Thông tin tài liệu
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - NGUYỄN MẠNH CƯỜNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ HOẠT CHẤT TỪ CỦ BÌNH VƠI VIỆT NAM (STEPHANIA SPP.) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC KỸ THUẬT HÓA HỌC Hà Nội – Năm 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - NGUYỄN MẠNH CƯỜNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ HOẠT CHẤT TỪ CỦ BÌNH VƠI VIỆT NAM (STEPHANIA SPP.) Chun ngành: KỸ THUẬT HĨA HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC KỸ THUẬT HÓA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS TS VŨ ĐÌNH HOÀNG Hà Nội – Năm 2017 I T i xin m o n t nh kh h qu n trung th Do v n ki n th sót t i th C v s li u v k t nghi n u lu n v n u m ng òn hạn h n n lu n v n n y kh ng tr nh khỏi thi u v h nh x s mong nh n ượ s th ng ảm v bạn bè hỉ bảo t n tình ủ ồng nghi p s u ọ lu n v n n y Hà Nội, ngày 20 th ng 10 năm 2017 T c giả u guyễ i v h ƣờ g Thầy I Ả Ơ Lu n v n ượ ho n th nh s nỗ l ủ thầy bạn bè ủ thân s giúp ỡ t n tình ồng nghi p v người thân gi T i xin b y tỏ lịng bi t ơn sâu sắ ình n PGS TS Vũ Đình Ho ng ã t n tình hỉ dẫn t i su t qu trình xây d ng ương v ho n th nh lu n v n TS Trần Bạ h Dương ã ộng vi n giúp ỡ v tạo i u ki n t t ho t i su t qu trình th hi n T i xin b y tỏ lòng bi t ơn B n hủ nhi m thầy Bộ m n C ng ngh Hó dượ v BVTV trường Đại họ B h kho H nội v ồng nghi p Vi n Hó họ C ng nghi p Vi t N m ã lu n tạo i u ki n v hỗ trợ t i vi ng ể t i ó thể ho n th nh lu n v n n y Xin ảm ơn Vi n Kỹ thu t Hó họ Vi n Hó họ C ng nghi p Vi t N m Vi n Đ o tạo S u ại họ trường Đại họ B h Kho H nội ã tạo i u ki n thu n lợi ể lu n v n ho n th nh úng ti n ộ Lu n v n n y ượ th ngh T p o n Hó o n Hó hi n với s t i trợ kinh ph từ hất Vi t Nam Nhóm nghi n tài khoa học công u hân th nh ảm ơn T p hất Vi t Nam Vi n Hóa học Công nghi p Vi t Nam Hà Nội, ngày 20 th ng 10 năm 2017 Học viê guyễ ii h ƣờ g Ụ I i I Ả Ụ D D Ụ Ơ ii Ụ ii H Ụ Á KÝ HIỆU, HỮ VIẾT TẮT v H Ụ HÌ H VẼ, SƠ Ồ, BẢ G BIỂU vi Ở ẦU HƢƠ G TỔ G QU .3 1 Tổng qu n v lo i Bình v i .3 1.1.1 Th v t 1 Giới thi u s lo i Bình v i h nh Vi t N m: 1.2 Các alkaloid nhân isoquinoline ủ Bình v i .11 V i nét v hó họ v hoạt t nh sinh họ 11 2 Nghi n u Vi t N m v dượ t nh ủ lk loid từ ủ Bình v i 16 Một s phương ph p hó họ phân l p lk loid từ ủ lo i Bình vơi 16 Một s phương ph p t h v tinh h lk loid từ Bình v i .19 HƢƠ G ỐI TƢỢ G VÀ PHƢƠ G PHÁP GHIÊ ỨU 24 Đ i tượng nghi n u 24 2 C kỹ thu t th nghi m hủ y u 24 2 Phân t h sắ ký Rotundine P lm tine v Ceph r nthine 24 2 Thử nghi m quy trình t h v tạo mu i p lm tine hydro hlodide quy m Pilot 25 2 Phân t h x ịnh ấu trú v ộ tinh t ủ sản phẩm 27 HƢƠ G THỰ GHIỆ .28 Phân l p BV1 (Rotundine) .28 3.2 Phân l p phần hi t giàu BV2 (Palmatine) BV3 (Cepharanthine) .30 3 Chi t/T h tinh h BV2 (P lm tine hydro hloride) 31 Chi 3.5 Đặ 351 352 353 t/T h tinh h BV3 (Ceph r nthine) 32 trưng v t lý v phổ ủ hợp hất phân l p ượ 34 Hợp hất BV1 ( Rotundine) 34 Hợp hất BV2 (P lm tine) 34 Hợp hất BV3 (Ceph r nthine) 35 HƢƠ G KẾT QUẢ VÀ THẢ UẬ 37 Phân t h x ịnh ấu trú ủ BV1 .37 iii Phân t h x ịnh ấu trú BV2 39 Phân t h ấu trú v h m lượng BV3 41 4.4 Xây d ng v thử nghi m quy trình thu C o hi t gi u P lm tine (BV2) v Ceph r nthine (BV3) từ ót hi t Rotundine (BV1) 45 4 Ảnh hưởng ủ lượng x t sulfuri 45 4 Ảnh hưởng ủ pH ki m hó dị h lọ v tạo k t tủ lk loid 46 4 Thử nghi m quy trình thu “C o hi t nguy n li u” ng suất 100 kg/mẻ 47 Chi t/T h v Tinh h P lm tine (BV2) .48 Phân l p ri ng bi t Phần hi t P lm tine (BV2) v Ceph r nthine (BV3) .48 1 Tỷ l Eth nol/C o hi t nguy n li u 49 4.5.1.2 Ảnh hưởng ủ nồng ộ N Cl hỗn dị h 49 Thử nghi m phân l p P lm tine th v Phần hi t Ceph r nthine 51 Xây d ng v thử nghi m quy trình t h tinh h P lm tine (BV2) .52 Ảnh hưởng ủ tỷ l P lm tine th /Eth nol: 52 2 Ảnh hưởng ủ tỷ l Nướ /P lm tine 80 qu trình k t tinh 53 Triển kh i thử nghi m sản xuất Palmatine hydrochloride quy mô Pilot .54 T h v Tinh h Ceph r nthine (BV3) 55 Phân l p Ceph r nthin (BV3) tinh thể th 55 4.6 Tinh h Ceph r nthine (BV3) sắ ký lỏng o p b n ng nghi p 57 KẾT UẬ 58 TÀI IỆU TH KHẢ 59 PHỤ Ụ 65 iv D H Ụ Á KÝ HIỆU, HỮ VIẾT TẮT CC Sắ ký ột (Column hrom togr phy) TLC Sắ ký lớp mỏng (Thin l yer hrom togr phy) mp Điểm hảy (Melting point) MS Phổ kh i lượng (M ss spe tros opy) 13 Phổ ộng hưởng từ hạt nhân 13C C-NMR HR-ESIMS Phổ kh i lượng phân giải Phổ ộng hưởng từ hạt nhân proton H-NMR o EtOH Ethanol Độ huyển dị h ho họ (ppm) J Hằng s tương t (Hz) v D H Ụ HÌ H VẼ, SƠ Ồ, BẢ G BIỂU Hình 1 Hình ảnh lo i Bình v i (Steph ni spp ) .3 Hình Một s lk loids ti u biểu ủ Bình v i (Steph ni sp ) 11 Hình H th ng Pilot Prep HPLC HD-3000 Labomatic AG 25 Hình 2 H th ng miniPilot tổng hợp hữu 5-10 lít Buechi Glass Üster 26 Hình Cấu trú hó họ ủ BV1 37 Hình Cấu trú hó họ ủ BV2 39 Hình Sắ ký HPLC/MS sản phẩm BV2 (P lm tine hydro hloride dihydr te) 41 Hình 4 Cấu trú hó họ ủ BV3 42 Hình Sắ ký HPLC/MS phân t h BV3 45 Hình Ảnh hưởng ủ tỷ l H2SO4/Keo ót tới hi u thu hồi lk loid 46 Hình Ảnh hưởng ủ pH tới hi u thu hồi lk loid 47 Hình Ảnh hưởng ủ tỷ l Eth nol/C o hi t tới hi u phân l p P l v Ceph .49 Hình Ảnh hưởng ủ nồng ộ N Cl tới hi u phân l p P l v Ceph 50 Hình 10 Ảnh hưởng tỷ l Eth nol/P lm tine th 52 Hình 4.11 Ảnh hưởng ủ lượng nướ sử dụng ể k t tinh P lm tine 53 Hình 12 Khảo s t ảnh hưởng Tỷ l A eton/C o nh “Ceph r nthine th ” 56 Sơ 1 Phân l p lk loid sử dụng dung m i hữu t phân 17 Sơ Sản xuất p lm tine từ Bột thân rễ ho ng ằng 18 Sơ Sơ quy trình ng oạn sản xuất BV1 85% (rotundine 85%) 29 Sơ Sơ quy trình ng oạn sản xuất BV1 98% (rotundine 98%) 29 Sơ 3 Sơ quy trình t n thu o hi t gi u BV2 (P lm tine) v BV3 (Cepharanthine) 30 Sơ Sơ quy trình thu BV2 thơ (Palmatine thô) 30 Sơ Quy trình t h tinh h BV2 (P lm tine) 31 Sơ Quy trình phân l p v tinh h BV3 (Ceph r nthine) .33 Bảng 1: Độ huyển dị h hó họ δ 1H v δ 13C ủ BV1 38 Bảng Độ dị h huyển hó họ δC v δH ủ P lm tine 40 Bảng Độ dị h huyển hó họ δC v δH ủ BV3 43 vi Ở ẦU Vi t N m l qu ượ nh gi óm gi nằm khu v ộ dạng sinh họ Đ ng N m Á l khu v o ó ó nhi u loại th ó thể ượ dùng l m dượ li u truy n th ng [54] Tuy nhi n dượ li u nướ ng nghi p sản xuất hư ph t triển húng t phải nh p lượng lớn nguy n li u dượ th m v o ó nguồn t i nguy n dượ li u từ thi n nhi n hư nghi n v t u v kh i th thỏ ng ể ượ ầu tư p ng nhu ầu nướ [1] Bình vơi (Stephania rotunda Lour thuộ họ Ti t d - Menispermaceae) lo i phân b phổ bi n khu v dụng b i thu Đông Á [40] Củ Bình v i thường ượ sử dân gi n hữ b nh n thần ki t lỵ v ng d ki t lỵ t ng huy t p vi m v ủ Bình v i ó h lượng lớn hữ ngủ l o hen b nh li n qu n n g n Trong hoạt hất alkaloids rotundine, cepharanthine, cycleanine [29, 35, 38, 49] p lm tine oryd lmine th lifoline…[50, 51, 52] Rotundine (còn gọi L-tetrahydropalmatine) (C21H25O4N) ượ hi m 12-0,3 % [4] kh i lượng ủ Bình v i tươi Rotundine ó t u ng b dụng l m giảm n thần hi u Rotundine k t tinh dạng tinh thể hình kim m u trắng hoặ v ng nhạt dễ huyển m u bị un nóng h y phơi nắng [4] Palmatine C21H24NO4+ òn gọi l berberi inine l ti n hất ủ berberine (protoberberine), ó h m lượng lớn ây Ho ng ằng (Fibraurea tinctoria Lour thuộ họ Ti t d - Menispermaceae) ượ hấp nh n sử dụng vi v ng d ki t lỵ t ng huy t p vi m v b nh li n qu n i u trị b nh n g n Ceph r nthine ượ phân l p lần ầu ti n từ lo i Bình hay O-methylcepharanoline C37H38N2O6 v i ủ Nh t Bản (Stephania cepharantha Hayata), l lk loid ó gi trị, hi n ã bắt ầu ượ sử dụng rộng rãi Nh t v nhi u nướ kh ng vi m v h ng ung thư Ở Vi t N m ho xuất nh p ng b hâu Á l m thu n n y th ng tin v quy m thị trường dượ phẩm quy m thu i u trị v nguy n li u hó dượ ầy ủ Th nh phần hoạt t nh h ng vi m v ung thư theo ịnh hướng quy trình ấp phép v ấp s b i thu ng dượ ng ký Ri ng hư ượ th ng k v i nghi n b i thu òn ượ giữ k n hoặ ng sản phẩm từ ủ Bình v i Rotundine, Cepharanthine, Palmatine alkaloid kh hỉ t nh ri ng ủ l n ng lưu ý l v ng ty Medipl ntex Tr ph o OPC tổng kh i lượng nh p n h ng hụ n m Để hỉ Rotundine vi theo s li u nh p p ng lại nhu ầu th t nướ kh ng sản xuất Ceph r nthine v P lm tine ũng qu n trọng Đi u ả b loại lk loid tr n ó nhi u tương ồng u ó h m lượng ng ngh o sản xuất Vi lo i Bình v i k t hợp sản xuất Ceph r nthine v P lm tine ùng với Rotundine kh ng hỉ l m phẩm m góp phần giảm gi th nh ủ dạng hó sản th nh phẩm t ng hi u sản xuất ủ dây huy n ục đích ủ lu n v n n y l phân ượ s lượng o từ ủ Bình v i (Stephania spp.) ược s lk loid th nh phẩm lk loid hữu dụng với h m ồng thời ti n h nh triển kh i sản xuất p ng y u ầu l m nguy n li u thu ội du g chí h ủ lu n v n gồm: - Nghi n u ng ngh hi t oi toàn ph n t nh v i i t N m (Stephania spp.); - Phân ập 3-X oi tinh hi t t định ấu trú - T i ưu h ng ngh oi toàn ph n; oi phân ập đượ ; hi t tinh h ph n oi tinh hi t t oi toàn Phụ ụ 4.2.5 Phổ 13Cex-NMR Phụ ụ 4.2.6 Phổ DEPT 72 (P m tine) (P matine) Phụ ụ 4.2.7 Phổ DEPTex Phụ ụ 4.2.8 Phổ HSQC 73 (P m tine) (P m tine) Phụ ụ 4.2.8 Phổ HSQCex1 (P m tine) Phụ ụ 4.2.9 Phổ HSQCex2 (P m tine) 74 Phụ ụ 4.2.10 Phổ HM C Phụ ụ 4.2.11 Phổ HMBCex1 75 (P m tine) (P m tine) Phụ ụ 4.2.12 Phổ HM Cex2 (P m tine) Phụ ụ 4.2.13 Phổ HM Cex3 (P m tine) 76 PHỤ Ụ 4.3 Á ẠI PHỔ Ủ BV3 ( EPH R THI E) Phụ ụ 4.3.1 Phổ ESI-MS (Ceph r nthine) Phụ ụ 4.3.2 Phổ 1H-NMR (Ceph r nthine) 77 Phụ ụ 4.3.3 Phổ 1Hex1-NMR (Ceph r nthine) Phụ ụ 4.3.4 Phổ 1Hex2-NMR (Ceph r nthine) 78 Phụ ụ 4.3.5 Phổ 13C-NMR Phụ ụ 4.3.6 Phổ 13Cex1-NMR 79 (Ceph r nthine) (Cepharanthine) Phụ ụ 4.3.7 Phổ 13Cex2-NMR Phụ ụ 4.3.8 Phổ DEPT 80 (Ceph r nthine) (Ceph r nthine) Phụ ụ 4.3.9 Phổ DEPTex (Ceph r nthine) Phụ ụ 4.3.10 Phổ HSQC (Ceph r nthine) 81 Phụ ụ 4.3.11 Phổ HSQCex1 (Ceph r nthine) Phụ ụ 4.3.12 Phổ HSQCex2 (Ceph r nthine) 82 Phụ ụ 4.3.13 Phổ HM C Phụ ụ 4.3.14 Phổ HM Cex1 83 (Ceph r nthine) (Ceph r nthine) Phụ ụ 4.3.15 Phổ HM Cex2 (Ceph r nthine) Phụ ụ 4.3.16 Phổ HM Cex3 (Ceph r nthine) 84 Phụ ụ 4.3.17 Phổ HM Cex4 Phụ ụ 4.3.18 Phổ COSY (Ceph r nthine) (Ceph r nthine) 85 Phụ ụ 4.3.19 Phổ COSYex1 (Ceph r nthine) Phụ ụ 4.3.20 Phổ COSYex2 86 (Cepharanthine) ... - NGUYỄN MẠNH CƯỜNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ HOẠT CHẤT TỪ CỦ BÌNH VƠI VIỆT NAM (STEPHANIA SPP.) Chuyên ngành: KỸ THUẬT HÓA HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC KỸ THUẬT HÓA HỌC NGƯỜI HƯỚNG... 2+ hoạt t nh h enzyme A etyl holinester se hoạt t nh h giải phóng Hist mine hoạt t nh h ng oxi hó huy t p 15 v hoạt t nh giãn mạ h v hạ 1.2.2 Nghiê cứu Việt am dƣợc tí h alkaloid từ củ Bình vôi. .. t N m v dượ t nh ủ lk loid từ ủ Bình v i 16 Một s phương ph p hó họ phân l p lk loid từ ủ lo i Bình vơi 16 Một s phương ph p t h v tinh h lk loid từ Bình v i .19 HƢƠ G ỐI TƢỢ
Ngày đăng: 26/05/2021, 11:53
Xem thêm: Luận văn thạc sĩ nghiên cứu một số hoạt chất từ củ bình vôi việt nam (stephania SPP)