XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI THEOBROMINE, THEOPHYLLINE VÀ CAFFEINE TRONG SẢN PHẨM CHÈ Ở MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC VIỆT NAM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC)

Tạp chí KHLN 4/2016 (4739 - 4748) ©: Viện KHLNVN - VAFS ISSN: 1859 - 0373 Đăng tải tại: www.vafs.gov.vn XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI THEOBROMINE, THEOPHYLLINE VÀ CAFFEINE TRONG SẢN PHẨM CHÈ Ở MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC VIỆT NAM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) Đồn Thị Bích Ngọc, Hồng Trung Hiếu Viện Nghiên cứu Công nghiệp rừng - Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam TĨM TẮT Từ khóa: Caffeine, chè, HPLC, Theobromine, Theophylline Nghiên cứu sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) với detector UV-Vis để xác định đồng thời hàm lượng theobromine, theophylline (TB, TP CF) caffeine sản phẩm chè tỉnh gồm có Phú Thọ, Thái Nguyên, Lào Cai Nghệ An Quá trình tách thực với cột LiChrospher 100 RP - 18 (5µm) sử dụng pha động (15/85) = (ACN/ nước deion) với tốc độ 0,8ml/phút bước sóng phát 271nm Phương pháp cho giới hạn phát TB, TP CF là: 1,48ppm, 1,41ppm 1,41ppm giới hạn định lượng là: 4,49 ppm, 4,27ppm 4,29ppm Kết phân tích mẫu thực cho thấy địa điểm trồng chè khác cho phần trăm khối lượng thành phần ba ankaloid chè khác ba thành phần chịu ảnh hưởng nhiều phương pháp canh tác phân bón cho chè Simultaneous determination of caffeine, theobromine, and theophylline in some kinds of tea produced in the North Viet Nam with using high-performance liquid chromatography (HPLC) Keywords: Caffeine, HPLC, tea, theobromine, theophylline This paper is dealt with the results of analysis with using highperformance liquid chromatography (HPLC) to identify the content of theobromine, theophylline and caffeine (TB, TP and CF) in tea produced in the provinces Phu Tho, Thai Nguyen, Lao Cai and Nghe An The separation was performed with 100 LiChrospher column RP - 18 (5μm) using 15% ACN /85% deion water as the mobile phase at 0.8 ml/ and absorbance wavelength at 271nm The method has limit of detection for TB, TP and CF respectively: 1.48ppm, 1.41ppm and 1.41ppm and detection of quantitative respectively: 4:49 ppm, 4.27ppm and 4.29ppm Real sample analysis results showed that the different locations for tea growing, the weight percentages of the three tea ankaloid are different and these three components greatly influenced by farming methods and fertilizers 4739 Tạp chí KHLN 2016 I ĐẶT VẤN ĐỀ Chè xanh có tên khoa học Camellia sinensis (L.) Kuntze, loại thức uống phổ biến giới, nước châu Á đặc biệt vùng Đông Á Chè phần thiếu văn hóa ẩm thực Việt Nam trồng sử dụng chè từ hàng nghìn năm Chè phân loại theo vùng xuất xứ Tuy nhiên chưa hiểu rõ mối liên hệ vùng trồng chè hương vị chè Ở Việt Nam có số vùng trồng chè có hương vị chè vượt trội vùng khác Thái Nguyên, Lào Cai, Yên Bái, Phú Thọ Khi uống chè ta thấy hệ thần kinh trung ương dày kích thích, đồng thời cảm thấy có vị đắng tê tê đầu lưỡi Thành phần dẫn đến cảm giác nhóm ankaloid có chè bao gồm caffeine (1,3,7-trimethylxanthine), theobromine (3,7-dimethylxanthine), theophylline (1,3-dimethylxanthine) Trong đó, caffeine chiếm khoảng 2-5% lượng khơ; theobromine theophylline với hàm lượng khô nhỏ nhiều so với hàm lượng caffeine, chiếm khoảng 0,33% khối lượng chất khơ (Hosseinzadeh, Deghan, 1999) Tuy vậy, vai trị theobromine theophylline dược tính chè quan trọng so với caffeine Cấu trúc hình học điện tử alkaloid phản ánh rõ dược tính chúng Hiện nay, việc phát triển phương pháp phân tích để xác định caffeine, theobromine, theophylline sản phẩm thực phẩm, dịch sinh học đồ uống có caffein sơ la, trình sản xuất dược phẩm quan tâm (Chen, Wang, 2002) Một số phương pháp sắc ký đề xuất để xác định methylxanthine (Coco et al., 2007) Tuy nhiên, có vài phương pháp số 4740 Đồn Thị Bích Ngọc et al., 2016(4) phương pháp sắc ký cho phép tách biệt hồn tồn ba hợp chất, có yêu cầu xử lý mẫu trước đo, không giới hạn phát thấp Phần lớn phương pháp xác định caffeine, theobromine theophylline sử dụng sắc ký lỏng pha đảo Hầu hết phương pháp HPLC sử dụng detector UV để phát hiện, chu kỳ tách khoảng đến 22 phút Trong nghiên cứu gần đây, Zambonin đồng tác giả sử dụng cột C18 thân hẹp (250mm × 2,1mm) để tách xác định methylxanthine nước tiểu Tuy nhiên, sử dụng tốc độ dòng 0,2 ml/phút tỷ lệ pha động 20% MeOH, chu kỳ tách khơng hồn thành 22 phút Mặt khác, phương pháp không tách sử dụng thiết bị đo đạc đơn giản phổ biến Trên sở đó, caffeine theobromine xác định đồng thời cà phê loại trà phổ UV sau sử dụng toán tin ứng dụng phân tích phù hợp (Lopez-Martinez et al., 2003) Các nghiên cứu Tzanavaras đồng tác giả đề xuất phương pháp HPLC để xác định đồng thời ba methylxanthine: caffeine, theobromine theophylline - mẫu khác nhau, sử dụng cột sắc ký monolithic hẹp Phương pháp phân tích nhanh kinh tế việc tiêu thụ dung mơi hữu so với nghiên cứu trước RP-HPLC (Chen et al., 1998) phương pháp IC, nhanh nhạy trình tách CE (Regan Shakalisava, 2005) Chuẩn bị mẫu đơn giản khả việc xác định đồng thời tất chất phân tích lần đo Phương pháp phát triển tối ưu hóa để áp dụng cho loạt ma trận mẫu bao gồm cà phê, trà, nước ngọt, đồ uống thảo dược, ca cao, sơ la dược phẩm Đồn Thị Bích Ngọc et al., 2016(4) Trong nghiên cứu này, phương pháp phân tích phát triển để xác định đồng thời caffeine, theobromine theophylline chè phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo (HPLC) với phát UV, cho phép bơm trực tiếp mẫu mà không cần xử lý trước, ngoại trừ bước lọc Quá trình cho phép xác định hợp chất 12 phút với giới hạn phát thấp II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Hóa chất dụng cụ a) Hóa chất Chất chuẩn bao gồm: caffeine dạng bột Sigma-Aldrich, theobromine dạng rắn với độ tinh khiết > 98,5% Sigma-Aldrich, theophylline khan với độ tinh khiết > 99% dạng bột Sigma-Aldrich Dung môi: kênh B: Metanol độ tinh khiết > 99,9% Merck, kênh C: acetonitrile độ tinh khiết > 99,9% Merck, kênh D: nước deion Hóa chất khác: dung dịch amoniac NH3 22%, Metanol độ tinh khiết > 99,9% b) Dụng cụ Dụng cụ bao gồm: Pipet: 1, 2, 5, 10, 20ml, micro pipet 10-100µm, micro pipet 1001000µm đầu cơn, lọ đựng mẫu 2ml dùng Tạp chí KHLN 2016 cho máy chạy sắc ký, bình định mức: 5, 10, 50, 100ml, ống đong, phễu, giấy lọc Thiết bị Thiết bị sử dụng nghiên cứu gồm: cân phân tích xác đến 0,0001g, máy rung siêu âm, máy điều nhiệt, hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao HPLC hãng Shimadzu, Nhật Bản gồm (Bộ loại khí dung mơi, DegasserDGU-14AM, van trộn dung môi FCV10ALVP, bơm dung môi bốn kênh LC10ADVP, ổn nhiệt cột tách CTO-10 ASVP, van bơm mẫu với thể tích vịng mẫu 20µl, detector UV-Vis SPD-M10AVP, hệ điều khiển SCL-10AVP, phầm mềm điều khiển xử lý số liệu LCMS solution Ver 3, cột sắc ký: LiChrospher 100 RP-18 (5µm)) Chuẩn bị mẫu a) Thu thập mẫu Trong nghiên cứu tiến hành phân tích caffein, theophylline theobromine mẫu chè số tỉnh miền núi Việt Nam: Phú Thọ, Thái Nguyên, Lào Cai Nghệ An Các mẫu chè búp chè phơi sấy khơ 60oC sau nghiền thành bột mịn đủ dùng cho nghiên cứu lưu giữ túi hút ẩm Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam Bộ mơn Hóa phân tích trường ĐHKHTN Bảng Bảng địa điểm lấy mẫu búp chè chè TT Nơi lấy mẫu Số lượng Lá chè Búp chè Ngày lấy mẫu Huyện Thanh Thủy - tỉnh Phú Thọ 23/04/2016 Huyện Thanh Ba - tỉnh Phú Thọ 1 04/09/2016 Huyện Đoan Hùng - tỉnh Phú Thọ 1 02/09/2016 Huyện Phong Hải - tỉnh Lào Cai 1 21/05/2016 Huyện Linh Dương - tỉnh Lào Cai 2 22/05/2016 Huyện Đại Từ - Thái Nguyên 10 16/04/2016 Huyện Thanh Chương - Nghệ An 4 01/09/2016 4741 Tạp chí KHLN 2016 Đồn Thị Bích Ngọc et al., 2016(4) b) Chiết mẫu theophylline caffeine: Chọn thể tích vịng mẫu, bước sóng detector, pha tĩnh, pha động (tỷ lệ pha động thành phần pha động) Các mẫu bột chè cân xác 2g mẫu, sau cho vào bình tam giác 500ml có 50ml nước deion 4ml dung dịch NH 1%/EtOH 60% 80 oC Sau rung siêu âm 10 phút để nguội dung dịch thêm 50ml nước deion Sau đó, dung dịch lọc qua giấy lọc lọc qua màng lọc 0,25µm Dung dịch mẫu thu được pha loãng theo tỷ lệ thích hợp để đo máy HPLC Các mẫu phân tích sau chiết bảo quản tủ lạnh 20 oC không ngày - Khảo sát điều kiện chiết mẫu: thời gian chiết, nhiệt độ chiết, dung môi chiết, lượng dung dịch NH3 1%/etanol 60% - Đánh giá phương pháp phân tích: Khoảng tuyến tính, giới hạn phát LOD, giới hạn định lượng LOQ, độ chụm (độ lặp lại), độ (độ chệch, độ thu hồi) - Áp dụng phương pháp xây dựng để xác định caffein, theobromine theophylline mẫu chè, búp chè vùng núi phía Bắc Việt Nam tỉnh Lào Cai, Thái Nguyên, Phú Thọ và, Nghệ An 2.2 Phương pháp nghiên cứu Sắc ký lỏng kỹ thuật tách chất dựa tổ hợp nhiều q trình vừa có tính chất hố học lại vừa có tính chất lý học Nó cân động xảy cột sắc ký pha tĩnh pha động, vận chuyển phân bố lại liên tục chất tan (hỗn hợp mẫu phân tích) theo lớp qua chất nhồi cột (pha tĩnh) từ đầu cột tách đến cuối cột tách III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khảo sát điều kiện tối ưu xác định đồng thời TB, TP, CF chè Để xác định đồng thời theobromine, theophylline caffeine phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, cần thực nội dung sau: - Tìm điều kiện tối ưu phương pháp sắc ký lỏng để xác định đồng thời theobromine, Để tìm điều kiện tối ưu cho trình sắc ký theobromine, theophylline caffeine Chúng khảo sát bước sóng tối ưu, thành phần pha động, tốc độ pha động Và để tìm điều kiện tối ưu trình chiết mẫu, nghiên cứu khảo sát thời gian chiết, nhiệt độ chiết, dung môi chiết lượng dung dịch NH 1%/EtOH 60% thực Kết trình bày bảng Bảng Điều kiện tối ưu xác định đồng thời TB, TP CF chè TT 4742 Tên Điểm tối ưu Pha tĩnh LiChrospher 100 RP - 18 (5µm) Pha động 15% ACN/85% nước deion, tốc độ 0,8 ml/phút Thể tích vịng mẫu Bước sóng Dung mơi chiết Nước deion Thời gian chiết 15 phút Nhiệt độ chiết 80 C Dung dịch NH3 1%/ Etanol 60% ml 20 µl 271 nm o Tạp chí KHLN 2016 mAU(x100) 3.0 271nm,4nm (1.00) 4.152 Đồn Thị Bích Ngọc et al., 2016(4) 5.034 2.5 2.0 8.533 a b 1.5 1.0 c 0.5 0.0 0.0 2.5 5.0 7.5 Hình Sắc đồ tách (a) Theobromine, (b) Theophylline (c) Caffeine 3.2 Thẩm định phương pháp phân tích a) Xây dựng đường chuẩn Từ kết điều kiện tối ưu nêu bảng 2, tiến hành khảo sát khoảng tuyến tính phép đo xác định đồng thời theobromine, theophylline caffeine: pha dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp ba chất caffeine, theophylline theobromine có nồng độ từ 2ppm đến 250ppm từ dung dịch chuẩn Các dung dịch chuẩn pha nước deion Từ kết thu sau phân tích sử dụng phần mềm MS Excell tìm khoảng tuyến tính phương trình hồi quy thích hợp Kết thu khoảng tuyến tính khoảng 2ppm đến 120ppm bảng hình vẽ sau Hình Đường chuẩn (a) Theobromine, (b) Theophylline (c) Caffeine 4743 Tạp chí KHLN 2016 Đồn Thị Bích Ngọc et al., 2016(4) Bảng Bảng giá trị đánh giá sai số hệ thống đường chuẩn Chất TB TP CF Phương trình hồi quy y = (116858±1493) x y = (115778±1932) x + (95436±12732) y = (99865±1511) x y = (98479±1580) x + (121478±102994) y = (93546±1360) x y = (92341±1489) x + (105327±96870) Phương sai 18115350247 9672623766 18139933642 6329385023 14646004210 5599083618 Từ kết tính tốn cho giá trị F tính < Fbảng, khác giá trị a giá trị khơng có ý nghĩa, hay coi a = Như phương pháp tiến hành sắc ký không mắc sai số hệ thống (Tạ Thị Thảo, 2008) Vì với mục tiêu nghiên cứu F tính F bảng 1,87 4,39 2,87 4,39 2,62 4,39 mẫu chè nên chọn điều kiện phân tích Từ đường chuẩn ta xác định giới hạn phát LOD giới hạn định lượng LOQ (Trần Thị Tuyết Thu et al., 2012) phương pháp theo bảng Bảng Giới hạn phát giới hạn định lượng theo phương trình hồi quy Chất TT Hệ số góc b Độ lệch chuẩn Sy Giới hạn phát (ppm) Giới hạn định lượng (ppm) Theobromine 115778 52031 1,48 4,49 Theophylline 98478 42089 1,41 4,27 Caffeine 92341 39587 1,41 4,29 b) Độ chụm độ phương pháp Trong đó: R%: Độ thu hồi % Độ chụm phương pháp biểu diễn dạng sai số tuyệt đối SD sai số tương đối RSD % (Trần Cao Sơn, 2010) Độ xác định mẫu chè, thêm chuẩn mức nồng độ 2ppm, 20ppm 50ppm Mỗi mức tiến hành làm lặp lại lần Tính độ thu hồi theo cơng thức sau: Cm+c: Nồng độ chất phân tích mẫu thêm chuẩn; R%  C m c  C m Cc Cc: Nồng độ chuẩn thêm (lý thuyết); Cm: Nồng độ chất phân tích mẫu thử Kết độ chụm độ đánh giá với giới hạn cho phép theo AOAC  100 Bảng Độ lặp phương pháp mẫu chè TT Chất Nồng độ (ppm) SD RSD (%) Theobromine 9,06 93753,37 8,20 Theophylline 4,63 46099,19 7,35 Caffeine 84,41 439972,30 5,57 Phần trăm độ lệch chuẩn độ lệch chuẩn tương đối RSD% phương pháp ba chất phân tích có giá trị từ 5,57 - 8,20% so sánh với giới hạn cho phép AOAC nồng 4744 độ khoảng 1ppm-100ppm, RSD% năm khoảng 11% đến 5,3% Vì phương pháp có độ lặp phù hợp với xác suất thống kê Đồn Thị Bích Ngọc et al., 2016(4) Tạp chí KHLN 2016 Bảng Độ thu hồi phương pháp phân tích Chất TT Chuẩn thêm (ppm) Nồng độ TB (ppm) R (%) 8,75 Theobromine Theophylline Caffeine 10,95 103,24 20 27,96 90,30 50 58,15 92,92 4,55 6,39 94,04 20 23,51 96,84 50 52,00 96,93 78,99 80,85 97,98 20 96,14 90,39 50 124,47 95,90 Độ thu hồi nồng độ khác có kỳ vọng khác Trong trường hợp phân tích chất hàm lượng vết tham khảo tiêu chuẩn hội đồng châu Âu theo AOAC Qua bảng số liệu ta thấy độ thu hồi phương pháp phân tích điểm thêm chuẩn khác chất phân tích nằm khoảng 90,30 đến 103,24% Các giá trị nằm khoảng giới hạn cho phép AOAC nồng độ khoảng 1ppm-100ppm, RSD% nằm khoảng 80% đến 110% Vì khoảng nồng độ khảo sát phương pháp phân tích có độ sác đáp ứng u cầu thống kê 3.3 Kết phân tích mẫu thật a) Phân tích mẫu chè Tiến hành phân tích, đánh giá lượng caffeine, theophylline theobromine mẫu chè búp chè địa phương khác Kết phân tích mẫu chè búp chè nêu hình sau Lá chè 3,5 % Khối lượng 2,5 1,5 0,5 TT1 TT2 TT3 TT4 TB ĐH PH LH1 LH2 ĐT1 ĐT2 ĐT3 ĐT4 TC1 TC2 TC3 TC4 Phú Thọ Lào Cai TB % m TP % m Thái Nguyên Nghệ An CF % m Hình Phần trăm khối lượng ankaloid mẫu chè 4745 Tạp chí KHLN 2016 Đồn Thị Bích Ngọc et al., 2016(4) 4,5 Búp chè 3,5 2,5 % khối lượng 1,5 0,5 TT1 TT2 TT3 TT4 TT5 TT6 TB ĐH PH LD1 LD2 ĐT1 ĐT2 ĐT3 ĐT4 ĐT5 ĐT6 ĐT7 ĐT8 ĐT9 ĐT10 TC1 TC2 TC3 TC4 Phú Thọ Lào Cai Tb % m Thái Nguyên TP % m Nghệ An Cf % m Hình Phần trăm khối lượng ankaloid mẫu búp chè Hiện nay, Việt Nam chè phân bố rộng phạm vi nước Những vùng trồng chè lớn chủ yếu đất xám (Acrisols) phát triển phiến thạch sét, gơnai mica, sa thạch, phù sa cổ đất đỏ (Feralsols) phát triển bazan (Trần Thị Tuyết Thu et al., 2012) Đất trồng chè Việt Nam có phản ứng axit từ chua đến chua nhẹ, hàm lượng chất hữu khoảng - 2%, nghèo lân, kali, canxi, magiê có hàm lượng sắt, nhơm cao Ngồi đất trồng chè cịn có thành phần giới nặng, chủ yếu hình thành đá mẹ giàu sét, cấu trúc tơi xốp Nhiều nghiên cứu cho thấy đất trồng chè nước ta có hàm lượng chất hữu mức thấp dao động rộng từ nghèo đến trung bình (thường < 2) Ở vùng trồng chè có điều kiện khí hậu thuận lợi cho tích lũy chất hữu bị xói mịn rửa trơi hàm lượng chất hữu đạt mức Hàm lượng chất hữu đất trồng chè có khác rõ nhóm đất khác Tại vùng đất trồng chè có đầu tư thâm canh cao Phú Thọ, Thái Nguyên, Lào Cai, Nghệ An có thực biện pháp che phủ lâu năm đất có hàm lượng chất hữu mức trung bình 4746 đến giàu Đối với vườn chè quy mơ hộ gia đình Phú Thọ có mức đầu tư thấp hàm lượng chất hữu đất mức nghèo đến trung bình Theo nghiên cứu Trần Thị Tuyết Thu đồng tác giả năm 2010, hàm lượng chất hữu mơ hình thâm canh cao, trung bình thấp vùng trồng chè Tân Cương, Thái Nguyên 4,13%, 3,63% 2,76% Hàm lượng chất hữu đất trồng chè hộ gia đình Phú Thọ có mức đầu tư trung bình dao động từ 1,8% đến 2,81% Cho thấy tích lũy hàm lượng chất hữu đất trồng chè Việt Nam phụ thuộc chủ yếu vào kỹ thuật canh tác hoạt động quản lý đầu vào cung cấp phân bón nguồn chất hữu cho đất Vì chất lượng đất ảnh hưởng nhiều đến chất lượng thành phần chất hóa học chè Đối với chè: Theo hình cho thấy kết phầm trăm khối lượng ankaloid cao Nghệ An với mẫu chè đo mẫu TC2 đạt kết cao 0,191% theobromine, 0,119% thephylline 3,517% caffeine Và kết thấp mẫu ĐT1 Thái Nguyên với 0,059% theobromine, 0,049% thephylline 0,859% caffeine Kết Đồn Thị Bích Ngọc et al., 2016(4) Tạp chí KHLN 2016 cho thấy tỷ lệ phần trăm ba ankaloid chè theo thứ tự giảm dần tỉnh: Nghệ An > Lào Cai > Phú Thọ > Thái Nguyên Hình rằng, tỷ lệ thành phần ankaloid bị ảnh hưởng nhiều phương thức trồng chè Tại địa điểm chè trồng tập trung có kết tỷ lệ phần trăm ankaloid cao trồng nhà Nhưng tỉnh Thái Nguyên trồng tập trung lại cho kết hàm lượng ankoloid thấp trình lấy mẫu, nhận thấy đất trồng chè khu vực canh tác lâu năm bị thối hóa nhiều so với tỉnh khác mà chưa có phương pháp cải tạo đất hợp lý Đối với búp chè: Theo hình cho thấy kết phầm trăm khối lượng caffeine cao mẫu TC2 Thái Nguyên đạt kết cao 4,239% caffeine thấp mẫu ĐT3 Thái Nguyên với 2,391% caffeine Trong đó, với theobromine cao TT6 thuộc tỉnh Phú Thọ với 0,082% thấp ĐT2 Thái Nguyên 0,127% Còn theophylline cao LD2 tỉnh Lào Cai với 0,307% nhỏ 0,072% ĐT10 tỉnh Thái Nguyên Vì tỉnh Thái Nguyên có kết tỷ lệ % ba ankaloid nhỏ Kết cho thấy tỷ lệ phần trăm ba ankaloid búp chè theo thứ tự giảm dần tỉnh: Phú Thọ > Nghệ An > Lào Cai ≈ Thái Nguyên Hình rằng, tỷ lệ thành phần ankaloid bị ảnh hưởng nhiều phương thức trồng chè ngược lại với kết phân tích mẫu chè Đối với búp chè, địa điểm chè trồng tập trung có kết tỷ lệ phần trăm ankaloid thấp trồng nhà Đối với tỉnh Thái Nguyên kết hàm lượng ankoloid thấp trình lấy mẫu, ta nhận thấy đất trồng chè khu vực canh tác lâu năm bị thối hóa nhiều so với tỉnh khác mà chưa có phương pháp cải tạo đất hợp lý IV KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu xác định đồng thời theobromine, theophylline caffeine mẫu chè số tỉnh phía Bắc Việt Nam máy sắc ký lỏng hiệu cao HPLC cho thấy phương pháp HPLC - UV - Vis có độ nhạy cao, với phương pháp xử lý mẫu đơn giản không gây ảnh hưởng đến mơi trường giảm chi phí phân tích Kết phân tích mẫu thực: xác định đồng thời hàm lượng TB, TP CF mẫu chè mẫu búp chè tỉnh Phú Thọ, Thái Nguyên, Lào Cai Nghệ An Kết phân tích mẫu thực cho thấy địa điểm trồng chè khác cho phần trăm khối lượng thành phần ba ankaloid chè khác ba thành phần chịu ảnh hưởng nhiều phương pháp canh tác phân bón cho chè Tuy nhiên kết số mẫu thực đánh giá nghiên cứu cịn hạn chế chưa phân tích xác thành phần chất dinh dưỡng đất ảnh hưởng đến chất lượng chè Vì kết có ý nghĩa ban đầu định hướng cho nghiên cứu sâu thành phần ankaloid chè vùng miền khác Đây nghiên cứu bước đầu để tạo tiền đề cho nghiên cứu thành phần theobromine, theophylline caffeine mẫu chè vùng miền khác từ xác định nguồn gốc mối tương quan thành phần chè với chất dinh dưỡng đất trồng chè TÀI LIỆU THAM KHẢO Q.C Chen and J Wang, 2002 Simultaneous determination of artificial sweeteners, preservatives, caffeine, theobromine and theophylline in food and pharmaceutical preparations by ion chromatography J Chromatogr A 937: pp.57-64 Q.C Chen, S.F Mou, X.P Hou, Z.M Ni, 1998 Anal Chim Acta 371, 287 4747 Tạp chí KHLN 2016 Đồn Thị Bích Ngọc et al., 2016(4) Hosseinzadeh, H and Deghan, R 1999 Anti-Inflammatorynactivity of Purine Alkaloids Pharmaceutical and Pharmacological Letters, 9, 18-19 F Lo Coco, F Lanuzza, G Micali, and G Cappellano, 2007 Determination of Theobromine, Theophylline and Caffeine in bi-Product of Cupuacu and Cacao Seeds by High-Performance Liquid Chromatography Journal of Chromatographic Science, Vol 45 L Lopez-Martinez, P.L Lopez-de-Alba, R Garcia-Campos, L.M De LeonRodriguez, 2003 Anal Chim Acta 493, 83 F Regan, Y Shakalisava, 2005 Anal Chim Acta 540, 103 D.S Trần Cao Sơn, Viện Kiểm nghiệm An toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia, 2010 Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội Tạ Thị Thảo, giáo trình mơn học, 2008 Thống kê hóa phân tích Đại học Khoa học Tự nhiên - ĐHQGHN Trần Thị Tuyết Thu, Nguyễn Xuân Cự, Nguyễn Phương Hồng, 2012 Ảnh hưởng mức độ thâm canh khác đến số tính chất đất suất chè Tân Cương, Thái Nguyên Nông nghiệp Phát triển Nông thôn (22), tr 56 -61 10 Paraskevas D Tzanavaras, Constantinos K Zacharis, Demetrius G Themelis, 2010 Rapid determination of methylxanthines in real samples by high-performance liquid chromatography using the new FastGradient® narrow-bore monolithic column Talanta 81 (2010) pp.1494-1501 11 C.G Zambonin, A Aresta, F Palmisano, J Pharm 2004 Biomed Anal 36, 621 Người thẩm định: GS.TS Hà Chu Chử 4748