Vi khuẩn lam (cyanobacteria) trong một số loại hình đất trồng ở tỉnh nghệ an và vai trò của chúng đối với trồng tt

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH NGUYỄN ĐỨC DIỆN VI KHUẨN LAM (CYANOBACTERIA) TRONG MỘT SỐ LOẠI HÌNH ĐẤT TRỒNG Ở TỈNH NGHỆ AN VÀ VAI TRÒ CỦA CHÚNG ĐỐI VỚI TRỒNG TRỌT Chuyên ngành: Thực vật học Mã sơ: 9.42.01.11 TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC NGHỆ AN - 2018 ĐẶT VẤN ĐỀ Tính cấp thiết đề tài Vi khuẩn Lam (VKL) vi sinh vật quang tự dưỡng thải oxy - cố định khí cacbonic để tổng hợp nên chất hữu cơ; số lồi VKL có khả cố định nitơ phân tử chúng phát triển thành thảm VKL bề mặt đất, đặc biệt đất trồng lúa nước Những đặc điểm trội VKL góp phần quan trọng trì bền vững hệ sinh thái nơng nghiệp mắt xích quan trọng để trì chu trình sinh - địa - hóa VKL đất có khả tiết chất nhầy tạo nên lớp màng, ngăn cản thoát nước cho đất, làm đất ln có độ ẩm, cải tạo pH đất tính chất lí học đất VKL cịn có vai trị to lớn việc bổ sung chất hữu tăng độ phì cho đất, chống xói mịn đất tạo chất có hoạt tính sinh học kích thích sinh trưởng phát triển thực vật bậc cao Ở nước ta, cơng trình nghiên cứu VKL đất trồng cho thấy chúng gặp nhiều đất trồng thành phần loài thay đổi theo loại đất vùng địa lý Riêng Nghệ An, chưa có cơng trình nghiên cứu đa dạng VKL loại hình đất trồng cách đầy đủ có hệ thống Mặt khác, điều đáng lo ngại việc sử dụng phân bón hóa học loại chế phẩm khác nơng nghiệp cách thiếu kiểm sốt gây tác động tiêu cực chất lượng đất, chất lượng môi trường chất lượng nông sản Do đó, việc tìm kiếm biện pháp, có việc điều tra, phân lập số chủng VKLCĐN để cải tạo đất trồng yêu cầu thiết nhiều địa phương, có tỉnh Nghệ An Xuất phát từ sở khoa học thực tiễn nêu trên, tiến hành đề tài “Vi khuẩn Lam (Cyanobacteria) số loại hình đất trồng tỉnh Nghệ An vai trò chúng trồng trọt” Mục tiêu Mục tiêu của đề tài nhằm nghiên cứu đa dạng VKL đất trồng tỉnh Nghệ An, phân lập thăm dò khả cố định nitơ số chủng đồng thời đánh giá vai trò chúng số loại trồng (lúa đậu tương) 3 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiển luận án + Ý Nghĩa khoa học: - Bằng phương pháp tiếp cận hệ thống phân loại VKL Komárek cộng (2014) xếp lại danh lục loài VKL Việt Nam (đến năm 2010) - Lập danh lục 76 loài VKL phân bố đất trồng tỉnh Nghệ An bổ sung danh lục VKL đất trồng Việt Nam Những kết có ý nghĩa nghiên cứu giảng dạy VKL + Ý nghĩa thực tiển: Luận án bước đầu đánh giá vai trị tích cực chủng VKL Nostoc calcicola HN91a suất giống lúa Tám thơm khả phòng vệ giống Đậu tương Nam Đàn Đóng góp luận án - Mơ tả chi Isocystis lồi bổ sung cho danh lục VKL Việt Nam - Xây dựng sưu tập gồm 13 chủng thuộc 13 loài VKL phân lập từ đất trồng tỉnh Nghệ An đồng thời thăm dò khả cố định nitơ chủng thông qua gen nifD - Bước đầu đánh giá vai trò chủng VKL Nostoc calcicola HN91a lên khả thích nghi phịng vệ Đậu tương stress oxy hóa Cấu trúc luận án Luận án bao gồm 128 trang với 24 bảng số liệu, 21 hình với 170 tài liệu tham khảo Kết cấu luận án gồm: mở đầu (03 trang), tổng quan (29 trang), phương pháp thực nghiệm (12 trang), kết thảo luận (60 trang), kết luận (02 trang), danh mục cơng trình cơng bố (01 trang), tài liệu tham khảo (18 trang) Ngoài cịn có phần phụ lục Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung vi khuẩn Lam 1.1.1 Vị trí vi khuẩn Lam sinh giới 1.1.2 Đặc điểm vi khuẩn Lam 1.2 Phân loại vi khuẩn Lam 1.2.1 Sơ lược lịch sử nghiên cứu phân loại vi khuẩn Lam 1.2.2 Hệ thống phân loại vi khuẩn Lam Komárek cộng (2014) 1.2.3 Tình hình nghiên cứu thành phần loài vi khuẩn Lam đất trồng giới Việt Nam Trên giới Ở Việt Nam 1.2.4 Danh lục loài vi khuẩn Lam Việt Nam xếp theo hệ thống phân loại Komárek cộng (2014) Danh lục loài VKL đất trồng Việt Nam Danh lục thành phần loài VKL đất trồng nước Việt Nam 1.3 Vai trò vi khuẩn Lam nông nghiệp 1.3.1 Sự cố định nitơ phân tử vi khuẩn Lam 1.3.2 Nghiên cứu ứng dụng vi khuẩn Lam sản xuất nông nghiệp 1.4 Điều kiện tự nhiên tỉnh Nghệ An Chương ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu đề tài loài VKL (Cyanobacteria) phân bố số loại hình đất trồng thuộc 10 huyện tỉnh Nghệ An Giống lúa Tám thơm (Viện nông nghiệp Việt Nam) Giống đậu tương Nam Đàn (giống địa) 2.2 Nội dung nghiên cứu - Xác định tiêu nơng hố số loại hình đất trồng tỉnh Nghệ An - Xác định thành phần loài VKL số loại hình đất trồng Nghệ An - Phân lập, ni trồng số chủng VKL - Nghiên cứu ứng dụng ảnh hưởng VKL trồng 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp lấy mẫu đất mẫu vi khuẩn Lam 2.3.2 Phương pháp phân tích số tiêu nơng hóa thổ nhưỡng 2.3.3 Phương pháp kế thừa lựa chọn hệ thống phân loại vi khuẩn Lam 2.3.4 Phương pháp định loại vi khuẩn Lam Các mẫu VKL quan sát kính hiển vi quang học (Cole Parmer) với độ phóng đại từ 100 đến 1000 lần, vẽ hình, mơ tả chụp ảnh hiển vi Kích thước tế bào đo phần mềm Motic Images Plus 2.0 Để xác định loài VKL, sử dụng tài liệu định loại của: Komárek J & Anagnostidis K., 1999: Band 19 - Cyanoprokaryota, Part Chroococcales; Komárek J & Anagnostidis K., 2005: Band 19 - Cyanoprokaryota, Part - Oscillatoriales; Komárek J., 2013: Band 19 - Cyanoprokaryota, Part Heterocytous genera Ngoài ra, chúng tơi cịn tham khảo thêm tài liệu phân loại VKL Dương Đức Tiến, 1996; Desikachary, 1959; Hollerbach, 1953 cơng trình cơng nghiên cứu cơng bố loài mới, chi nhà khoa học Danh mục taxa VKL xếp theo Komárek cộng (2014) 2.3.5 Phương pháp phân lập số chủng vi khuẩn Lam Phân lập cấy truyền 2.3.6 Phương pháp phân tích gen cố định nitơ nifD Phương pháp tách chiết DNA DNA tổng số tách chiết theo quy trình tách chiết A Neilan cs (1995) Phương pháp khuếch đại đoạn gen PCR Tất phản ứng PCR thực với tổng thể tích 50µL/phản ứng bao gồm từ 10 - 50 ng DNA, 25 µM mồi, 25 µM MgCl 2, 25 µl Taq PCR MasterMix (QIAGEN) H2O Cặp mồi sử dụng nifD552-F: 5’TCCGK GGKGT DTCTC AGTC3’ nifD861-R: 5’CGRCW GATRT AGTTC AT3’ cho đoạn gen đích khoảng 310bp (được thiết kế để nhân phần đoạn gen nifD từ vị trí 552 tới 861 trình tự nifD chủng Anabaena cylindrica PCC 7122 (AF44250) Phân tích trình tự DNA Sau có trình tự đoạn gen nifD, việc phân tích trình tự thự phần mềm Bioedit MEGA 2.3.7 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng dịch huyền phù vi khuẩn Lam lên số tiêu sinh lý sinh trưởng suất lúa + Bố trí thí nghiệm đồng ruộng Các cơng thức thí nghiệm gồm: - Đối chứng: chăm bón bình thường theo chế độ - Cơng thức BG-11 khơng đạm: ngồi việc chăm sóc theo chế độ, môi trường BG-11 không đạm phun lên lúa sau cấy 15 ngày (lúa bắt đầu đẻ nhánh) sau cấy 50 ngày (lúa bắt đầu làm địng); lít mơi trường BG-11 khơng đạm pha lỗng 10 lần (20 lít) sử dụng cho lần phun - Cơng thức Nostoc calcicola HN9-1a: ngồi việc chăm sóc theo chế độ nêu trên, dịch huyền phù Nostoc calcicola HN9-1a (nồng độ 1,9 g khơ/lít) phun lên lúa sau cấy 15 ngày sau cấy 50 ngày; lượng phun 20 lít/sào/lần + Phương pháp thu thập phân tích số liệu Trong cơng thức thí nghiệm, 10 khóm lúa lấy ngẫu nhiên để thu thập số liệu Các tiêu hàm lượng diệp lục, cường độ quang hợp phân tích vào giai đoạn lúa đẻ nhánh rộ (sau cấy 35 ngày) Bên cạnh đó, kích thước địng (giai đoạn lúa trước trổ bơng) yếu tố cấu thành suất suất thực tế sau thu hoạch đánh giá Các tiêu phân tích theo phương pháp hành dùng nghiên cứu sinh lý thực vật cho lúa + Phương pháp phân tích hàm lượng diệp lục a, b, a, b tổng số phương pháp quang phổ 2.3.8 Phương pháp thử nghiệm tác dụng vi khuẩn Lam lên hệ thống chống ôxy hóa đậu tương Bố trí thí nghiệm Các công thức thực bao gồm: - CT1: đối chứng - xử lý đậu tương với nước cất lần - Các cơng thức thí nghiệm xử lý dịch chiết VKL nồng độ khác nhau, cụ thể sau: CT2: VKL pha cân nồng độ 0,1g/L; CT3: VKL pha cân nồng độ 0,3g/L; CT4: VKL pha cân nồng độ 0,5g/L; CT5: VKL pha suy vong nồng độ 0,1g/L; CT6: VKL pha suy vong nồng độ 0,3g/L; CT7: VKL pha suy vong nồng độ 0,5g/L Mẫu thu lần đầu vào thời điểm trước phun dịch VKL thu lần tiếp sau vào giai đoạn V1 (lá kép ba mở rộng), V3 (có kép ba hồn chỉnh, thân có đốt hữu hiệu) V5 (có kép ba hồn chỉnh, chuẩn bị bước sang giai đoạn sinh trưởng phát triển sinh sản) Lá đậu tương công thức thí nghiệm thu riêng rẽ, cẩn thận, dùng làm nguyên liệu để phân tích số Lá cân cẩn thận, xử lý nitơ lỏng bảo quản -80 oC để phân tích hoạt độ enzyme chống oxy hoá Hàm lượng superoxide (O 2-) hydrogen peroxide (H2O2) xác định nguyên liệu tươi Phương pháp phân tích Tất hóa chất sử dụng để phân tích mua từ hãng SigmaAldrich (Hoa Kỳ) + Xác định hàm lượng hydrogen peroxide gốc tự superoxide Hàm lượng H2O2 nội sinh đậu tương xác định phương pháp so màu theo phương pháp Becana cộng (1986) biểu thị theo đơn vị tính micromol/gram tươi (µM.g-1FW) Hàm lượng gốc tự O2- xác định theo phương pháp Doke (1983) Đơn vị biểu thị lượng O 2- đậu tương độ hấp thụ ánh sáng dịch chiết O 2ở bước sóng 580/ khối lượng tươi (A580.g-1FW) Quá trình phân tích thực máy quang phổ UV-Vis CARY 60 (Agilent, USA) có kết nối máy tính cài đặt phần mềm xử lý số liệu UV-Win version 5.0 + Xác định hoạt độ enzyme chống oxy hóa Trước hết, đậu tương nghiền nhỏ ngâm dung dịch đệm photphat (pH 7,0) để chiết xuất enzyme Hỗn hợp dịch nghiền li tâm oC với tốc độ 10.000 vòng/phút, 20 phút Loại bỏ cặn, thu phần dịch chiết để phân tích hoạt độ enzyme 2.3.9 Phương pháp xử lý số liệu Các số phân tích lặp lại lần Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Đa dạng vi khuẩn Lam số loại đất trồng tỉnh Nghệ An 3.1.1 Đa dạng thành phần loài vi khuẩn Lam phát đất trồng tỉnh Nghệ An Kết điều tra VKL số loại hình đất trồng tỉnh Nghệ An, xác định 76 loài Chúng thuộc 27 chi, 14 họ Bộ Oscillatoriales có 25 lồi, chi, họ; Nostocales gặp 23 loài, 10 chi, họ; Chroococcales gặp 14 loài, chi, họ; Synechococales gặp 13 loài, chi, họ; Pleurocapsales gặp loài, 1chi, họ 3.1.2 Đa dạng taxon vi khuẩn Lam bậc bộ, họ chi vi khuẩn Lam + Đa dạng bậc bộ: Trong đất trồng tỉnh Nghệ An gặp bộ, Oscillatoriales gặp họ có số lồi nhiều với 25 loài (chiếm 33,89% tổng số loài), Nostocales gặp họ có 23 lồi (chiếm 30,26%), Chroococcales gặp họ có 14 loài (chiếm 18,42%) Synechococcales gặp họ có 13 lồi (chiếm 17,11%), cịn Pleurocapsales gặp họ có lồi (chiếm 1,32 %) (Bảng 3.1) Bảng 3.1 Sự phân bố taxon VKL Họ Chi Loài Số Tỉ lệ Số Tỉ lệ Số Tỉ lệ lượng (%) lượng (%) lượng (%) Synechococcales 21,43 22,22 13 17,11 Chroococcales 21,43 18,52 14 18,42 Pleurocapsales 7,14 3,70 1,32 Oscillatoriales 21,43 18,52 25 33,89 Nostocales 28,57 10 37,04 23 30,26 100 27 100 76 100 Bộ Tổng cộng 14 + Đa dạng bậc họ Trong số 14 họ phát (với 76 loài) có họ (với 43 lồi gặp) gặp từ đến 21 lồi, là: Oscillatoriaceae, Nostocaceae Leptolyngbyaceae Trong họ giàu lồi thuộc Oscillatoriaceae (21 loài) Các họ 10 Merismopediaceae, Pseudanabaenaceae, Aphanothecaceae, Chroococcaceae, Coleofasciculaceae, Scytonemataceae, Microcoleaceae, Microcystaceae, Dermocarpellaceae, Hapalosiphonaceae Rivulariaceae gặp từ - lồi, số Coleofasciculaceae, Dermocarpellaceae Rivulariaceae họ gặp chi chi gặp loài (Bảng 3.2) Bảng 3.2 Số lượng taxon họ gặp TT 10 11 12 13 14 Họ Merismopediaceae Pseudanabaenaceae Leptolyngbyacea Aphanothecaceae Chroococcaceae Microcystaceae Dermocarpellaceae Coleofasciculaceae Microcoleaceae Oscillatoriaceae Scytonemataceae Rivulariaceae Hapalosiphonaceae Nostocaceae Tổng cộng Chi Số lượng 2 2 1 1 1 27 Tỉ lệ (%) 7,41 7,41 7,41 7,41 7,41 3,70 3,70 3,70 3,70 11,11 3,70 3,70 11,11 18,53 100 Loài Số lượng Tỷ lệ (%) 3,95 5,26 7,89 3,95 10,53 3,95 1,32 1,32 3,95 21 27,63 6,58 1,32 3,95 14 18,42 76 100 + Đa dạng bậc chi Trong 27 chi xác định, có chi đa dạng nhất: chi Phormidium với 10 loài (chiếm 13,16%), tiếp đến Nostoc gặp loài (chiếm 11,84%), Oscillatoria gặp loài (chiếm 9,21%), chi Leptolyngbya, Chroococcus Scytonema chi gặp loài (chiếm 6,58%) Cả chi chiếm 22,22% tổng số chi gặp có tới 41 lồi loài (chiếm 53,95% tổng số loài vùng nghiên cứu) + Đa dạng hình thái lồi VKL đất trồng tỉnh Nghệ An VKL đất trồng tỉnh Nghệ An đa dạng hình thái: có dạng cấu trúc hạt (đơn bào), cấu trúc sợi (sợi đồng sợi TBDH); sợi không phân nhánh sợi phân nhánh (gồm phân nhánh thực phân nhánh giả) (Bảng 3.3) 13 Nostoc linckia (Roth) Bornet et Flahault 1888 Nostoc paludosum Kützing ex Bornet & 10 Flahault 1886 Nostoc ellipsosporum (Desmazières) 11 Rabenhorst ex Bornet et Flahault 1888 12 Mastigocladus sp 13 Isocystis sp Cam-C1 TK3 2017 ĐT3-02 YT1 2017 NH2X7 NL1 2017 QL3-01 DP3-11 QL3 DC3 2017 2017 Chúng phân lập 13 chủng thuộc 13 loài VKL điểm nghiên cứu, cụ thể: chủng đơn bào, chủng dạng sợi khơng có TBDH, chủng dạng sợi có TBDH chủng dạng sợi có bào tử khơng có TBDH từ đất trồng tỉnh Nghệ An 3.2.2 Kết phân lập số chủng thuộc loài vi khuẩn Lam bổ sung cho danh lục vi khuẩn Lam Việt Nam Kết đối chiếu danh lục loài VKL phân bố số loại đất trồng tỉnh Nghệ An với danh lục thành phần loài VKL phân bố đất nước Việt Nam công bố từ năm 2010 trở trước cho thấy: - Chi Isocystis Borzì ex Bornet et Flahault 1886 lần tìm thấy Việt Nam Kết mơ tả trình bày chi tiết bảng 3.5 - Có lồi VKL lần tìm thấy Việt Nam mô tả chi tiết Bảng 3.5 Danh lục chi loài VKL bổ sung cho danh lục thành phần loài VKL Việt Nam TT Tên taxon Chi bổ sung cho Việt Nam Isocystis Borzì ex Bornet et Flahault 1886 Các lồi bổ sung cho Việt Nam Chroococcus helveticus Nägeli 1849 Jaaginema minimum (Gicklhorn) Anagnostidis et Komárek 1988 Pseudanabaena dictyothalla (Skuja) Anagnostidis 2001 Leptolyngbya carnea (Kützing ex Lemmermann) Anagnostidis et Komárek 1988 Geitlerinema acutissimum (Kufferath) Anagnostidis 1989 Địa điểm thu mẫu DC3 DC1 DC3 QL1 DC3 DC2, DC3, YT2 14 Westiellopsis prolifica Janet 1941 Nostoc gelatinosum Schousboe ex Bornet et Flahault 1888 DC3 YT2 Trong số có chủng VKL thuộc lồi bổ sung cho danh lục VKL Việt Nam Những chủng là: Chroococcus helveticus DT2-01, Jaaginema minimum DP3-01, Pseudanabaena dictyothalla QV3-11, Leptolyngbya carnea DP3-03, Geitlerinema acutissimum TT3-08, Westiellopsis prolifica DP1-01 Nostoc gelatinosum TT3-05 Do gặp số khó khăn trình thực hiện, chủng phân lập khỏi tảo khác chưa phân lập đơn dòng (phân lập từ sợi từ tế bào); đồng thời việc phân lập hoàn thành năm 2017 3.2.2.1 Loài Chroococcus helveticus Nägeli 1849 Đã Komárek J & Anagnostidis mô tả trang 298, hình 392 Desikachary trang 620 - Đặc điểm hình thái chủng Chroococcus helveticus DT2-01: Các tế bào đơn độc dạng tập đoàn - - tế bào Xung quanh tế bào xung quanh tập đoàn bao bọc lớp bao nhầy khơng màu, mép ngồi phân cách rõ ràng với mơi trường ngồi Tế bào hình cầu, bán cầu ovan rộng; đường kính 4,0 - 7,5 tối đa µm; màu xanh lam xanh vàng So sánh cho thấy đường kính tế bào chủng DT2-01 khác với lồi cơng bố tìm thấy Việt Nam Chủng Chroococcus helveticus DT2-01 phân lập từ đất trồng lúa xã Diễn Thắng (DC3); phát triển tốt bề mặt đất ẩm, kể nắp đĩa Petri nơi có nước đọng lại 3.2.2.2 Loài Jaaginema minimum (Gicklhorn) Anagnostidis et Komárek 1988 Đã Komárek J & Anagnostidis K., 2005 mô tả trang 114, hình 114 - Đặc điểm hình thái chủng Jaaginema minimum DP3-01 Trước đây, loài Jaaginema minimum định loại Oscillatoria minima Gicklhorn 1921 Trichom thẳng, ngoằn ngoèo xoắn; đơn độc đan xen với thành đám rối chúng bện xoắn với dây thừng; màu xanh vàng nhạt; không eo thắt vách ngang Sợi không di động, không thấy vỏ nhầy Tế bào hình trụ, chiều dài 5,7 - 7,0 µm, chiều rộng 1,9 - 2,3 µm; tế bào đỉnh thn trịn Vách ngang tế bào nội chất khó quan sát thấy kính hiển vi thường Chủng 15 Jaaginema minimum DP3-01 phân lập từ đất trồng lúa xã Diễn Phú (DC3); phát triển tốt nước agar chứa mơi trường BG-11 3.2.2.3 Lồi Pseudanabaena dictyothalla (Skuja) Anagnostidis 2001 Đã Komárek J & Anagnostidis K., 2005 mơ tả trang 80, hình 52 - Đặc điểm hình thái chủng Pseudanabaena dictyothalla QV3-11 Tản có màu xanh lam, trôi tự do, chất nhầy giàu xung quanh trichom Trichom ngắn sau dài hơn, thẳng ngoằn ngoèo, xếp song song gần song song với nhau; eo thắt vách ngang rõ ràng Tế bào hình trụ với hai đầu thn trịn, dài 1,7 - 2,6 µ, rộng 1,2 - 14 µm Chủng Pseudanabaena dictyothalla QV3-11 phân lập từ đất trồng lúa xã Quỳnh Văn (QL1); phát triển tốt nước agar chứa mơi trường BG-11 Lồi Pseudanabaena dictyothalla tìm thấy Thụy Sĩ, Brazil; tìm thấy Ấn Độ năm 2017 3.2.2.4 Loài Leptolyngbya carnea (Kützing ex Lemmermann) Anagnostidis et Komárek 1988 Đã Komárek J & Anagnostidis K., 2005 mô tả trang 192, hình 234 - Đặc điểm hình thái chủng Leptolyngbya carnea DP3-03: Trước Plectonema carneum (Kützing) ex Lemmermann 1910, Plectonemna roseolum Gomont ex Gomont 1892 Thảm có màu vàng nâu đỏ hồng tùy vào thời điểm phát triển; tạo thành lớp mỏng, nhầy bề mặt Sợi tập trung dày đặc, ngoằn ngoèo; thường gặp phân nhánh giả, kể phân nhánh giả đơn phân nhánh giả đôi Trichom màu xanh nhạt, già chuyển sang màu đỏ hồng, bao bọc lớp chất nhầy mỏng, không eo thắt vách ngăn ngang Tế bào hình trụ, rộng 1,9 - 2,2 µm, dài 2,3 - 3,3 µm; tế bào đỉnh thn trịn Ở Việt Nam, nhiều lồi thuộc Leptolyngbya tìm thấy nước đất mà trước chủ yếu xếp chúng thuộc chi Lyngbya Phormidium; nhiên, chưa có cơng bố lồi VKL dạng sợi, khơng có tế bào dị hình có phân nhánh giả Kết nghiên cứu ghi nhận loài Leptolyngbya carnea vùng nhiệt đới Chủng Leptolyngbya carnea DP3-03 phân lập từ đất trồng lúa xã Diễn Phú (DC1); phát triển tốt bề mặt agar có chứa mơi trường BG-11 3.2.2.5 Loài Geitlerinema acutissimum (Kufferath) Anagnostidis 1989 Đã Komárek J & Anagnostidis K., 2005 mô tả trang 126, hình 133 - Đặc điểm hình thái chủng Geitlerinema acutissimum TT3-08: Tản 16 mỏng, có chất nhầy, bao gồm bó nhiều trichom màu xanh lam; trichom dễ khỏi tản có tác động học Trichom thẳng, màu xanh lam, thuôn nhọn đầu, rộng 1,4 - 2,6 µm; phẩn đỉnh thường chuyển động xốy; khơng eo thắt vách ngăn ngang Tế bào dài 4,4 - 12 µm Tế bào đỉnh hình mũi nhọn, thẳng uốn cong; khơng có hình đầu 3.2.2.6 Loài Westiellopsis prolifica Janet 1941 Đã Komárek J & Anagnostidis K., 2005 mơ tả trang 585, hình 707 Desikachary, 1959 trang 596, hình 131 - Hình thái loài Westiellopsis prolifica đất trồng lúa xã Diễn Phú Mẫu VKL đất trồng lúa xã Diễn Phú (DC3) định loại Westiellopsis prolifica sau quan sát hiển vi nhiều lần qua giai đoạn phát triển khác quần thể Ban đầu, quần thể bao gồm sợi có màu xanh lam, phân nhánh thật hình chữ T Trichom gồm dãy tế bào hình trụ hình trống với chiều rộng 10,5 - 11,3 µm chiều dài 7,5 - 15,1 µm, bao bọc lớp vỏ chắn, dày 1,0 - 1,2 µm Trichom sợi nhánh thn hẹp dần phía đỉnh; tế bào phần gốc hình trống rộng 6,1 - 11,2 µm, dài 5,8 - 8,2 µm, tế bào phía đỉnh hình trụ với chiều rộng 4,6 - 7,4 µm, chiều dài 7,3 - 13,8 µm, khơng thắt hẹp tế bào TBDH phần sợi có hình trụ ngắn hình ovan nằm ngang với chiều rộng 10,8 - 11,6 µm, dài 7,8 - 8,3 µm phần sợi nhánh có hình trụ dài với chiều rộng 5,8 - 7,6 µm, dài 6,4 - 11,5 µm Trong quần thể, phần gốc nhiều sợi tế bào hình cầu hình trụ với kích thước lớn hơn; tế bào có nguồn gốc từ sợi từ bào tử nghỉ monocyte Bên cạnh đó, nhiều sợi có phần gốc tế bào hình trụ phần đầu sợi dãy tế bào hình cầu hình trống, đường kính 6,2 - 8,6 µm; cấu trúc gọi pseudohormocyte Quần thể giai đoạn tàn lụi xuất nhiều pseudohormocyte monocyte Theo Komárek (2013), số chi VKL phân nhánh thật hình chữ T, đặc điểm đặc trưng chi Westiellopsis vịng đời có xuất giai đoạn đơn bào, tức hình thành bào tử nghỉ monocyte Dạng bào tử có nguồn gốc từ pseudohomocyte từ tế bào riêng rẽ Chi Westiellopsis có lồi mô tả phân bố đất nhiệt đới Ấn độ Pakistan So sánh đặc điểm phân loại hình thái bốn lồi này, quần thể VKL mơ tả thuộc Westiellopsis prolifica Janet 17 1941 Hồ Sỹ Hạnh cs (2005) tác giả phát chi Westiellopsis Việt Nam chưa định loại loài 3.2.2.7 Loài Nostoc gelatinosum Schousboe ex Bornet et Flahault 1888 Đã Komárek J & Anagnostidis K., 2013 mơ tả trang 989, hình 1284 Trong mẫu đất trồng lúa xã Thọ Thành (YT2), quần thể Nostoc gelatinosum tạo thành lớp mỏng màu nâu sát mặt đất Các sợi VKL thẳng cong queo, trichom gồm tế bào hình trụ nằm lớp chất nhầy dày màu vàng nâu nên khó quan sát đo kích thước tế bào Sau phân lập, chủng TT3- 05 nuôi môi trường lỏng BG-11, sinh khối có màu nâu vàng chứa nhiều chất nhầy Chủng phát triển tốt môi trường nuôi nhân tạo Trichom thẳng cong queo, có eo thắt tế bào, bao bọc lớp chất nhầy dày khơng có giới hạn rõ ràng Tế bào có màu xanh lam nhạt, hình trụ với chiều rộng 3,9 - 4,6 µm, chiều dài 4,8 - 9,6 µm Phần sợi phân hóa để hình thành bào tử có tế bào hình trống với chiều rộng 4,7 - 5,2 µm, dài 4,4 - 7,2 µm TBDH nằm sợi có hình ovan, rộng 6,4 - 6,7 µm, dài 8,7 - 9,4 µm; nằm đầu sợi thường có hình cầu, đường kính 4,2 - 6,1 µm Bào tử (akinete) có hình ovan, rộng 4,3 - 5,8 µm, dài 5,9 - 9,6 µm hình cầu với đường kính 5,6 - 5,9 µm Hiện tượng bào tử nảy mầm thường gặp môi trường nuôi 3.2.3 Kết phân lập mơ tả số lồi chưa xác định tên Trong số 76 lồi VKL tìm thấy đất trồng tỉnh Nghệ An, có hai lồi chưa xác định tên, Mastigocladus sp Isocystis sp Nhằm mục đích tiếp tục nghiên cứu để xác định tên hai lồi này, chúng tơi tiến hành phân lập hai chủng đại diện cho hai lồi là: Mastigocladus sp QL301 Isocystis sp DP3-11 3.2.4 Kết phân lập số chủng vi khuẩn Lam có tế bào dị hình nghiên cứu gen quy định tổng hợp nitrogenase chúng 3.2.4.1 Kết phân lập số chủng vi khuẩn Lam có tế bào dị hình từ đất trồng tỉnh Nghệ An Ở đây, chúng tơi trình bày chủng VKL, có chủng VKL có TBDH phân lập từ mẫu đất trồng lúa (Chủng Nostoc calcicola HN91a, Nostoc gelatinosum TT3-05, Nostoc paludosum ĐT3-02, Nostoc ellipsosporum NH2X7) đất trồng cam (chủng Nostoc linckia Cam-C1) sử dụng để phân 18 tích gen quy định tổng hợp nitrogenase Trong đó, có chủng Nostoc calcicola HN91a phân lập thành công năm 2014; chủng khác phân lập thành công năm 2017 (Bảng 3.6) Chủng Pseudanabaena dictyothalla QV3-11 có cấu tạo dạng sợi khơng có TBDH sử dụng nghiên cứu làm đối chứng cho chủng VKL có TBDH Bảng 3.6 Kết phân lập số chủng VKL có TBDH khơng có TBDH từ đất trồng tỉnh Nghệ An TT Tên loài Nostoc calcicola Nostoc linckia Nostoc gelatinosum Nostoc paludosum Nostoc ellipsosporum Pseudanabaena Ký hiệu Địa điểm Thời gian chủng HN91a Cam-C1 TT3-05 ĐT3-02 NH2X7 thu mẫu HN2 TK3 YT2 YT1 NL1 phân lập Năm 2014 Năm 2017 Năm 2017 Năm 2017 Năm 2017 Ghi Có TBDH Có TBDH Có TBDH Có TBDH Có TBDH Khơng có QV3-11 QL1 Năm 2017 dictyothalla TBDH Ghi chú: Chủng QV3-11 TBDH dùng làm đối chứng 3.2.4.2 Kết phân tích gen nifD chủng vi khuẩn Lam có tế bào dị hình DNA chủng VKL (Hình 3.1) chủng vi khuẩn E coli tách chiết nhân đoạn gen nifD PCR Kết điện di gel agarose cho thấy sản phẩm PCR với cặp mồi nifD xuất với kích thước 310 bp tất chủng VKL có TBDH (Nostoc calcicola HN91a, Nostoc linckia Cam-C1, Nostoc gelatinosum TT3-05, Nostoc paludosum ĐT3-02, Nostoc ellipsosporum NH2X7) Ngược lại, sản phẩm PCR khơng có chủng VKL khơng có TBDH Pseudanabaena dictyothalla QV3-11 vi khuẩn E.coli DH5 alpha (Hình 3.1) Hình 3.1 Ảnh điện di sản phẩm PCR gen nifD chủng nghiên cứu 19 Kết phân tích bước đầu cho phép nhận định chủng VKL có TBDH có gen nifD Chủng Pseudanabaena dictyothalla QV3-11 khơng có gen nifD phù hợp với kết trước cho phần nhiều lồi khơng có TBDH khơng có khả cố định nitơ Chủng E coli khẳng định khơng có khả cố định nitơ - Trình tự gen nifD chủng từ Ngân hàng gen có độ tương đồng cao với chủng Nostoc calcicola HN91a với chủng Nostoc piscinale CENA21 (97%), Cylindrospermum stagnale Ind15 (97%) Cylindrospermum PCC 7604 (96%) - Trình tự gen nifD chủng từ Ngân hàng gen có độ tương đồng cao với chủng Nostoc lickia Cam-C1 với chủng Nostoc sp NIES-2111 (96%), Nostoc sp PCC-7423 (96%) Nostoc sp NIES-3756 (96%) - Trình tự gen nifD chủng từ Ngân hàng gen có độ tương đồng cao với chủng Nostoc gelatinosum TT3-05 với chủng Nostoc sp NIES-4103 (96%), Nostoc linckia NIES-25 (95%) - Trình tự gen nifD chủng từ Ngân hàng gen có độ tương đồng cao với chủng Nostoc paludosum ĐT3-02 với chủng Nostoc piscinale CENA21 (97%), Nostoc sp 9C-PS (97%) - Trình tự gen nifD chủng từ Ngân hàng gen có độ tương đồng cao với chủng Nostoc ellipsosporum NH2X7 với chủng Nostoc sp NIES-4103 (98%), Nostoc linckia NIES-25 (95%) Các kết phân tích trình tự cho thấy trình tự gen nifD nghiên cứu có độ tương đồng cao với chủng Nostoc công bố ngân hàng gen Đồng thời, kết cho phép nhận định sản phẩm PCR trình tự nucleotide chủng Nostoc nghiên cứu mà khơng phải lồi vi khuẩn tạp nhiễm mẫu nghiên cứu Kết phân tích gen nifD kết hợp với việc quan sát xuất TBDH khả sinh trưởng tốt môi trường BG-11 không đạm cho phép kết luận chủng VKL có TBDH nghiên cứu có khả cố định nitơ phân tử; lúc chủng Pseudanabaena dictyothalla QV3-11 khơng có TBDH khơng có khả cố định nitơ phân tử (Bảng 7) Bảng 3.7 Kết phân tích khả cố định ni tơ số chủng VKL có TBDH khơng có TBDH từ đất trồng tỉnh Nghệ An 20 Nhận TT Tên loài Ký hiệu Tế bào chủng dị hình Sản phẩm PCR Trình tự nifD định khả cố định nitơ Nostoc calcicola HN91a + + + + Nostoc linckia Cam-C1 + + + + TT3-05 + + + + ĐT3-02 + + + + NH2X7 + + + + QV3-11 - - - - Nostoc gelatinosum Nostoc paludosum Nostoc ellipsosporum Pseudanabaena dictyothalla 3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chủng Nostoc calcicola HN91a trồng 3.3.1 Kết thử nghiệm ảnh hưởng vi khuẩn Lam Nostoc calcicola HN9-1a giống lúa Tám thơm 3.3.1.1 Ảnh hưởng dịch huyền phù Nostoc calcicola HN9-1a đến kích thước đòng lúa Tám thơm giai đoạn trước trổ Cây lúa phun dịch huyền phù Nostoc calcicola HN9-1a có chiều dài địng đạt 38,23 cm, cao 15,49% so với đối chứng (33,10 cm); chiều rộng đòng đạt 1,57 cm, cao 10,56% so với đối chứng (1,42 cm) 3.3.1.2 Ảnh hưởng dịch huyền phù Nostoc calcicola HN9-1a đến hàm lượng diệp lục lúa Tám thơm Cây lúa xử lý dịch VKL, hàm lượng diệp lục a đạt 1,768 mg/g lá, cao 18% so với đối chứng (1,497 mg/g lá); diệp lục b đạt 0,764 mg/g lá, cao 15% so với đối chứng (0,663 mg/g lá); diệp lục tổng số (a+b) đạt 2,532 mg/g lá, cao 17% so với đối chứng (2,160 mg/g lá) Những sai khác hàm lượng diệp lục công thức xử lý dịch VKL so với đối chứng có ý nghĩa mức α=0,05 21 3.3.1.3 Ảnh hưởng dịch huyền phù Nostoc calcicola HN9-1a đến cường độ quang hợp lúa Tám thơm Kết cho thấy lúa phun dịch huyền phù Nostoc calcicola HN9-1a đạt CĐQH cao (0,964 mg CO2/g lá), tăng tới 41,14% so với đối chứng (0,683 mg CO2/g lá), số công thức xử lý môi trường BG-11 không đạm giảm 4,52% so với đối chứng 3.3.1.4 Ảnh hưởng dịch huyền phù Nostoc calcicola HN9-1a đến suất lúa Tám thơm Năng suất lý thuyết tính tốn cho tỷ lệ gia tăng 21,55% so với đối chứng Việc cân, đo sau thu hoạch cho thấy, thấp suất lý thuyết suất thực tế lúa phun dịch nuôi vi khuẩn Lam cao vượt trội; suất thực tế (85,34 tạ/ha) tăng 11,99% so với đối chứng (76,20 tạ/ha) 3.3.2 Ảnh hưởng vi khuẩn Lam Nostoc calcicola HN9-1a lên hệ thống chống oxy hóa đậu tương 3.3.2.1 Ảnh hưởng dung dịch Nostoc calcicola HN9-1a đến sinh tổng hợp dạng oxy hoạt hóa đậu tương Nam Đàn Các dạng oxy hoạt hóa (ROS-reactive oxygen species) superoxide (O 2-), hydrogen peroxide (H2O2), hydroxyl (OH-) sản phẩm chuyển hóa tế bào sống Trong điều kiện bình thường thể thực vật, ROS sản phẩm trao đổi chất tự nhiên có vai trị quan trọng, tham gia điều khiển sinh trưởng, phát triển quan lá, hoa, quả… thơng qua điều tiết q trình chuyển hóa nội bào Dưới tác dụng dịch VKL Nostoc calcicola HN 9-1a, có biến đổi mạnh mẽ hàm lượng O2- H2O2 đậu tương Nam Đàn; hàm lượng dạng oxy hoạt hóa tăng nhanh cao so với đối chứng a) Sinh tổng hợp superoxide (O2-) Trong đậu tương xử lý dịch VKL pha suy vong, hàm lượng gốc tự O2- cảm ứng tăng mạnh mẽ đạt cao đỉnh giai đoạn V1; lượng O 2- sinh tỷ lệ thuận với nồng độ tác động VKL Sau giảm xuống giai đoạn V3 V5, hàm lượng O2- thay đổi khơng có sai khác rõ rệt cơng thức nồng độ VKL So với tác động VKL pha suy vong, gốc tự O2- công thức đậu tương xử lý dịch VKL pha cân có xu hướng biến đổi, cao đỉnh đạt có trị số thấp nhiều Hàm lượng O 2- cao giai đoạn V1 22 công thức nồng độ VKL 0,3 g/L (1,23 A580.g-1 FW), đạt 46,54% so với trị số cao số xử lý VKL pha suy vong (2,65 A 580.g-1 FW) Trong giai đoạn V3 V5, O2- thay đổi khơng có nhiều sai khác cơng thức thí nghiệm thời điểm nghiên cứu b) Sinh tổng hợp hydrogen peroxide (H2O2) Tương tự O2-, hàm lượng H2O2 đậu tương cảm ứng tăng sau xử lý VKL Trong công thức nồng độ VKL pha suy vong, số tăng nhanh, đạt cao đỉnh giai đoạn V1, sau giảm mạnh Lượng H 2O2 tổng hợp nhiều đậu tương xử lý dịch VKL có nồng độ cao ngược lại Hàm lượng H2O2 cao (7,89 µM.g-1 FW) đạt cơng thức nồng độ VKL 0,5g/L giai đoạn V1, cao 3,07 lần so với đối chứng (2,57 µM.g-1 FW) Dưới ảnh hưởng dịch VKL pha cân bằng, hàm lượng H 2O2 đậu tương tăng nhẹ suốt trình nghiên cứu Chỉ số giai đoạn V3 V5 cao rõ rệt so với công thức xử lý dịch VKL pha suy vong Khác với chức O 2-, H2O2 thường có vai trị kích ứng chuỗi gồm nhiều phản ứng sinh lý sinh hóa có vai trị hình thành phản ứng bảo vệ tế bào thực vật Như vậy, stress “oxy hóa” xảy giai đoạn V1 đậu tương Nam Đàn chịu ảnh hưởng dịch chiết VKL pha suy vong với bùng phát sinh tổng hợp, gia tăng mạnh mẽ hàm lượng dạng ơxy hoạt hóa nội sinh O2- H2O2 3.3.2.2 Ảnh hưởng dung dịch Nostoc calcicola HN9-1a đến sinh tổng hợp enzyme chống oxy hóa đậu tương Nam Đàn a Superoxide dismutase (SOD, EC 1.15.1.1) SOD enzyme phân giải gốc tự superoxide (O 2-), dạng oxy hoạt hóa độc hình thành tế bào, mơ bị stress, thành chất độc (hydrogen peroxide H2O2) Trong hệ thống enzyme chống oxy hóa thể thực vật, SOD enzyme chế giải độc O 2- tế bào sống Ngoài ra, SOD có vai trị loại bỏ gốc tự sản sinh từ peroxide hóa lipid ngăn chặn phản ứng dây chuyền tạo sản phẩm bất lợi cho thể Kết thu cho thấy, nồng độ VKL pha suy vong cảm ứng mạnh mẽ SOD từ giai đoạn V1 Hoạt độ enzyme tăng nhanh đạt giá trị cao (17,95 nkat.mg -1protein) giai đoạn V3 với nồng độ tác động 0,5 g/L, cao 1,94 lần so với đối chứng (9,24 nkat.mg - 23 protein) 2,49 lần so với trước xử lý VKL (7,20 nkat.mg -1protein) Trong tất thời điểm nghiên cứu, hoạt độ SOD cao so với công thức xử lý VKL pha cân đối chứng Hoạt độ SOD đậu tương xử lý VKL pha cân dao động không nhiều giai đoạn V1, tăng nhanh đạt cao đỉnh giai đoạn V3 Sang giai đoạn V5, hoạt độ SOD ba công thức nồng độ VKL giảm nhẹ, có xu hướng biến đổi tương tự công thức xử lý VKL pha suy vong mức tăng hoạt độ SOD đậu tương xử lý VKL pha cân thấp b Catalase (CAT, EC 1.11.1.6) Hoạt độ CAT tất công thức xử lý VKL pha cân biến đổi (10,28÷12,51 nkat.mg-1protein) sai khác không nhiều so với đối chứng Thậm chí, hoạt độ enzyme cơng thức xử lý nồng độ dịch VKL 0,05% thấp đối chứng tất thời điểm nghiên cứu Trái lại, công thức đậu tương xử lý VKL pha suy vong, độ hoạt động CAT tăng liên tục suốt trình nghiên cứu tỷ lệ thuận với nồng độ VKL sử dụng Hoạt độ cao (21,60 nkat.mg-1protein) đạt công thức nồng độ 0,5 g/L giai đoạn V5, tương ứng cao 1,72 lần so với đối chứng 1,94 lần so với trước xử lý VKL Với chức phân giải H2O2 thành H2O O2, gia tăng mạnh mẽ liên tục hoạt độ CAT công thức xử lý VKL pha suy vong góp phần làm giảm trì hàm lượng H2O2 mức thấp giai đoạn V3÷V5 Tóm lại, enzyme chống oxy hố SOD, CAT, … yếu tố quan trọng phản ứng phòng vệ trồng Sự diện hoạt độ cao enzyme chống oxy hố dịch chiết VKL coi phần chức góp phần bảo vệ thực vật khỏi tác động yếu tố không thuận lợi Sử dụng dịch chiết VKL N calcicola HN9-1a góp phần tăng cường khả thích nghi để bảo vệ đậu tương khỏi stress oxy hóa, góp phần làm tăng sức đề kháng G max cv "Nam Đàn" Phản ứng chống oxy hoá cải thiện G max cv "Nam Dan" tác dụng chiết xuất Nostoc calcicola HN9-1a khía cạnh bảo vệ sinh học, thành phần tách rời chiến lược thân thiện cho sản xuất nông nghiệp bền vững 24 25 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết thu trình nghiên cứu, rút kết luận sau: 1.1 Định loại 76 loài VKL phân bố đất trồng lúa đất cạn trồng công nghiệp 30 địa điểm 23 xã 10 huyện thuộc tỉnh Nghệ An Chúng thuộc 27 chi, 14 họ Bộ Oscillatoriales có 25 lồi lồi, chi, họ; Nostocales gặp 23 loài, 10 chi, họ; Chroococcales gặp 14 loài, chi, họ; Synechococales gặp 13 loài, chi, họ; Pleurocapsales gặp loài, 1chi, họ Sự phân bố VKL đất trồng Nghệ An bị chi phối yếu tố độ ẩm đất, kali tổng số nitơ dễ tiêu, độ ẩm đất có tầm quan trọng 1.2 Xây dựng sưu tập gồm 13 chủng thuộc 13 loài VKL (1 chủng đơn bào, chủng dạng sợi khơng có TBDH, chủng dạng sợi có TBDH chủng dạng sợi có bào tử khơng có TBDH) từ đất trồng tỉnh Nghệ An để phục vụ cho công tác nghiên cứu đào tạo 1.3 Mô tả chi (Isocystis Borzì ex Bornet et Flahault 1886) loài VKL (Chroococcus helveticus, Jaaginema minimum, Pseudanabaena dictyothalla, Leptolyngbya carnea, Geitlerinema acutissimum, Westiellopsis prolifica Nostoc gelatinosum) bổ sung cho danh lục VKL Việt Nam 1.4 Đã thăm dị chủng VKL có TBDH (Nostoc calcicola HN91a, Nostoc linckia Cam-C1, Nostoc gelatinosum TT3-05, Nostoc paludosum ĐT3-02, Nostoc ellipsosporum NH2X7) phân lập từ đất trồng tỉnh Nghệ An đánh giá có khả cố định nitơ phân tử thơng qua việc phân tích sản phẩm PCR trình tự nucleotid gen nif D chúng 1.5 Dịch huyền phù chủng Nostoc calcicola HN9-1a có tác dụng tích cực đến sinh trưởng, phát triển suất giống lúa Tám thơm thử nghiệm (năng suất thực tế tăng 11,99% so với đối chứng) 1.6 Dịch chiết Nostoc calcicola HN9-1a pha suy vong gây stress “oxy hóa” đậu tương Nam Đàn giai đoạn V1 với sinh tổng hợp mạnh mẽ gốc tự O2- H2O2 cảm ứng tăng cường hoạt độ enzyme chống oxy hóa CAT, SOD, hàm lượng dạng ơxy hoạt hóa O2- H2O2 giảm xuống giai đoạn V3V5 Dịch VKL pha cân kích thích hoạt độ SOD tăng mạnh chưa có ảnh hưởng rõ ràng đến CAT Kiến nghị Cần có nghiên cứu chủng VKL có khả cố định nito phân lập từ đất trồng Nghệ An để áp dụng vào việc cải tạo đất tăng suất trồng 26 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Nguyen Duc Dien, Nguyen Dinh San, Vo Hanh, Mai Van Chung (2016), “Effect of Cyanobacteria Nostoc calcicola HN9-la on the enzymatic antioxidants of Glycine max DT84”, Proceeding of the 6th International Conference on Sciences and Social Sciences, Thailand, pp 833-840 Nguyễn Đức Diện, Nguyễn Lê Ái Vĩnh, Võ Hành (2017), “Danh lục lồi vi khuẩn Lam có tế bào dị hình (Heterocytous cyanobacteria) đất trồng Việt Nam theo hệ thống phân loại J Komáret (2013)”, Báo cáo Khoa học sinh thái tài nguyên sinh vật, Hội nghị khoa học toàn quốc lần thứ 7, Hà Nội, Nxb Khoa học tự nhiên công nghệ, tr 84-90 Mai Van Chung, Nguyen Ba Hoanh, Nguyen Duc Dien and Nguyen Le Ai Vinh (2017), “Nostoc calcicola extract improved the antioxidative response of soybean to cowpea aphid”, Bot Stud (2017) 58:55 Nguyễn Đức Diện, Nguyễn Lê Ái Vĩnh, Nguyễn Đình San, Võ Hành (2017), “Ảnh hưởng dịch nuôi chủng vi khuẩn Lam Nostoc calcicola HN91a đến sinh trưởng suất giống lúa tám thơm thử nghiệm huyện Hưng Nguyên tỉnh Nghệ An”, Tạp chí khoa học Trường Đại học Vinh, tập 46 số 3A, tr 13-19 Nguyễn Đức Diện, Nguyễn Lê Ái Vĩnh, Võ Hành, Nguyễn Trung Thành (2018), “Thành phần vi khuẩn Lam có tế bào dị hình (Heterocytous cyanobacteria) số loại hình đát trồng tỉnh Nghệ An”, Tạp chí Khoa học Đại học Quốc gia Hà Nội: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 34, số 1, tr 21-30 27 Cơng trình hồn thành Trường Đại học Vinh Người hướng dẫn khoa học: GS TS Võ Hành PGS TS Nông Văn Hải Phản biện: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Trường Trường Đại học Vinh vào hồi ngày tháng năm 2018 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt Nam; - Thư viện Nguyễn Thúc Hào, Trường Đại học Vinh ... dạng vi khuẩn Lam số loại đất trồng tỉnh Nghệ An 3.1.1 Đa dạng thành phần loài vi khuẩn Lam phát đất trồng tỉnh Nghệ An Kết điều tra VKL số loại hình đất trồng tỉnh Nghệ An, xác định 76 loài Chúng. .. hành đề tài ? ?Vi khuẩn Lam (Cyanobacteria) số loại hình đất trồng tỉnh Nghệ An vai trị chúng trồng trọt” Mục tiêu Mục tiêu của đề tài nhằm nghiên cứu đa dạng VKL đất trồng tỉnh Nghệ An, phân lập... trồng tỉnh Nghệ An 3.2.2 Kết phân lập số chủng thuộc loài vi khuẩn Lam bổ sung cho danh lục vi khuẩn Lam Vi? ??t Nam Kết đối chiếu danh lục loài VKL phân bố số loại đất trồng tỉnh Nghệ An với danh lục