: ml dung dịch Nam địa long+ thuốc thử Ninhydrin → dung dịch phải có màu xanh tím Nhận xét: Trong sản phẩm Nam địa long có diện hợp chất flavonoid hợp chất acid amin 1.2 Phương pháp sắc ký lớp mỏng: • Kiểm tra diện nguyên liệu Nam địa long Địa long n-butanol – acid acetic – nước (4:1:1) n-butanol – acid acetic – nước (7:1:2) Dịch nước Dịch n-butanol 1 Địa long 2 Nam địa long Phun thuốc thử Ninhydrin 2% aceton Quan sát đèn tử ngoại 254 nm và sấy 105oC phút quan sát ánh sáng thường Kết quả: Màu sắc và giá trị Rf vết thu sắc đồ dung dịch thử chiết từ Nam địa long tương ứng với màu sắc và giá trị Rf vết thu dung dịch thử chiết từ Địa long Như vậy, chứng tỏ Nam địa long có sự hiện diện Địa long Đậu đen, đậu xanh n-butanol – acid acetic – nước (4:1:1) n-butanol – acid acetic – nước (7:1:2) Dịch nước Dịch n-butanol Đậu xanh Đậu đen 3 Nam địa long Phun thuốc thử Ninhydrin 2% aceton Quan sát đèn tử ngoại 254 nm và sấy 105oC phút quan sát ánh sáng thường Kết quả: Màu sắc và giá trị Rf vết thu sắc đồ dung dịch thử chiết từ Nam địa long tương ứng với màu sắc và giá trị Rf vết thu dung dịch thử chiết từ Đậu đen Như vậy, chứng tỏ Nam địa long có sự hiện diện Đậu đen Bờ ngót Acid formic khan - acid acetic khan - nước - ethyl acetat (5 : : 10 : 100) Dịch ethyl acetat n-butanol – acid acetic – nước (4:1:1) Dịch nước Bờ ngót 2 Nam địa long Quan sát đèn tử Phun thuốc thử FeCl3 5% Phun thuốc thử Ninhydrin 2% ngoại 254 nm ethanol và sấy 105oC phút aceton và sấy 105oC phút quan sát ánh sáng thường quan sát ánh sáng thường n-butanol – acid acetic – nước (7:1:2) Dịch n-butanol 1 2 1 Bờ ngót 2 Nam địa long Quan sát đèn tử Quan sát đèn tử ngoại ngoại 254 nm 365 nm Phun thuốc thử H2SO4 10% ethanol và sấy 105oC phút quan sát ánh sáng thường Kết quả: Màu sắc và giá trị Rf vết thu sắc đồ dung dịch thử chiết từ Nam địa long tương ứng với màu sắc và giá trị Rf vết thu dung dịch thử chiết từ Bồ ngót Như vậy, chứng tỏ Nam địa long có sự hiện diện Bờ ngót Đậu xanh Acid formic khan - acid acetic khan - nước - ethyl acetat (5 : : 10 : 100) Dịch ethyl acetat 1 Đậu xanh 2 Nam địa long Quan sát đèn tử ngoại Phun thuốc thử FeCl3 5% ethanol và sấy 254 nm 105oC phút quan sát ánh sáng thường Ethyl acetat – nước – acid formic (8:0,5:0,5) Dịch ethyl acetat 1 2 Đậu xanh Nam địa long Quan sát đèn tử ngoại 254 nm Phun thuốc thử FeCl3 5% ethanol và sấy 105oC phút quan sát ánh sáng thường Ethyl acetat – nước – acid formic (8:0,5:0,5) Dịch ethyl acetat 1 2 Đậu xanh Quan sát đèn tử ngoại 254 nm Nam địa long Phun thuốc thử AlCl3 5% methanol và sấy 105oC phút quan sát đèn tử ngoại 365 nm Ethyl acetat – methanol – nước (100 : 17 : 13) Dịch ethyl acetat 1 Đậu xanh Quan sát đèn tử ngoại 254 nm 2 Nam địa long Phun thuốc thử AlCl3 5% methanol và sấy 105oC phút quan sát ánh sáng thường Kết quả: Màu sắc và giá trị Rf vết thu sắc đồ dung dịch thử chiết từ Nam địa long tương ứng với màu sắc và giá trị Rf vết thu dung dịch thử chiết từ Đậu xanh Như vậy, chứng tỏ Nam địa long có sự hiện diện Đậu xanh Kiểm tra diện vitexin Nam địa long Ethyl acetat – nước – acid formic (8:0,5:0,5) 1 Vitexin Quan sát đèn tử ngoại 254 nm 2 Nam địa long Phun thuốc thử FeCl3 5% ethanol và sấy 105oC phút quan sát ánh sáng thường Ethyl acetat – methanol – nước (100 : 17 : 13) 1 Vitexin Quan sát đèn tử ngoại 254 nm 2 Nam địa long Phun thuốc thử AlCl3 5% methanol và sấy 105oC phút quan sát đèn tử ngoại 365 nm Kết quả: Màu sắc và giá trị Rf vết thu sắc đồ dung dịch thử chiết từ Nam địa long tương ứng với màu sắc và giá trị Rf vết thu chuẩn vitexin Như vậy, chứng tỏ Nam địa long có sự hiện diện chuẩn vitexin 1.2 Định lượng: Bảng 1: Kết quả xác định khoảng tuyến tính Nồng độ chuẩn (µg/ml) Diện tích pic 25 816828 50 1386869 100 2316208 150 3423166 200 4389397 Phương trình hời quy: y = 20382x+326388 Hệ sớ tương quan: r = 0,9993 ... đoan luận án tiến sĩ ? ?Nghiên cứu chế phân tử kháng ung thư thuốc Nam Địa Long? ?? cơng trình nghiên cứu riêng tơi, hướng dẫn cán hướng dẫn, PGS.TS Hồ Huỳnh Thùy Dương Các kết nghiên cứu luận án hồn... nhập Trong khuôn khổ luận án này, mục tiêu nghiên cứu đề tài tập trung nghiên cứu chế phân tử kháng ung thư thuốc NĐL dòng tế bào ung thư Theo đó, nội dung nghiên thực bao gồm: Đánh giá chất lượng... GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ MỸ NƯƠNG NGHIÊN CỨU CƠ CHẾ PHÂN TỬ KHÁNG UNG THƯ CỦA BÀI THUỐC NAM ĐỊA LONG Chuyên ngành: Di truyền học Mã số chuyên ngành: 62 42 70 01