Nghiên cứu thử nghiệm vắc xin đa giá nhũ dầu phòng bệnh viêm phổi do vi khuẩn actinobacillus pleuropneumoniae, pasteurella multocida và streptococcus suis gây ra ở lợn

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM –––––––––––––––– NGUYỄN THỊ QUỲNH ÁNH NGHIÊN CỨU THỬ NGHIỆM VẮC XIN ĐA GIÁ NHŨ DẦU PHÒNG BỆNH VIÊM PHỔI DO VI KHUẨN ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIAE, PASTEURELLA MULTOCIDA VÀ STREPTOCOCCUS SUIS GÂY RA Ở LỢN TẠI TỈNH THÁI NGUYÊN LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y THÁI NGUYÊN - 2019 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM –––––––––––––––– NGUYỄN THỊ QUỲNH ÁNH NGHIÊN CỨU THỬ NGHIỆM VẮC XIN ĐA GIÁ NHŨ DẦU PHÒNG BỆNH VIÊM PHỔI DO VI KHUẨN ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIAE, PASTEURELLA MULTOCIDA VÀ STREPTOCOCCUS SUIS GÂY RA Ở LỢN TẠI TỈNH THÁI NGUYÊN Chuyên ngành: Thú y Mã số: 8.64.01.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: TS TRẦN ĐỨC HẠNH THÁI NGUYÊN – 2019 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn hoàn toàn trung thực đồng ý, cho phép sử dụng số liệu nghiên cứu để hoàn thành luận văn cao học PGS TS Cù Hữu Phú Mọi giúp đỡ cho việc hoàn thành luận văn cảm ơn Các thông tin, tài liệu trình bày luận văn ghi rõ nguồn gốc Thái Nguyên, ngày 06 tháng năm 2019 Tác giả Nguyễn Thị Quỳnh Ánh ii LỜI CẢM ƠN Sau hai năm học tập nghiên cứu, đến hồn thành chương trình khố học với luận văn Thạc sĩ chuyên ngành Thú y đề tài “Nghiên cứu thử nghiệm vắc xin đa giá nhũ dầu phòng bệnh viêm phổi vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida Streptococcus suis gây lợn tỉnh Thái Ngun”.Để hồn thành khố học cơng trìnhnghiên cứu này, tơi nhận dạy bảo tận tình định hướng giảng viên hướng dẫn TS Trần Đức Hạnh giúp đỡ PGS TS Cù Hữu Phú Sự quan tâm giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi tập thể giảng viên khoa Chăn ni Thú y, Phịng Đào tạo - Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên; Công ty Cổ phần thuốc thú y Đức Hạnh Marphavet Nhân dịp cho phép trân trọng bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc giúp đỡ tận tình, q báu Tơi xin trân trọng bày tỏ lòng biết ơn hội đồng chấm luận văn giúp đỡ cho phép bảo vệ luận văn Tôi xin cảm ơn Ban Lãnh đạo đơn vị, bạn bè, đồng nghiệp, người thân gia đình động viên, tạo điều kiện thời gian, vật chất tinh thần để tơi hồn thành tốt khố học Thái Ngun, ngày 06 tháng năm 2019 Tác giả Nguyễn Thị Quỳnh Ánh iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU vi DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH x MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học thực tế 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tế Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae bệnh viêm phổi lợn 1.1.1 Vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae 1.1.2 Bệnh viêm phổi - màng phổi lợn A pleuropneumoniae 1.1.3 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae bệnh viêm phổi lợn vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae gây 1.2 Vi khuẩn P multocida bệnh viêm phổi lợn P multocida gây ra.12 1.2.1 Vi khuẩn P multocida 12 1.2.2 Bệnh viêm phổi lợn vi khuẩn P multocida 16 1.2.3 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn P multocida bệnh viêm phổi lợn vi khuẩn P multocida gây 22 1.3 Vi khuẩn S suis bệnh viêm phổi lợn vi khuẩn S suis gây ra… 22 1.3.1 Vi khuẩn S suis 22 1.3.2 Bệnh viêm phổi lợn vi khuẩn S suis 22 iv 1.1.2 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn S suis bệnh viêm phổi lợn vi khuẩn S sui gây 29 Chương NỘI DUNG, NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 30 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 30 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 30 2.1.3 Thời gian nghiên cứu 30 2.2 Nội dung nghiên cứu 30 2.3.1 Mơi trường, hóa chất dùng nghiên cứu chế tạo vắc xin đa giá nhũ dầu phòng viêm phổi lợn 31 2.3.2 Động vật thí nghiệm 31 2.3.3 Máy móc, dụng cụ thí nghiệm 31 2.4 Phương pháp nghiên cứu 31 2.4.1 Phương pháp xác định số lượng vi khuẩn 31 2.4.4 Phương pháp chế tạo vắc xin phòng bệnh viêm phổi cho lợn 32 2.4.5 Phương pháp nghiên cứu đáp ứng miễn dịch độ dài miễn dịch đàn lợn sau tiêm phòng vắc xin đa giá nhũ dầu phòng bệnh viêm phổi lợn vi khuẩn A pleuropneumoniae; P multocida S suis 33 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 37 2.5.1 Các phương pháp đo lường dịch tễ 37 2.5.2 Phương pháp xử lý số liệu 37 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Kết xác định độc lực chủng vi khuẩn A pleuropneumoniae, P multocida S suis phân lập được; chọn chủng vi khuẩn chế tạo vắc xin thử nghiệm 38 3.1.1 Kết xác định độc lực chủng vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập 38 v 3.1.2 Kết xác định độc lực chủng vi khuẩn P multocida phân lập 40 3.1.3 Kết xác định độc lực chủng vi khuẩn S.suis phân lập 45 3.2 Kết chế tạo vắc xin thử nghiệm phòng bệnh viêm phổi cho lợn 45 3.2.1 Chọn giống vi khuẩn chế tạo vắc xin thử nghiệm 45 3.2.2 Kết chế tạo vắc xin thử nghiệm phòng viêm phổi cho lợn 46 3.3 Kết xác định độ dài miễn dịch hiệu lực vắc xin thử nghiệm lợn nuôi tỉnh Thái Nguyên 57 3.3.1 Kết xác định độ dài miễn dịch vắc xin thử nghiệm 57 3.3.2 Kết xác định hiệu lực vắc xin thử nghiệm lợn nuôi tỉnh Thái Nguyên 68 KẾT LUẬN, ĐỀ NGHỊ 71 Kết luận 71 Đề nghị 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO 73 PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU ADN : Acid Deoxyribonucleic AGID : Agargel Immuno Diffuse A pleuropneumoniae : Actinobaccillus pleuroneumoniae Apx : Apx - Toxins BHI : Brain Heart Infusion Bp : Base pair CAMP : Chiristie - Atkinson - Munch - Peterson CFU : Colony Forming Unit CPS : Capsule polysaccharide Cs : Cộng DNT : Dermanecrotic toxin ELISA : Enzyme - linked Immuno sorbant assay H pleuropneumoniae : Haemophilus pleuropneumoniae HIP : Acid hippuric HLTP : Hiệu lực tiêm phòng IHA : Indirect Haemagglutination test LPS : Lypopolysaccaride LD : Lethal dose MR : Methyl red NAD : Nicotinamide Adenine Dinucleotide OMPs : Outer membrane proteins PBS : Phosphat buffer solution PCR : Polymerase Chain Reaction PPLO : Pleuropneumonia - like organism P multocida : Pasteurella multocida RR : Relative Risk vii Sta aureus : Staphylococcus aureus S suis : Streptococcus suis TYE : Tryptone Yeast Extract Broth TSA : Tryptic Soya Agar TSB : Tryptone soya broth VP : Voges Prokauer YE : Yeast Extract viii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1: Kết kiểm tra độc lực chủng vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập 39 Bảng 3.2: Kết kiểm tra độc lực chủng vi khuẩn P multocida phân lập 41 Bảng 3.3: Kết kiểm tra độc lực chủng vi khuẩn S suis phân lập 42 Bảng 3.4: Các chủng vi khuẩn chọn để chế tạo vắc xin thử nghiệm 45 Bảng 3.5: Kết đếm số lượng vi khuẩn có canh trùng 47 chế tạo vắc xin thử nghiệm 47 Bảng 3.6: Kết kiểm tra khiết lô canh trùng 48 sử dụng chế tạo vắc xin thử nghiệm 48 Bảng 3.7: Kết kiểm tra vô trùng lô vắc xin chế tạo thử nghiệm 49 Bảng 3.8: Kết kiểm tra an toàn vắc xin thử nghiệm chuột bạch 50 Bảng 3.9: Kết xác định hiệu lực vắc xin thử nghiệm chuột bạch công cường độc vi khuẩn A pleuropneumoniae 51 Bảng 3.10: Kết xác định hiệu lực vắc xin thử nghiệm chuột bạch công cường độc vi khuẩn P multocida 52 Bảng 3.11: Kết xác định hiệu lực vắc xin thử nghiệm chuột bạch công cường độc vi khuẩn S suis serotype 53 Bảng 3.12: Kết xác định hiệu lực vắc xin thử nghiệm lợn 56 phương pháp công cường độc 56 Bảng 3.13: Kết xác định hiệu giá kháng thể có máu lợn 59 tiêm vắc xin thử nghiệm sau tháng 59 Bảng 3.14: Kết xác định hiệu giá kháng thể có máu lợn 60 tiêm vắc xin thử nghiệm sau hai tháng 60 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Tiêu Quang An, Nguyễn Hữu Nam (2011), “Xác định số vi khuẩn kế phát gây chết lợn vùng dịch lợn Tai xanh huyện Văn Lâm tỉnh Hưng Yên năm 2010”, Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, 18(3), tr 56- 64 Đặng Xuân Bình, Nguyễn Thị Ngân, Phan Hồng Phúc (2007), “Tình hình nhiễm Actinobacillus pleuropneumoniae bệnh viêm phổi màng phổi lợn”, Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, 14(2), tr 36-39 Đặng Xuân Bình, Nguyễn Thị Kim Dung, Nguyễn Thị Hà, Lê Bá Hiệp (2010), “Khảo sát lưu hành vi khuẩn Pasteurella multocida gia súc số tỉnh miền núi phía Bắc Việt Nam”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 17(2), tr 53- 57 Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn – Cục Thú y (2006) Quy trình kiểm nghiệm vacxin dùng thú y, truy cập http://www.cucthuy.gov.vn/index.php Lê Văn Dương (2013), “Nghiên cứu số đặc tính sinh học vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida,Streptococcus suis gây viêm phổi Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn Thái Nguyên, biện pháp phòng trị” Luận án tiến sỹ thú y, Đại học Thái Nguyên, tr 82- 116 Đỗ Tất Đạt, Cù Hữu Phú, Nguyễn Bá Hiên (2019), “Chế tạo vacxin đa giá vơ hoạt nhũ dầu phịng bệnh viêm phổi lợn vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida,Streptococcus suis gây ra” Tạp chí Khoa học nơng nghiệp Việt Nam 2019, 17(5), tr 351-359 Nguyễn Thị Thu Hằng (2010), Nghiên cứu số đặc tính sinh học tính sinh miễn dịch Actinobacillus pleuropneumoniae phân lập từ lợn làm sở cho việc chế tạo vắc xin Luận án tiến sĩ Nông nghiệp, Viện Thú y Quốc gia, Hà Nội, tr 115-116 74 Trịnh Quang Hiệp, Cù Hữu Phú, Nguyễn Thu Hằng, Âu Xuân Tuấn (2004), “Xác định đặc tính sinh vật hố học, độc lực vi khuẩn Actinobacillus, Pasteurella Streptocococcus gây bệnh viêm phổi lợn”, Tạp chí khoa học-cơng nghệ Bộ Nơng nghiệp PTNT (4), tr 476-477 10 Phạm Sỹ Lăng, Đỗ Ngọc Thúy, Nguyễn Bá Hiên, Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Hoàng Văn Năm, Phạm Ngọc Thạch, Nguyễn Quốc Doanh, Phạm Ngọc Đính, Văn Đăng Kỳ, Nguyễn Thị Kim Oanh, Nguyễn Hữu Hưng, Phan Văn Long, Phan Quí Minh, Đỗ Hữu Dũng, Nguyễn Tùng, Trần Đức Hạnh (2012), Bệnh truyền lây từ động vật sang người, Nxb Nông nghiệp, tr 168-178 11 Hoàng Văn Minh (2017), “Ứng dụng chế tạo, thử nghiệm vaccine đa giá nhũ dầu phòng bệnh viêm phổi vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida,Streptococcus suis gây lợn tỉnh Bắc Giang” Luận văn thạc sỹ thú y, Đại học Thái Nguyên, tr 32-48 12 Trịnh Phú Ngọc, Lê Văn Tạo, Nguyễn Ngọc Nhiên (1999), “Một số tính chất vi khuẩn học chủng Streptococcus phân lập từ lợn tỉnh phía Bắc Việt Nam”, Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, (2), tr 47-49 13 Trịnh Phú Ngọc (2002), Nghiên cứu số đặc tính sinh vật độc lực vi khuẩn Streptococcus gây bệnh lợn số tỉnh, Luận án tiến sĩ Nông nghiệp, Viện Thú y Quốc gia, Hà Nội 14 Cù Hữu Phú, Nguyễn Ngọc Nhiên, Nguyễn Thu Hằng, Âu Xuân Tuấn, Nguyễn Bích Thuỷ, Vũ Ngọc Quý, Phạm Bảo Ngọc (2005), “Xác định nguyên nhân gây bệnh đường hô hấp lợn nuôi số tỉnh phía Bắc”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 12(4), tr 23-32 15 Cù Hữu Phú (2011), Nghiên cứu mối liên quan Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn với vi khuẩn gây bệnh kế phát xác định biện pháp phòng, trị bệnh, Báo cáo khoa học Viện Thú y Quốc gia 2011 75 16 Nguyễn Vĩnh Phước, Hồ Đình Chúc, Nguyễn Văn Hanh, Đặng Thế Huynh (1979), Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc, Nxb Nông thôn, Hà Nội 17 Lê Văn Tạo (2007), Một số bệnh truyền nhiễm thường gặp lợn biện pháp phòng trị, Nxb Lao động - Xã hội, tr 7-15; 68 - 89 18 Đỗ Ngọc Thuý, Lê Thị Minh Hằng, Constance Schutz, Ngô Thị Hoa, Trần Đình Trúc, Cù Hữu Phú, Trần Việt Dũng Kiên, Âu Xuân Tuấn, Nguyễn Xuân Huyên, Trần Thị Thanh Xuân (2009), “Một số đặc tính chủng vi khuẩn Streptococcus suis lưu hành lợn miền Bắc Việt Nam”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 16(3), tr 24-28 19 Tiêu chuẩn Việt Nam 8669 (2011), Tiêu chuẩn kiểm nghiệm vắc xin, Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y Trung ương I 20 Đỗ Quốc Tuấn, Nguyễn Quang Tuyên (2007), “Kết kiểm tra độc lực tính mẫn cảm kháng sinh Pasteurella multocida phân lập từ lợn khu vực miền núi phía bắc”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 14(6), tr 46-51 21 Nguyễn Quang Tuyên, Đỗ Quốc Tuấn (2007), “Kết phân lập vi khuẩn Pasteurella multocida lợn khu vực miền núi phía bắc”, Tạp chí Nơng nghiệp phát triển Nông thôn, (15), tr 45- 47 22 Tiếng Anh 23 Albina E., Madec F., Cariolet R., Torrison J (1994), Immune response and persistence of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus in infected pigs and farm units, Vet Rec 134, pp 567-573 24 Archambault M., Rioux S., Jacques M (1999), Evaluation of the hemoglobine binding activity of Actinobacillus pleuropneumoniae using fluorescein labeled pig hemoglobin and flow cytometry FEMS Microbiol Lett;173:17-25 25 Belanger M., Dubreuil D., Harel J., Girard C., Jacques M (1990), Role of lipopolysaccharides in adherence of Actinobacillus pleuropneumoniae to porcine tracheal rings Infect Immun 58:3523-3530 76 26 Bergey (1974), Manual of determinative bacteriology 8th Buchanan R.E and Gibbsons N.E Co - editors, Saltimore, the Williams anh Wiking Company 27 Bertram T A (1986), Intravascular macrophages in lungs of pigs infected with Haemophilus pleuropneumoniae Vet Pathol 23: 681-691 28 Blackall P J., Klaasen H B L M., van den Bosch H., Kuhnert P., Frey J (2002), Proposal of a new serovar of Actinobacillus pleuropneumoniae: serovar 15, Vet Microbiol (84) 47-52 29 Bosses J T., MacInnes J I (2000), Urease activity may contribute to the ability of Actinobacillus pleuropneumoniae to establish infection Can J Vet Res Jul;64(3):145-50 30 Carter G R (1961), A new serological type of Pasteurella multocida from central, Veterinary record, 73, pp 1052 31 Carter G.R (1984), Pasteuralla Yersinia and Franciella page: 111-121 in Diagnostic procedures in veterinary bacteriology and Mycology 4th ed (Carter G.R, ed), Charles C, Thomas Publisher, Springfield 32 Chang Y F., Shi J R., Ma D P., Shin S J., Lein D H (1993), Molercular analysis of the Actinobacillus pleuropneumoniae RTX Toxin-III gene cluster DNA Cell Biol 12: 351-362 33 Chiers K, Donne E, Van Overbeke I, Ducatelle R, Haesebrouck F (2002), Actinobacillus pleuropneumoniae infectious in closed swine heards: infectious patterns and serological profiles Elsevier science B.V in Ghent University - Belgium 34 Cho W S., Chae C (2001), Expression of the apx IV Gene in Pigs Naturally Infected with Actinobacillus pleupneumoniae, J Comp Path 125, p 34 - 40 35 Chung J Y., Wilkie I., Boyce J D., Townsend K M., Frost A J., Ghoddusi M., Adler B (2001), “Role of capsule in the pathogenesis of fowl cholera caused by Pasteurella multocida serogroup A”, Infect Immin, 69(4), pp 2487 - 2492 36 Chung J W., Ng- Thow- Hing C., Budman L I., Gibbs B F., Nash J H., Jacques M., Coulton J W (2007), Outer membrane proteome of Actinobacillus pleuropneumoniae: LC-MS/MS analyses validate in silico predictions Proteomics Jun; 7(11): 1854-1865 77 37 Clifton-Hadley F A (1983), Streptococccus suis type infection, Br.Vet J, No 139, pp 1-5 38 Clifton-Hadley F A., Alexander T J L., Enright M R (1986a), The epidemiology, diagnosis, treatment and control of Streptococcus suis type infection, In Proc Am Assoc Swine Pract, pp 473- 491 39 Clifton-Hadley F A., Enright M R., Alexander T J L.(1986b), Survival of Streptococcus suis type in pig carcasses, Vet Rec pp 118; 275 40 Collins J E., Benfield D A., Christianson W T., Harris L., Hennings J C., Shaw D P., Goyal S M., McCullough S., Morrison R B., Joo S H., Gorcyca D., Chladek D (1992), “ Isolation of swine infertility and respiratory syndrome virus (isolate ATCC VR- 2332) in North America and experimental reproduction of the disease in gnotobiotic pigs”, J Vet Diagn Invest 4: 117- 126 41 De Moor C E (1963), Septicaemic infections in pigs caused by haemolytic Streptococcis of new Lancefield groups designated R, S and T, Antonie van Leeuwenhoek, No 29, pp 272- 280 42 Devenish J., Rosendal S., Bosse J T., Wilkie B N., Johnson R (1990), Prevalence of seroreactors to the 104-kilodalton hemolysin of Actinobacillus pleuropneumoniae in swine herds, J Clin Microbiol 28:789-791 43 Devenish J., Rosendal S (1991), Calcium binds to and is required for biological activity of the 104 kilodalton hemolysin of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 1, Can J Microbiol 37:317-321 44 Diallo I S., Frost A J., Spradbrow P B (1995), “Molecular studies on avian stranins of Pasteurella multocida in Australia”, Vet Microbiol, pp 335 - 342 45 Diarra M S., Dolence J A., Dolence E K., Darwish I., Miller M J., Malouin F., Jacques M (1996), Growth of Actinobacillus pleuropneumoniae is promoted by exogenous hydroxamate and catechol siderophores, Appl Environ Microbiol; 62:853-859 46 D'Silva C G., Archibald F S., Niven D F (1995), Comparative study of iron acquisition by biotype and biotype strains of Actinobacillus pleupneumoniae, Vet Microbiol 44: 11-23 78 47 Eiichi K., Takuo S., Tsutomu M (1997), “Evaluation of transport media for Pasteurella multocida isolates from rabbit nasal specimens”, Journal of clinical microbiology, 35(8), pp 1948 - 1951 48 Elliott S D (1966), Streptococcal infections in young pigs I Am immunochemical study of the causative agent (PM Streptococcus) J Hyg, No 64, pp 205-212 49 Enright M R., Alexander T J L., Clifton-Hadley E A (1987), Role of houseflies (Musca domestica) in the epidemiology of Streptococcus suis type 2, Vet Rec, No 121, pp 132-133 50 Fedorka-Cray P J., Hoffman L., Cray W C., Gray J T., Breish S A., Anderson G A (1993), Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae Part I History, epidemiology, serotyping, and treatment Compend Contin Ed Practic Vet 15:1447-1455 51 Felmlee T., Pellett S., Welch R A (1985), Nucleotide sequence of an Escherichia coli chromosomal hemolysin J Bacteriol 163:94-105 52 Fenwick B., Henry S (1994), Porcine pleuropneumonia J Am Vet Med Assoc 204:1334-1340 53 Frey J., Nicolet J (1988), Purification and partial characterization of a hemolysin produced by Actinobacillus pleuropneumoniae type strain 4074 FEMS Microbiol Lett 55:41-46 54 Frey J., Nicolet J (1990), Hemolysin patterns of Actinobacillus pleuropneumoniae J.Clin Microbiol 28:232-236 55 Frey J., Van Den Bosch H., Segers R., Nicolet J (1992), Identification of a second hemolysin (HlyII) in Actinobacillus pleuropneumoniae serotype I and expression of the gene in Escherichia coli Infection and Immunity 60, 1671-1676 56 Frey J., Bosse J T (1993), Actinobacillus pleupneumoniae RTX toxins: Uniform designation of haemolysins, cytolysins pleurotocin and their genes, J Gen Microbiol 139, p 1723 - 1728 79 57 Frey J., Kuhn R., Nicolet J (1994), Association of the CAMP phenomenon in Actinobacillus pleuropneumoniae with the RTX toxins ApxI, ApxII and ApxIII FEMS Microbiol Lett 124 245-251 58 Frey J (1995a), Exotoxins of Actinobacillus pleuropneumoniae In: W Donachie (ed.) Haemophilus, Actinobacillus, and Pasteurella New York and London: Plenum 59 Frey J (1995b), Virulence in Actinobacillus pleuropneumoniae and RTX toxins Trends Microbiol Jul, 3(7): 257- 261 60 Gerlach G F., Klashinsky S., Anderson C., Potter A A., Willson P J (1992), Characterization of two genes encoding distinct transferring binding proteins in different Actinobacillus pleuropneumoniae isolates Infect Immun;60: 3253-3261 61 Gonzalez G C., Yu R H., Rosteck P R J R., Schryvers A B (1995), Sequence, genetic analysis and expression of transferrin receptor genes Microbiology (Reading) 141: 2405-2416 62 Gottschalk M., Higgins R., Jacques M., Mittal K R., Henrichsen J (1989), Description of 14 new capsular types of Streptococcus suis, J Clin Microbiol, No 2, pp 2633- 2635 63 Gottschalk M., Lebrun A., Wisselink H., Dubreuil J D., Smith H., Vecht U (1998), Production of virulence-related proteins by Canadian strains of Streptococcus suis capsular type 2, Can J Vet Res, No 62, pp 75-79 64 Gygi D., Nicolet J., Hughes C., Frey J (1992), Functional analysis of the Ca2+ regulated hemolysin I operon of A pleuropneumoniae serotype Infect Immun 60: 3059-3064 65 Han J., Wang Y., Faaberg K S (2006), Complete genome analysis of RFLP 184 isolates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus: Virus Research 122 (1-2): pp 175-183 66 Hartmann L., Schroeder W., Luebke A (1995), Isolation of the major outer membrane proteins of Actinobacillus pleuropneumoniae and Haemophilus parasuis J Vet Med (B) 42:59-63 80 67 Higgins R., Gottschalk M., Boudreau M., Lebrun A., Henrichsen J (1995) Description of six new Streptococcus suis capsular types, J Vet Diagn Invest 7: 405- 406 68 Higgins R., Gottschalk M (2002), Streptococcal diseases Diseases of swine, pp 563-573 69 Hunt M L., Adler B., Townsend K M (2000), “The molecular biology for Pasteurella multocida”, Vet Microbiology 72 (1), pp - 25 70 Inoue A., Yamamoto K., Hirano N., Murakami T (1984), Drug susceptibility of Haemophilus pleuropneumoniae strains isolated from pigs Jpn J Vet Sci 46:175-180 71 Inzana T J (1991), Virulence properties of A pleuropneumoniae Microb.Path 11:305-316 72 Iwamatsu S., Sawada T (1988), Relationship between serotypess, dermonecrotic toxin production of Pasteurella multocida isolation and pneumonic lesions of porcine lungs, Jpn J Vet Sci 50: p 1200 - 1206 73 Jablonki P E., Jaworski M., Hovde C J (1996), “A minimal medium for growth of Pasteurella multocida”, FEMS Microbiol Lett, 140(2), pp.165 - 174 74 Jacobsen M J., Nielsen J P., Nielsen R (1996), Comparison of virulence of different A pleuropneumoniae serotypes and biotypes using an aerosol infection model Veterinary Microbiology 49: 159-168 75 Jacques M., Roy G., Mittal K R (1988), Hemmaglutinating properties of A pleuropneumoniae Can J Microbiol 34, 1046-1049 76 Jacques M., Gottschalk M., Foiry B., Higgins R (1990), Ultrastructural study on surface components of Streptococcus sui, J Bacteriol, No 172, pp 2833- 2838 77 Jacques M (2004), Surface polysaccharides and iron-uptake systems of Actinobacillus pleuropneumoniae The Canadian Journal of Veterinary Research 68:81-85 81 78 Jensen A E., Bertram T A (1986), Morphological and biochemical comparison of virulent and avirulent isolates of Haemophilus pleuropneumoniae serotype Infect Immun 51:419-424 79 Jansen R., Briaire J., Kamp E M., Smits M A (1992), The cytolysin genes of Actinobacillus pleuropneumoniae Proceedings 12th IPVS, The Hague The Netherlands, p 197 Abstr Proc 12th Int Pig Vet Soc PHỤ LỤC Giống vi khuẩn Thạch máu, thạch PPLO Giống nhỏ Kiểm tra khiết Giống sản xuất Kiểm tra khiết Lên men sục khí Đếm số kiểm tra khiết Vô hoạt formol 0,5% Kiểm tra vô trùng Bổ sung nhũ dầu ISA 50% Ra chai, dán nhãn Thành phẩm Kiểm tra vô trùng Kiểm tra an tồn Kiểm tra hiệu lực Hình 2.1: Quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt bổ trợ nhũ dầu (Bộ môn Vi trùng, Viện Thú y Quốc gia) PHỤ LỤC Các phương pháp đo lường dịch tễ - Tỷ lệ % khỏi bệnh = - Tỷ lệ % bảo hộ = Số sống Tổng số điều trị Số sống Tổng số thí nghiệm × 100 × 100 - Cơng thức tính hiệu lực tiêm phịng HLTP = a−b × 100 a Trong đó: HLTP: Hiệu lực tiêm phòng a: tỷ lệ % vùng khơng tiêm phịng b: tỷ lệ % vùng tiêm phịng - Cơng thức tính χ2 để so sánh tần suất bệnh: n  n a.d − b.c −  2  χ2 = (a + b ) × (c + d ) × (a + c ) × (b + d ) Áp dụng công thức: (Công thức áp dụng nghiên cứu dịch tễ) Tra bảng ứng với bậc tự df = (k -1)(l -1) = (2 -1)(2 -1) = ta tìm giá trị χ2 với mức α = 0,05; 0,01 0,001 -So sánh χ2 thực nghiệm với χ2 bảng để tìm xác suất xuất giá trị χ2 thực nghiệm hoàn toàn ngẫu nhiên sinh Nếu χ2TN < χ2α tức (P > 0,05) kết luận khơng có sai khác tỷ lệ Nếu χ2TN > χ2α tức (P < 0,05) kết luận có sai khác tỷ lệ mức α - Phương pháp xác định nguy tương đối (RR) So sánh nguy bị tiêu chảy chết tiêu chảy loại lợn theo lứa tuổi theo vùng, dùng nguy tương đối (Relative Risk = RR) Nguy tương đối thương số hai nguy cơ, tính sau: Số mắc bệnh Số không mắc bệnh (Con) (Con) a b a +b Tiêm vắc xin c d c +d Tính chung a +c b+d N = a+b+c+d Nội dung Khơng tiêm vắc xin Cộng Trong đó: a số lợn khơng tiêm phịng vắc xin bị mắc bệnh b số lợn khơng tiêm phịng vắc xin khơng bị mắc bệnh c số lợn tiêm phòng vắc xin bị mắc bệnh d số lợn tiêm phòng vắc xin không bị mắc bệnh a + b tổng số lợn khơng tiêm phịng vắc xin c + d tổng số lợn tiêm phòng vắc xin a + c tổng số lợn bị mắc bệnh b + d tổng số lợn không bị mắc bệnh RR = Ie a / (a + b = I0 c / (c + d ) ) -Tính nguy tương đối - Đánh giá kết quả: + RR > 1: Nguy mắc bệnh lớn gấp RR lần, trị số RR lớn nguy mắc bệnh cao + RR = 1: Khơng có liên quan MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU Hình 2: Tiến hành lấy mẫu máu lợn ngồi thực nghiệm Hình 3: Máy móc, thiết bị sử dụng trình nghiên cứu - Máy li tâm Hình 4+5+6+7: Một số hình ảnh gây bệnh thực nghiệm lợn Hình 8: Một trường thạch PPLO Hình 9: Vắc xin đa giá nhũ dầu phòng bệnh viêm phổi vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida Streptococcus suis gây ... vi khuẩn A pleuropneumoniae, P multocida S suis sử dụng chế tạo thử nghiệm vắc xin đa giá nhũ dầu phòng bệnh vi? ?m phổi cho lợn - Xác định hiệu lực vắc xin đa giá phòng bệnh vi? ?m phổi lợn vi khuẩn. .. S suis bệnh vi? ?m phổi lợn vi khuẩn S suis gây ra? ?? 22 1.3.1 Vi khuẩn S suis 22 1.3.2 Bệnh vi? ?m phổi lợn vi khuẩn S suis 22 iv 1.1.2 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn S suis bệnh vi? ?m. .. THỊ QUỲNH ÁNH NGHIÊN CỨU THỬ NGHIỆM VẮC XIN ĐA GIÁ NHŨ DẦU PHÒNG BỆNH VI? ?M PHỔI DO VI KHUẨN ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIAE, PASTEURELLA MULTOCIDA VÀ STREPTOCOCCUS SUIS GÂY RA Ở LỢN TẠI TỈNH THÁI