Xác định sự lưu hành của vi khuẩn salmonelia spp ở lợn nái và lợn con tại một số trại chăn nuôi công nghiệp ở tỉnh thái nguyên và biện pháp phòng trị

1 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM Ngun ThÞ Ngut Tờn ti Xác định l-u hành vi khuẩn Salmonella spp lợn nái lợn số trại chăn nuôi công nghiệp tỉnh Thái Nguyên biện pháp phòng trị Chuyờn ngnh: Thỳ y Mã số: 60.62.50 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Đặng Xuân Bình THÁI NGUYÊN, 2012 MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Trong năm gần đây, kinh tế nước ta có bước phát triển vượt bậc mặt, đời sống kinh tế xã hội ngày cải thiện Đóng góp phần khơng nhỏ cho thành cơng phải kể đến thành tựu ngành nơng nghiệp, có ngành chăn nuôi thú y mà đặc biệt ngành chăn nuôi lợn Ngành chăn ni lợn góp phần đáp ứng nhu cầu thực phẩm nước phần dành cho xuất thu ngoại tệ Theo CIRAD (Trung tâm nghiên cứu phát triển quốc tế nông nghiệp Pháp) (2006)[40], thịt lợn chiếm 77% tổng lượng loại thịt tiêu dùng hàng ngày thị trường Việt Nam Tuy nhiên, thách thức không nhỏ việc phát triển chăn nuôi lợn dịch bệnh thường xuyên xảy đàn lợn lứa tuổi, làm giảm suất, giảm chất lượng giống nhiễm vào sản phẩm thịt lợn gây nguy an toàn vệ sinh thực phẩm Một bệnh thường gặp phải kể đến bệnh tiêu chảy vi khuẩn Salmonella gây lợn sau cai sữa, cịn gọi bệnh phó thương hàn, không nổ thành dịch lớn, với đặc điểm dịch tễ phức tạp, gây nên thiệt hại đáng kể cho người chăn nuôi Có thể nói sở chăn nuôi dù quy mô lớn hay nhỏ xuất bệnh Khi đời sống nhân dân ngày nâng cao, vấn đề an toàn thực phẩm, có lợn thịt lợn bệnh, không bị nhiễm Salmonella yêu cầu cấp thiết Có nhiều tác giả cơng bố nhiễm Salmonella vào thân thịt lợn trình giết mổ chủ yếu liên quan đến nhiễm trùng Salmonella ruột (Borch cs, 1996[35]; Berends cs, 1998[33]) Do đó, việc giảm tỷ lệ trại bị nhiễm mầm bệnh Salmonella làm an toàn thịt lợn tăng lên Mục tiêu nhà khoa học, nhà sản xuất xây dựng đàn gia súc Salmonella Theo Bryan (1988)[37]; Nielsen Wegener (1997)[53]; Berends cs 1998[33]; Schwartz (1999)[61]: Các đàn lợn bị nhiễm Salmonella gây thiệt hại kinh tế cho người chăn ni mà cịn nguồn tàng trữ mầm bệnh gây hại người Bởi mà biện pháp ngăn chặn có hiệu gia súc cần thiết điều kiện tiên góp phần giảm thiểu dịch bệnh, tăng thu nhập cho người chăn nuôi, chống ô nhiễm môi trường bảo vệ sức khoẻ cộng đồng Vì mà việc phân lập vi khuẩn Salmonella, xác định serotype đặc tính gây bệnh chúng lợn, nhằm mục đích phát sớm tìm hướng phịng trị bệnh có hiệu ln việc làm cấp thiết Xuất phát từ thực tiễn nghiên cứu yêu cầu sản xuất, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Xác định lưu hành vi khuẩn Salmonella spp lợn nái lợn số trại chăn nuôi công nghiệp tỉnh Thái Nguyên biện pháp phòng trị” Mục tiêu nghiên cứu - Xác định lưu hành vi khuẩn Salmonella lợn nái sinh sản, lợn sau cai sữa; - Xác định đặc tính sinh vật hố học, tính gây bệnh serotype chủng Salmonella phân lập được; - Đề xuất biện pháp khống chế tình trạng thải trừ Salmonella lợn sở chăn nuôi Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học - Xác định tình trạng thải trừ vi khuẩn Salmonella lợn nái sinh sản, lợn sau cai sữa; - Giám định đặc tính sinh vật hố học serotype vi khuẩn Salmonella phân lập 3.2 Ý nghĩa thực tiễn - Cung cấp tư liệu khoa học phục vụ công tác phòng trị bệnh Salmonella gây lợn sau cai sữa; - Cung cấp tư liệu khoa học phục vụ cơng tác đảm bảo vệ sinh an tồn thực phẩm, khống chế ngộ độc thực phẩm cho người Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh phó thƣơng hàn ngồi nƣớc 1.1.1 Tình hình nghiên cứu giới Năm 1880, Eberth lần quan sát thấy vi khuẩn Salmonella kính hiển vi Bốn năm sau (1984), Gaffky ni cấy thành cơng vi khuẩn Lồi vi khuẩn Salmonella typhi thời gian đầu gọi với tên như: Bacillus typhous, Bacterium typhi Eberthella typhi hay Eberthella typhi tiphosa, tên giống Salmonella Lignires sử dụng đặt tên cho trực khuẩn gây bệnh dịch tả “Hog-cholera bacillus” vào năm 1900 (Selbizt cs, 1995[63]) Năm 1885, tên gọi S choleraesuis lần xuất báo cáo năm phịng chăn ni cơng nghiệp Mỹ Thời gian này, Salmon, D.E trưởng phòng nghiên cứu, mà tên ơng lấy đặt cho vi khuẩn Song Smith, người cộng Salmon thật người phát vi khuẩn Salmonella Một vài năm sau đó, loài Salmonella khác phát loài vi khuẩn có ý nghĩa y học ngày Năm 1891, Jensen phân lập S dublin từ bệnh phẩm bê bị tiêu chảy Cũng vào năm đó, S typhimurium phát vùng Greiswald Breslau Hai năm sau (1893), Breslau xảy vụ ngộ độc thịt ăn phải thịt bò ốm, kết bệnh xảy người Kaensche người tìm thấy vi khuẩn, vi khuẩn đặt tên trực khuẩn Kaensche (Selbizt cs, 1995[63]) Tất bệnh Salmonella gây lúc đầu đặt tên chung phó thương hàn “Para-typhus”, năm 1914, có 12 lồi vi khuẩn mơ tả xếp vào giống Salmonella Năm 1926, với công trình nghiên cứu White cấu trúc kháng nguyên Salmonella bắt đầu thời kỳ khoa học giống vi khuẩn Sau Kauffmann thành công lĩnh vực nghiên cứu vi khuẩn Salmonella (Selbizt cs, 1995[63]) Năm 1934, Kauffmann White thiết lập bảng cấu trúc kháng nguyên đặt tên bảng phân loại Kauffmann-White Từ đến nay, bảng cấu trúc kháng nguyên Salmonella ln ln bổ sung Năm 1993 có 2375 serovar Salmonella định danh (Selbizt cs, 1995[63]) Năm 1997, số serovar lên đến 3000 (Plonait Birkhardt, 1997[57]) Như vậy, giống Salmonella luôn thu hút ý nhà chuyên môn lĩnh vực vi sinh vật Trước năm 1983, tồn nhiều loài Salmonella chấp nhận phân loại Từ đó, kết thí nghiệm cho thấy mức tương đồng DNA cao, tất chủng Salmonella xếp thành loài S Choleraesuis (Salmonella choleraesuis) (Crosa cs, 1973[43]; Farmer, 1995[46]) Năm 1999, khóa phân loại học trung tâm Kiểm sốt phịng ngừa dịch bệnh (CDC: Center for Diease Control and Prevention) Hoa Kỳ Euzéby đề nghị đặt tên typ huyết Salmonella sau: Giống Salmonella chia thành lồi, S enterica S bongori Tất type huyết gây bệnh cho người động vật thuộc S enterica Loài S enterica chia nhỏ thành lồi là: enterica, salamae, arizonae, diarizonae, houterae indica, tương ứng với số la mã: I, II, IIIa, IIIb, IV VI dựa tương đồng DNA phạm vi vật chủ Do lồi I có nhiều typ huyết khác nên loài phân loại đến typ huyết Để nhấn mạnh typ huyết khơng phải lồi riêng biệt nên tên typ huyết không viết nghiêng chữ đầu phải viết hoa Vì vậy, S choleraesuis có tên đầy đủ S Enterica serotyp choleraesuis, viết tắt ngắn gọn S choleraesuis Mặc dù hệ thống phân loại khơng cơng nhận cách thức ủy ban quốc tế vi khuẩn học hệ thống, tổ chức y tế giới hiệp hội vi sinh vật học Mỹ chấp nhận sử dụng (Euzéby, 1999[45]) Vi khuẩn Salmonella phân lập từ thịt lợn chết bệnh phó thương hàn thường gặp miền Tây nước Mỹ S choleraesuis var kunzendorf, S typhimurium S typhisuis (Barnes Sorensen, 1975[32]) Trong vài trường hợp, lợn cịn tìm thấy S dublin S enteritidis Hai serotyp S dublin S enteritidis gặp lợn theo mẹ Những báo cáo gần cho thấy: Ở số nước Mỹ, Canada, Anh Bắc Đài Loan phân lập S choleraesuis từ người bị bệnh (Khakhria & Johnson, 1995[50]; Chiu cs, 1996[38]; Su cs, 2001[64]) Từ việc tìm thấy vi khuẩn Salmonella động vật ốm, sản phẩm động vật, nước dụng cụ chăn nuôi , tác giả có đề xuất giải pháp tổng hợp cần thiết nhằm tránh lây lan vi khuẩn hệ sinh thái môi trường để bảo vệ sức khỏe Nguồn tàng trữ Salmonella chủ yếu đường tiêu hoá người động vật mắc bệnh Một vài loài S typhi, S paratyphi A, S paratyphi B, S paratyphi C ký sinh người Những loài khác hay gặp như: S choleraesuis, S enteritidis chủ yếu ký sinh động vật có khả gây bệnh cho người Do tính chất gây bệnh vi khuẩn Salmonella cho gia súc, gia cầm, động vật máu nóng, máu lạnh người nên từ lâu nhân y thú y, người ta quan tâm nghiên cứu đặc tính sinh học, yếu tố gây bệnh biện pháp phòng điều trị bệnh chúng gây Theo Wilcock Schwartz (1992)[69] nước Anh, năm 1972 tìm thấy vi khuẩn Salmonella có phân lợn 9,9%, năm 1973 tìm thấy vi khuẩn Salmonella hạch ruột 7,3% Tại Nhật Bản, Asai cs (2002)[31] cho thấy tỷ lệ nhiễm Salmonella lợn sau cai sữa bị tiêu chảy 12,4%; lợn vỗ béo 17,3%; lợn theo mẹ 4,5% Tác giả cho biết S typhimurium phân lập thấy nhiều lợn sau cai sữa 72,6%; lợn gần xuất chuồng 73,8% Kishima cs (2008)[51] điều tra tỷ lệ nhiễm phân bố vi khuẩn Salmonella phân lợn khỏe mạnh bình thường toàn lãnh thổ Nhật Bản năm 2003 năm 2005 3,1% Theo Barnes Sorensen (1975)[32]; Wilcock Schwartz (1992) [69]: Ở lợn, cần phân biệt dạng bệnh vi khuẩn Salmonella gây ra, bệnh phó thương hàn cấp tính lợn S choleraesuis var kunzendorf bệnh viêm ruột mãn tính S typhimurium Ở trâu bị, bệnh chủ yếu loài S dublin S entertidis gây Ở cừu, S abortus ovis, S montevideo, S dublin, S anatum gây Ở ngựa S abortus equi gây ra, gia cầm chim S pullorum, S gallinarum, S typhimurium S enteritidis gây Hiện nay, có nhiều loại thuốc kháng sinh sử dụng để điều trị bệnh, với lợn trước sau cai sữa Tuy nhiên, việc sử dụng rộng rãi kháng sinh để phòng điều trị bệnh nên xuất chủng vi khuẩn Salmonella kháng thuốc (Kishima cs, 2008[51]) Gần đây, nhiều nghiên cứu tập trung vào nghiên cứu gen kháng kháng sinh DT104 vi khuẩn Salmonella Chủng đa kháng thuốc S typhimurium DT104 phát lần người mắc Salmonellosis Anh vào năm 1980 Sau quan sát thấy người vật nuôi khắp giới vào năm 90 mối quan ngại hàng đầu sức khỏe cộng đồng Gen thường xuất serotyp S typhimurium thấy serotyp khác Một tổ hợp kháng thuốc điển hình S typhimurium DT104 kháng đồng thời với loại kháng sinh, bao gồm: Ampicillin, Chloramphenicol, Streptomycin, Sulfonamide Tetracycline (ACSSuT) (Kishima cs, 2008[51]) Tuy nhiên, khơng có chiều ngược lại, tức kết xác định lâm sàng cho thấy chủng vi khuẩn kháng với loại kháng sinh chưa đủ để kết luận chủng vi khuẩn có mang gen kháng kháng sinh DT104 (Kishima cs, 2008[51]) Cũng theo tác giả, có 61,5% số chủng thuộc serotyp S typhimurium có mang gen DT104 Selbitz (1995)[63] cho biết: “genom” Salmonella nghiên cứu tương đối kỹ Cho đến chứng minh 750 gen, có 680 gen có đồ gen Như vậy, vi khuẩn Salmonella bệnh chúng gây nhiều nhà vi sinh vật toàn giới quan tâm Mục đích nghiên cứu nhằm tìm biện pháp có hiệu để góp phần ngăn chặn đẩy lùi bệnh Salmonella gây động vật người 1.1.2 Tình hình nghiên cứu nước Ở Việt Nam, vi khuẩn Salmonella bệnh chúng gây cho người gia súc bắt đầu nghiên cứu từ năm 50 Viện Pasteur Sài Gòn năm (1951-1953) phân lập chủng Salmonella người (4 chủng từ máu, chủng từ nước tiểu) Cũng Sài Gòn, thời gian phân lập 35 chủng từ 360 lợn, có 23 mẫu S cholereasuis (Đỗ Đức Diên, 1999[6]) Năm 1989, Nguyễn Thị Nội cs[20] tiến hành điều tra tình hình nhiễm vi khuẩn đường ruột số sở chăn ni lợn miền Bắc tìm thấy 37,5% lợn nhiễm Salmonella Trước tình vậy, nhóm tác giả nghiên cứu chế tạo thành cơng vacxin đa giá Salsco phịng bệnh ỉa chảy 10 cho lợn Vacxin áp dụng để phịng bệnh có hiệu nhiều trại chăn ni lợn, tỷ lệ lợn bị tiêu chảy giảm từ 30-50%, tỷ lệ lợn chết tiêu chảy giảm xuống 10-20% Lê Văn Tạo cs (1994)[26] phân lập xác định serotyp vi khuẩn Salmonella gây bệnh lợn, kết cho thấy: 50% chủng phân lập thuộc S choleraesuis; 12,5% S enteritidis; 6,25% S typhimurium số lại thuộc serotyp khác Trần Xuân Hạnh (1995)[10] phân lập giám định vi khuẩn Salmonella lợn Thành phố Hồ Chí Minh cho kết quả: S typhisuis lợn bệnh 16,9%; lợn bình thường 6-16 tuần tuổi 4,2%; S paratyphi lợn 6-16 tuần tuổi 2,8% Đặc biệt, vi khuẩn S choleraesuis chiếm 38,7% lợn bệnh 2,8% lợn bình thường Theo Phùng Quốc Chướng (1995)[2] Tây Nguyên, mùa khô lợn mắc bệnh vi khuẩn Salmonella gây 20,03%, vụ đông 28,66% Kết phân lập vi khuẩn Salmonella lợn mắc bệnh tiêu chảy sở chăn nuôi lợn thuộc miền Bắc nước ta Cù Hữu Phú cs (2000)[21] cho biết: Tỷ lệ tìm thấy Salmonella trung bình lợn tiêu chảy ni sở 80% Đây điều đáng lo ngại ngành chăn nuôi lợn nước ta Theo Nguyễn Bá Hiên (2001)[12], tỷ lệ nhiễm Salmonella đàn lợn ngoại thành Hà Nội cao lợn 60 ngày tuổi (88,23%), thấp lợn từ 1-21 ngày tuổi (73,68%) Cùng với trình nghiên cứu chi tiết vi khuẩn, biện pháp phòng bệnh nhiều nhà khoa học quan tâm nghiên cứu, có vacxin phịng bệnh Nguyễn Văn Lãm (1968)[14] tiến hành nghiên cứu chế vacxin phó thương hàn lợn từ chủng Salmonella chuẩn Trung Quốc Hiện nay, loại vacxin phịng bệnh phó thương hàn số cơng ty, xí 70 27 Nguyễn Như Thanh 2001 Vi sinh vật Thú y NXB Nông nghiệp, Hà Nội 28 Tơ Liên Thu (2005), Nghiên cứu tình trạng ô nhiễm số vi khuẩn vào thịt lợn, thịt gà sau giết mổ Hà Nội số phương pháp làm giảm nhiễm khuẩn thịt Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp, Viện Thú y Quốc gia Hà Nội 29 Tạ Thị Vịnh, Đặng Khánh Vân (1996), “Bước đầu thăm dò xác định E.coli Salmonella lợn bình thường lợn mắc hội chứng tiêu chảy Hà Tây Hà Nội” Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, số 1, tr 41- 44 II TÀI LIỆU TIẾNG NƢỚC NGOÀI 30 Andrijana Rajic, Juia Keenliside (2001) Salmonella in swine Advances in Pork production 2001 Volume 12 31 Asai T, Otagiri Y, Osumi T, Namimatsu T, Hirai H and Sato S (2002), “Isolation of Salmonella from Diarrheic Feces of Pig” J Vet Med Sci 64, 2, p 159- 160 32 Barners D.M, Sorensen K.D (1975), ”Salmonellosis” Diseases of Swine, 4th Edition Iowa State University press, p 12-18 33 Berends B.R, Van Knapen F, Mossel D.A.A, Burt S.A and Snij J.M.A (1998), “Impact on human health of Salmonella spp on pork in the Netherlands and the anticipated effects of some currently proposed control strategies” Int J Food Mcrobiol, 44, p 219-229 34 Bergey’s (1994), Manual of determinative Bacteriology, 9th Edition, by the Williams and Wilkings Company 35 Borch E, Nesbakken T and Christensen H (1996), “Hazard identification in swine slaughter with respect to foodborne” Bacteria Int J Food Microbiol, 30, p 9-25 36 Bradley S.G (1979), “Cellular and molecular mechanisms of action of 71 bacterial endotoxins” Ann Rev Microbiol, 33, p 67-94 37 Bryan F (1988), “Risks associated with vehicles of foodborne pathogens and toxins” J Food Prot, 51, p 498-508 38 Chiu C.H and Ou J.T (1996), “Rapid identification of Salmonella serovars in feces by specific detection of the virulence genes, invA and spvC, by an enrichment broth culture – multiplex PCR combination assay” J Clin Microbiol, 34, p 2619-2622 39 Chiu C.H, Su L.H and Chu C (2004), “Samonella enterica serotype Choleraesuis: Epidemiology, Pathogenesis, Clinical Disease and Treatment” Clinical Microbiology Reviews 2, p 311-322 40 CIRAD “Training Course Salmonella”, 23 – 37 October 2006 41 Clarke G.J, Wallis T.S, Starkey W.J, Collins J, Spencer A.J, Daddon G.J, Osborne M.P, Candy D.C and Stephen I (1988), “Expression of an antigen in strains of Salmonella typhimurium with antibodies tocholeratoxin” Med Microbiol, 25, p 139-146 42 Cleckner N, Roth J.R, Bostein D (1977), “Genetic engineering invivo using translocatable drug – resistance elements new methods in bacterial genetics” Hol Sen Gonet , 116, p 125 – 159 43 Crosa J.H, Brenner D.J, Ewing W.H and Falkow S (1973), “Molecular relationship among Salmonella” J Bacteriol, 115, p 307-315 44 Ewing, Edward (1970), Indentification of Enterobacteriaceae Edicion Revolucionnalria, Instituto Cubano Del libro 19 No 1002, Vedado Habana 45 Euzéby J.P (1999), “Revised Salmonella nomenclature”: designation of Salmonella enterica (exjjj Kauffmann and Edwards 1952) Le Minor and Propoff 1987 sp nov., nom rev as the neotype species of the genus Salmonella Lignieres 1900 (Approved Lists 1980), rejection of the name Salmonella choleraesuis (Smith 1894) Weldin 1927 (Approved Lists 72 1980), and conservation of the name Salmonella typhi (Schroeter 1886) Warren and Scott 1930 (Approvied Lists 1980), Request for an opinion Int J Sist Bacteriol, 49, p 927-930 46 Farmer J.J (1995), “Enterobacteriaceae: Introduction and identification” p 438-449 In Murray P.R, Baron E.J and Pfaller M.A (ed.), Manual of Clinical Microbiology, 6th Edition, American Society for Microbiology, Washington D.C 47 Finlay B.B and Falkow (1988), “Virulence factors associated with Salmonella species” Microbiological Sciences Vol 5, No.11 48 Gray J.T, Fedorka-Gray P.J and Stabel T.S (1995), “Influence of inoculation route on the carrier state of Salmonella choleraesuis in swine” Vet Microbiol, 47, p 43 – 49 49 Jones J.W, Richardson A.L (1981), “The attachment to invasion of helacells by Salmonella typhimurium the contribution of manose sensitive and manose – sensitive haemaglutinate activities” J Gen Microbiol, V127, p 361-370 50 Khakhria R and Johnson W (1995), “Prevalence of Salmonella serotypes and phage types in Canada” Southeast Asian J Trop Med Public Health 26 (Suppl 2) p 42-44 51 Kishima M, Uchida i, Namimatsu T, Osumi T, Takahashi S, Tanaka K, Aoki H, Matsuura K and Yamamoto K (2008), “Nationwide Surveillance of Salmonella in the Faeces of Pigs in Japan” 52 Krause M, Fang F.C, Gedaily A.E, Libby S and Guiney D.G (1995), “Mutational Ananysis of SpvR Binding to DNA in the Regulation of the Salmonella Plasmid Virulence Operon” Academic Press Inc Plasmid, 34, p 37-47 53 Nielsen B and Wegener H.C (1997), “Public health and pork and fork 73 products: regional perspectives of Denmark” Rev Sci Tech, 16, p 513-524 54 Nusera D.M, Maddox C.W, Hoien-Dalen P and Weigel R.M (2006), “Comparison of API 20E and invA PCR for identification of Salmonella enterica isolates from swine production units” J Clin Microbiol, 44, p 3388-3390 55 Peter Davies (1998) Fecal shedding of Salmonella by pigs housed in buildings with open-flush gutters Swine Health and Production 1998: (3): 101-106 56 Peteron J.W (1980), “Salmonella toxin” Pharm Ather, VII, p 719-724 57 Plonait H, Bickhardt (1997), Salmonella infectionand Salmonella lehrbuchder Schweine Krankheiten Parey Buchverlag, Berlin, p 334 – 338 58 Quinn P.J, Carter M.E, Makey B, Carter G.R (2002), Clinical veterinary microbiology Wolfe Pulishing, London WC1 H9LB, England, p 209-236 59 Rahman K, De Grandis S.A, Clarke R.C, McEwen S.A, Galán J.E, Ginocchio C, Curtiss III R and Gyles C.L (1992), “Amplification of a invA gene sequence of Salmonella typhimurium by polymerase chain reaction as a specific method of Salmonella” Mol Cell Probes, 6, p 271-279 60 Robin C Anderson, Ken J Genovese, Roger B Harvey, Larry H Stanker, John R DeLoach, David J Nisbet (2000) Assessment of the long term shedding pattern of Salmonella serovar choleraesuis following experimental infection of neonatal piglets J Vet Diagn Invest 12: 257-260.2000 61 Schwartz K.J (1999), “Salmonellosis” In: Straw, B E., S D Allaire, W L Mengeling, and D J Taylo (eds), Disease of Swine, p 535-551 Iowa State University Press, Ames 62 Schwartz.K.J (2006) Salmonellosis Diseases of swine IOWA State University press / AMES, IOWA U.S.A.8th Edition 63 Selbitz H.J (1995), Grundsaetzliche Sicherheisanfornderungen bein 74 Einsatz von lebendimpfstoffen bei lebensmittelliefernden Tieren Berl Much Tieruzl Wschr, 144, p 428-423 64 Su L.H, Chiu C.H, Kuo A.J, Chia J.H, Sun C.F, Leu H.S and Wu T.L (2001), “Secular trends in incidence and antimicrobial resistance among clinical isolates of Salmonella at a university hospital in Taiwan, 19831999” Epidemiol Infect, 127, p 207-213 65 Timoney J.F, Gillespie J.H, Baelough J.E, Hagan and Bruner ’s (1988), “Microbiology and infection disease of domentic animals”, Inthca and London Comstock Publising Associates, A Division of cornell University press, p 209-230 66 Tsolis R.M, Adams L.G, Fitcht T.A and Baumler A.J (1999), “Contribution of Salmonella enterica serovar Typhimurium virulence factors to diarrheal disease in calves Infect” Immun, 67, p 1879-1885 67 Valtonen M.V (1977), “Role of phagocytosis in mouse virulence of Salmonella typhimurium recombinmant with O- antigen 6, or 4, 12.” Infect Immun, 18, p 574 68 Weinstein D.L, Carsiotis M, Lissner CH.R, Osrien A.D (1984), “Flagella help Samonella typhimurium survive within murine macrophages” Infection and Immuniti, 46 p 819-825 69 Wilcock B.P, Schwartz K.J (1992), “Salmonella” Disease of Swine, 7th Edition, p 570-583 70 Wilcock B.P (1995), “Salmonellosis” Disease of Swine, Sixth Edition, Iowa state University Press, U.S.A, p 508-518 75 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Thái Nguyên, ngày tháng 10 năm 2012 Tác giả Nguyễn Thị Nguyệt ii 76 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, với lỗ lực cố gắng thân, xin đặc biệt bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy: PGS.TS Đặng Xuân Bình, người trực tiếp hướng dẫn tơi q trình nghiên cứu hồn thành l uận văn Tơi xin chân thành cảm ơn tới thầy cô giáo Khoa Chăn nuôi Thú y; Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên tận tình giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn Ban lãnh đạo viện Khoa học sống, thầy cô, anh, chị, em Bộ môn Công nghệ vi sinh - Viện Khoa học sống - trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Bộ môn vi trùng - Viện Thú y quốc gia giúp đỡ tơi q trình hồn thành luận văn Và đặc biệt gia đình tạo điều kiện thuận lợi giúp trình thực đề tài Thái Nguyên, ngày tháng 10 năm 2012 Nguyễn Thị Nguyệt 77 iii MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục từ viết tắt vii Danh mục bảng viii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề 2 Mục tiêu nghiên cứu 3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh phó thương hàn ngồi nước 1.1.1 Tình hình nghiên cứu giới 1.1.2 Tình hình nghiên cứu nước 1.2 Đặc tính sinh vật hóa học vi khuẩn Salmonella 11 1.2.1 Đặc điểm hình thái 11 1.2.2 Tính chất ni cấy 12 1.2.3 Đặc tính sinh hố 13 1.2.4 Sức đề kháng vi khuẩn Salmonella 13 1.2.5 Một số đặc điểm dịch tễ bệnh vật nuôi Salmonella gây 14 1.2.6 Cấu trúc kháng nguyên vi khuẩn Salmonella 15 1.2.7 Các yếu tố gây bệnh vi khuẩn Salmonella 17 1.2.7.1 Các yếu tố độc tố 17 1.2.7.2 Các yếu tố độc tố 20 1.3 Bệnh vi khuẩn Salmonella gây lợn 23 1.3.1 Đặc tính sinh bệnh 23 78 iv 1.3.2 Thể nhiễm trùng huyết S choleraesuis var kunzendorf gây 24 1.3.3 Thể viêm ruột S typhimurium 25 1.4 Biện pháp phòng trị bệnh Salmonella gây lợn 29 1.4.1 Phòng bệnh 29 1.4.2 Điều trị bệnh 29 1.5 Bê nhiễm Salmonella 30 1.6 Gà nhiễm Salmonella 30 1.7 Ngộ độc thực phẩm người Salmonella 31 Chƣơng NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 Đối tượng, thời gian địa điểm nghiên cứu 32 2.1.1 Đối tượng 32 2.1.2 Thời gian địa điểm 32 2.2 Vật liệu nghiên cứu 32 2.2.1 Mẫu dùng phân lập vi khuẩn 32 2.2.2 Động vật thí nghiệm 32 2.2.3 Hoá chất dụng cụ nghiên cứu 32 2.2.3.1 Hoá chất dùng để nhuộm Gram 32 2.2.3.2 Hoá chất dùng để thử phản ứng sinh hố 32 2.2.4 Mơi trường nuôi cấy, phân lập vi khuẩn 33 2.2.5 Dụng cụ thí nghiệm 33 2.3 Nội dung nghiên cứu 33 2.3.1 Nghiên cứu đặc điểm thải trừ vi khuẩn Salmonella spp lợn nái lợn sau cai sữa; 33 2.3.2 Phân lập Salmonella từ mẫu phân lợn nái, lợn sau cai sữa khoẻ lợn sau cai sữa nghi mắc bệnh PTH; 33 2.3.3 Xác định số đặc tính sinh vật hóa học, serotyp xác định khả mẫn cảm kháng sinh chủng vi khuẩn phân lập 33 2.3.4 Xác định độc lực chủng vi khuẩn phân lập chuột bạch 33 79 v 2.4 Phương pháp nghiên cứu 33 2.4.1 Phương pháp điều tra dịch tễ 33 2.4.2 Phương pháp nuôi cấy, phân lập xác định vi khuẩn Salmonella 34 2.4.2.1 Nuôi cấy, phân lập 34 2.4.2.2 Phương pháp xác định đặc tính sinh vật, hoá học vi khuẩn Salmonella 36 2.4.3 Phương pháp thử độc lực chuột bạch 37 2.4.4 Định type huyết học chủng Salmonella phân lập phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính 37 2.4.5 Xác định tính mẫn cảm với số kháng sinh chủng Salmonella phân lập phản ứng thử kháng sinh đồ đĩa thạch Kirby-Bauer 38 2.4.5.1 Chuẩn bị 38 2.4.5.2 Tiến hành 38 2.4.6 Phương pháp xử lý số liệu 40 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 41 3.1 Đặc điểm thải trừ vi khuẩn Salmonella lợn nái sinh sản 41 3.1.1 Thải trừ Salmonella lợn nái sinh sản theo đàn theo cá thể 41 3.1.2 Thải trừ Salmonella lợn nái sinh sản theo lứa đẻ 42 3.2 Đặc điểm thải trừ vi khuẩn Salmonella lợn sau cai sữa 44 3.2.1 Thải trừ Salmonella lợn sau cai sữa khơng có triệu chứng lâm sàng, bệnh tích bệnh phó thương hàn 44 3.2.1.1 Thải trừ Salmonella lợn sau cai sữa theo đàn theo cá thể 44 3.2.1.2 Thải trừ Salmonella lợn sau cai sữa theo tháng năm 46 3.2.1.3 Thải trừ Salmonella lợn sau cai sữa theo tuổi 47 3.2.2 Tình hình bệnh phó thương hàn lợn sau cai sữa 49 3.2.2.1 Tình hình bệnh phó thương hàn lợn sau cai sữa theo đàn theo cá thể 49 3.2.2.2 Tình hình bệnh phó thương hàn lợn sau cai sữa theo tháng năm 51 80 vi 3.3 Phân lập Salmonella từ phân lợn sau cai sữa mắc bệnh phó thương hàn 52 3.4 Giám định đặc tính sinh vật hố học vi khuẩn Salmonella phân lập 54 3.5 Xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh vi khuẩn Salmonella phân lập 56 3.6 Xác định độc lực vi khuẩn Salmonella phân lập 57 3.7 Giám định serotype chủng Salmonella phân lập 59 3.8 Kết xác định số yếu tố gây bệnh chủng vi khuẩn Salmonella phân lập 62 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 I TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT 67 II TÀI LIỆU TIẾNG NƯỚC NGOÀI 70 vii 81 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ADP Adenosine diphosphate ATP Adenosine triphosphate BHI Brain Heart Infusion BPW Buffered Pepton Water CHO Chinese Hamster Ovary Cell CIRAD Centre de Coopération Internationale en Recherche Agronomique pour le Développement DHL Deoxycholate Hydrogen sulfide Lactose DNA Deoxyribonucleic Acid DT104 Definitive phage type 104 EDTA Ethylene Diamine Tetra Acetic acid ETEC Enterotoxigenic E coli GDP Guanin diphosphate GTP Guanin triphosphate InvA Invasion A LIM Lysine Indole Motility LPS Lipopolysaccharide LT Heat- Labile Toxin mARN Messenger Acide RiboNucleotide RPF Rapid Permebility Factor Stn Salmonella toxin TL Thắng Lợi TT Tân Thái TSI Triple- Sugar- Iron PCR Polymerase Chain Reaction PY Phổ Yên RV Rappaports Vassiliadis viii 82 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Kết khảo sát thải trừ Salmonella lợn nái sinh sản theo đàn theo cá thể 41 Bảng 3.2 Kết khảo sát thải trừ Salmonella lợn nái sinh sản theo lứa đẻ 42 Bảng 3.3 Kết khảo sát thải trừ Salmonella lợn sau cai sữa theo đàn theo cá thể 44 Bảng 3.4 Kết khảo sát thải trừ Salmonella lợn sau cai sữa theo tháng năm .46 Bảng 3.5 Kết khảo sát thải trừ Salmonella lợn sau cai sữa theo tuổi 48 Bảng 3.6 Kết điều tra Tình hình bệnh phó thương hàn lợn sau cai sữa theo đàn theo cá thể 50 Bảng 3.7 Kết điều tra tình hình bệnh phó thương hàn lợn sau cai sữa theo tháng năm 51 Bảng 3.8 Kết phân lập Salmonella từ lợn mắc bệnh phó thương hàn .53 Bảng 3.9 Một số đặc tính sinh vật hố học chủng Salmonella phân lập 55 Bảng 3.10 Kết xác định tính mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn Salmonella phân lập từ lợn sau cai sữa mắc bệnh phó thương hàn 56 Bảng 3.11 Độc lực chủng Salmonella sp phân lập từ lợn sau cai sữa mắc bệnh phó thương hàn 58 Bảng 3.12 Giám định serotype chủng Salmonella phân lập 60 Bảng 3.13 Kết kiểm tra số yếu tố gây bệnh chủng vi khuẩn 63 83 84 ... vi? ??c làm cấp thiết Xuất phát từ thực tiễn nghiên cứu yêu cầu sản xuất, tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Xác định lưu hành vi khuẩn Salmonella spp lợn nái lợn số trại chăn nuôi cơng nghiệp tỉnh Thái. .. PTH lợn sau cai sữa Trại TT Trại TL Trại PY Số lợn Số lợn Số lợn Số lợn Số lợn Số lợn theo dương Tỷ lệ theo dương Tỷ lệ theo dương Tỷ lệ dõi tính (%) dõi tính (%) dõi tính (%) (con) (con) (con) ... lợn nái sinh sản theo lứa đẻ Kết khảo sát thải trừ Salmonella lợn nái sinh sản theo lứa đẻ Địa điểm Lợn nái chửa lứa Số Số lợn lợn dương Tỷ lệ theo tính (%) dõi (con) (con) Lợn nái chửa lứa Số