Một số đặc điểm của Salmonella spp. gây tiêu chảy ở lợn con sau cai sữa tại một số trang trại nuôi công nghiệp ở miền Bắc

Các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập được từ lợn sau cai sữa bị tiêu chảy với các triệu chứng điển hình do vi khuẩn Salmonella mang đầy đủ các đặc tính sinh vật, hóa học điển hình. Mặc dù số lượng mẫu còn ít nhưng đây là nghiên cứu đầu tiên cho thấy S. typhimurium chiếm tỷ lệ cao nhất trong các serotyp phân lập được. Các chủng vi khuẩn phân lập được đều có độc lực cao khi tiêm truyền động vật thí nghiệm.

MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CỦA SALMONELLA SPP GÂY TIÊU CHẢY Ở LỢN CON SAU CAI SỮA TẠI MỘT SỐ TRANG TRẠI NUÔI CÔNG NGHIỆP Ở MIỀN BẮC Nguyễn Mạnh Phương1, Cũ Hữu Phú2, Văn Thị Hường2, Nguyễn Bá Tiếp3 Tóm tắt Salmonella spp phân lập từ phân quan nội tạng lợn sau cai sữa bị tiêu chảy trang trại chăn nuôi công nghiệp thuộc tỉnh Miền Bắc xác định thuộc serotyp: S typhimurium chiếm tỷ lệ cao (chiếm 51,61%) S anatum (19,35%), S agona (16,14%), S meleagridis S ruzizi (cùng có tỷ lệ 6,45%) Các chủng Salmonella kháng hoàn toàn với streptomycin, kháng cao với tetracyclin, amoxicillin, ampicillin sulfatrimethoprime Tất chủng thể độc lực cao (gây chết 100% động vật thí nghiệm) Các serotype phân lập mang gen quy định độc tố (stn) yếu tố xâm nhập (invA) với tỷ lệ cao 100% số chủng S.typhimurium mang hai gen stn invA Kết cho thấy cần ý vai trò S.typhimurium hội chứng tiêu chảy lợn nuôi theo quy mô công nghiệp Miền Bắc Từ khóa: Lợn sau cai sữa, Tiêu chảy, Salmonella, Serotyp, Tỷ lệ lưu hành, Miền BắcVN Characteristics of Salmonella spp/ causing diarrhea in weaned pigs of some regions of the North Vietnam Nguytn Manh Phuong, Cu Huu Phu, Van Thi Huong, Nguyen Ba Tiep Summary Salmonella spp which were isolated from the faeces and organs of diarrheic weaner pigs from farms distributed in provinces of the North Vietnam were identified as belonging to serotypes i.e S typhimurium (representing 51,61%) ; S anatum (19,35%); S agona (16,14%), S meleagridis and S ruzizi (also, 6,45%) They were completely resistant to streptomycin and highly resistant to tetracyclin,amoxicillin,ampicillin and sulfatrimethoprime All the isolates were found hightly pathogen as they killed 100% of the laboratory animals that were experimentally infected Also all of them beared either the toxinogenic gene (stn) or invasive factor gene (invA) and all the S.typhimurium isolates beared both genes The mentioned results hightly suggested that the role of Salmonella spp as a cause of the diarrheic syndrome should be paid attention to Key words: Weaner, Diarrhea, Salmonella, Serotype, Prevalence, North Vietnam Đặt vấn đề Phương thức chăn nuôi suất cao dẫn đến biến đổi đặc tính sinh học vi khuẩn Salmonella lợn (Foley cs., 2008) Những tiêu quan tâm để đánh giá mức độ biến đổi vi khuẩn bao gồm tỷ lệ lưu hành serotype, đặc tính sinh hóa, độc lực, khả đề kháng với tác nhân hóa học đặc biệt thuốc sát trùng kháng sinh Những biến đổi làm giảm hiệu điều trị kháng sinh, tăng nguy nhiễm bệnh vật chủ (EMEA, 2006) Nhiều nghiên cứu Việt Nam cho thấy có khác tỷ lệ nhiễm Salmonella lứa tuổi lợn (Nguyễn Bá Hiên, 2001; Trương Quang Trương Hà Thái, 2007) đối tượng lợn nuôi (Trương Quang, 2004) Ngoài ra, độc lực Salmonella phân lập từ lợn bình thường lợn bị tiêu chảy xác định có khác biệt động vật thí nghiệm (Trương Quang, 2004; Trương Quang Trương Hà Thái, 2007) Hai serotype nhiễm lợn với tỷ lệ cao số serotype chủng Salmonella phân lập từ đối tượng lợn nuôi Miền Bắc S cholerasuis (Lê Văn Tạo Nguyễn Thị Vui, 1994; Tạ Thị -1 Học viên cao học ngành Thú y Đại học Nông nghiệp Hà Nội, Bộ môn Vi trùng Viện Thú y Quốc gia, Khoa Thú y Đại học Nông nghiệp Hà Nội 29 Vịnh Đặng Khánh Vân, 1996) S enteritidis (Trịnh Tuấn Anh cs., 2010) Cho đến nay, tỷ lệ đóng góp sản phẩm chăn ni quy mơ cơng nghiệp ngày tăng chưa có nhiều nghiên cứu vi khuẩn Salmonella đặc biệt vai trò serotype Salmonella hội chứng tiêu chảy đàn lợn nuôi trang trại lớn có kiểm sốt chặt chẽ vệ sinh thức ăn nước uống Nghiên cứu nhằm xác định tỷ lệ lưu hành serotype Salmonella, đặc tính sinh hóa, số yếu tố độc lực khả kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella phân lập từ lợn sau cai sữa mắc tiêu chảy trang trại nuôi theo quy mô công nghiệp Miền Bắc II Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu -Lợn sau cai sữa bị tiêu chảy với triệu chứng lâm sàng điển hình tiêu chảy Salmonella nuôi từ trang trại tỉnh Ninh Bình, Hà Nội, Hịa Bình, Thái Nguyên, Phú Thọ, Vĩnh Phúc - Mẫu phân mẫu bệnh phẩm gồm amiđan, gan, lách, hạch màng treo ruột, chất chứa ruột non lợn sau cai sữa bị tiêu chảy nặng chết tiêu chảy nghi vi khuẩn Salmonella -Các loại môi trường dùng cho nuôi cấy, phân lập giám định đặc tính vi khuẩn Salmonella Hóa chất, thuốc nhuộm Gram; loại dung dịch Kovac, Andrader , giấy tẩm kháng sinh hãng Eiken, Oxoid, Biorad, Merck, sản xuất -Kháng huyết chuẩn hãng Denka Seiken Co., Ltd, Tokyo (Nhật Bản) sản xuất dùng để định typ kháng nguyên O H -Các nguyên liệu cho phản ứng PCR gồm Taq-DNA polymerase, dNTPs, đệm phản ứng, đệm điện di TAE (Tris-Acetic-EDTA), Gel loading buffer, Ethidium Bromide Các serotyp đối chứng Viện Thú y Nhật Bản cung cấp 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp lấy mẫu Mẫu phân từ lợn tiêu chảy lấy cách dùng tăm bơng vơ trùng ngốy vào trực tràng, cho vào ống vô trùng, bảo quản lạnh 4oC Mẫu quan lấy từ gan, lách, hạch ruột, chất chứa ruột non lợn chết tiêu chảy Các mẫu đựng riêng túi nilon chuyên dùng Máu tim hút xi–lanh giữ 4oC 2.2.2 Phương pháp nuôi cấy, phân lập vi khuẩn Salmonella Dựa quy trình phân lập giám định vi khuẩn Khoa Thú y ứng dụng sức khỏe cộng đồng, trường Đại học Nông nghiệp Thú y Obihiro, Nhật Bản Các tiêu kiểm tra bao gồm hình thái học, khả di động môi trường thạch bán cố thể; chuyển hóa loại đường; phản ứng sinh Indol; Phản ứng sinh H2S; Phản ứng Oxidaza; Phản ứng Catalaza, phản ứng lên men loại đường Xác định serotyp hai loại kháng nguyên O H phản ứng ngưng kết với kháng huyết chuẩn (hãng Denka, Seiken Co., Ltd Niigata, Japan); định danh vi khuẩn vào bảng phân loại Kauffmann -White (Popoff, 2001) Với kháng nguyên H, xác định kháng nguyên H pha tương ứng với typ sau xác định kháng nguyên H pha Các tiêu kiểm tra bao gồm hình thái học, khả di động môi trường thạch bán cố thể; chuyển hóa loại đường; phản ứng sinh Indol; Phản ứng sinh H2S; Phản ứng Oxidaza; Phản ứng Catalaza, phản ứng lên men loại đường 3.2.3 Phương pháp xác định tính mẫn cảm với kháng sinh Sử dụng phương pháp Kirby- Bauer đánh giá tính mẫn cảm vi khuẩn với loại kháng sinh dựa vào bảng đánh giá kết NCCLS (2000) 3.2.4 Phương pháp xác định có mặt gen mã hóa độc tố đường ruột yếu tố xâm nhập Gen mã hóa độc tố đường ruột (stn) yếu tố xâm nhập (invA) chủng Salmonella xác định phản ứng PCR với bước tiến hành trình tự cặp mồi 30 theo nghiên cứu công bố (Cloeckaert cs., 2006; Skyberg cs., 2006) Cặp mồi xác định có mặt gen quy định độc tố Stn gồm mồi xi (Stn-F) có trình tự 5’CTT TGG TCG TAA AAT AAG GCG- 3’và mồi ngược (Stn-R), 5’- TGC CCA AAG CAG AGA GAT TC- 3’ cho sản phầm PCR kích thước 259bp Cặp mồi xác định có mặt yếu tố xâm nhập gồm mồi xi (invA- F) có trình tự 5’- TTG TTA CGG CTA TTT TGA CCA3’ mối ngược (invA- R) với trình tự 5’- CTG ACT GCT ACC TTG CTG ATG- 3’ cho sản phẩm có kích thước 521bp 3.2.5 Phương pháp kiểm tra độc lực chủng Salmonella phân lập phương pháp tiêm truyền động vật thí nghiệm Vi khuẩn từ mơi trường giữ giống cấy truyền vào mơi trường BHI bình tam giác 100ml Canh trùng ni 37oC/24 (có rung lắc để kích thích tăng sinh vi khuẩn) Tiêm chủng vi khuẩn cần nghiên cứu vào xoang phúc mạc chuột nhắt trắng (khối lượng 18-20g/con), liều tiêm 0,2ml canh trùng/con Lô đối chứng gồm chuột tiêm 0,2ml dung dịch BHI/con Kiểm tra trạng thái chuột thí nghiệm, ghi thời gian chết sau tiêm, số lượng chuột chết vòng ngày Căn vào số lượng chuột chết, thời gian chết trung bình lô để đánh giá độc lực vi khuẩn Mổ khám chuột chết nuôi cấy phân lập vi khuẩn từ máu tim -Sai khác có ý nghĩa kiểm định hàm (χ2) III Kết thảo luận 3.1 Kết phân lập vi khuẩn Salmonella từ bệnh phẩm lợn bị tiêu chảy Kết phân lập vi khuẩn Salmonella từ mẫu phân quan nội tạng trình bày bảng Bảng Kết phân lập vi khuẩn Salmonella spp từ phân nội tạng lợn tiêu chảy Bệnh phẩm STT Số mẫu kiểm tra Số mẫu dương tính Tỷ lệ (%) Mẫu phân 19 19 100,00a Hạch amiđan 12 66,67b Gan 12 50,00c Lách 12 50,00c Hạch màng treo ruột 12 10 83,33d 12 10 83,33d Chất chứa hồi tràng a, b, c, d Ghi chú: giá trị khác có ý nghĩa thống kê Kết cho thấy 100% mẫu phân lợn tiêu chảy phân lập vi khuẩn Salmonella Kết khẳng định nguyên nhân nghi ngờ gây tiêu chảy Salmonella dựa vào biểu triệu chứng lâm sàng điển hình Trong số loại mẫu bệnh phẩm từ quan nội tạng, tỷ lệ phân lập cao hạch màng treo ruột đoạn hồi tràng (83,33%) sau hạch hạnh nhân (amidan) (66,67%), thấp từ mẫu lách gan (50%) Theo Wilcock Schwatz (1992), sau gây nhiễm, Salmonella có mặt hạch lympho màng treo ruột Nếu gây nhiễm theo đường miệng, 24 sau vi khuẩn xuất hạch lympho màng treo ruột hạch amiđan Đỗ Trung Cứ cs (2001) tìm thấy vi khuẩn Salmonella 9/9 loại phủ tạng gồm chất chứa ruột non, ruột già, hạch lympho màng treo ruột, hạch amiđan, gan, lách, thận, máu tim, phổi lợn từ – tháng tuổi bị tiêu chảy Trong đó, tỷ lệ cao hạch lympho màng treo ruột (94,59%), gan (91,89%) thấp thận (27,08%) Tỷ lệ phân lập Salmonella từ mẫu bệnh phẩm nghiên cứu phù hợp với quy luật phân bố vi khuẩn quan nội tạng lợn bị tiêu chảy Salmonella 3.2 Kết giám định số đặc tính ni cấy sinh hóa chủng Salmonella phân lập Kết trình bày bảng Bảng Kết xác định đặc tính ni cấy sinh hóa chủng vi khuẩn Salmonella phân lập 31 STT Chỉ tiêu/môi trường kiểm tra Số chủng kiểm tra Số chủng dương tính Tỷ lệ dương tính (%) Di động Nhuộm Gram 31 31 31 31 100,0 100,0 BPW RV Thạch DHL Thạch CHROMTM Salmonella Thạch TSI 31 31 31 31 31 31 31 31 31 31 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 Thạch LIM Malonate 31 31 31 31 100,0 100,0 Tất mẫu vi khuẩn bắt màu Gram âm với đặc điểm hình thái điển hình vi khuẩn Salmonella Trong mơi trường tăng sinh BPW R , tất chủng vi khuẩn mọc tốt, có khả di động, làm đục mơi trường, có cặn đáy ống nghiêm sau 24 giờ, tạo màng mỏng bề mặt môi trường nuôi cấy Các chủng vi khuẩn (31/31) nuôi cấy môi trường thạch DHL tạo khuẩn lạc màu đen, xung quanh suốt khuẩn lạc suốt không màu Trên môi trường thạch CHROMTM Salmonella, khuẩn lạc có màu tím hồng, dạng S Tất 31 chủng Salmonella mọc phát triển tốt mơi trường TSI, có khơng sản sinh H2S, không làm chuyển màu môi trường LIM không làm chuyển màu môi trường Malonate Sau xác định đặc tính ni cấy chủng vi khuẩn Salmonella, đặc điểm sinh hóa kiểm tra Kết ghi bảng Bảng Kết giám định số đặc tính sinh hố chủng vi khuẩn Salmonella phân lập STT Chỉ tiêu kiểm tra Số lượng mẫu Số chủng dương tính Indol 31 Tỷ lệ dương tính (%) Oxidaza 31 0 Catalaza 31 31 100,0 H2S 31 23 74,19 Glucose 31 31 100,0 Mantol 31 31 100,0 Lactose 31 0 Sorbitol 31 31 100,0 Dextroze 31 31 100,0 10 Sucrose 31 0 11 Galactose 31 31 100,0 12 Manitol 31 31 100,0 13 Arabinose 31 31 100,0 Kết bảng cho thấy 31 chủng kiểm tra lên men sinh đường glucose, mantol, sorbitol, dextrose, galactose, manitol, arabinose không lên men đường lactose, sucrose Tất chủng Salmonella phân lập không sản sinh indol, phản ứng oxidaza âm tính, catalaze dương tính, 100% số chủng có khả di động, 83,01% chủng sinh H2S 32 Như vậy, đặc tính sinh vật hố học chủng Salmonella phân lập mang đặc điểm chung giống Salmonella phù hợp với đặc điểm hình thái, ni cấy, đặc tính sinh hố vi khuẩn theo mơ tả Cù Hữu Phú cs (2000), Đỗ Trung Cứ (2001), Quinn cs (2002) 3.3 Kết xác định serotyp chủng vi khuẩn Salmonella phân lập Kết trình bày bảng Bảng Kết xác định serotype chủng vi khuẩn Salmonella phân lập Công thức kháng nguyên Số chủng kiểm tra n=31 KN H Kết Tỷ lệ dương tính (%) Kết luận serotyp Pha Pha Số chủng dương tính i 1,6 16,14a S.agona 3,10 e,h L,w 6,45b S.meleagridis 3,10 z6 6,45 S.ruzizi i 1,2 16 51,61c S.typhimurium 3,10 e,h 1,6 19,35 S.anatum KN O Ghi chú: a, b, c, d giá trị khác có ý nghĩa thống kê Sự có mặt thành phần kháng nguyên O kháng nguyên H để xác định serotyp vi khuẩn Salmonella Kết bảng cho thấy, chiếm cao S typhimurium:16/31 chủng (51,61%); chủng S.anatum (19,35%); chủng S agona (16,14%); chủng S.meleagridis (6,45%) chủng S.ruzizi (chiếm 6,45%) Nghiên cứu Laval (2000) cho thấy S.choleraesuis tác nhân gây bệnh thể cấp tính tìm thấy với tỷ lệ cao Theo Lê Văn Tạo Nguyễn Thị Vui (1994), Salmonella lợn chủ yếu S choleraesuis Phân lập từ 75 mẫu phân số vùng thuộc Ba Vì (Hà Tây cũ), Tạ Thị Vịnh Đặng Khánh Vân (1996) cho biết S.choleraesuis chiếm tỷ lệ cao (60%) Trịnh Tuấn Anh cs.(2010) phát S enteritidis có tỷ lệ cao chủng Salmonella phân lập Tuy nhiên, số chủng phân lập nghiên cứu khơng tìm thấy S.cholerasuis S.typhimurium chiếm tỷ lệ cao Theo thông tin từ Trung tâm phịng chống dịch bệnh Mỹ (CDC) cơng bố năm 2006, S.typhimurium typ Salmonella phổ biến lợn tiêu chảy Một thông tin thú vị (Foley cs., 2008), Mỹ, năm gần đây, S.typhimurium thay S.cholerasuis để trở thành serotyp gây bệnh phổ biến lợn Như nhận xét tỷ lệ lưu hành serotyp vi khuẩn Salmonella lợn (hay đàn lợn sau cai sữa nuôi trang trại chăn ni theo quy mơ cơng nghiệp) có thay đổi Tuy nhiên với lượng mẫu/chủng phân lập nghiên cứu cịn hạn chế nên cần có nghiên cứu để khẳng định 3.4 Kết kiểm tra mức độ mẫn cảm chủng Salmonella phân lập với số loại kháng sinh Chúng chọn ngẫu nhiên 31 chủng vi khuẩn Salmonella phân lập để kiểm tra mức độ mẫn cảm với 14 loại kháng sinh hóa dược theo phương pháp KirbyBauer (1996) Két ghi bảng Bảng Kết kiểm tra mức độ mẫn cảm với số loại kháng sinh chủng Salmonella phân lập TT Tên kháng sinh Số chủng kiểm tra Mẫn cảm Số chủng Tỷ lệ (%) 33 Kháng Số chủng Tỷ lệ (%) 10 11 Gentamycin Colistin Tetracyclin Kanamycin Streptomycin Sulfatrimethoprime Norfloxacin Amoxicillin Ampicillin Apramicin Enrofloxacin 31 31 31 31 31 31 31 31 31 31 31 11 15 35,48 48,39 20 16 64,52 51,61 3,23 29,03 30 22 96,77 70,97 16 0,00 6,45 51,61 31 29 15 100,00 93,55 48,39 1 18 3,23 3,23 58,06 12,90 30 30 13 27 96,77 96,77 41,94 87,10 Kết bảng cho thấy chủng vi khuẩn Salmonella phân lập kháng hoàn toàn với Streptomycin Tỷ lệ kháng Tetracyclin, Amoxicillin Ampicillin (96,77%), kháng Sulfatrimethoprime 93,55% Mức mẫn cảm cao vi khuẩn phân lập với Apramicin (58,06%) so với tỷ lệ chủng mẫn cảm với Norfloxacin (51,61%) Colistin (48,39%) kháng sinh lại Theo Phùng Quốc Chướng (1995), vi khuẩn Salmonella mẫn cảm với Norfloxacin Ciprofloxacin Kết nghiên cứu Tô Liên Thu (2005) cho biết Salmonella phân lập từ thịt lợn mẫn cảm cao với Norfloxacin (90%), Ofloxacin (90%) Gentamycin (90%) Nghiên cứu cho thấy, không xét riêng chủng vi khuẩn, có thay đổi tỷ lệ chủng Salmonella mẫn cảm với loại kháng sinh (tỷ lệ mẫn cảm giảm so với nghiên cứu công bố) Như thấy tác dụng nhiều loại kháng sinh vi khuẩn Salmonella giảm 3.5 Kết kiểm tra độc lực chủng Salmonella phân lập Trong số serotype phát hiện, serotype chọn ngẫu nhiên chủng để kiểm tra độc lực phương pháp tiêm truyền qua chuột nhắt trắng (2ml canh trùng /chuột; tiêm phúc mạc); chuột đối chứng (2ml môi trường BHI /chuột; tiêm phúc mạc) Kết dược ghi bảng Bảng Kết kiểm tra độc lực chủng Salmonella phân lập phương pháp tiêm truyền qua chuột nhắt trắng Serotype Liều tiêm (ml) Đường tiêm Số chuột thử S.agona 0,2 Phúc mạc S.meleagridis 0,2 S.ruzizi S.typhimurium S.anatum 0,2 0,2 0,2 0,2 Đối chứng(BHI) Kết theo dõi Kết phân lập vi khuẩn Thời gian chuột chết sớm Thời gian chuột chết muộn Số chết Tỷ lệ 13 17 100,0 + Phúc mạc 15 20 100,0 + Phúc mạc Phúc mạc Phúc mạc Phúc mạc 4 16 10 20 12 14 4 100,0 100,0 100,0 0,0 + + + Theo kết bảng chủng nghiên cứu gây chết 100% chuột nhắt trắng Thời gian gây chết chuột sớm 10 sau tiêm (đối với S typhimurium S anatum) muộn 26 sau tiêm (đối với S.ruzizi) Tất mẫu máu từ chuột chết phân lập vi khuẩn Salmonella Các chủng Salmonella phân lập thể độc lực cao chứng tỏ vi khuẩn Salmonella nguyên nhân quan trọng gây tiêu chảy đàn lợn trang trại thuộc nghiên cứu 3.6 Kết xác định gen mã hóa số yếu tố độc lực chủng vi khuẩn Salmonella phân lập 34 Gen quy định độc tố (Salmonella toxin; stn) yếu tố xâm nhập (Invation A; invA) xác định phương pháp PCR (bảng 7) Bảng Kết xác định gen mã hóa số yếu tố độc lực chủng vi khuẩn Salmonella phân lập TT Serotyp Số chủng kiểm tra S.agona 5 S.meleagridis S.ruzizi S.typhimurium 16 S.anatum Tổng 31 Ghi chú: * biểu thị giá trị trung bình Yếu tố gây bệnh Stn InvA (+) (%) 80,00 (+) (%) 100,00 1 16 27 50,00 50,00 100,00 83,33 87,10* 16 30 100,00 50,00 100,00 100,00 96,77* Tất chủng thuộc serotyp S typhimurium kiểm tra có mang hai gen stn invA Tất chủng S.anatum mang gen invA chủng mang gen stn (83,33%) Trong số chủng thuộc serotyp S.agona, chủng mang gen stn (chiếm 80%) tất chủng mang gen invA Cả hai chủng S.meleagridis mang gen invA chủng mang gen stn Trong số chủng S.ruzizi kiểm tra chủng mang gen stn chủng có gen invA Như vậy, hầu hết chủng Salmonella mang gen mã hóa yếu tố xâm nhập (tỷ lệ chung mang gen tới 96,77%, có chủng thuộc serotyp S.ruzizi khơng mang gen này) tỷ lệ cao chủng mang gen quy định độc tố đường ruột (87,10%) Các chủng thuộc serotyp S typhimurium mang cả`hai gen quy định độc tố Tỷ lệ chủng mang gen quy định độc tố cao serotyp S.anatum S.agona Đối với S.meleagridis S.ruzizi , số chủng nghiên cứu chưa cịn (2 chủng) nên chưa đủ để kết luận tỷ lệ mang yếu tố độc lực yếu tố xâm nhập Kết xác định gen quy định yếu tố xâm nhập gen quy định độc tố cho thấy khả gây bệnh cao Salmonella sở chăn nuôi Đặc biệt với S.typhimurium, serotype vừa có tỷ lệ phát cao mẫu nghiên cứu vừa có tỷ lệ mang yếu tố độc lực yếu tố xâm nhập cao IV KẾT LUẬN Các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập từ lợn sau cai sữa bị tiêu chảy với triệu chứng điển hình vi khuẩn Salmonella mang đầy đủ đặc tính sinh vật, hóa học điển hình Mặc dù số lượng mẫu cịn nghiên cứu cho thấy S.typhimurium chiếm tỷ lệ cao serotyp phân lập Các chủng vi khuẩn phân lập có độc lực cao tiêm truyền động vật thí nghiệm Chủng thuộc serotype mang gen quy định độc tố yếu tố xâm nhập với tỷ lệ cao Đặc biệt 100% số chủng S.typhimurium phát mang hai gen quy định độc tố yếu tố xâm nhập Cùng với tỷ lệ phát cao, cho cần ý vai trị S.typhimurium chăn ni lợn theo quy trình cơng nghiệp Nghiên cứu cho thấy khả kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella có chiều hướng tăng Trong nghiên cứu chúng tơi chưa xác đinh yếu tố khác vi khuẩn Salmonella phân lập yếu tố bám dính, độc tố thẩm xuất đặc biệt gen kháng kháng sinh Đây nội dung cần đặt nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Trịnh Tuấn Anh, Cù Hữu Phú, Văn Thị Hường, Nguyên Văn Sửu (2010) Tình hình tiêu chảy lợn kết phân lập vi khuẩn Salmonella số địa phương tỉnh Thái Nguyên Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y – Tập XVII – Số 4, 41-48 Đỗ Trung Cứ, Trần Thị Hạnh, Nguyễn Quang Tuyên (2001), “ Kết phân lập xác định số yếu tố gây bệnh vi khuẩn Salmonella spp gây bệnh phó thương hàn lợn số tỉnh miền núi phía Bắc” Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, số 3, tr 10-17 35 Foley S.L., Lynne A.M., and Nayak R (2008) Salmonella challenges: Prevalence in swine and poultry and potential pathogenicity of such isolates Journal of Animal Science 86 (E.Suppl.) E149-E162 Trần Xuân Hạnh (1995), “Phân lập giám định vi khuẩn Salmonella lợn tuổi giết thịt” Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, số 3, tr 89-93 Nguyễn Bá Hiên (2001), Một số vi khuẩn đường ruột thường gặp biến động chúng gia súc khỏe mạnh bị tiêu chảy nuôi vùng ngoại thành Hà Nội Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội Trương Quang, Trương Hà Thái (2007) Biến động số vi khuẩn đường ruột vai trò Salmonella hội chứng tiêu chảy lợn 2-4 tháng tuổi Tạp chí KHKT Thú y, tập XIV, số 6, 52-57 Cù Hữu Phú, Nguyễn Ngọc Nhiên, Vũ Bình Minh, Đỗ Ngọc Thuý (2000), “Phân lập vi khuẩn E.coli Salmonella lợn mắc bệnh tiêu chảy, xác định số đặc tính sinh vật hố học chủng vi khuẩn phân lập biện pháp phòng trị” Kết nghiên cứu Khoa học kỹ thuật thú y (1996-2000), NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr 171-176 Lê Văn Tạo, Nguyễn Thị Vui (1994), “Phân lập định typ vi khuẩn Salmonella gây bệnh cho lợn” Tạp chí Nông nghiệp công nghiệp thực phẩm, số 11, tr 430- 431 Tô Liên Thu (2005), “ Nghiên cứu tình trạng nhiễm số vi khuẩn vào thịt lợn, thịt gà sau giết mổ Hà Nội số phương pháp làm giảm nhiễm khuẩn thịt” Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp, Viện Thú y Quốc gia Hà Nội 10 Tạ Thị Vịnh, Đặng Khánh Vân (1996), “Bước đầu thăm dò xác định E.coli Salmonella lợn bình thường lợn mắc hội chứng tiêu chảy Hà Tây Hà Nội” Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, số 1, tr 41- 44 36 ... serotype Salmonella, đặc tính sinh hóa, số yếu tố độc lực khả kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella phân lập từ lợn sau cai sữa mắc tiêu chảy trang trại nuôi theo quy mô công nghiệp Miền Bắc II... Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu -Lợn sau cai sữa bị tiêu chảy với triệu chứng lâm sàng điển hình tiêu chảy Salmonella nuôi từ trang trại tỉnh Ninh Bình, Hà Nội, Hịa Bình, Thái Nguyên,... ruột, chất chứa ruột non lợn sau cai sữa bị tiêu chảy nặng chết tiêu chảy nghi vi khuẩn Salmonella -Các loại môi trường dùng cho nuôi cấy, phân lập giám định đặc tính vi khuẩn Salmonella Hóa chất,