Kỹ thuật thụ tinh nhân tạo bao gồm các bước cơ bản sau: - Lấy tinh. Thường sử dụng phương pháp âm đạo giả vì nó có nhiều ưu điểm như cho phép thu được tinh dịch thuần khiết, các phản xạ phóng tinh của con đực xảy ra bình thường, cấu tạo của âm đạo giả đơn giản, gần với tự nhiên và đặc biệt là dễ sử dụng. - Ðánh giá chất lượng tinh trùng và pha loãng tinh dịch.
rồi đưa tinh dịch vào đường sinh dục để đảm bảo thu hệ sau Kỹ thuật thụ tinh nhân tạo bao gồm bước sau: - Lấy tinh Thường sử dụng phương pháp âm đạo giả có nhiều ưu điểm cho phép thu tinh dịch khiết, phản xạ phóng tinh đực xảy bình thường, cấu tạo âm đạo giả đơn giản, gần với tự nhiên đặc biệt dễ sử dụng - Ðánh giá chất lượng tinh trùng pha loãng tinh dịch - Bảo quản tinh dịch Có hai hình thức ngắn hạn (tinh lỏng) dài hạn (tinh đông lạnh) - Phát động dục - Dẫn tinh cho Thụ tinh nhân tạo cho phép đực giống phối giống với nhiều so với khả thông thường cho phép tiến hành đồng thời nhiều sở nhân giống đánh giá xác giá trị gây giống đực Mặt khác số lượng cá thể đời sau lớn nên nên áp dụng chọn lọc chặt chẽ đưa nhanh đàn cải tiến vào phần lại quần thể Thụ tinh nhân tạo cịn khắc phục tính khơng tương hợp thể trọng, sinh lý hay tập tính giống hay loài thân thuộc Kết hợp với việc chọn lọc tăng cường kiểm tra hậu thế, thụ tinh nhân tạo mang lại hiệu lớn sản xuất sữa (Vishwanath 2003, Hansen and Block 2004) việc kết hợp với giới tính tinh trùng (tách tinh trùng mang nhiễm sắc thể X tinh trùng mang nhiễm sắc thể Y, Seidel 2003) bắt đầu mở rộng lợi ích xa Ở gia súc nói chung bị nói riêng có nhiều bệnh giao cấu, thụ tinh nhân tạo tránh bệnh truyền qua đường + Thụ tinh nhân tạo bò Trong khoảng thập niên từ 1940-1950, thụ tinh nhân tạo bò sữa sử dụng tinh lỏng nhà chăn ni có hội để lựa chọn đực giống Ðến đầu thập niên 1960, tinh đông lạnh trở nên phổ biến cho phép sử dụng rộng rãi đực giống xuất sắc, sau chúng chết cho phép nhà chăn nuôi tự lựa chọn Công nghệ gen nơng nghiệp 82 Ðối với bị thịt, việc sử dụng thụ tinh nhân tạo bị sữa Sở dĩ việc quản lý bị thịt với qui mơ rộng lớn làm cho việc phát động dục xác sau xử lý bị để thụ tinh nhân tạo khó + Thụ tinh nhân tạo lợn Nhìn chung, hầu hết nưóc, thụ tinh nhân tạo lợn bị hạn chế nhiều Ðiều khó khăn mặt kỹ thuật nhu cầu thấp dịch vụ sản xuất Khi tiến hành thụ tinh nhân tạo, tinh dịch lợn sử dụng phải tươi 72 sau lấy tinh đạt hiệu tốt (Mare 1984) Tuy nhiên số nước, chi phí cho phối giống nhân tạo tương đối thấp so với phối giống tự nhiên nên sử dụng rộng rãi sản xuất + Thụ tinh nhân tạo gia cầm Ðối với gia cầm việc lấy tinh dịch dễ gia cầm mái thụ tinh cách nhanh chóng Tuy nhiên, chi phí thụ tinh nhân tạo cho đơn vị sản phẩm tương đối cao gia cầm có kích thước nhỏ Bởi tinh đơng lạnh cho tỷ lệ thụ thai thấp nên thụ tinh nhân tạo gia cầm sử dụng tinh lỏng, phương pháp đông lạnh cải tiến cho tỷ lệ thụ thai cao loại tinh + Thụ tinh nhân tạo cá Ðối với cá, thụ tinh nhân tạo tốt lấy trứng tinh dịch lúc, nhiệt độ cao Thụ tinh nhanh có hiệu cao Khi lấy tinh dịch, người đặt cá đực vào khăn ướt vắt kiệt nước, bụng hướng lên trên, giữ cho cá khỏi giãy, người khác tay phải cầm pipetman, tay trái ấn nhẹ vào phần vùng buồng sẹ, vuốt phía sau, bỏ giọt tinh dịch đầu tiên, đưa pipetman vào gần lỗ sinh dục để hút lấy tinh dịch Tinh dịch cá đực nên lấy hết lần Tương tự lấy trứng, dùng tay vuốt nhẹ phần bẹ cá trứng chảy ngồi Cơng nghệ gen nông nghiệp 83 Như biết trứng thành thục khỏi buồng trứng không lúc mà theo đợt thời gian thụ tinh có hiệu loạt trứng khơng đồng với nhau, mà việc lấy trứng thường làm lần, q trình thụ tinh cần phải cố gắng hồn thành nhanh chóng Hiện nay, phương pháp thụ tinh nhân tạo thông thường phương pháp thụ tinh khơ Có bốn cách thao tác sau: Cách thứ Sau lấy trứng, tùy theo số lượng trứng, cho nguyên tinh dịch lấy sẵn vào cốc nhỏ có nước muối sinh lý (lượng nước muối sinh lý gấp 10 lần tinh dịch) lắc đều, tưới lên trứng Cách thứ hai Ðể rút ngắn thời gian thụ tinh trước lấy trứng, đổ tinh dịch hòa với nước muối sinh lý vào khay thụ tinh sau lấy trứng cho vào, lắc nhẹ khay thụ tinh làm cho trứng tinh trùng sớm tiếp xúc với Hai cách lấy tinh dịch trước, lấy trứng sau, có ưu điểm giảm bớt số người làm chuẩn bị đầy đủ số lượng tinh dịch cần thiết từ đầu, khuyết điểm thời gian thụ tinh dài, vào mùa hè nhiệt độ cao khơng thích hợp Cách thứ ba Vừa lấy trứng vừa lấy tinh dịch Trong lấy trứng đồng thời có số người khác lấy tinh dịch tưới nhanh vào trứng Làm rút ngắn thời gian thụ tinh đến mức độ tối đa nhược điểm cần tăng thêm số người làm Cách thứ tư Lấy trứng trước lấy tinh dịch sau Sau lấy trứng, trực tiếp vuốt tinh dịch cá đực vào trứng Phương pháp giảm bớt thời gian lấy tinh dịch Bất kỳ áp dụng phương pháp nào, sau trộn lẫn tinh dịch với trứng cần dùng lông gà khuấy nhẹ để thúc đẩy trình thụ tinh Thời gian khuấy khoảng chừng 30-60 giây Sau đó, từ từ cho nước vào, vừa cho nước vừa khuấy chừng 30 giây, để yên 30 giây Sau tiếp tục cho thêm nước vào để rửa trứng, loại bỏ tinh dịch, máu noãn dịch thừa Rửa 2-3 lần cho trứng vào đĩa petri để tiến hành bóc màng, tạo phơi trần tế bào chuẩn bị cho phương pháp vi tiêm gen ngoại lai vào Khi cho tinh dịch vào trứng, thấy tinh dịch không tốt lắm, dùng cách thụ tinh hỗn hợp, nghĩa dùng tinh dịch hai nhiều đực Trong trường hợp nhiều trứng tinh dịch không đủ lấy tinh Cơng nghệ gen nơng nghiệp 84 sào cá đực cắt thành nhiều miếng nhỏ, dùng nước muối sinh lý rửa để lấy tinh trùng Sau dùng vải xơ lọc sử dụng 3.2.3 Cấy chuyển phôi công nghệ liên quan + Thu nhận phôi Phương pháp phẫu thuật không phẫu thuật hai phương pháp sử dụng để thu nhận phôi gia súc Thu nhận phôi phương pháp phẫu thuật phương pháp thu nhận phơi sau mổ vật Cũng giết chết vật, cắt lấy phận sinh dục bên mang phịng thí nghiệm để dội rửa lấy phôi Phương pháp không phẫu thuật phát triển cho bò ngựa cho kết phương pháp phẫu thuật Hiện nay, phương pháp phổ biến sử dụng để thu nhận phôi gia súc Chúng bao gồm việc sử dụng ống thông Foley cỡ 18-24 (gồm hai ống lồng vào nhau), cho phép dẫn dung dịch vào tử cung sau cho phép dung dịch từ tử cung quay trở vào vật chứa để chọn lọc Một bóng nhỏ gần cuối ống thơng thổi phồng phía bên sừng tử cung để ngăn cản khơng cho dịch tràn ngồi cổ tử cung Dung dịch dội rửa thu để lắng khoảng 20-30 phút, gạn bỏ phần bên Phôi tách ra, đưa vào đĩa petri đánh giá độ phóng đại 75X Phơi sống phân loại xếp dựa vào biểu hình thái chúng Phơi sau đánh giá phân loại đem chuyển cho vật nhận đồng pha (synchronized recipients) đem đông lạnh để sử dụng sau Tất phôi sống cho vào môi trường giữ khử trùng (DPBS bổ sung với 0,4% BSA) theo dẫn Hiệp hội chuyển phôi Quốc tế + Bảo quản phôi Ðây công đoạn tiến hành trước cấy truyền phôi vào vật nhận, tạo điều kiện thuận lợi cho việc vận chuyển phôi xa Phôi bảo quản nitrogen lỏng (-196oC) tất vật nuôi, trừ lợn + Nuôi phôi Phôi nuôi cấy tạm thời hệ thống sống khác ống dẫn trứng cừu chuột, thỏ; tử cung bò; xoang phúc mạc Công nghệ gen nông nghiệp 85 chuột; xoang ối phôi gà Trong đa số trường hợp, phôi bọc agar để bảo vệ cho màng suốt phôi không bị tổn thương + Cấy chuyển phơi Cấy chuyển phơi (embryo transfer) q trình thu nhận phôi từ (con cho) chuyển sang khác (con nhận) để hoàn thành thời kỳ có thai Nguyên tắc việc cấy chuyển phơi phơi lấy vị trí cấy trả vào vị trí nhờ súng chuyển phôi Phương pháp cấy chuyển phôi sử dụng để tăng khả sinh sản động vật Hiện nay, phương pháp phổ biến sử dụng thực tiễn chọn giống gia súc nhiều nước giới Các phương pháp cấy chuyển phôi khác phát triển Hiệu việc chuyển phôi phụ thuộc vào nhiều yếu tố quan trọng kinh nghiệm kỹ người thực thao tác cấy chuyển phơi Có hai phương pháp cấy chuyển phôi: phương pháp phẫu thuật phương pháp không phẫu thuật Phương pháp cấy chuyển phôi không phẫu thuật có số ưu điểm: tốn kém, đạt tỷ lệ thụ thai cao phương pháp phẫu thuật Vì phương pháp sử dụng rộng rãi (Hình 3.5) Cấy chuyển phơi khơng phẫu thuật thực cách sử dụng súng chuyển phôi thu nhỏ xuyên qua cổ vào sừng tử cung Các nhận lúc kiểm tra có mặt thể vàng hoạt động (CLcorpus luteum) Việc gây tê màng cứng (epidural anesthesia) để giảm đến mức tối thiểu sức căng Phôi để cấy chuyển hút vào “cọng rơm” 0,25 ml cột trung tâm chứa 20 ml môi trường giữ (holding medium) nằm hai túi khí “Cọng rơm” lắp vào súng cấy chuyển phôi màng bọc với đầu kim loại lắp qua đỉnh Sau đó, màng bọc vệ sinh quấn đỉnh để tránh nhiễm trùng từ hệ vi khuẩn âm đạo Bây giờ, súng chuyển phôi đưa xuyên qua âm đạo đến miệng tử cung Rồi sau màng bọc vệ sinh xuyên qua súng chuyển phôi đưa từ từ qua cổ thân tử cung đến 1/3 sừng tử cung, phía với buồng trứng mang thể vàng Piston súng đẩy chầm chậm để đặt phôi vào sừng tử cung súng rút từ từ Công nghệ gen nông nghiệp 86 Hình 3.5 Tóm tắt phương pháp chuyển phơi bị 1: Gây siêu rụng trứng bò cho gonadotropin 2: Thụ tinh nhân tạo (5 ngày sau bắt đầu gây siêu rụng trứng) 3: Thu nhận phôi phương pháp không phẫu thuật (6-8 ngày sau thụ tinh nhân tạo) 4: Ống Foley để thu nhận phôi 5: Tách phân loại phôi 6: Bảo quản phôi không hạn định nitrogen lỏng 37 0C nhiệt độ phòng ngày 7: Chuyển phôi vào nhận phương pháp phẫu thuật khơng phẫu thuật 8: Chẩn đốn thai sờ nắn qua vách trực tràng 1-3 tháng sau chuyển phôi 9: Sinh đẻ (9 tháng sau chuyển phôi) Công nghệ gen nông nghiệp 87 Trong cấy chuyển phôi phương pháp không phẫu thuật, bước quan trọng đưa dụng cụ vào súng cấy chuyển phôi đến cổ sừng tử cung Việc sử dụng không cẩn thận dụng cụ làm tổn thương cổ màng tử cung gây chảy máu Do đó, di chuyển dụng cụ biết vị trí chúng q trình đưa dụng cụ vào tử cung ln kiểm tra điều chỉnh qua trực tràng Ở nước phát triển, tỷ lệ đậu thai bò sau cấy chuyển phôi 60-70% phôi tươi 55-65% phôi đông lạnh Ở Việt Nam, tỷ lệ đậu phôi đạt thấp hơn: 30-40% phôi tươi 38-44% phôi đông lạnh (Hồng Kim Giao 1997) + Sinh thiết phơi Sinh thiết từ phơi sinh đơi trứng xác định giới tính đặc tính di truyền dịng vơ tính Có thể hút tế bào từ phôi để xét nghiệm dùng dao cắt phần phôi + Thụ tinh in vitro Thụ tinh in vitro (in vitro fertilization) kỹ thuật công nghệ sinh học đại nhằm kết hợp trứng tinh trùng ống nghiệm để thu hợp tử Các nhà khoa học sử dụng phương pháp thụ tinh nhân tạo để giải vấn đề tính hữu thụ người nhiều năm qua Ðối với gia súc, kỹ thuật công nghệ sinh học sử dụng lần thỏ (Daizien 1971), sau bị lợn (Iritani 1978), dê (Kim 1981) Năm 1982, bê sinh thụ tinh in vitro (Hanada 1982) Từ đến kỹ thuật thụ tinh in vitro áp dụng rộng rãi chăn ni bị nhiều nước giới Nói chung, kỹ thuật thụ tinh in vitro bao gồm bước: - Trước hết tiến hành thu nhận trứng chưa thụ tinh từ buồng trứng cho (có thể sử dụng thuốc gây siêu rụng trứng khơng) Trứng thu nhận vào thời gian chu kỳ sinh sản (đối với bị) - Sau ni thành thục tủ ấm (khoảng 20-24 bò), trứng thụ tinh với tinh trùng hoạt hóa Sự hoạt hóa tinh trùng Cơng nghệ gen nơng nghiệp 88 thực đường sinh dục hay ống nghiệm với môi trường nuôi cấy thích hợp - Ni hợp tử cho phát triển đến giai đoạn phôi dâu phôi nang - Cấy chuyển phơi thu nhận vào nhận Ở bị tỷ lệ thụ thai từ thụ tinh in vitro thường nằm khoảng từ 4050% Sử dụng thụ tinh in vitro cho phép khai thác tiềm sinh sản gia súc đơn thai, rút ngắn khoảng cách hệ gia súc có vịng đời dài, thành lập ngân hàng gen cơng nghiệp hóa ngành chăn ni 3.2.4 Tạo dịng vơ tính động vật Tạo dịng vơ tính (somatic cloning) thuật ngữ dùng để tập hợp cá thể (từ hai trở lên) có xuất xứ từ cá thể ban đầu qua q trình sinh sản vơ tính Tạo dịng vơ tính vật ni phát triển với số kỹ thuật: + Chia tách phôi Với kỹ thuật cho hai hay nhiều phơi từ phôi ban đầu, tạo hàng loạt cá thể giống hệt mặt di truyền hay nói cách khác tạo nên dịng vơ tính Có hai phương pháp chia tách phơi (embryo spliting): phương pháp dùng kim (Hình 3.6) phương pháp dùng dao cắt Phương pháp dùng dao đơn giản dễ dàng nhiều so với phương pháp dùng kim Ðể thực chia tách phơi cần phải có dung dịch ni phơi, kính hiển vi soi ngược (inverted microscope), thiết bị vi thao tác để điều khiển kim dao cắt, kim giữ để cố định phơi Hình 3.6 Tách phôi kim Công nghệ gen nông nghiệp Trước hết cho phôi dùng để chia tách vào đĩa petri chứa dung dịch nuôi cấy; cố định phôi kim giữ; điều khiển thiết bị vi thao tác để dịch chuyển dao cắt theo hướng thẳng đứng từ xuống hay theo hướng nằm ngang cho lưỡi dao đặt vào khối tế bào phôi; cắt phôi thành hai, ý thao 89 tác nhanh, dứt khốt xác; chuyển phơi sau tách vào dung dịch nuôi để nuôi cấy khoảng 2-3 trước chuyển vào vật nhận gây động dục đồng pha; ni cấy tiếp tục chia tách lặp lại thu nhận nhiều phôi Phơi sử dụng để chia tách giai đoạn 5-7 ngày sau thụ tinh (đối với bị) Nếu sử dụng phơi giai đoạn cuối phôi dâu hay đầu phôi nang khối tế bào đủ lớn tế bào chưa biệt hoá kết chia tách phơi nói chung tốt Nếu chia tách phôi giai đoạn phôi dâu việc chia khối mầm phơi thành hai phần Cịn chia tách phơi giai đoạn phơi nang ngồi việc tách nội phơi bì cịn phải tách phần ngoại phơi bì Nếu tách phôi giai đoạn muộn hơn, lúc tế bào biệt hóa tỷ lệ tạo nên thể toàn vẹn thấp Vào năm 2001, lần Việt Nam nhà khoa học Viện Chăn nuôi quốc gia thành công việc tạo dịng vơ tính bị gồm hai cá thể phương pháp chia tách phôi làm đôi + Chuyển ghép nhân Phương pháp chuyển ghép nhân (nuclear transplantation) tạo nên dịng vơ tính thành cơng nhiều lồi gia súc cừu, bò, ngựa, lợn, dê Ðây phương pháp đại nhằm chuyển toàn vật chất di truyền (DNA chứa nhân) từ tế bào phôi sớm vào tế bào trứng chưa thụ tinh tách nhân để tạo nên tế bào lưỡng bội (hợp tử) phát triển thành phôi Kỹ thuật chuyển nhân bao gồm bước sau (Hình 3.7): - Trước hết, gây siêu nỗn, thụ tinh, thu nhận phôi tốt giai đoạn phôi dâu - Tách khối tế bào phôi dâu thành tế bào riêng lẻ Các tế bào cho sinh trưởng điều kiện đặc biệt môi trường nuôi cấy Bằng cách số lượng tế bào tăng lên Cũng thực biến đổi di truyền chọn tế bào biến đổi mong muốn để nhân chúng lên - Dung hợp tế bào với tế bào trứng chưa thụ tinh không nhân xung điện tạo thành phôi Công nghệ gen nông nghiệp 90 - Phôi tạo thành nuôi cấy in vitro đưa vào nuôi vật nhận trung gian thường thỏ cừu - Sau thời gian, chuyển phôi phát triển vào vật nhận gây động dục đồng pha Kỹ thuật chuyển nhân cho phép tăng số lượng cá thể động vật cái, đạt đến hàng trăm hàng ngàn Nói cách khác, cho phép tạo nhóm động vật giống hệt mặt di truyền mang tính trạng mong muốn đó, đem lại hiệu cao nhân giống, cải tiến di truyền giống vật nuôi Các tế bào phôi thể cho tách Tế bào phôi thể cho đặt cạnh trứng dung hợp xung điện Phôi phát triển trứng thụ tinh Các nhiễm sắc thể từ trứng chưa thụ tinh Hình 3.7 Kỹ thuật chuyển ghép nhân 3.2.5 Tạo dòng cừu Dolly Năm 1996, lần giới động vật tạo dòng thành công nhà phôi học Ivan Wilmut cộng Viện Roslin Scotland cừu Dolly (Hình 3.8) Phương pháp sử dụng để tạo cừu Dolly tóm tắt sau (Hình 3.9): - Tế bào trứng cừu giống Scottish Blackface chưa thụ tinh kỳ II loại bỏ nhân Công nghệ gen nông nghiệp 91 - Tế bào tuyến vú cừu giống Finn Dorset, năm tuổi giai đoạn tháng cuối thời kỳ mang thai, nuôi cấy môi trường nghèo chất dinh dưỡng để vào pha định vị chu kỳ tế bào (pha G0) - Hai tế bào dung hợp xung điện - Các tế bào phát triển môi trường nuôi cấy thành phôi Phôi cấy vào cừu mẹ thay tiêm hormone cần thiết - Phôi phát triển đến giới hạn kiểu DNA xác định Dolly dịng vơ tính, cừu Finn Dorset Từ 277 phôi tạo thành phương pháp đưa vào nuôi cấy, cuối có phơi phát triển thành thai thành cừu Cừu Dolly sinh ngày tháng năm 1996, có trọng lượng bình thường, khơng có biểu dị dạng Tiếp theo đó, nhà nghiên cứu tạo cừu từ tế bào thai 26 ngày tuổi cừu từ tế bào phôi ngày tuổi Hình 3.8 Cừu Dolly cừu mẹ Sau nhiều động vật khác đời phương pháp Năm 1998, sử dụng phương pháp vi tiêm nhân vào trứng loại bỏ nhân, nhà sinh học trường Ðại học Hawaii tạo dòng 50 chuột nhắt Các nhà khoa học công ty PPL Therapeutics Edinburgh (Scotland) cho đời lợn tạo dòng vào ngày tháng năm 2000 cách sử dụng vật chất di truyền từ tế bào lợn trưởng thành Một Cơng nghệ gen nơng nghiệp 92 nhóm nhà khoa học Nhật Bản thành công việc tạo dòng bê Tế bào tuyến vú cừu nuôi cấy môi trường Lấy bớt chất dinh dưỡng Tế bào trứng kỳ II Loại bỏ nhân Tế bào thể cho pha G0 Shock điện Dung hợp Chuyển sang cừu mẹ thay Hình 3.9 Quy trình tạo dịng cừu Dolly Cơng nghệ gen nông nghiệp 93 Cừu Dolly chết vào năm 2003 bị ung thư phổi, bệnh phổ biến tìm thấy cừu già Kết phân tích DNA cho thấy đầu nhiễm sắc thể (telomere) cừu Dolly ngắn so với bình thường 3.3 Sản xuất vaccine thú y Vaccine DNA tái tổ hợp điều chế cách biến nạp gen kháng nguyên bề mặt đặc hiệu tác nhân truyền nhiễm vào E coli Mục đích để tạo dịng gen mã hóa protein kháng nguyên bảo vệ biểu cao gen tạo dịng Sau protein tinh chế tiêm chủng vào thể với protocol chuẩn thể tăng phản ứng miễn dịch với protein tái tổ hợp Nếu thành cơng, sau thể tiêm chủng đạt hiệu cao đọ sức với tác nhân truyền nhiễm Phương pháp tinh chế xác định vùng protein kháng nguyên bề mặt trội miễn dịch (immunodominant) Ðây yếu tố định kháng nguyên bảo vệ Các chuỗi peptide nhỏ tổng hợp liên kết với phân tử thể mang sử dụng nguồn kháng nguyên dẫn đến phản ứng miễn dịch bảo vệ Phương pháp đem lại kết to lớn áp dụng để sản xuất vaccine chống sốt rét Bệnh sốt rét giới bệnh truyền nhiễm đặc biệt gây nên tình trạng bệnh tật tỷ lệ tử vong lớn Nguyên nhân loài ký sinh trùng Plasmodium Các sporozoite giai đoạn chu kỳ sống Plasmodium tiêm vào máu muỗi Anopheles lấy máu để ni dưỡng trứng Giai đoạn biểu kháng nguyên bề mặt chủ yếu gây phản ứng miễn dịch Gen mã hóa kháng ngun tạo dịng sử dụng kháng thể đơn dòng để sàng lọc thư viện biểu DNA tái tổ hợp E coli Thư viện DNA plasmid chứa cDNA Plasmodium (đã tổng hợp cách sử dụng mRNA sporozoite) dung hợp với promoter E coli Khi biểu gen dung hợp, cDNA mã hóa kháng nguyên bề mặt sporozoite tách Trình tự nucleotide cDNA tái tổ hợp tách cho phép tổng hợp peptide bắt chước (mimicked) epitope trội miễn dịch Công việc thực Plasmodium knowlesi, ký sinh trùng gây sốt rét khỉ, lại mở rộng cách nhanh chóng việc tách chiết gen kháng nguyên bề mặt từ dòng gây sốt rét người P falciparum P vivax Phương pháp áp dụng cách rộng rãi nhanh Công nghệ gen nông nghiệp 94 chóng để sản xuất số vaccine kháng virus kháng ký sinh trùng (Bảng 3.2) Bảng 3.2 Các vaccine sản xuất phương pháp DNA tái tổ hợp Vaccine Gen tạo dòng Virus Cúm Kháng nguyên bề mặt viêm gan B (HbsAg) Herpes Hemaglutinin/Neuraminidase Lở mồm long móng Các tiểu đơn vị bao bọc khác (various coat subunits) HIV (HTLVIII, LAV) Protein capsid VPl Viêm gan B Kháng nguyên bề mặt Ký sinh trùng Plasmodium (sốt rét) Trypanasoma (bệnh ngủ) Shistosoma Giun tóc (Trichnella) Giun (Filaria) Kháng nguyên bề mặt sporozoite Kháng nguyên bề mặt merozoite Kháng nguyên bề mặt Kháng nguyên bề mặt Kháng nguyên bề mặt Một phương pháp khác sử dụng để sản xuất vaccine dùng genome virus đậu mùa tái tổ hợp Trong phương pháp này, DNA qui định epitope kháng nguyên bề mặt từ virus viêm gan B cúm A hay từ ký sinh trùng Plasmodium tạo dòng genome virus đậu mùa Các gen tạo dòng biểu nhờ promoter virus đậu mùa Sự tiêm chủng virus đậu mùa tái tổ hợp vào cá thể tạo nhiễm trùng cục sinh sản virus với biểu sản phẩm gen từ Công nghệ gen nông nghiệp 95 ... đủ lấy tinh Công nghệ gen nông nghiệp 84 sào cá đực cắt thành nhiều miếng nhỏ, dùng nước muối sinh lý rửa để lấy tinh trùng Sau dùng vải xô lọc sử dụng 3.2.3 Cấy chuyển phôi công nghệ liên quan... qua vách trực tràng 1-3 tháng sau chuyển phôi 9: Sinh đẻ (9 tháng sau chuyển phôi) Công nghệ gen nông nghiệp 87 Trong cấy chuyển phôi phương pháp không phẫu thuật, bước quan trọng đưa dụng cụ vào... bào thể cho pha G0 Shock điện Dung hợp Chuyển sang cừu mẹ thay Hình 3.9 Quy trình tạo dịng cừu Dolly Công nghệ gen nông nghiệp 93 Cừu Dolly chết vào năm 2003 bị ung thư phổi, bệnh phổ biến tìm thấy