Để có được kết qủa chẩn đoán đúng cũng cần phải đảm bảo một số yếu tố sau: Có được kế hoạch điều tra dịch chính xác; Thu thập mẫu xét nghiệm thích hợp và đầy đủ; Bảo quản và vận chuyển n[r]
(1)SỞ NƠNG NGHIỆP VÀ PTNT KHÁNH HỊA CHI CỤC THÚ Y
Tên tài liệu
QUY TRÌNH LẤY - NHẬN MẪU XÉT NGHIỆM
(2)NỘI DUNG QUY TRÌNH 1 MỤC ĐÍCH VÀ U CẦU
Khi dịch bệnh xảy làm ảnh hưởng lớn đến sức khỏe cộng đồng, đến kinh tế quốc gia lan rộng quốc gia khác Do vậy, cần phải nhanh chóng phát khống chế để giảm thiểu tác động Để khống chế dịch sớm cần thực hiện: (1) Phát sớm báo cáo kịp thời trường hợp nghi ngờ; (2) Nhanh chóng điều tra yếu tố dịch tễ học; (3) Có kết khẳng định nhanh từ phịng thí nghiệm; (4) Thực đầy đủ biện pháp kiểm soát dịch
Để xác định nhanh tác nhân gây dịch nguồn lây kiểu lan truyền cần thực tốt hai việc sau: (1) Thu thập thông tin trường hợp nghi ngờ; (2) Thu thập mẫu lâm sàng để chẩn đốn phịng thí nghiệm
Để có kết qủa chẩn đoán cần phải đảm bảo số yếu tố sau: Có kế hoạch điều tra dịch xác; Thu thập mẫu xét nghiệm thích hợp đầy đủ; Bảo quản vận chuyển nhanh đến phịng thí nghiệm thích hợp; Khả thực thử nghiệm xác phịng thí nghiệm; Tn thủ nghiệm ngặt quy trình an tồn sinh học khử trùng phù hợp
1.1 Lập kế hoạch thu thập mẫu xét nghiệm
Khi có báo cáo nghi ngờ có vụ dịch xảy ra, phải tổ chức điều tra phải đưa số điều then chốt để thảo luận định trước cử người đến thực địa lấy mẫu xét nghiệm Quyết định có tính định hướng mẫu xét nghiệm cần lấy, cách thức tiến hành lấy mẫu vận chuyển mẫu đến phịng thí nghiệm Đây bước quan trọng cần phải có kiến thức chun mơn Dịch tễ học kỹ người kỹ thuật viên làm xét nghiệm
1.1.1 Xác định nguyên nhân gây dịch
(3)tại Khi tác nhân gây nhiễm trùng khác với diện hình ảnh lâm sàng giống nhau, người ta chẩn đốn kiểm sốt dịch bệnh dựa kiểu hội chứng khác Nhưng phương pháp tốt xác định nguyên gây dịch
1.1.2 Lựa chọn mẫu lâm sàng phòng thí nghiệm
Phịng thí nghiệm phải có đủ lực để tiếp nhận mẫu xét nghiệm cho chẩn đốn Phải đảm bảo tồn khía cạnh công việc từ việc lựa chọn kiểu mẫu xét nghiệm, nguyên vật liệu cần thiết, xác định vị trí vùng lấy mẫu, vận chuyển mẫu xét nghiệm thông tin kết phải nguyên tắc Phịng thí nghiệm cần cung cấp đầy đủ môi trường đặc biệt, trang thiết bị tối thiểu tài liệu hướng dẫn Đây điểm mấu chốt để cá nhân kỹ thuật viên định phải chịu trách nhiệm kết trình lấy mẫu, hoạt động truyền thông tin câu hỏi vùng dịch phịng thí nghiệm
1.1.3 Quyết định người thu thập, bảo quản vận chuyển mẫu xét nghiệm
Lựa chọn chuyên gia kỹ thuật viên phòng thí nghiệm để thành lập nhóm nhóm phải tập huấn cách lấy mẫu bệnh phẩm, cách tiến hành công việc vận chuyển mẫu xét nghiệm, như: quy trình đảm bảo an tồn khử trùng Phải tổ chức lớp tập huấn cho người tham gia lấy mẫu xét nghiệm suốt thời gian phục vụ điều tra dịch đặc biệt cộng tác viên y tế đảm nhiệm vị trí đặc biệt
1.1.4 Xác định quy trình cần thiết để xử lý mẫu xét nghiệm
(4)(5)CHI CỤC THÚ Y
QUY TRÌNH
Lấy – nhận mẫu xét nghiệm trả kết xết nghiệm
Mã hiệu: Lần ban hành: Ngày ban hành: NỘI DUNG QUY TRÌNH
5.1 Điều kiện thực thủ tục hành chính Biên báo cáo có dịch bệnh
5.2 Thành phần hồ sơ chínhBản Bảnsao
Biên gửi mẫu; biên mổ khám; giấy chứng nhận tiêm phòng (nếu có)
x
5.3 Quy trình thu thập bệnh phẩm
Để điều tra dịch, nên bắt đầu lấy bệnh phẩm sớm tốt sau nghi ngờ có dịch Các bệnh phẩm nên thu thập giai đoạn bệnh cấp tính, tốt trước sử dụng thuốc kháng sinh, thời điểm phù hợp để xác định nguyên gây nhiễm trùng Trước tiến hành lấy bệnh phẩm nên giải thích với chủ gia súc mắc bệnh để có hợp tác cao đảm bảo yêu cầu kỹ thuật nhận thơng tin xác Khi lấy mẫu bệnh phẩm nên tránh lây nhiễm lấy đủ số lượng (theo hướng dẫn xét nghiệm viên phịng thí nghiệm) Phải tn thủ theo hướng dẫn an tồn suốt q trình thu thập phân tích mẫu xét nghiệm
5.3.1 Thường quy bảo hộ khử trùng
(6)quy trình an tồn chung u cầu người kỹ thuật viên áp dụng thực cho tất mẫu lâm sàng ln coi thể bị nhiễm trùng
Dụng cụ bảo vệ (găng tay, kính bảo vệ mắt, trang, ủng) cần mang q trình thao tác cơng việc để làm giảm nguy phơi nhiễm với chất nhiễm trùng tiềm ẩn Các phương pháp đóng gói quy cách góp phần đảm bảo an tồn cho cá nhân từ nơi thu thập bệnh phẩm đến phịng thí nghiệm, cho dù có xảy hư hỏng q trình vận chuyển
Chuẩn bị dụng cụ sơ cứu tới nơi thu thập bệnh phẩm cần thiết Tất quần áo bảo hộ, khu vực làm việc, dụng cụ đồ dùng khác bị nhiễm thực địa Có thể dùng dung dịch chlorin, iodine để khử trùng khu vực làm việc khử trùng máu chất dịch thể bị nhiễm trùng Nói chung khơng thể thực tiệt trùng đồ dùng bị nhiễm thực địa Khi đồ vật không “tiệt trùng” đầy đủ người tham gia điều tra cộng đồng có nguy phơi nhiễm với nguy nhiễm trùng Khơng khuyến khích sử dụng lại dụng cụ nhiễm trùng găng tay, quần áo bảo hộ Thiêu đốt phương pháp hoàn hảo để loại bỏ chất bị nhiễm khuẩn Trước loại bỏ dụng cụ đồ vật nhiễm khuẩn nhiều phải khử trùng Những đồ dùng dụng cụ dễ cháy nên đốt cháy hồn tồn thành tro đem chôn hố sâu
Các biện pháp dự phòng :
(7)bệnh súc khác
- Nên mặc quần áo bảo hộ (áo chồng, áo khốc) thu thập mẫu
- Kim tiêm vật nhọn sau dùng phải bỏ vào hộp đậy nắp thật chắn
- Tại khu vực làm việc diện tích bề mặt nên xếp gọn gàng tẩy uế hàng ngày dung dịch thuốc tẩy trùng 1% Các chất nhiễm khuẩn bị đổ bề mặt, sau lau chùi dùng thuốc tẩy trùng 10% để vệ sinh
- Những dụng cụ bị nhiễm bẩn khơng loại bỏ nên ngâm dung dịch khử trùng 1% thời gian phút Trước sử dụng phải rửa nước xà phòng nước khử trùng
- Những dụng cụ vật tư phịng thí nghiệm sử dụng lần mà bị nhiễm bẩn nhiều trước thiêu loại bỏ nên ngâm dung dịch khử trùng 10% Trong số trường hợp đặc biệt cần phải bảo vệ da, tránh tiếp xúc với màng niêm dịch, đường hô hấp với tác nhân gây bệnh phải có trang găng tay bảo hộ
5.3.2 Gắn nhãn cho mẫu xét nghiệm
(8)-Họ tên chủ hộ Địa Số điện thoại Thơng tin giống lồi, độ tuổi bệnh súc
-Loại mẫu xét nghiệm, thời gian nơi thu thập
- Tên người thu tập mẫu xét nghiệm ban đầu Phịng thí nghiệm u cầu thêm thơng tin khác giải thích rõ tét xét nghiệm cần thiết, như:
- Thông tin bệnh súc: tuổi, giống loài, giới, địa đầy đủ
- Thơng tin lâm sàng: ngày có biểu triệu chứng đầu tiên, tiền sử bệnh tật tiêm phòng, số lượng mắc, số chết/ tổng đàn, yếu tố nguy tiền sử tiếp xúc, kháng sinh điều trị trước lấy mẫu xét nghiệm
- Thơng tin phịng thí nghiệm: mẫu xét nghiệm giai đoạn bệnh cấp hay hồi phục có đặc biệt khác bệnh súc
Phịng thí nghiệm nên ghi rõ thời gian, tiếp nhận chất lượng mẫu xét nghiệm, tên người tiếp nhận mẫu xét nghiệm ban đầu
5.4 nghiệmLưu giữ, đóng gói vận chuyển mẫu xét 5.4.1 Lưu giữ mẫu xét nghiệm
(9)- Nhiều mẫu xét nghiệm để phân lập vi rút chấp nhận nuôi cấy sau ngày để môi trường đặc biệt nhiệt độ từ - 8oC.
Nếu giai đoạn đầu để lâu nên để đơng đá, kết bị thay đổi Nếu để có tính lâu dài phải để điều kiện nhiệt độ - 70oC.
- Mẫu bệnh phẩm để nuôi cấy vi khuẩn nên giữ mơi trường vận chuyển thích hợp điều kiện nhiệt độ thích hợp Nếu để chậm khơng thích hợp số lượng vi khuẩn giảm cách đáng kể
- Mẫu xét nghiệm để phát kháng nguyên, kháng thể phải giữ điều kiện - 8oC trong
thời gian 24 - 48 giờ, - 20oC thời gian
đầu kéo dài Huyết để phát kháng thể có giữ điều kiện - 8oC 10 ngày.
Lưu ý quan trọng tránh làm tan đông đá lại nhiều lần, làm ảnh hưởng đến phản ứng ngưng kết
5.4.2 Đóng gói dán nhãn mẫu xét nghiệm
Các phương pháp đóng gói phải chuẩn thức chắn an toàn cho người Mẫu xét nghiệm phải đóng gói, dán nhãn theo nguyên tắc quốc gia quốc tế vận chuyển chất nhiễm trùng Địa dán phía ngồi bao gói phải thể rõ nơi gửi tên phòng thí nghiệm với đầy đủ địa chỉ, số điện thoại người gửi người nhận Tài liệu gửi theo phải ghi chép chi tiết mẫu xét nghiệm (số, loại mẫu xét nghiệm, thời gian thu thập mẫu), dán nhãn cảnh báo nguy hiểm thích hợp
5.4.3 Vận chuyển mẫu xét nghiệm
(10)thu thập mẫu nên thơng báo tới phịng thí nghiệm tiếp nhận mẫu hình thức vận chuyển cụ thể mẫu xét nghiệm gửi tới Nếu cần thiết vận chuyển theo đường quốc tế phải có giấy phép phịng thí nghiệm phịng thí nghiệm phải thơng báo cho người gửi biết có nhận hay khơng nhận mẫu xét nghiệm
5.5 Các phương pháp thu thập bệnh phẩm 5.5.1 Lấy mẫu não tủy
Mẫu xét nghiệm cần phải lấy bác sĩ người có kinh nghiệm Dịch não tủy dùng để chẩn đoán vi rút, vi khuẩn, ký sinh trùng viêm màng não nấm
5.5.1.1 Chuẩn bị dụng cụ
-Dụng cụ vô khuẩn: găng tay, thấm nước, gạc, panh, kéo, dao mổ, túi đựng vô trùng
-Sát trùng vùng da: povidon iodin 10% cồn y tế 70%
5.5.1.2 Phương pháp lấy mẫu xét nghiệm
Thơng thường hay lấy não lồi gia cầm, các gia súc khác lấy não
-Gia cầm cắt vùng đầu lột bỏ da, cắt bỏ phần mỏ Cho vào túi vô trùng
- Dán nhãn lên túi 5.5.1.3 Vận chuyển mẫu
Nói chung mẫu xét nghiệm nên gửi tới phịng thí nghiệm để xử lý sớm tốt
(11)Mẫu não tủy cho phân lập virus không cần môi trường vận chuyển Chúng vận chuyển điều kiện - 8oC, thời gian 48 giờ,
-70oC cho thời gian kéo dài hơn.
5.5.2 Lấy mẫu swab trực tràng
Các mẫu phân dùng để chẩn đoán vi sinh vật hiệu thu thập sau bệnh nhân bị ỉa chảy cấp (với vi rút ≤ 48 vi khuẩn < ngày), nên lấy trước điều kháng sinh Có thể lấy từ - mẫu phân chia cho ngày Phân mẫu xét nghiệm ưu tiên cho nuôi cấy vi khuẩn, vi rút ký sinh trùng Tăm trực tràng khơng khuyến cáo để lấy phân cho chẩn đốn vi rút
5.5.2.1 Chuẩn bị môi trường dụng cụ
-Hộp chứa phân phải sạch, khơ có nắp vặn -Chuẩn bị môi trường vận chuyển vi khuẩn thích hợp cho tăm bơng trực tràng: CARRY – BLAIR
-Trường hợp lấy phân để chẩn đoán ký sinh trùng, hộp vận chuyển phân dùng dung dịch bảo quản: formalin 10%, polyviny isopropyl alcohol (PVA)
5.5.2.2 Phương pháp lấy mẫu swab trực tràng
Phương pháp lấy mẫu phân tăm bông trực tràng động vật.
-Tăm phải làm ẩm nước muối vô khuẩn
- Đưa chóp tăm bơng vào qua thắt hậu môn xoay nhẹ nhàng
- Lấy tăm kiểm tra chắn đầu tăm bơng có dính phân
(12)chuyển virus vi khuẩn
- Bẻ gẫy phần cán tăm không chạm vào tuýp, sau vặn chặt nắp lại
- Dán nhãn lên tuýp
5.5.2.3 Vận chuyển mẫu xét nghiệm
Mẫu phần cần vận chuyển điều kiện -8oC Số lượng vi khuẩn giảm đáng kể nếu
mẫu xét nghiệm khơng xử lý vịng - ngày sau thu thập Vi khuẩn Shigella có nhạy cảm đặc biệt nhiệt độ tăng lên
-Mẫu xét nghiệm để kiểm tra ký sinh trùng nên cho vào dung dịch formali 10% PVA (3 phần phân/1 phần bảo quản) Vận chuyển điều kiện nhiệt độ môi trường, túi ni lơng bịt kín miệng
5.5.3 hầu họng)Lấy mẫu xét nghiệm từ đường hô hấp (swab
5.5.3.1 Chuẩn bị môi trường dụng cụ
- Môi trường vận chuyển vi khuẩn virus - Tăm loại có cán kim loại, mềm đầu sợi mềm đặc biệt
- Đè lưỡi
-Dụng cụ banh mũi
-Máy hút dịch bơm tiêm loại 10 - 20 ml - Tp vơ khuẩn có nắp vặn
5.5.3.2 súcMẫu xét nghiệm lấy từ đường hô hấp gia - Dùng dụng cụ đè lưỡi để đè lưỡi xuống Dùng đèn có nguồn sáng mạnh soi vào vị trí có viêm xuất tiết sau tỵ hầu
(13)chạm vào lưỡi, thành má đưa vào tuýp đựng môi trường vận chuyển có nắp vặn
-Bẻ đoạn tăm bông, phần không chạm vào tuýp vặn nắp
- Dán nhãn hộp đựng mẫu xét nghiệm -Hồn thành mẫu u cầu phịng thí nghiệm
5.5.3.3 Lấy mẫu qua đường miệng gia cầm
-Để vật tư thật thoải mái, kéo đầu vươn trước ngả đầu phía sau
-Dùng loại tăm bơng có cán đưa vào song song với sàn mũi không hướng lên Sau đưa vào cổ họng, di chuyển đầu bơng xuống phía khu vực tỵ hầu
-Soay đầu quanh màng tỵ hầu vài lần nhẹ nhàng kéo đưa vào có mơi trường vận chuyển có nắp vặn
-Bẻ đoạn tăm bông, phần không chạm vào tuýp vặn nắp
-Dán nhãn tuýp đựng mẫu xét nghiệm 5.5.3.4 Vận chuyển mẫu xét nghiệm
- Tất mẫu xét nghiệm đường hô hấp trừ đờm vận chuyển mơi trường thích hợp cho vi khuẩn vi rút
-Chuyển nhanh chóng đến phịng thí nghiệm nhanh tốt để giảm tối đa phát triển vi khuẩn hội sinh miệng
-Nếu để tới 24 giờ, trình vận chuyển mẫu xét nghiệm vi khuẩn vi rút cần để điều kiện nhiệt độ từ - 8oC/môi trường thích hợp.
(14)- Khử trùng ngồi da: cồn 70% povidon iodin 10%, gạc, băng sơ cứu
-Găng tay vô khuẩn dùng lần
-Ga rô, lấy máu chân không (vaccutainer) bơm kim tiêm dùng lần
- Bộ lấy máu chân khơng đựng máu có nắp vặn
- Bơm kim tiêm vô trùng -Gắn nhãn bút khơng xố 5.5.4.2 Phương pháp lấy máu.
- Đặt ga rơ phía vị trí chọc ven
- Bắt mạch để xác định vị trí ven Sát trùng vị trí lấy ven rộng vùng xung quanh, để bay hết thực chọc ven
- Nếu dùng bơm tiêm lần lấy 5-10 ml/gia súc lớn, từ 2-5 ml/gia súc nhỏ gia cầm
- Lấy xong bỏ ga rô, ép mạch đến máu ngừng chảy dán băng lên
- Bẻ cong đầu kim đậy chặc nắp để vào khay đựng nghiên gốc 45 độ cho máu đông bỏ vào thùng vận chuyển
- Hoặc chuyển mẫu vào tuýp vận chuyển có nắp chai cấy máu
- Dán nhãn tuýp, dùng bút khơng xố ghi thơng tin
5.5.4.3 Quy trình vận chuyển
(15)ra
-Nếu mẫu xét nghiệm đến phịng thí nghiệm vịng 24 giờ, nguyên gây bệnh vi khuẩn tồn điều kiện vận chuyển nhiệt độ môi trường
5.5.5 Nhận mẫu bảo quản
- Các mẫu nhận bảo quản nhiệt độ quy định tránh ánh nắng trực tiếp nguồn nóng khác
- Kiểm tra nhanh tốt sau nhận mẫu trường hợp
- Gửi mẫu đến phong thí nghiệm cấp theo đạo Lãnh đạo
5.5.5.1 Xử lý mẫu phịng thí nghiệm
- Đảm bảo khu vực làm việc khơng có phế thải;
- không để mẫu tiếp xúc ánh nắng; làm khu vực làm việc trước vào sau kiểm tra mẫu;
- Khử trùng trước cách dụng cụ đựng khay.v.v
Chờ nhận kết từ phòng xét nghiệm cấp trên trả lời kết đến người dân.