Ảnh hưởng của môi trường nuôi thành thục và nồng độ tinh tới khả năng hình thành tiền nhân và sự phát triển của phôi lợn thụ tinh ống nghiệm​

VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT - NGUYỄN THỊ HIỆP ẢNH HƢỞNG CỦA MÔI TRƢỜNG NUÔI THÀNH THỤC VÀ NỒNG ĐỘ TINH TỚI KHẢ NĂNG HÌNH THÀNH TIỀN NHÂN VÀ SỰ PHÁT TRIỂN CỦA PHÔI LỢN THU TINH ỐNG NGHIỆM Chuyên ngành: Động vật học Hà Nội - 2014 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu tơi thực hiện, số liệu luận văn trung thực xác Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn đƣợc cảm ơn đầy đủ, thơng tin trích dẫn luận văn đƣợc rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 11 tháng 11 2014 năm Tác giả luận văn Nguyễn Thị Hiệp Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN! Tôi xin gửi lời cám ơn chân thành sâu sắc tới TS Nguyễn Việt Linh, chủ nhiệm đề tài, ngƣời thầy tận tình hƣớng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới TS Bùi Xuân Nguyên, TS Nguyễn Thị Ƣớc, ngƣời thầy tận tình dạy bảo, hƣớng dẫn công việc chuyên môn nhƣ kinh nghiệm sống Tôi xin gửi lời cám ơn chân thành tới tập thể cán nghiên cứu Phịng Cơng nghệ Phơi đặc biệt TS Nguyễn Văn Hạnh, Ths Nguyễn Thị Hồng, Ths Nguyễn Thị Nhung, CN Nguyễn Văn Lâm nhiệt tình giúp đỡ, ủng hộ góp ý để tơi hồn thành luận văn Luận văn đƣợc hoàn thành với tài trợ Quỹ Phát triển khoa học công nghệ quốc gia khuôn khổ đề tài “Nghiên cứu ảnh hƣởng giọt nỗn bào chất đơn tính lên hoạt hóa trứng phát triển phôi” mã số 106.12-2012.93 TS Nguyễn Việt Linh chủ nhiệm Tôi xin cảm ơn Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật tạo điều kiện thủ tục hành để tơi bảo vệ luận văn Cuối tơi xin gửi lời cám ơn tới gia đình, bạn bè, ngƣời sát cánh, ủng hộ tơi suốt q trình học tập thực luận văn Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 2014 11 tháng 11 năm Học viên Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Nguyễn Thị Hiệp MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH …vi DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT viii PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Ý nghĩa .3 PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Sự hình thành phát triển tế bào trứng lợn 2.1.1 Sự hình thành phát triển nang trứng 2.1.2 Sự hình thành phát triển tế bào trứng .6 2.1.3 Sự thành thục tế bào trứng 2.2 Thụ tinh ống nghiệm lợn .10 2.2.1 Nguyên lý thụ tinh ống nghiệm giai đoạn trình thụ tinh 10 2.2.2 Sự thành thục tế bào trứng lợn ống nghiệm 13 2.2.3 Các yếu tố ảnh hƣởng tới kết thụ tinh ống nghiệm lợn 20 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 2.3 Tình hình nghiên cứu ni thành thục, thụ tinh ống n Việt Nam PHẦN III ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 3.1 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 3.3 Nội dung nghiên cứu tiêu theo dõi 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 3.4.1 Chuẩn bị môi trƣờng thu 3.4.2 Phƣơng pháp thu, bảo qu 3.4.4 Phƣơng pháp phân loại c 3.4.5 Phƣơng pháp đánh giá th 3.4.6 Phƣơng pháp thụ tinh ốn 3.4.7 Phƣơng pháp đánh giá chất lƣợng phôi nang 3.4.8 Phƣơng pháp xử lý số liệu PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi tới thành thục 4.2 Ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi tới tỷ lệ thụ tinh 4.3 Ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi thành thục tới phát triển phôi lợn thụ tinh ống nghiệm 4.4 Ảnh hƣởng nồng độ tinh tới kết thụ tinh ống nghiệm lợn 54 4.5 Ảnh hƣởng nồng độ tinh phát triển chất lƣợng phôi lợn PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 5.1 Kết luận 70 5.2 Đề nghị .71 DANH MỤC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 4.1 Ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi thành thục tới khả thành thục tế bào trứng lợn Bảng 4.2 Ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi thành thục tới khả hình thành tiền nhân đực tế bào trứng lợn Bảng 4.3 Ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi thành thục tới phát triển tế bào trứng lợn Bảng 4.4 Ảnh hƣởng nồng độ tinh tới khả thụ tinh tinh trùng với trứng loại A Bảng 4.5 Ảnh hƣởng nồng độ tinh tới khả thụ tinh tinh trùng với trứng loại B1 Bảng 4.6 Ảnh hƣởng nồng độ tinh tới khả thụ tinh tinh trùng với trứng loại B2 Bảng 4.7 Ảnh hƣởng nồng độ tinh tới phát triển phôi lợn thụ tinh ống nghiệm với trứng loại A Bảng 4.8 Ảnh hƣởng nồng độ tinh tới phát triển phôi lợn thụ tinh ống nghiệm với trứng loại B1 Bảng 4.9 Ảnh hƣởng nồng độ tinh tới phát triển phôi lợn thụ tinh ống nghiệm với trứng loại B2 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN 43 47 49 53 56 57 61 62 63 http://www.lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC HÌNH Tên hình Trang Hình 2.1 Sự hình thành phát triển nang trứng lợn Hình 2.2 Cấu tạo tế bào trứng Hình Buồng trứng lợn lai kinh tế Hình 3.2 Trứng lợn loại A, B1, B2 Hình 4.1 Trứng lợn giai đoạn GV Hình 4.2 Trứng lợn giai đoạn thàn Hình 4.3-a Tế bào trứng lợn thụ tinh bình thƣờng, 4.3-b Tế bào trứng lợn đa thụ tinh Hình 4.4 Phơi giai đoạn tế bào ( Hình 4.4 Phơi nang (Blastocyst) Hình 4.5 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN Số tế bào/phôi nang http://www.lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC BIỂU ĐỒ Tên biểu đồ Trang Biểu đồ 4.1 Ảnh hƣởng chất lƣợng trứng tới khả xâm nhập tinh trùng Biểu đồ 4.2 Ảnh hƣởng chất lƣợng trứng tới khả hình thành tiền nhân Biểu đồ Ảnh hƣởng chất lƣợng trứng tới khả thụ tinh bình thƣờng tế bào trứng lợn Biểu đồ 4.4 Ảnh hƣởng chất lƣợng trứng tới khả phân chia tế bào trứng lợn Biểu đồ 4.5 Ảnh hƣởng chất lƣợng trứng tới khả hình thành phôi nang Biểu đồ 4.6 Ảnh hƣởng chất lƣợng trứng tới chất lƣợng phơi nang Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt DMSO ECG EGF FBS FM FSH GSH GV GVBD HCG IVC IVF IVM LH Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN triệu 0,1 triệu tinh trùng/ml, nhƣng nồng độ triệu tinh trùng/ml trứng loại B1 cho tỷ lệ chia cao trứng loại A Khơng có khác biệt tỷ lệ phân chia sau thụ tinh ống nghiệm nhóm chất lƣợng trứng (P>0,05) a b Hình 4.4 Phôi giai đoạn tế bào (a) giai đoạn phơi dâu (b) Tỷ lệ hình thành phơi nang (%) Khả hình thành phơi nang tế bào trứng sau thụ tinh ống nghiệm 0,05 triệu tt/ml A 11 12 B1 46 B2 00 Biểu đồ 4.5 Ảnh hƣởng chất lƣợng trứng tới khả hình thành phơi nang Ở nồng độ tinh 0,05 triệu tt/ml, trứng loại B2 khơng có khả hình thành phơi nang Trứng loại A cho tỷ lệ hình thành phơi nang cao so với Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn trứng loại B1 (11,1 ± 0,9% sv 7,46 ± 1,0%) khác biệt hai nhóm trứng khơng có ý nghĩa thống kê với P>0,05 Với nồng độ tinh triệu tt/ml, trứng loại B2 có hình thành phơi nang nhƣng tỷ lệ thấp, có phơi nang hình thành tổng số 122 trứng thí nghiệm chiếm tỷ lệ 2,51 ± 1,0% Trong đó, trứng loại A, B1 cho tỷ lệ hình thành phơi nang cao (P0,05 Ở nồng độ tinh 0,1 triệu tt/ml, trứng loại A cho tỷ lệ hình thành phơi nang cao đến trứng B1, B2 lầ lƣợt (24,41 ± 1,1%, 14,8 ± 1,5%, 5,25 ± 0,7%), khác biệt có ý nghĩa thống kê với P