Nghiên cứu chiết tách và định danh các phytolcid chủ yếu từ củ nén ở quảng nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRẦN THỊ NGỌC THANH NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ ĐỊNH DANH MỘT SỐ PHYTONCID CHỦ YẾU TỪ CỦ NÉN Ở QUẢNG NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Đà Nẵng - 2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRẦN THỊ NGỌC THANH NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ ĐỊNH DANH MỘT SỐ PHYTONCID CHỦ YẾU TỪ CỦ NÉN Ở QUẢNG NAM Chuyên ngành : Hóa hữu Mã số : 60.44.27 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ THỊ LIÊN THANH Đà Nẵng - Năm 2012 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu kết nghiên cứu nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận văn Đặng Văn Phi MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH .vii MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung củ nén 1.1.1 Đặc điểm thực vật phân loại 1.1.2 Thành phần hóa học 1.2 Giới thiệu chung phytolcid 1.2.1 Định nghĩa 1.2.2 Phân loại 1.2.3 Tính chất 1.2.4 Ứng dụng phytolcid 1.2.5 Một số hợp chất có họ hành tỏi 1.2.5.1 Hợp chất Allicin 1.2.5.2 Hợp chất Diallyl disulfide 10 1.3 Phương pháp tách chiết hợp chất phytolcid 10 1.3.1 Khái niệm 10 1.3.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết tách 10 1.3.2.1 Dung môi 10 1.3.2.2 Nồng độ dịch chiết 11 1.3.2.3 Đặc điểm nguyên liệu 11 1.3.2.4 Nhiệt độ 12 1.3.2.5 Thời gian 13 1.3.2.6 Khuấy trộn 13 1.3.3 Một số dung môi thường sử dụng chiết tách 13 1.3.4 Một số phương pháp tách chiết thường dùng 14 1.3.4.1 Ngâm 14 1.3.4.2 Phương pháp chiết xuất ngấm kiệt 15 1.3.4.3 Phương pháp chiết tách ngược dòng 15 1.3.4.4 Phương pháp chiết tách khí hóa lỏng siêu tới hạn 16 1.3.4.5 Chiết siêu âm 17 1.4 Tình hình nghiên cứu họ hành tỏi giới nước 17 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Nguyên liệu, hóa chất thiết bị nghiên cứu 20 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 20 2.1.2 Hóa chất thiết bị 20 2.1.3 Nơi thực nghiên cứu 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Phương pháp vật lý 20 2.2.2 Phương pháp hóa học 21 2.2.3 Phương pháp hóa sinh 21 2.2.3.1 Xác định hàm lượng glucid tổng 21 2.2.3.2 Xác định hàm lượng nitơ tổng 21 2.2.4 Phương pháp hóa lý 22 2.2.4.1 Xác định hàm lượng nguyên tố vi lượng 22 2.2.4.2 Đo quang phổ hấp thụ phân tử UV/VIS 22 2.2.4.3 Phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC/MS) 23 2.2.5 Phương pháp vi sinh vật 24 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 3.1 Xác định số thành phần hóa học có củ nén 25 3.2 Xác định cấu tử hỗn hợp dịch chiết 27 3.3 Chọn dung môi chiết tách phytolcid chủ yếu củ nén 31 3.4 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất chiết tách số phytocid chủ yếu từ củ nén 35 3.4.1 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng tỷ lệ dung môi/nguyên liệu tươi (ml/g) đến hiệu suất chiết tách 35 3.4.2 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất thu hồi diallyl disulfide 38 3.4.3 Khảo sát ảnh hưởng thời gian 41 3.4.4 Khảo sát ảnh hưởng pH 44 3.5 Đề xuất qui trình ngâm chiết phytolcid từ củ nén 46 3.6 Xác định khả kháng khuẩn dịch chiết củ nén 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐỀ TÀI (bản sao) PHỤ LỤC 58 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Các kí hiệu AAS Quang phổ hấp thụ nguyên tử GC/MS Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ  Lambda  Thời gian t0 Nhiệt độ UV/VIS Phổ hấp thụ phân tử W Độ ẩm Viết tắt CK Chất khô dm/ngl Dung môi/ nguyên liệu DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang 1.1 Thành phần hóa học củ nén 1.2 Một số tính chất vật lý dung môi 14 3.1 Một số thành phần hóa học củ nén Quảng Nam 25 3.2 Một số hợp chất phytolcid có dịch chiết củ nén 29 3.3 Kết đo đường kính vịng thủy phân 48 DANH MỤC CÁC HÌNH Số Tên hình hiệu Trang 1.1 Hoa nén 1.2 Cây nén (hành tăm) 1.3 Củ nén (Hành tăm) 1.4 Công thức cấu tạo Allicin 1.5 Công thức cấu tạo diallyl disulfide 10 3.1 Phổ GC/MS dịch chiết củ nén 28 3.2 Sơ đồ ngâm chiết số phytolcid với loại dung môi 32 khác 3.3 So sánh hiệu chiết diallyl disulfide dung môi hữu 33 khác điều kiện 3.4 Sơ đồ thí nghiệm chiết hỗn hợp phytolcid chủ yếu củ 37 nén với tỉ lệ dung môi khác 3.5 Ảnh hưởng tỷ dung môi cồn 960/ nguyên liệu củ nén 37 giã nát đến giá trị mật độ quang thu 3.6 Sơ đồ thí nghiệm chiết phytolcid nhiệt độ khác 39 3.7 Ảnh hưởng nhiệt độ chiêt đến giá trị mật độ quang 40 diallyl disulfide 3.8 Sơ đồ thí nghiệm tìm thời gian thích hợp để chiết diallyl 42 disulfide 3.9 Ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu suất thu nhận 43 diallyl disulfide 3.10 Sơ đồ ngâm chiết diallyl disulfide giá trị pH khác 44 3.11 Ảnh hưởng pH đến hiệu suất thu hồi diallyl disulfide 45 3.12 Sơ đồ qui trình chiết phytolcid từ củ nén 47 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ai biết rằng: Ăn mặc nhu cầu thiếu người Chính chế biến ăn ngon hỗ trợ cho sức khỏe người ln khuyến khích đề cao Đối với người Việt Nam vấn đề sử dụng ăn hợp lí ln nhân dân ta trọng mức Có thể thấy hợp với số gia vị định có dùng ăn phát huy hết cơng dụng ví dụ: Vịt cần gừng, gà cần chanh, bị nướng cần nén, heo cần hành… Có thể nói gia vị phần thiếu, trực giác chất điều vị giúp gia tăng hương vị màu sắc tăng hấp dẫn cho ăn điều phần giúp cho tiêu hóa hấp thụ thức ăn tốt sâu xa sử dụng gia vị tận hưởng hoạt chất kháng sinh thực vật – phytolcid (fitolcid) có cơng dụng giúp thể kháng khuẩn Có thể thấy cơng dụng loại gia vị tồn kho tàng tri thức nhân gian có loại khoa học chứng minh rõ ràng nghệ, gừng, tỏi… Nhưng có loại gia vị dùng vị thuốc dân gian chưa hiểu rõ công dụng thực củ nén, kiệu… Nén hay hành tăm có nguồn gốc Bắc Á, Bắc Âu châu Bắc Mỹ, trồng sử dụng từ 5000 năm Loài trồng tương cận với loài mọc hoang vùng núi Alpes, giống hoang khác mọc nhiều vùng Bắc bán cầu Tại lục địa Bắc Mỹ, nén “thích ứng hóa” trồng từ khu vực Nam Canada, xuống tới Đông Nam California.[3] Ở Việt Nam nén trồng từ lâu đời nhiên trồng đại trà có chất lượng tốt vùng đất từ Quảng Nam Quảng Trị, nhiều Nghệ An nén thường trồng làm rau ăn lấy củ làm thuốc Có thể nhân giống hành hoa, hạt hay tách bụi vào vụ đông xuân Thu hoạch củ với nén 3.6 Xác định khả kháng khuẩn dịch chiết củ nén Vật liệu thử nghiệm: Thạch TSA Nồng độ thử nghiệm: pha loãng mẫu thử (10-1, 10-2, 10-3,10-4, 10-5, 10-5) Chủng vi khuẩn thử nghiệm:  Escherichia coli ATCC 25922  Staphylococcus aureus ATCC 25923  Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145  Bacillus subtilis ATCC 6633 Thời gian nuôi cấy: 24 Môi trường nuôi cấy: Thạch TSA Kết trình bày bảng 3.3 Bảng 3.3 Kết đo dường kính vịng thủy phân Vi khuẩn thử nghiệm Đường kính vịng thủy phẩn (mm) Nồng độ (C) C0 10-1 Staphylococcus aureus 14 13,5 13 12,5 11 10 Escherichia coli 10 8,5 6,5 Pseudomonas aeruginosa 7,5 7 Bacillus subtilis 6,5 6 10-2 10-3 10-4 10-5 Từ kết bảng 3.3 ta thấy với nồ ng đô ̣ ban đầ u và pha lỗng nồng độ 10-1, 10-2, 10-3,10-4, 10-5, đường kính vịng thủy phân thay đổi: khuẩn Staphylococcus aureus có đường kính vịng thủy phân cao nhât 14mm Khi pha lỗng nồng độ 10-1 -10-5 đường kính thay đổi từ 13,5mm10mm điều cho thấy dịch chiết từ củ nén có khả kháng khuẩn với Staphylococcus aureus Theo nghiên cứu Chu Mạnh Thắng cộng [15] ngâm chiết tỏi, hành tây thời gian 30 ngày khả kháng khuẩn dịch chiết tỏi Staphylococcus aureus có đường kính vịng thủy phân 17mm, hành tây 13,4mm So với dịch chiết tỏi, hành tây khả kháng khuẩn dịch chiết củ nén Staphylococcus aureus thấp Đối với Escherichia coli với nồ ng đô ̣ ban đầ u và pha loañ g nồng độ từ 10-1 – 10-5 đường kính vịng thủy phân thay đổi 10mm – 6,5mm Có thể thấy với nồng độ pha lỗng dịch chiết củ nén ức chế phát triển khuẩn Escherichia coli so với dịch chiết củ tỏi dung mơi cồn 960 đường kính thủy phân 19.5mm dịch chiết hỗn hợp hẹ, tỏi theo tỉ lệ hẹ: tỏi = 3:7 đường kính vịng thủy phân 23mm[6] khả kháng khuẩn dịch chiết củ nén Escherichia coli thấp Đối với chủng Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis đường kính vịng thủy phân giảm từ xuống 5mm Khả kháng khuẩn dịch chiết củ nén loài vi khuẩn không cao Escherichia coli Staphylococcus aureus Kết thực nghiệm so với loài thuộc họ hành tỏi phù hợp theo tài liệu nghiên cứu: - Theo công bố nghiên cứu từ tài liệu [24], [27] ghi nhận hợp chất S-Metyl methanenthiosulfinate S-metyl-2-propene-1-thiosulfinate, trích từ hẹ có khả diệt E Coli O-157 : H7 vi khuẩn gây hư hại thực phẩm Thí nghiệm ống nghiệm, tác dụng diệt khuẩn hợp chất allicin có tỏi mạnh dung dịch 1/85000- 1/125000 đủ ức chế sinh trưởng trùng Staphylococcus, Streptococus, trùng thương hàn, phó thương hàn, trực trùng lỵ.[9] - Tương tự, theo nghiên cứu công bố tạp chí [29] nghiên cứu dịch chiết củ hành tây kết thu dịch chiết nước ép củ hành tây ức chế Serratiamarcescens, loài tăng trưởng Streptococcus, Escherichia Lactobacillus coli, odontolyticus, Pseudomonas aeruginosa Salmonella typhosa Chiết xuất dung môi ete dầu hỏa củ hành tây ức chế tăng trưởng Clostridium paraputrificum Staphylococcus aureus Tinh dầu có hoạt động chống lại loạt loại nấm : Aspergillus niger, Cladosporium werneckii,Candida albicans, Fuarium oxysporium, Saccharomyces cerevisiae, Geotrichum candidum, Brettanomyces anomalus Candida lipolytica - Cũng tạp chí nghiên cứu củ tỏi- Bulbus Allii Sativi có loạt hoạt tính kháng khuẩn chống nấm.Kết chiết xuất dung môi ethanol nước cốt củ tỏi ức chế ống nghiệm tăng trưởng loài Bacillus, Staphylococcus aureus, Shigellasonnei, Erwinia carotovora, Mycobacterium tuberculosis, Escherichia coli, Pasteurella multocida, Proteus [29] - Theo Robert Duka, Dorina Ardelean nghiên cứu phytolcid có củ tỏi kết cho thấy allicin củ tỏi dihydroallinine hành tây ức chế vi khuẩn có tỏi chứng minh khả kháng chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus đề kháng methicillin, Pseudomonasaeruginosa, Esterechia coli vi khuẩn Bacillus subtilis [25] Có thể giải thích sau thành phần dịch chiết củ nén có chứa đồng thời hai loại hợp chất có tính kháng khuẩn mạnh allicin dialyl disulfide riêng allicin pha loãng nồng độ 1/125000 thể rõ ràng khả ức chế vi khuẩn (Bacilus subtilis, proteas morgani, salmonella enteritidis, S Paradysenteriae, Staph Aureus, Streptococus viridans, vibrio cholerae) [21], [31] Thêm vào hợp chất diallyl disunfide có tính kháng khuẩn cao [22], [38] Nên từ kết ta nói dịch chiết từ củ nén dung mơi cồn 960 có khả kháng lại số chủng vi khuẩn thường gặp thực phẩm từ giải thích sử dụng thuộc họ hành tỏi làm gia vị có khả ngăn chặn hoạt động vi khuẩn thời gian định đồng thời tạo hương vị hấp dẫn cho sản phẩm sử dụng chúng Từ kết nghiên cứu số nghiên cứu khả kháng khuẩn hợp hợp chất phytolcid có họ hành tỏi Có thể nói kết thực nghiệm khả kháng khuẩn dịch chiết củ nén bảng 3.3 là đồng nên xếp nén vào họ hành, tỏi phương diện hoạt chất sinh học kháng khuẩn KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ * KẾT LUẬN Xác định số thành phần hóa học củ nén Quảng Nam: Nước: 86,3% Glucid tổng: 6,53% Canxi : 0,04% Magiê : 0,03% Kali : 0,25% Natri: 0,02% Từ thành phần cho thấy củ nén hồn tồn xếp vào họ hành tỏi Trong loại dung môi thực nghiệm, hiệu ngâm chiết ether dầu, n- hexan; axeton; cồn 960 Trong thí nghiệm chọn cồn 960 Đã xác định điều kiện ngâm chiết Nhiệt độ: 200C Thời gian: 30 ngày Tỉ lệ dung môi/nguyên liệu: 80/10, ml/g pH: Từ đề xuất qui trình ngâm chiết số phytolcid từ củ nén Bằng phương pháp sắc ký ghép khối phổ xác định định danh số phytolcid có dịch chiết từ củ nén: Allicin, diallyl disulfide Xác định khả kháng khuẩn dịch chiết củ nén vi sinh vật kiểm định tương ứng với đường kính vòng thủy phân cho chủng * KIẾN NGHỊ Kháng sinh thực vật hợp chất chiết chủ yếu từ thực vật có nhiều cơng dụng người động vật nên để đảm bảo thu hồi hàm lượng phytolcid từ củ nén cao tinh khiết hơn, ứng dụng nhiều lĩnh vực sức khỏe y học hơn, tơi xin có số kiến nghị sau: Dùng phương pháp tách định lượng allicin, diallyl disulfide Nghiên cứu số điều kiện tối ưu để giữ hoạt tính sinh học allicin, diallyl disulfide DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT [1] Nguyễn Bin (2001), Các trình thiết bị cơng nghệ hóa chất thực phẩm, NXB Giáo Dục, Hà Nôi [2] Bộ môn Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội (2004), Bài giảng dược liệu, Tập1, Nhà xuất Đại học Dược Hà Nội [3] Bộ mơn hóa sinh (2003), Sổ tay Thí nghiệm hóa sinh, Trường đại học bách khoa, TPHCM, tr – [4] Bộ môn máy thiết bị (1992), Sổ tay q trình thiết bị cơng nghệ hóa chất, Tập 1, 2, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội [5] Nguyễn Hữu Đĩnh, Trần Thị Đà (1999), Ứng dụng số phương pháp phổ nghiên cứu cấu trúc phân tử, Nhà xuất giáo dục [6] Lê Thị Thu Hiền (2010), Khảo sát tính kháng sinh chất chiết hành, tỏi, hẹ, móng tay vi khuẩn E.Coli, Luận văn tốt nghiệp đại học, Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh [7] Trần Việt Hương (2000), Từ điển thảo mộc dược học, Tài liệu y tế, sức khỏe [8] Từ Minh Koóng (2007), Kỹ thuật sản xuất dược phẩm, Tập 1, Trường đại học Y Dược, Hà Nội, trang 148 – 161 [9] Đỗ Tất Lợi (1986), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội [10] Lý Kinh Luận (2010), Nghiên cứu trích ly tinh dầu từ tỏi Lý Sơn, Luận văn tốt nghiệp đại học, Đại học kỹ thuật thành phố Hồ Chí Minh [11] Lê Đức Ngoan (2002), Các phương pháp phân tích hóa học trồng thức ăn gia súc, Đại học Nông Lâm Huế [12] A.F Nametnhicov (1977), Hóa học công nghiệp thực phẩm, Bộ môn kỹ thuật đồ hộp lạnh thực phẩm trường ĐH Bách Khoa dịch, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội [13] Hồ Viết Quý (1999), Các phương pháp phân tích quang học hóa học, NXB Đại học quốc gia Hà Nội [14] Hồ Viết Quý (1996), Chiết tách phân chia chất dung môi hữu (Lý thuyết – Thực hành - Ứng dụng), Tập 2, Nhà xuất khoa học kỹ thuật [15] Chu Mạnh Thắng, Lê Thị Hồng Thảo, Đỗ viết Minh, Nguyễn Thành Long (2009), Nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp chế biến, bảo quản dịch chiết, bột khô, dung dịch đến hàm lượng kháng sinh khả kháng khuẩn tỏi, hành tây, Bộ môn dinh dưỡng thức ăn chăn ni [16] Hà Thanh Tồn, Lê Nguyễn Kim Nguyên, Trần Thanh Hiền (2010), Chuyên đề thực phẩm chức rượu tỏi, Đại học Cần Thơ khoa nông nghiệp sinh học ứng dụng [17] Hà Duy Tư (chủ biên, 1996), Quản lý kiểm tra chất lượng thực phẩm, Đại học bách khoa Hà Nội, tr 232-233, 303-305 [18] Viện dược liệu (2008), Kỹ thuật chiết xuất dược liệu, NXB Khoa học Kỹ thuật TIẾNG ANH [19] Arunkumar A, Vijayababu MR, Kanagaraj P, Balasubramanian K, Aruldhas MM, Arunakaran J(2002), Growth suppressing effect of garlic compound diallyl disulfide on prostate cancer cell line (PC-3) in vitro, Department of Endocrinology, Dr ALM PG Institute of Basic Medical Sciences, University of Madras, India [20] P.Bocchini, C.Andalo, R.Pozzi, G.C.Galletti, A.Antonelli (2001), Determination of dially thiosulfinate (allicin) in Garlic (allium sativum L.) by high-performance liquid chromatography with a postcolumn photochemical reactor, “The Analytica Chimina Acta”, 441, pp.37-43 [21] Claser and Drobnik (1939), Cavallite and Balley (1944), Hughes and Lawson (1991), Deshpande (1993), Antibacterial Effects of Garlic [22] Robert, Véronique, Mouillé, Béatrice, Mayeur, Camille, (2001), “Effects of the garlic compound diallyl disulfide on the metabolism, adherence and cell cycle of HT-29 colon carcinoma cells”, Evidence of sensitive and resistant sub-populations, Oford university press [23] Eric Block, Sriram Naganathan, David Putman, Shu Hai Zhao (2003), “Allium chemistry: HPLC analysis of thiosulfinates from onion, garlic, wild garlic (ramsoms), leek, scallion, shallot, elephant (greatheaded) garlic, chive, and Chinese chive Uniquely high allyl to methyl ratios in some garlic samples”, Departerment of chemistry, state University of New York at Albany [24] Kambiz Baghalian, Seyed Ali Ziai, Mohammad Reza Naghavi, Hassanli Naghli Badi, Ahmad Khalighi (2005), Evaluation of allicin content and botanical in Iranian garlic (Allium sativum L.) ecotypes, The Cientia Horticulturae, 103, pp.155-166 [25] Robert Duka, Dorina Ardelean (2010), Phytoncides and Phytoalexins vegetal antibiotics, Jurnal medical Aradean Vol XIII,3, Vasile Goldis University Press pp 19-25 [26] Sumi (1987),Staba (2001), A commentary on the effect of garlic extraction and formulation on product composition, Journal of Nutrition [27] H.D Rabinowitch and L Currah (1991), Allium Crop Science : recent advances, CABI Publishing [28] Xiaonan Lu, Barbara A Rasco, Jamie M F Jabal, D Eric Aston, Mengshi Lin, and Michael E Konkel (2011), Investigating Antibacterial Effects of Garlic (Allium sativum) Concentrate and Garlic-Derived Organosulfur Compounds on Campylobacter jejuni by Using Fourier Transform Infrared Spectroscopy, Raman Spectroscopy, and Electron Microscopy, Appl Environ Microbiol [29] World Health Organization (1999), Who Monographs on selected Medicinal Plants- Volume CÁC TRANG WEB [30] http://diendankienthuc.net/diendan/showthread.php?p=32046 (ngày 27/3/2012) [31] http://www.duoclieu.org/2012/02/mot-so-duoc-lieu-khang-khuan-voicac.html (ngày 2/4/2012) [32] http://www.monanbaithuoc.com (ngày12/12/2012) [33] http://www.nist.gov/index.html (ngày 12/12/2012) [34] http://www.nguyenkynam.com/capnhat/tap11/congdungtoita.htm [35] http://www.ykhoa.net/yhoccotruyen/voha/vh062.htm (ngày 10/5/2012) [36] http://www.vnmilitaryhistory.net (ngày 8/2/2012) [37] http://kids.vuongquocnhi.vn/n/1/76/1807/hanh-tam vi-thuoc-than (ngày 10/5/2012) [38] http://www.wattpad.com/1394794-duoc-ly-de-cuong-duoclieu?p=21#!p=1 (ngày 12/12/2012) [39] http://en.wikipedia.org/wiki/Allicin (ngày 25/11/2012) [40] http://en.wikipedia.org/wiki/Diallyl_disulfide (ngày 25/11/2012) [41] http://vi.wikipedia.org/wiki/Hanh_tam (ngày 25/11/2012) PHỤ LỤC KẾT QUẢ MỘT SỐ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CỦ NÉN 1.1 Kết xác định độ ẩm củ nén: Bảng 1.1 Độ ẩm củ nén Thí nghiệm Khối lượng cốc Khối lượng mẫu trước Khối lượng mẫu cốc Độ ẩm sấy sấy sau sấy (m3),g (%) (m1), g (m2), g 17 20 19,94 85,3 17 20 19,7 86,5 17 20 19,58 87,1 Vậy độ ẩm trung bình củ nén là: 86,3% 1.2 Kết xác định hàm lượng glucid tổng củ nén: Bảng 1.2 Hàm lượng glucid tổng củ nén Thí nghiệm Khối lượng mẫu Thể tích mẫu, Thể tích chuẩn, Hàm lượng glucid tổng, g ml ml % 10,05 3,2 2,1 6,53 3,2 2,2 6,84 3,3 2,1 6,33 Vậy hàm lượng glucid tổng trung bình củ nén 6,53% PHỤ LỤC 1.1 Xác định độ ẩm Tiến hành Tiến hành cân cốc sấy khô nhiệt độ 100- 1500C đến khối lượng khơng đổi Để nguội bình hút ẩm Cân xác mẫu, mẫu có khối lượng cho vào cốc sấy Chuyển cốc vào tủ sấy, sấy 60 -800C vào Sau nâng nhiệt độ lên 1001500C, sấy khơ liên tục 8h Lấy để nguội bình hút ẩm, đem cân ghi kết lần Cho lại tủ sấy 100-1500C 30 phút, lặp lại đến khối lượng khơng đổi Cách tính độ ẩm: - Độ ẩm mẫu W%  (m1  m2 )  m3 100% m2 - Độ ẩm trung bình WTB (%)   W(%) Trong đó: m1 : Khối lượng cốc sấy (g) m2 : Khối lượng nén trước sấy (g) m3 : Khối lượng chén sứ mẫu nén khô sau sấy (g) W (%) : Độ ẩm mẫu WTB (%) : Độ ẩm trung bình 1.2 Xác định hàm lượng glucid tổng củ nén Tiến hành: Chuẩn bị mẫu: Cân cho vào cối sứ 10g nguyên liệu tươi, sau nghiền nhỏ trích ly đường nhiều lần nước cất nóng 70-800C Chuyển tồn dung dịch vào bình định mức 100ml Kết tủa protein tạp chất dung dịch chì axetat 10% hay triclo axetic 5% Nếu dùng chì axetat tránh dùng dư(2-5ml), sau loại bỏ lượng chì axetat dư dung dịch bão hòa Na2HPO4 (3-5ml) thêm với lượng vừa đủ để kết tủa hồn tồn chì axetat dư Để yên hỗn hợp 10 phút, kiểm tra lại dung dịch xem cịn chì axetat dư hay khơng Nếu khơng thêm nước cất tới vạch định mức, lọc qua giấy lọc vào cốc hay bình khơ Nước qua lọc dùng làm dung dịch thí nghiệm xác định đường khử Để xác định glucid tổng, lấy vào bình định mức 100ml xác 50ml dung dịch xác định đường khử Thêm 20ml dung dịch HCl 5%, đun cách thủy hỗn hợp 30-45 phút Làm nguội nhanh, trung hòa hỗn hợp dung dịch NaOH 2,5N với thị phenolphtalein (không màu- hồng) hay với thị methyl đỏ (đỏ - vàng) Định mức tới vạch nước cất Chuẩn độ: Cho vào bình nón 10ml dung dịch K3Fe(CN)6 1% 2,5 ml dung dịch NaOH 2,5N Them vào giọt methylenblue Đun sôi chuẩn độ bếp dung dịch đường tổng từ buret, cho giọt một, lắc mạnh Dung dịch chuyển từ đỏ sang vàng giọt đường thừa làm màu xanh methylen cho biết phản ứng kết thúc Kết lần chuẩn độ chí có ý nghĩa tham khảo, tiến hành chuẩn độ lần thứ hai Lần này, sau đun sôi dung dịch ferry cyanute, xả nhanh lượng đường (theo kết chuẩn độ lần trước), để lại khoản 1ml để chuẩn độ tiếp tìm xác điểm cuối Tiến hành định mức lặp lại lần Thí nghiệm tương tự dung dịch đường chuẩn glucose 0,5% Tiến hành định mức lặp lại lần Tính kết Lượng glucid tổng (Xt) tính theo cơng thức: Xt = 0,5*V g *V *V *100 100*V t *50m Trong đó: Xt: Lượng đường tổng (%) Vg: Thể tích dung dịch glucose 0,5% cho chuẩn độ (ml) Vt: Thể tích dung dịch glucid tổng cho chuẩn độ (ml) V1: Thể tích bình định mức dung dịch xác định đường khử V2: Thể tích bình định mức dung dịch xác định glucid tổng m: Lượng mẫu cần thí nghiệm (g) ... phát từ nguồn nguyên liệu dồi Quảng Nam để biết rõ công dụng phytolcid củ nén, mạnh dạn chọn đề tài : Nghiên cứu chiết tách định danh phytolcid chủ yếu từ củ nén Quảng Nam Mục đích nghiên cứu. .. trình chiết tách chất kháng sinh thực vật - Xác định công thức cấu tạo, danh pháp phytolcid chủ yếu có dịch chiết củ nén - Xác định khả kháng khuẩn dịch chiết từ củ nén Đối tượng phạm vi nghiên cứu. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRẦN THỊ NGỌC THANH NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ ĐỊNH DANH MỘT SỐ PHYTONCID CHỦ YẾU TỪ CỦ NÉN Ở QUẢNG NAM Chuyên ngành : Hóa hữu Mã số