(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu môi trường nuôi cấy in vitro cây nhàu (morinda citrifolia l )

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM JULY SENGMANIVONG NGHIÊN CỨU MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY IN VITRO CÂY NHÀU (Morinda Citrifolia L.) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN, NĂM 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM JULY SENGMANIVONG NGHIÊN CỨU MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY IN VITRO CÂY NHÀU (Morinda Citrifolia L.) Ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Cán hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN THỊ THU NGÀ THÁI NGUYÊN, NĂM 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn: “Nghiên cứu môi trường nuôi cấy in vitro Nhàu (Morinda Citrifolia L.)” cơng trình nghiên cứu tơi Mọi kết liệt kê luận văn kết tơi thu được, hồn tồn khơng chép kết luận văn có trước Về tài liệu tham khảo có trích dẫn đầy đủ luận văn Thái Nguyên, tháng năm 2019 Tác giả luận văn July SENGMANIVONG Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Đầu tiên tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thị Thu Ngà người tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện, giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Thứ hai xin cảm ơn thầy giáo, cô giáo thuộc khoa Sinh học, phận Sau đại học Phòng Đào tạo, Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên nhiệt tình giảng dạy tạo điều kiện cho tơi hồn thành khóa học Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cô Trần Thị Hồng, cán phịng thí nghiệm Cơng nghệ tế bào, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên giúp đỡ tạo điều kiện cho tiến hành luận văn Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới người thân gia đình, đồng nghiệp bạn bè tạo điều kiện, giúp đỡ động viên suốt thời gian học tập Thái Nguyên, tháng năm 2019 Tác giả luận văn July SENGMANIVONG Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Nhàu 1.1.1 Đặc điểm phân loại đặc điểm sinh học 1.1.2 Giá trị dược liệu 1.1.3 Tình hình nghiên cứu Nhàu giới Việt Nam 10 1.2 Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật ứng dụng 13 1.2.1 Các yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy in vitro 13 1.2.2 Các phương pháp nhân giống vơ tính in vitro 15 1.3 Thành tựu bảo tồn nguồn gen thực vật in vitro 16 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Vật liệu hóa chất 20 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 20 2.1.2 Hoá chất, thiết bị 20 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 20 2.3 Phương pháp nghiên cứu 21 2.3.1 Nhóm phương pháp ni cấy in vitro 21 2.3.2 Phương pháp đưa vườn ươm 24 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 2.3.3 Phương pháp xử lí tính tốn số liệu 25 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 Nghiên cứu công thức khử trùng tạo mẫu 26 3.1.1 Kết khử trùng hạt Nhàu 26 3.1.2 Kết khử trùng đoạn thân Nhàu 29 3.2 Kết tạo chồi in vitro Nhàu 30 3.2.1 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến phát sinh chồi mẫu cấy 31 3.2.2 Ảnh hưởng Kinetin đến phát sinh chồi in vitro 34 3.3 Nghiên cứu khả tạo rễ Nhàu 36 3.3.1 Ảnh hưởng IBA đến phát sinh rễ Nhàu 37 3.3.2 Ảnh hưởng IAA đến phát sinh rễ Nhàu 40 3.4 Nghiên cứu giá thể thích hợp đưa Nhàu ngồi tự nhiên 44 3.4.1 Giai đoạn bầu đất 44 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 2,4-D : 2,4D-Dichlorophenoxy Acetic Acid BAP : 6-Benzyl Amino Purin BTĐ : Bệnh tiểu đường Cs : Cộng CT : Công thức CTN : Cao trái Nhàu CY : Cyclophosphamid DPPH : 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazy ĐC : Đối chứng ĐTĐ : Đái tháo đường GA3 : Gibberellin IAA : Indoly Acetic Acid IBA : Indoly Butyric Acid Kinetin : 6-furturylamino purine KT : Khử trùng MS : Murashige - Skoog (1962) NAA : α - Napthalen Acetic Acid NJ : Noni Juice TNJ : Tahitian Noni Juice OA : Ovalbumin + Al(OH)3 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng javen đến nảy mầm hạt Nhàu 28 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BAP đến phát sinh chồi mẫu cấy 33 Bảng 3.3 Ảnh hưởng Kinetin đến phát sinh chồi mẫu cấy 35 Bảng 3.4 Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ Nhàu 39 Bảng 3.5 Ảnh hưởng IAA đến khả tạo rễ Nhàu 42 Bảng 3.6 Ảnh hưởng giá thể đến trồng bầu 44 Bảng 3.7 Kết vườn ươm 46 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây, hoa Nhàu Hình 1.2 Hạt Nhàu Hình 3.1 Hạt Nhàu sau khử trùng nảy mầm 28 Hình 3.2 Đoạn thân Nhàu sau khử trùng mơi trương MS 30 Hình 3.3 Cây Nhàu môi trường chứa BAP với nồng độ thay đổi 34 Hình 3.4 Cây Nhàu môi trường chứa Kinetin 36 Hình 3.5 Cây Nhàu mơi trường chứa IBA 0,9mg/l 40 Hình 3.6 Cây Nhàu môi trường chứa IAA 0,5mg/l 43 Hình 3.7 Cây Nhàu in vitro hồn chỉnh trồng bầu đất 45 Hình 3.8 Cây Nhàu in vitro trồng vườn ươm 46 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Trong thập niên gần đây, nhờ ứng dụng khoa học kỹ thuật nghiên cứu, khai thác nguồn dược liệu có nhiều bước tiến đáng kể, góp phần nâng cao hiệu điều trị, hiệu kinh tế Tuy nhiên với điều đó, nguồn tài nguyên cạn kiệt dần Vì vậy, sử dụng hợp lý tìm nguồn dược liệu mới, dược liệu thay cần thiết Cây Nhàu thuộc họ Coffee Rubiaceae giống dược liệu quý trồng phổ biến dược liệu có nhiều ứng dụng y học cổ truyền dân tộc Lào nhiều nơi giới Hầu hết phận sử dụng làm thức ăn, đồ uống Trong dân gian, dùng làm thuốc với tác dụng chữa bệnh như: Mất ngủ, đau lưng, hạ huyết áp, loét dày, viêm khớp, thuốc nhuận tràng, điều kinh, giảm đau xương khớp, chống oxy hóa, hỗ trợ chữa trị ung thư,… Hiện nay, việc chữa bệnh thuốc có nguồn gốc từ thảo dược xu hướng thu hút quan tâm nghiên cứu nhà khoa học Chính lợi ích thiết thực với sống, Nhàu loại dược liệu cần nhân giống phổ biến rộng rãi Trong năm trở lại gần đây, nhu cầu sử dụng sản phẩm từ Nhàu tăng đột biến, đặc biệt nhu cầu từ nước tăng mạnh, gần sản phẩm từ Nhàu ln tình trạng khan hàng Trong nước, người tiêu dùng biết đến nhiều công dụng từ trái Nhàu, dẫn đến nhu cầu nội địa tăng Nhiều nơi có truyền thống dùng rễ Nhàu thái mỏng phơi khô sắc uống để trị đau lưng, phong thấp Phụ nữ số vùng cịn ăn trái Nhàu chín để làm nhuận trường, hoạt huyết điều hòa kinh nguyệt…[18] Bên cạnh cịn có nhiều cơng ty dược nước giới sản xuất thuốc viên thuốc nước từ thuốc với mục đích chữa nhiều bệnh [11] Việc bảo tồn giống dược liệu nói chung Nhàu nói riêng thực nhiều biện pháp truyền thống chiết cành, ghép cành Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn chiều dài trung bình rễ giảm Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Bảng 3.4 Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ Nhàu Công thức Nồng độ IBA (mg/l) Số lượng rễ Chiều dài Chất lượng rễ(cm) rễ Sau tuần ĐC 0 CT1 0,3 3,80±0,19 0,70±0,04 + CT2 0,5 4,30±0,21 0,71±0,04 ++ CT3 0,7 4,73±0,19 0,74±0,04 ++ CT4 0,9 5,53±0,20 0,79±0,03 ++ CT5 1,1 2,80±0,23 0,61±0,04 + Sau tuần ĐC 0 CT1 0,3 6,04±0,28 1,67±0,06 + CT2 0,5 6,98±0,24 2,09±0,07 ++ CT3 0,7 8,37±0,24 2,51±0,09 ++ CT4 0,9 8,73±0,13 2,75±0,10 +++ CT5 1,1 5,48±0,25 1,11±0,04 + Sau tuần ĐC 0 CT1 0,3 9,13±0,41 3,11±0,10 + CT2 0,5 9,43±0,25 3,46±0,11 ++ CT3 0,7 10,67±0,25 3,64±0,12 ++ CT4 0,9 11,83±0,30 3,75±0,13 +++ CT5 1,1 7,43±0,26 2,35±0,08 + Ghi chú: (+) rễ ngắn, nhỏ, màu vàng; (++): rễ bình thường, màu trắng vàng; (+++): rễ mập, dài, có rễ phụ, màu trắng vàng Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn A B Hình 3.5 Cây Nhàu mơi trường chứa IBA 0,9mg/l sau tuần A: Đối chứng; B: IBA 0,9 mg/l Xét đồng thời tiêu theo dõi thí nghiệm cho thấy, môi trường tối ưu nồng độ nghiên cứu cho việc tạo rễ Nhàu môi trường bổ sung IBA 0,9 mg/l Trên môi trường này, số rễ/chồi đạt 11,83 cm, chiều dài trung bình 3,75 cm, bề mặt rễ sần xùi, có nhiều rễ phụ, màu trắng vàng 3.3.2 Ảnh hưởng IAA đến phát sinh rễ Nhàu IAA chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm auxin, đưa vào môi trường nuôi cấy nhằm thúc đẩy sinh trưởng dãn nở tế bào, tăng cường trình sinh tổng hợp trao đổi chất, kích thích hình thành rễ Dựa đặc tính IAA, chúng tơi tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng IAA đến phát sinh rễ Nhàu Thí nghiệm tiến hành cơng thức có bổ sung IAA nồng độ khác Kết thu sau nuôi cấy 4, tuần thể bảng 3.5 hình 3.6 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Bảng 3.5 Ảnh hưởng IAA đến khả tạo rễ Nhàu Công thức Nồng độ Số lượng rễ IAA (mg/l) Chiều dài Chất lượng rễ (cm) rễ Sau tuần ĐC 0 CT1 0,1 2,97±0,16 0,55±0,03 + CT2 0,3 3,43±0,19 0,63±0,04 ++ CT3 0,5 4,60±0,18 1,20±0,35 +++ CT4 0,7 3,83±0,17 0,89±0,02 ++ CT5 0,9 3,57±0,20 0,83±0,34 ++ Sau tuần ĐC 0 CT1 0,1 6,97±0,33 0,98±0,03 + CT2 0,3 7,67±0,36 1,09±0,04 ++ CT3 0,5 9,37±0,50 1,27±0,18 +++ CT4 0,7 8,23±0,40 1,14±0,05 ++ CT5 0,9 7,67±0,36 1,06±0,34 ++ Sau tuần ĐC 0 CT1 0,1 7,93±0,28 2,03±0,48 + CT2 0,3 8,33±0,29 2,07±0,06 ++ CT3 0,5 10,70±0,50 2,37±0,32 +++ CT4 0,7 9,43±0,38 2,12±0,08 ++ CT5 0,9 9,17±0,31 1,94±0,31 ++ Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Ghi chú: (+) rễ gầy, nhỏ, màu vàng; (++): rễ bình thường, màu trắng vàng; (+++): rễ mập, dài, màu trắng vàng Từ kết trình bày bảng 3.5 cho thấy, tất mơi trường thí nghiệm chồi in vitro hình thành rễ, nhiên khả hình thành rễ chồi Nhàu khác mơi trường có bổ sung IAA với nồng độ khác Các mơi trường có chất kích thích sinh trưởng IAA cho tỉ lệ chồi rễ cao nhiều so với môi trường đối chứng (mơi trường khơng có chất kích thích sinh trưởng IAA) Trong cơng thức mơi trường có chất kích thích sinh trưởng mơi trường CT3 (mơi trường có IAA 0,5 mg/l) môi trường cho tỉ lệ chồi rễ cao (sau tuần đạt 10,70 rễ) Môi trường CT5 có nồng độ IAA 0,9 mg/l cao mơi trường CT3 có nồng độ IAA 0,5 mg/l tỉ lệ chồi rễ thấp Kết cho thấy, nồng độ IAA cao gây ức chế khả hình thành rễ Nhàu Vì vậy, thí nghiệm này, công thức môi trường CT3 môi trường chứa IAA thích hợp cho tạo rễ Nhàu A B Hình 3.6 Cây Nhàu mơi trường chứa IAA 0,5mg/l sau tuần A: Đối chứng; B: IAA 0.5 mg/l Từ kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm auxin (IBA, IAA) đến phát sinh rễ Nhàu nhận thấy, môi trường tạo chất lượng rễ tốt Nếu nghiên cứu tạo hoàn chỉnh mang Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn đặc điểm hình thái rễ Nhàu (có rễ rễ phụ), mơi trường bổ sung IBA phù hợp Do vậy, mơi trường thích hợp cho tạo rễ Nhàu phạm vi nghiên cứu đề tài mơi trường MS có bổ sung đường sucrose 30 g/l + agar g/l + IBA 0,9 mg/l 3.4 Nghiên cứu giá thể thích hợp đưa Nhàu tự nhiên 3.4.1 Giai đoạn bầu đất Việc lựa chọn giá thể thích hợp để đưa vườn ươm khâu cuối quan trọng trình nhân giống in vitro Cần phải thực thật cẩn thận khâu định đến thành cơng q trình ni cấy in vitro Giá thể phù hợp giá thể cho tỉ lệ sống cao, sinh trưởng phát triển tốt Cây in vitro nuôi cấy điều kiện ổn định nguồn dinh dưỡng, ánh sáng, nhiệt độ Khi chuyển ngồi mơi trường tự nhiên hồn tồn khác nên dễ bị chết nước, nhiệt độ cao Vì phải thích nghi dần với điều kiện tự nhiên Trước đem trồng vườn ươm, đưa khỏi phòng sinh trưởng, đặt điều kiện nhiệt độ phịng bình thường, để khoảng ngày Sau lấy khỏi bình, rửa agar bám rễ Đem trồng giá thể nghiên cứu loại giá thể để trồng thăm dò: Đất thịt + trấu hun +cát (tỉ lệ 1:2:1); đất thịt trung bình + trấu hun (tỉ lệ 1:1); đất thịt trung bình Trong thời gian thích nghi với điều kiện mơi trường (tối thiểu khoảng - tuần), cần chăm sóc bảo vệ cẩn thận Bảng 3.6 Ảnh hưởng giá thể đến trồng bầu sau tuần Giá thể Tỉ lệ sống (%) Chất lượng Đất thịt 100 + Đất thịt + trấu hun (1:1) 100 +++ Đất thịt +trấu hun + cát (1:2:1) 100 ++ Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn Ghi chú: (+):Cây nhỏ, thấp, nhỏ, xanh nhạt; (++):cây thấp, xanh đậm; (+++):cây to, phiến rộng, xanh đậm Đất thịt Đất thịt + Trấu hun Đất thịt + Trấu hun + (1:1) Cát (1:2:1) Hình 3.7 Cây Nhàu in vitro hồn chỉnh trồng bầu đất sau tuần Kết bảng 3.6 hình 3.7 cho thấy, loại giá thể khác cho tỉ lệ sống chất lượng khác rõ rệt Tỉ lệ sống giá thể sau tuần trồng 100 % Trên giá thể đất thịt tỉ lệ sống đạt 100 %, sinh trưởng yếu so với giá thể khác, có màu vàng nhạt, phát triển chậm Những trồng giá thể đất thịt + trấu hun theo tỉ lệ 1:1, tỉ lệ sống 100%, sinh trưởng phát triển tốt, hình thành thêm mới, phiến rộng, màu xanh đậm Cây trồng giá thể đất thịt + trấu hun + cát, tỉ lệ sống đạt 100 %, phát triển bình thường giá thể này, hình thành mới, chuyển sang màu xanh nhạt Do đó, giá thể đất thịt kết hợp với trấu hun tỉ lệ 1:1 nghiên cứu phù hợp để trồng Nhàu in vitro giai đoạn bầu đất 3.4.2 Ra vườn ươm Cây Nhàu in vitro sau huấn luyện đạt chiều cao khoảng - cm, hình thành thêm mới, xanh đậm, chiều dài rễ đạt - cm, khỏe mập sẵn sàng cho việc chuyển môi trường tự nhiên Chúng tiến hành chuyển trồng luống với mật độ 30 x 30 cm Tuần phủ ni lông Tưới nước vào buổi chiều Theo dõi, đánh giá kết sau tuần tuần chăm sóc Kết Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn thí nghiệm thể bảng 3.7 hình 3.8 Bảng 3.7 Kết vườn ươm Thời gian Chiều cao (cm) Số lá/cây Chất lượng tuần 5,68 ± 0,27 8,67 ± 0,35 +++ tuần 6,70 ± 0,28 10,40 ± 0,34 +++ Ghi chú: Chất lượng (+): Cây nhỏ, thấp, nhỏ, xanh nhạt; chất lượng trung bình (++): Cây thấp, xanh đậm; chất lượng tốt (+++): Cây to, phiến rộng, xanh đậm A B Hình 3.8 Cây Nhàu in vitro trồng vườn ươm A: tuần; B: tuần Qua bảng 3.7 hình 3.8 cho thấy, Nhàu in vitro có sinh trưởng phát triển tốt môi trường tự nhiên, chiều cao đạt 5,68 sau tuần, đạt 6,70 cm sau tuần Cũng số có tăng lên 8,67 sau tuần 10,4 sau tuần; to, phiến rộng, xanh đậm Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 1.1 Hạt Nhàu khử trùng cồn 700 (1 phút), javen 60% 20 phút Ở ngưỡng thời gian tỉ lệ hạt nảy mầm đạt 82% 1.2 Trên môi trường MS + đường sucrose 30 g/l + agar g/l + BAP 2,0 mg/l cho hiệu tạo đa chồi tốt nồng độ nghiên cứu Trên môi trường chồi mập, phát triển tốt, số chồi/mẫu đạt 2,53 1.3 Mơi trường tối ưu cho q trình tạo Nhàu in vitro hoàn chỉnh MS + đường sucrose 30 g/l + agar g/l có bổ sung IBA 0,9 mg/l Rễ phát sinh mập, khỏe, rễ mang nhiều rễ phụ 1.4 Khi ngồi điều kiện tự nhiên giai đoạn bầu đất, giá thể đất thịt + trấu hun tỉ lệ 1:1 phù hợp cho việc huấn luyện in vitro Đề nghị Nghiên cứu bổ sung phối hợp chất kích thích sinh trưởng vào mơi trường ni cấy để kết tạo đa chồi tốt Tiếp tục theo dõi sinh trưởng phát triển Nhàu đến giai đoạn hoa, thu So sánh phân tích hàm lượng dược chất tự nhiên in vitro Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Phạm Thị Vân Anh, Nguyễn Trọng Thông, Vũ Thị Ngọc Thanh (2004), “Nghiên cứu ảnh hưởng cao trái Nhàu (Morinda Citrifolia L Rubiaceae) động vật thực nghiệm bị suy giảm miễn dịch chiếu tia xạ”, Tạp chí nghiên cứu Y học, 32(6), tr 82-86 Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học Võ văn Chi (2000), Cây thuốc trị bệnh thông dụng, NXB Thanh Hóa Bùi Thế Đồi, Lê Thị Diên (2011), Kỹ thuật trồng ba lồi thuốc nam Nhàu, Chóc máu Củ dịm đất rừng, NXB Nơng nghiệp, Hà Nội Vũ Hương Giang, Ninh Khắc Bản, Trần Mỹ Linh, Lê Quỳnh Liên (2015),“ Điều tra tình hình phân bố khả tái sinh tự nhiên số loài chi Nhàu (Morindacitrifolia L.) Việt Nam”, Hội nghị Khoa học toàn quốc sinh thái tái nguyên sinh vật lần thứ 6, tr 1357-1363 Trương Thị Hồng Hải, Nguyễn Cơng Hồi Sơn, Trần Thị Thanh (2018), “Nghiên cứu đa dạng di truyền số Chùm ngây (Morinda oleifera) nhập nội thị RADP” Hội thảo khoa học công nghệ sinh học tồn quốc, tr.1554-1563 Lê Văn Hồng (2007), Cơng nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật, NXB Khoa học kỹ thuật Phạm Hoàng Hộ (2003), Cây cỏ Việt Nam, Quyển III, NXB Trẻ, TP Hồ Chí Minh Lê Thị Tâm Hồng, Lê Thị Thủy Tiên, Trần Văn Minh (2018), “ Bảo tồn phát triển Xạ Đen (Ehretia Asperula Zollinger Et Moritzi) kỹ thuật nuôi cấy đốt thân in vitro”, Hội thảo khoa học cơng nghệ sinh học tồn quốc, tr.1602-1607 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 10 Nguyễn Thị Ngọc Hương, Võ thị Bạch Mai (2009), “Tìm hiểu phát sinh hình thái rễ nuôi cấy in vitro Nhàu (Morinda Citrifolia L.)”, Tạp chí phát triển khoa học & cơng nghệ, tập 12 (17), tr 100 - 105 11 Nguyễn Thị Ngọc Hương, Võ thị Bạch Mai (2010), “Tìm hiểu phát sinh hình thái chồi ni cấy in vitro Nhàu (Morinda Citrifolia L.)”, Tạp chí phát triển khoa học & công nghệ, tập13 (1), tr 209 - 214 12 Võ Thị Mai Hương, Trần Thanh Phong (2013), “ Một số đặc trưng hóa sinh khả kháng khuẩn dịch chiết Nhàu (Morinda Citrifolia L.)”, Hội nghị khoa học toàn quốc sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ 5, tr 1073-1078 13 Lê Hoài Hương, Nguyễn Hồng An Thụy, Bùi Thanh Hịa, Trần văn Minh (2018), “Nghiên cứu nhân giống in vitro nuôi cấy tế bào thuốc Hoàn Ngọc (Pseuderanthemum Palatiferum (Nees) Radlk, Ex Lindau) định lượng hoạt chất tích tụ ”, Hội thảo khoa học cơng nghệ sinh học tồn quốc, tr.1608-1614 14 Nguyễn Thị Nhật Linh, Nguyễn Bá Nam, Nguyễn Thị Kim Yến, Lê Kim Cương, Nguyễn Phúc Huy, Dương Tấn Nhựt (2012), “Ảnh hưởng than hoạt tính lên khả định hướng rễ Hồng môn Cúc ni cấy in vitro”, Tạp chí Sinh học, 34(3): 377-388 15 Đỗ Tất Lợi (2015), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Thời đại, Hà Nội 16 Nguyễn Quang, Nguyễn Thị Lý Anh (2007), Công nghệ sinh học nông nghiệp, NXB Đại học Sư phạm 17 Lê Thị Như Thảo, Nguyễn Trung Hậu, Trần Văn Minh (2018), “ Nuôi cấy rễ bất định Đinh Lăng nhỏ (Polyscias Fruticosa L Harms) định lượng hoạt chất saponin tích lũy”, Hội thảo khoa học cơng nghệ sinh học tồn quốc, tr.1658-1664 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 18 Vũ Văn Thắng, Nguyễn Phan Cẩm Tú, Phạm Thị Ánh Hồng (2009),“Tách chiết hợp chất anthraquinone từ rễ Nhàu (Morinda Citrifolia L.) Việt Nam”, Báo cáo khoa học hội nghị CNSH toàn quốc 2009, 04-49, tr.693696 19 Phạm Thiệp, Lê Văn Thuần, Bùi Xuân Chương (2000), Cây thuốc Bài thuốc Biệt dược, NXB Y học 20 Nguyễn Trọng Thông, Phạm Thị Vân Anh, Nguyễn Thị Vinh Hà, Vũ Thị Ngọc Thanh (2004), “Nghiên cứu ảnh hưởng cao trái Nhàu (Morinda Citrifolia L Rubiaceae) động vật thực nghiệm bị gây suy giảm miễn dịch Cyclophosphamid”, Tạp chí nghiên cứu Y học, 27(1), tr 28-33 21 Nguyễn Trọng Thông, Nguyễn Thành Quân, Phạm Thị Vân Anh, Vũ Thị Ngọc Thanh (2004), “Sơ nghiên cứu tác dụng hạ huyết áp cao trái Nhàu (Morinda citrifolia Linne) thực nghiệm”, Tạp chí nghiên cứu Y học, 32(6), tr 76-81 22 Nguyễn Thị Thơ, Vũ Thị Phan, Lê Viết Việt, Khuất Thị Hải Ninh, Nguyễn Thị Hải Hà, Nguyễn Thùy Linh, Bùi Văn Thắng (2018), “Nghiên cứu nhân giống Râu Hùm (Tacca Chantrieri André) kỹ thuật nuôi cấy in vitro ”, Hội thảo khoa học công nghệ sinh học toàn quốc, tr.1615-1620 23 Đái Thị Xuân Trang, Nguyên Thị Mai Phương, Võ Thị Ngọc Diễm Quách Tú Huê (2012), “Khảo sát hiệu hạ đường huyết chống oxy hóa cao chiết Nhàu (Morinda citrifolia L.) chuột bệnh tiểu đường”, Tạp chí khoa học, 23b, tr 115-124 24 Đái Thị Xuân Trang (2016), “Ảnh hưởng cao ethanol rễ Nhàu (Morinda citrifolia L.) đến thay đổi mô bệnh học tụy tạng chuột bệnh đái tháo đường ”, Tạp chí phát triển khoa học nghiên cứu, tập 19, tr 66-73 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 25 Nguyễn Hải Tuất, Ngơ Kim Khơi (1996), Xử lí thống kê kết nghiên cứu thực nghiệm nông lâm ngư nghiệp máy vi tính, NXB Nơng nghiệp, Hà Nội Tiếng Anh 26 Aline Carla Inada, Priscila Silva Figueiredo, Rosângela Aparecida dos Santos-Eichler, Karine de Cássia Freitas, Priscila Aiko Hiane, Alinne Pereira de Castro, and Rita de Cássia Avellaneda Guimarães (2017), “Morinda citrifolia Linn.(Noni) and Its Potential in Obesity-Related Metabolic Dysfunction”, Nutrients, 9(6): 540 27 Anderson T (1848), “On the Colouring Matter of Morinda Citrifolia” Trans Roy Soc Edin 16: 435-443 28 Antony Selvaraj S., Manju Kamath L and Subramani J (2006), “Micropropagation of Morinda citrifolia”, Intl J Noni Res 1(2) 29 Balakrishna S., Seshadri TR., Venkataramani B (1961), “Special chemical component of commercial woods and related plant materials: Part XHeartwood of Morinda citrifolia Linn”, J Sci Industrial Res, 20B:331–333 30 Elakkuvan S., Manivannan K (2015), “ Effect Of Surface Sterilization On In vitro Surviva Of Explants Of Noni (Morinda Citrifolia L.) ”, International Journal of Advance Research in Engineering, Science & Technology (IJAREST), ISSN(O):2393-9877, ISSN(P): 2394-2444 31 Gairi A & Rashid A (2004), “Direct differentiation of somatic embryos on different regions of intact seedlings of Azadirachta in response to thidiazuron”, j plant physiol, 161:1073-1077 32 Komaraiah P., Kishor, Maria, Magnusson, Karl-Eric (2005), “Enhancement of anthraquinone accumulation in Morinda citrifolia suspension cultures”, Plant Science, Vol 168, 1337-1344 33 Langford J., Dought A., Wang M., Clayton L., Babich M (2004), “Effects of Morinda citrifolia on quality of life and auditory function in postmenopausal women”, J Altern Complement Med 10 (5): 737-9 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn 34 Patade S.S., Tikka SBS., Mishra S., Rathod AH., Yadav SR and Patil CN (2011),“ In vitro micropropagation of Indian Noni (Morinda citrifolia L.)” Intl J Noni Res, (1-2) 35 Saini M K and Patel R M (2015), “ In vitro Mass Multiplication Of Noni (Morinda Citrifolia L.) Through Nodal Segment Explants ”, Journal of Cell and Tissue Research Vol 15(1) 4877-4882 36 Stalman M., Koskamp AM., Luderer R., Vernooy JH., Wind JC., Wullems GJ., Croes AF (2003), “Regulation of anthraquinone biosynthesis in cell cultures of Morinda citrifolia”, J Plant Physiol, 160(6): 607-14 37 Wang MY., Su C (2001), “Cancer Preventive Effect of Morinda citrifolia (Noni)”, Annals NY Acad Sci 952: 161-168 Tài liệu Internet 38 Nhàu (2019), https://vi.wikipedia.org/wiki/Nh%C3%A0u, ngày 26/03/2019 39 Sử dụng rễ Nhàu y học cổ truyền - Lương Y Võ Hà ( 2018), https://Nonigreen.com/su-dung-re-nhau-trong-y-hoc-co-truyen/, ngày 30/11/2018 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn ... Học liệu Công nghệ thông tin – ĐHTN http://lrc.tnu.edu.vn L? ??I CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn: ? ?Nghiên cứu môi trường nuôi cấy in vitro Nhàu (Morinda Citrifolia L. )? ?? cơng trình nghiên cứu. .. NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM JULY SENGMANIVONG NGHIÊN CỨU MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY IN VITRO CÂY NHÀU (Morinda Citrifolia L. ) Ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC... cytokinin gồm: Kinetin; - Benzyl amino purine (BAP); 6-Dimethylalylamnino purine (2iP); Zeatin Hiện hệ chất điều hòa sinh trưởng, chẳng hạn thidiazuron (TDZ) -một cytokinin thuộc phenylureas, l? ?n