Hướng dẫn lấy mẫu, bảo quản và vận chuyển bệnh phẩm COVID19

BÁO CÁO VIÊN: Huỳnh Phương Duy Bộ môn Xét nghiệm Y khoa Các nội dung I QUY TRÌNH THU THẬP, BẢO QUẢN VÀ VẬN CHUYỂN BỆNH PHẨM NGHI NHIỄM Mẫu bệnh phẩm Thời điểm thu thập bệnh phẩm Quy trình mang và tháo bỏ phương tiện phòng hộ cá nhân Phương pháp thu thập bệnh phẩm Bảo quản, đóng gói, vận chuyển bệnh phẩm tới phòng thí nghiệm An toàn sinh học bảo quản, đóng gói, vận chuyển bệnh phẩm II CÁC XÉT NGHIỆM CHẨN ĐOÁN COVID-19 Mẫu bệnh phẩm Điều kiện thiết yếu kết XN xác Ảnh hưởng đến hiệu PXN Mẫu Good sample management bệnh phẩm Ảnh hưởng trực tiếp đến chăm sóc sức khỏe người bệnh đầu Ảnh hưởng đến định điều trị Các yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng mẫu bệnh phẩm ➢ ➢ ➢ ➢ ➢ Thời gian thu thập mẫu Loại mẫu Kỹ thuật lấy mẫu dụng cụ lấy mẫu Bảo quản mẫu (thời gian nhiệt độ) Vận chuyển mẫu Mẫu bệnh phẩm • Chú ý: Được tập huấn an toàn sinh học trước thu thập • Phải có bệnh phẩm đường hơ hấp, thêm mẫu máu • Bệnh phẩm đường hơ hấp trên: • Dịch tị hầu, họng • Dịch xúc họng • Bệnh phẩm đường hô hấp dưới: • Đờm • Dịch phế nang, nội khí quản, màng phổi • Tổ chức phổi, phế quản, phế nang • Mẫu máu toàn phần (3-5ml) Thời điểm thu thập Mẫu bệnh phẩm Yêu cầu loại mẫu bệnh phẩm cho xét nghiệm sinh học phân tử chẩn đoán COVID-19 ❖Bắt buộc tối thiểu 01 mẫu bệnh phẩm đường hô hấp: ❖Bệnh phẩm đường hơ hấp trên: mẫu ngốy dịch tỵ hầu • Nếu khơng lấy mẫu ngoáy dịch tỵ hầu, lấy các mẫu đây: • Bệnh phẩm đường hơ hấp ➢ Mẫu ngoáy dịch họng ➢ Mẫu ngoáy dịch mũi (cả hai bên), áp dụng cho người có triệu chứng ➢ Dịch rửa mũi/tỵ hầu; ➢ Dịch súc họng • Bệnh phẩm đường hô hấp ➢ Đờm ➢ Dịch phế nang, dịch nội khí quản, dịch màng phổi ➢ Tổ chức phổi, phế quản, phế nang Mẫu bệnh phẩm Yêu cầu loại mẫu bệnh phẩm cho xét nghiệm huyết học ❖Mẫu máu (3 – 5ml) + Mẫu máu giai đoạn cấp; + Mẫu máu giai đoạn hồi phục (sau 14-21 ngày sau khởi bệnh) ➢ Lưu ý: Việc lấy mẫu máu không bắt buộc, tùy theo xét nghiệm huyết học địa phương xây dựng phương án cụ thể QUYTRÌNH XÉTNGHIỆM COVID-19 Quy trình xét nghiệm phát nhiễm SARS-CoV-2 cấp tính người có nghi ngờ lâm sàng với COVID-19 (WHO, 11-9-2020) NAAT (Nucleic acid amplification test loại xét nghiệm có độ nhạy cao, tính đặc hiệu cao để chẩn đốn lây nhiễm SARS-CoV2 -> SINH HỌC PHÂN TỬ CÁC XÉT NGHIỆM CHẨN ĐỐN COVID-19 Ni cấy virus (phân lập virus): - Phân lập virus nuôi cấy tế bào - Khơng khuyến cáo chẩn đốn thường qui - Cầncơ sở có an tồn sinh học cấp 3(BSL-3) - Cầnnhân viên đào tạo chuyên sâu - Cókết sau –2tuần - Cầnxác định tiếp tục xét nghiệm đặchiệu → Ứng dụng: nghiên cứu, điều chế vaccine CÁC XÉT NGHIỆM CHẨN ĐOÁN COVID-19 Xét nghiệm sinh học phân tử hay khuếch đại acid nucleic Kỹthuậtthườngsửdụng: - Real-time RT-PCR (Real-time Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction) Viết tắt: rRT-PCR hay qRT-PCR (quantitative RT-PCR) - Giải trình tự gene CÁC XÉT NGHIỆM CHẨN ĐOÁN COVID-19 Xét nghiệm sinh học phân tử Real-time RT-PCR (rRT-PCR hay qRT-PCR) - Khuyến cáo chẩn đoán thường qui: sàng lọc & khẳng định trường hợp nghi nhiễm SARS-CoV-2 cấp Phương pháp xét nghiệm CÁC XÉT NGHIỆM CHẨN ĐOÁN COVID-19 Xét nghiệm sinh học phân tử 2.2 Giải trình tự gene cho SARS-CoV-2 ❖ Để điều tra diễn tiến dịch bệnh: - Những thay đổi quy mô dịch bệnh theo thời gian, - Sự lây lan theo không gian dịch bệnh - Kiểm tra giả thuyết đường lây truyền ❖ Để định chọn kỹ thuật chẩn đoán, thuốc vaccine ❖ Tuy nhiên, chi phí khối lượng cơng việccao, → thực phịng thí nghiệm chun sâu, → nghiên cứu CÁC XÉT NGHIỆM CHẨN ĐOÁN COVID-19 Xét nghiệm phát KN đặc hiệu SARS-CoV-2: ❖ LàcácXNtincậymàíttốnkém,đơngiảnvànhanhhơn → nhạy (0-94%) độ đặc hiệu cao (>97%) ❖ WHO: chấp nhận cho chẩn đoán LS XN đạt yêu cầu độ nhạy > 80%, độ đặc hiệu  97% so với kỹ thuật tham chiếu NAAT ❖ CáctestchẩnđoánKN: giúp  XN SHPT & chẩn đoán nhanhCOVID19 ❖ Hiệu XN cao tải lượng virus cao vào thời điểm lấy mẫu: - giai đoạn đầu nhiễm SARS-CoV-2 - vòng – 14 ngày sau khởi phát triệu chứng CÁC XÉT NGHIỆM CHẨN ĐỐN COVID-19 Xét nghiệm phát KN ❖ Có2loại: - Test phịng xét nghiệm: Ví dụ: XN miễn dịch men hóa phát quang (Nhật bản) (Chemiluminescence Enzyme Immunoassay (CLEIA)assay) - Test nhanh (RDT -Rapid DiagnosticTests): + thực gần người bệnh + KN (protein) đích: thường kháng nguyên N (số lượng lớn) + thường test sắc ký miễn dịch (Immuno-chromatography: ICA) + cho kết vịng 30 phút Ví dụ: Test STANDARD COVID-19 Ag CÁC XÉT NGHIỆM CHẨN ĐOÁN COVID-19 Xét nghiệm phát kháng thể (KT): ❖Khơng sử dụng cho mục đích sàng lọc & chẩn đoán xác định nhiễm SARS-CoV-2 ❖ XN phát KT giúp: - Nghiên cứu & giám sát dịch tễ học COVID-19 - Hỗ trợ chẩn đốn, ví dụ: Độ nhạy kết hợp IgG & RNA > 99% CÁC XÉT NGHIỆM CHẨN ĐOÁN COVID-19 Xét nghiệm gộp mẫu (pool) Tóm tắt: Phân biệt phương pháp xétnghiệm TÀI LIỆU THAM KHẢO Phát kháng nguyên chẩn đoán ca nhiễm SARS-CoV-2 sử dụng xét nghiệm miễn dịch nhanh, WHO - hướng dẫn tạm thới 11/09/2020 Xét nghiệm chẩn đoán SARS-CoV-2, WHO - hướng dẫn tạm thới 11/09/2020 4995 /BYT-DPV/v hướng dẫn tạm thời giámsát người nhập cảnh vào Việt Nam 4042.QĐ-BYT, QuyếT định việc phê duyệt Kế hoạch xét nghiệm phát nhiễm SARS-CoV-2 giai đoạn dịch COVID-19 Antibody and cellular immune response – WHO to SARS-CoV-2 infectionRae-Ellen W Kavey and Allison B Kavey - Viral epidemics_ from influenza to ebola and COVID-19 _ https://ncov.moh.gov.vn/web/guest/trang-chu https://ncov.vncdc.gov.vn/ https://moh.gov.vn/web/dich-benh/cac-van-ban-chi-dao-cua-bo-y-te 10 https://www.who.int/emergencies/diseases/novel-coronavirus-2019 11 https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/index.html ... THẬP, BẢO QUẢN VÀ VẬN CHUYỂN BỆNH PHẨM NGHI NHIỄM Mẫu bệnh phẩm Thời điểm thu thập bệnh phẩm Quy trình mang và tháo bỏ phương tiện phòng hộ cá nhân Phương pháp thu thập bệnh phẩm Bảo quản, ... phẩm • Sau lấy mẫu bảo quản bảo quản 2-8°C chuyển tới phòng xét nghiệm vịng 48 • Vận chuyển đến PXN sau 48 giờ: bảo quản -70°C • Khơng bảo quản ngăn đá tủ lạnh -20°C Kỹ thuật lấy bệnh phẩm Dịch... chuyển bệnh phẩm • Vận chuyển sớm nhất, vòng 48 giờ: bảo quản 2-8°C, và chuyển tới phòng xét nghiệm • Vận chuyển chậm sau 48 giờ: bảo quản -70°C • Khơng bảo quản ngăn đá tủ lạnh -20°C • Bệnh phẩm