Luận án tiến sĩ khảo sát thành phần hóa học và một số hoạt tính sinh học của hai cây rau má lá sen

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  TÔN NỮ LIÊN HƯƠNG KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI CÂY RAU MÁ LÁ SEN HYDROCOTYLE BONARIENSIS COMM EX LAM VÀ HYDROCOTYLE VULGARIS L (APIACEAE) LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Thành phố Hồ Chí Minh - Năm 2013 ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  TÔN NỮ LIÊN HƢƠNG KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI CÂY RAU MÁ LÁ SEN HYDROCOTYLE BONARIENSIS COMM EX LAM VÀ HYDROCOTYLE VULGARIS L (APIACEAE) Chuyên ngành: Hóa Hữu Mã số chuyên ngành: 62 44 27 01 Phản biện 1: GS.TS NGUYỄN MINH ĐỨC Phản biện 2: PGS TS TRẦN CÔNG LUẬN Phản biện 3: PGS TS NGUYỄN CỬU KHOA Phản biện độc lập 1: PGS TS NGUYỄN MẠNH CƯỜNG Phản biện độc lập 2: TS TRẦN THỊ MINH NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS TS NGUYỄN NGỌC SƢƠNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2013 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHŨ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc ***** LỜI CAM ĐOAN Luận án Tiến sĩ Khoa học Hóa học “Khảo sát thành phần hóa học số hoạt tính sinh học rau má sen Hydrocotyle bonariensis Comm ex Lam Hydrocotyle vulgaris L., (Apiaceae)” thực hiện, số liệu kết trung thực Theo hiểu biết tôi, tài liệu tham khảo phần mềm Scifinder, kết nghiên cứu luận án mới, chưa tác giả khác cơng bố cơng trình khác Tp Hồ Chí Minh, ngày 08 tháng 09 năm 2012 Nghiên cứu sinh Tôn Nữ Liên Hương i LỜI CẢM ƠN Với lịng biết ơn sâu sắc nhất, tơi xin ngỏ lời cảm ơn đến: - PGS.TS Nguyễn Ngọc Sương Cơ kính u tận tình hướng dẫn, quan tâm khích lệ tạo điều kiện thuận lợi giúp cho tơi hồn thành luận án - GS.TS Nguyễn Kim Phi Phụng Cơ kính u tận tình hướng dẫn dành thời gian sửa chữa, đóng góp nhiều ý kiến quý báu cho luận án, quan tâm động viên đường học tập nghiên cứu khoa học nhiều năm qua - GS.TSKH Nguyễn Cơng Hào quan tâm đóng góp nhiều ý kiến quý báu cho chuyên đề tiến sĩ luận án - GS.TS Nguyễn Minh Đức PGS.TS Trương Thế Kỷ quan tâm đóng góp nhiều ý kiến quý báu cho chuyên đề tiến sĩ luận án - PGS.TS Nguyễn Ngọc Hạnh PGS TS Trần Cơng Luận quan tâm đóng góp nhiều ý kiến quý báu cho luận án - PGS TS Trần Lê Quan, TS Tôn Thất Quang, TS Nguyễn Trung Nhân động viên, chia sẻ kinh nghiệm quý báu trình thực luận án - Tất q Thầy Cơ Bộ Mơn Hóa Hữu Cơ tạo điều kiện thuận lợi cho thực luận án - Phịng NMR, Phịng Hoạt Tính Sinh Học thuộc Viện Hóa học, Viện KHCN VN, Hà Nội, Phịng Phân Tích Trung Tâm, phịng Hợp chất Thiên nhiên Bộ môn Sinh học phân tử thuộc trường ĐH Khoa Học Tự Nhiên Tp.HCM - Phòng Sau Đại Học trường ĐH Khoa Học Tự Nhiên Tp.HCM - Toàn thể bạn hữu Khoa Khoa học tự nhiên Trường ĐH Cần Thơ Khoa Hóa Trường ĐH Khoa Học Tự Nhiên Tp.HCM - Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, ln bên cạnh động viên, khích lệ tạo điều kiện cho tơi học tập hồn thành luận án Tơn Nữ Liên Hương ii MỤC LỤC Trang  MỞ ĐẦU  NỘI DUNG CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 MÔ TẢ THỰC VẬT 1.1.1 Hydrocotyle bonariensis Comm ex L., Cây rau má sen hoa chùm 1.2 1.3 1.4 1.1.2 Hydrocotyle vulgaris L., Cây rau má sen hoa phân tầng THÀNH PHẦN HOÁ HỌC 1.2.1 Hydrocotyle asiatica [hay Centella asiatica (L.) Urb.] 1.2.2 Hydrocotyle bonariensis Comm ex Lam 1.2.3 Hydrocotyle leucocephala Cham 1.2.4 Hydrocotyle ramiflora Maximowicz 1.2.5 Hydrocotyle rannunculoides L.f 1.2.6 Hydrocotyle rotundifolia Roxb (water pennywort) 1.2.7 Hydrocotyle sibthorpioides Lam 1.2.8 Hydrocotyle umbellala Linn 1.2.9 Hydrocotyle vulgaris L CÁC NGHIÊN CỨU VỀ DƢỢC TÍNH 15 1.3.1 Hydrocotyle asiatica L 16 1.3.2 Hydrocotyle bonariensis Comm ex Lam 20 1.3.3 Hydrocotyle nepalensis Hook 20 1.3.4 Hydrocotyle sibthorpioides Lam 20 1.3.5 Hydrocotyle umbellata Linn 20 1.3.6 Hydrocotyle vulgaris L 20 1.3.7 Các loài Hydrocotyle khác 21 NHẬN XÉT 21 1.4.1 Nhận xét thành phần hoá học 21 1.4.2 Nhận xét hoạt tính sinh học 21 iii 1.4.3 Phân tích đánh giá tình hình nghiên cứu nƣớc CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 2.2 2.3 21 22 HOÁ CHẤT VÀ THIẾT BỊ 22 2.1.1 Hóa chất thiết bị dùng tách chiết, lập chất 22 2.1.2 Hóa chất thiết bị dùng thử nghiệm hoạt tính sinh học 23 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.2.1 Tách chiết, cô lập định danh hợp chất hữu 24 2.2.2 Thử nghiệm hoạt tính sinh học nhóm hợp chất hữu 25 THỰC NGHIỆM 28 2.3.1 Khảo sát nguyên liệu 28 2.3.2 Điều chế loại cao 29 2.3.3 Khảo sát tinh dầu 30 2.3.4 Trích ly, cô lập số hợp chất hữu hai lồi Hydrocotyle 31 2.3.5 Khảo sát hoạt tính sinh học 45 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 52 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HOÁ HỌC 52 3.1.1 Khảo sát cấu trúc hoá học hợp chất alkaloid 52 3.1.2 Khảo sát cấu trúc hoá học hợp chất cerebroside chất béo 56 3.1 3.1.3 Khảo sát cấu trúc hoá học hợp chất coumarin, dioxolane, lignan 73 3.2 3.1.4 Khảo sát cấu trúc hoá học hợp chất flavonoid 81 3.1.5 Khảo sát cấu trúc hoá học hợp chất carbohydrate 91 3.1.6 Khảo sát cấu trúc hoá học hợp chất steroid 95 3.1.7 Khảo sát cấu trúc hoá học hợp chất terpenoid 110 KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CÁC TINH DẦU 116 3.2.1 Khảo sát thành phần hoá học tinh dầu H bonariensis 117 3.2.2 Khảo sát thành phần hoá học tinh dầu H vulgaris 120 3.2.3 Nhận xét thành phần hoá học tinh dầu hai H bonariensis H vulgaris 3.3 121 KẾT LUẬN VỀ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA HAI CÂY THUỘC CHI HYDROCOTYLE iv 122 3.4 KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH SINH HỌC 125 3.4.1 Thử nghiệm Brine-shrimp 125 3.4.2 Thử nghiệm gây độc tế bào ung thƣ (in vitro) 126 3.4.3 Thử nghiệm kháng vi sinh vật kiểm định 128 3.4.4 Thử nghiệm khả làm lành vết thƣơng chuột 129 3.4.5 Thử nghiệm khả kháng oxy hoá 129 3.4.6 Nhận định chung hoạt tính nhóm chất trích từ rau má sen 130 3.5 NHẬN XÉT VỀ HOÁ THỰC VẬT CỦA CHI HYDROCOTYLE CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN 131 135 KẾT LUẬN 135 KIẾN NGHỊ HƢỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO 139  DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC ĐÃ CÔNG BỐ 140  TÀI LIỆU THAM KHẢO 149  PHỤ LỤC v CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN ÁN [α]D : lực triền quang (Specific Optical Rotation) CTPT : công thức phân tử CS : cell survival, tế bào sống DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer DMSO : DiMethyl SulfOxid EI-MS : (Ionization by Electron Impact) khối phổ ion hóa va chạm điện tử FT-MS : (Fourier transform-Mass Spectroscopy) khối phổ biến đổi Fourier GC-MS : (Gas Chromatography-Mass Spectroscopy) sắc ký khí ghép khối phổ H-H COSY : (H-H COrrelation SpectroscopY) tương quan H-H HMBC : (Heteronuclear Multiple Bond Coherence) tương quan H-C qua 2, nối HSQC : (Heteronuclear Single Quantum Coherence) tương quan H-C qua nối HR-ESI-MS : (High Resolution ElectroSpray Ionization-Mass Spectrometry khối phổ ion hóa kỹ thuật phun điện phân giải cao IR : (Infrared Spectrocospy), phổ hồng ngoại LC-MS : (Liquid Chromatography-Mass Spectroscopy) sắc ký lỏng ghép khối phổ M : khối lượng phân tử NMR : (Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) phổ cộng hưởng từ hạt nhân OD : (optical density) mật độ quang vi RP-18 : (Reversed Phase C-18), silica gel pha đảo SKC : sắc ký cột SKLM : sắc ký lớp mỏng UV-Vis : (Ultraviolet visible Spectroscopy), phổ tử ngoại- khả kiến Các ký hiệu mũi s : (singlet), mũi đơn brs : (broad singlet), mũi đơn rộng d : (doublet), mũi đôi dd : mũi đôi đôi (doublet – doublet) t : (triplet), mũi ba dt : (doublet – triplet), mũi đôi ba m : (multiplet), mũi đa J : (coupling constant), số ghép Các giá trị thử nghiệm EC50 : (50% Eliminatory Concentration), nồng độ loại trừ 50% IC50 : (50% Inhibitory Concentration), nồng độ ức chế 50% LC50 : (50% Lethality Concentration), nồng độ gây chết 50% Các gốc hóa học Ara : Arabinose Glc : Glucose GlcA : Glucuronic Acid Rha : Rhamnose Tig : Tigloyl Các từ nghĩa carbon thủ tính : carbon bất đối, tâm chiral chi phương : mạch hở hữu triền : quay phải tả triền : quay trái vii DANH MỤC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, BẢNG BIỂU Trang  HÌNH ẢNH Hình 1.1 Hydrocotyle bonariensis Comm ex L., Cây rau má sen hoa chùm Hình 1.2 Hydrocotyle vulgaris L., Cây rau má sen hoa phân tầng Hình 2.1 Cây Hydrocotyle bonariensis 28 Hình 2.2 Cây Hydrocotyle vulgaris 28 Hình 2.3 Xử lý chuột để thử nghiệm hoạt tính làm lành vết (cấp độ 2) 47 Hình 3.1 Cấu trúc hố học lực triền quang leucocerebroside -Lb4 mucusoside Hình 3.2 58 Hình ảnh minh hoạ phân mảnh nhờ phổ FT-MS hợp chất Hb-Ea5 59 Hình 3.3 Hình ảnh minh hoạ phân mảnh thủy phân hợp chất Hb-Ea6 64 Hình 3.4 Sắc ký mỏng hợp chất Hb-Ea6 hệ giải ly khác 69 Hình 3.5 Sắc ký mỏng hợp chất Hb-Ea5 (vết bên trái) so với Hb-Ea6  SƠ ĐỒ 69 Sơ đồ 2.1 Qui trình điều chế cao lập chất từ tồn H bonariensis 49 Sơ đồ 2.2 Qui trình điều chế cao cô lập chất từ H bonariensis 50 Sơ đồ 2.3 Qui trình điều chế cao lập chất từ tồn H vulgaris 51  BẢNG BIỂU Bảng 2.1 Độ ẩm phận hai H bonariensis H vulgaris 29 Bảng 2.2 Khối lượng thu suất loại cao (so với nguyên liệu khô ban đầu) hai khảo sát 30 Bảng 2.3 Sắc ký cột cao ether dầu hỏa toàn H bonariensis, sơ đồ 2.1 35 Bảng 2.4 Sắc ký cột cao chloroform toàn H bonariensis, sơ đồ 2.1 35 Bảng 2.5 Sắc ký cột cao ethyl acetate toàn H bonariensis, sơ đồ 2.1 36 Bảng 2.6 Sắc ký cột cao methanol toàn H bonariensis, sơ đồ 2.1 36 viii hợp chất alkaloid, cerebroside, lactone, flavonol glycoside tương ứng, sterol glucoside tương ứng, triterpen mạch hở, khung lupan khung ursan, hợp chất khác hydratecarbon, ethylglucoside, dioscin, sterone, acid béo Đối với Hydrocotyle vulagaris, cô lập hợp chất trùng với chất tương ứng Hydrocotyle bonariensis, hợp chất flavonol glycoside tương ứng, sterol glucoside tương ứng, triterpen khung ursan, butyrolactone lignan; ngồi lập hợp chất flavanol glycoside từ cao phân cực, (thực lập chất từ lượng mẫu ngun liệu hơn) Từ phận lá, hoa, thân, rễ nguyên liệu tươi, chưng cất lôi nước thu loại tinh dầu phận Sử dụng GC-MS xác định thành phần hóa học cấu tử tinh dầu Tinh dầu hai –rau má sen- có nhóm chất gây mùi đặc trưng khác với rau má thường, monoterpene α-pinene, 2β-pinene, dl-limonene; đồng thời có mặt sesquiterpenoid đặc trưng chi Hydrocotyle farnesene, caryophyllene oxide Từ hợp chất cô lập hai loài Hydrocotyle bonariensis Hydrocotyle vulgaris hợp chất lồi khác chi, trình bày phần tổng quan, rút nét đặc trưng hoá–thực vật chi Hydrocotyle Chi Hydrocotyle có nhóm hợp chất hữu bậc hai như: tinh dầu, hợp chất acetylenic, ceramide, cerebroside, steroid (khung sườn stigmastan spirostan), triterpenoid (khung sườn oleanan, ursan, secooleanan lupan), flavonoid (khung sườn flavonol khung sườn flavanol mà vừa phát hiện), đặc biệt có nhóm chất alkaloid khung isoquinolin nhóm dibenzylbutyrolactone lignan nhóm  Về kết khảo sát hoạt tính sinh học hai lồi thuộc chi Hydrocotyle Với thử nghiệm Brine-shrimp: Các cao ether dầu hoả hai H bonariensis H vulgaris có độc tính với ấu trùng Artemia, giá trị LC50 nhỏ 30 μg/ml Ngồi ra, có cao chloroform, tinh dầu tinh dầu thân H bonariensis có độc tính với ấu trùng, giá trị LC50 khoảng 50-57 μg/ml, chứng tỏ hoạt tính gây chết Artemia H bonariensis mạnh H vulgaris 136 Về khả gây độc dòng tế bào ung thư người (in vitro): Tinh dầu cao alcol tổng H bonariensis có khả gây độc tế bào ung thư tim (RD) với giá trị IC50 (µg/ml) 16,10 9,90 Tinh dầu H bonariensis cịn có độc tính với tế bào ung thư gan (Hep-G2), IC50 = 19,93 µg/ml Ngồi ra, số loại cao thành phần H bonariensis có cao chloroform có độc tính yếu tế bào ung thư vú (MCF-7) Hợp chất acid ursolic lập từ hai có độc tính với tế bào ung thư biểu mơ (KB), gan (Hep-G2) phổi (Lu) với giá trị IC50 (µg/ml) 16,93; 24,00 24,00 Về hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định: Chỉ tinh dầu H bonariensis có tính kháng khuẩn, kháng dịng vi khuẩn gram âm E coli P aeruginosa, dòng khuẩn gram dương S aureus kháng nấm men F oxysporum Về hoạt tính chữa phỏng: Trong thử nghiệm in vivo chữa phỏng, cao ethyl acetate cao butanol có khả làm lành vết cấp độ chuột Thời gian giúp vết thương chuột bị lành 11 đến 16 ngày, lâu ngày so với dùng thuốc Madecassol, nhanh rửa vết nước muối sinh lý (lành vết thương sau 23 ngày) Về khả kháng oxy hóa: Hợp chất hyperoside (36) cô lập từ hai biết khả kháng oxy hóa, thử nghiệm DPPH cho kết tốt Nhìn chung: Kết thử nghiệm cho thấy Hydrocotyle bonariensis có hoạt tính vượt trội Hydrocotyle vulgaris Các nhóm chất từ H bonariensis có khả ức chế tế bào ung thư môi trường nuôi cấy tốt, nên định hướng H bonariensis thảo dược cần nghiên cứu kỹ dược tính Các hợp chất lập gồm OH O H3CO H3CO 4a 14 a H H3CO N 14 13 8a H3CO OCH3 4a H OH N 14 a 14 13 4" 8a HO OCH3 OCH3 OCH3 Tetrahydropalmatin (121) (-)-(S)-Xylopinine (122) (H bonariensis) (H bonariensis) 2' 15 OH O NH 1" 3" 12 a 12 10 12 a 12 10 18' 1' OH 19' OH 18 O 23 OH 19 13 1-O-(-D-Galactopyranosyl)-(2S,3S,4R,18E)-2-[(2'R)-2'hydroxynonadecanoylamino]tricosa-18-ene-1,3,4-triol H bonariensis) (123) 137 9' O 1' 16' OH OH O 4"' HO NH O OH O OH 1-O-(-D-Galactopyranosyl)-(2S, 3S,4R,8E)-2(14'-methylpentadecanoylamino)tricosa-8-ene-1,3,4-triol (H bonariensis)  10 HO COOH 10 12 OH 1-O-(-D-Galactopyranosyl)-(2S,3S,4R,9'E)-2(hexadeca-9'-enoylamino)octadecane-1,3,4-triol  H bonariensis) H3C 2 2' O HO O3 1' 4' O O HO Acid hexacosanoic (126) (H bonariensis) 23 10 16 OH OH 26 16' NH OH O HO 18 1' 11 OH OH 1" 3" 10' 2' O 2' 4' HO HO O 2-(4'-Methoxyphenyl)-1,3-dioxolane (H bonariensis) (130) Esculetine (129) (H.bonariensis) O 5' 2' 3' HO 2' 1' O 3' 4' HO 6' 5' 10 OH OH O 2' 1' O 10 HO OH 3' 4' 6' 5' OH 4'' OH HO Kaempferol (37) (33) (H bonariensis) 2'' 3'' OH O Quercetin OH 5'' O 6'' OH 3' 4' 2' 1' 5' 6' O HO O O 4'' HO HO 1'' 2'' 3'' (36) 3' 4' 6' 5' 10 O OH OH O 5'' O 6'' OH O Hyperoside 2' 1' OH 1'' (38) Astragalin (H bonariensis) (H bonariensis; H vulgaris) (H bonariensis) 10 CH3 OH OH OH CH2 Ethyl D-glucopyranoside (132) (H vulgaris) OH OH O OH1' OH O  O  O        O  O   O   6" O     6''' O O HO HO  O O Hinokinin (127) (H bonariensis; H vulgaris)    O O   O HOHO O 1'' O O OH 1'" 1' OH OH O 3' 4' OCH3 Hesperidin (131) (H vulgaris) Savinin (128) (H bonariensis) 29 29 29 29 21 21 18 21 26 24 20 25 25 RO 14 O RO 6 O Sitosterol (95) 27 26 Spinasterol (97) (H bonariensis) HO HO HO 25 29 28 Squalene (138) (H bonariensis) 138 Stigmastan-3,6-dione (135) (H bonariensis) O OH OH O 23 24 30 19 14 25 17 25 17 24 18 19 Stigmassterol (96) (H bonariensis; H vulgaris) (H bonariensis) R = Glc Sitosterol 3-O-glucopyranoside (134) Stigmassterol 3-O-glucopyranoside (136-a) Spinasterol 3-O-glucopyranoside (136-b) 18 26 20 26 24 20 14 14 R=H 21 19 19 26 24 17 17 RO 20 18 HO 6' 2' 1' O OH Sucrose (133) (H bonariensis) 5' OH 29 O 21 20 18 17 19 6' O HO 6''' HO HO O 1''' 2' 29 27 30 O O 1' 13 6'' (137) Dioscin (H bonariensis) 24 26 17 27 23 (139) Lupeol (H bonariensis) 15 17 13 28 15 19 18 12 25 26 HO O O 1'' HO OH HO OH 19 21 18 22 20 20 12 25 OH O 30 25 22 16 4' 26 COOH 28 27 HO 24 23 Acid ursolic (140) (H bonariensis; H vulgaris) KIẾN NGHỊ HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO  Khảo sát tiếp phân đoạn cịn lại hai lồi rau má sen luận án; cô lập thêm hợp chất cerebroside thủy phân để xác định mạch béo phân tử  Thử nghiệm hoạt tính sinh học số hợp chất cô lập  Khảo sát thêm số loài rau má sen khác thuộc chi Hydrocotyle mọc số vùng khác Việt Nam để xác nhận rõ đặc trưng hoá–thực vật loài thuộc chi Hydrocotyle mọc Việt Nam 139 TÀI LIỆU THAM KHẢO Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đăm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn, (2003), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập II, NXB Khoa học kỹ thuật, 582 – 594 Đỗ Tất Lợi, (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB Y học, 631-632 Nguyễn Văn Đậu, Nguyễn Văn Thuấn, Đỗ Thị Thanh, Phân lập số hợp chất từ vối, (2007), Tuyển tập cơng trình Hội nghị Khoa học cơng nghệ hóa hữu tồn quốc, lần IV, trang 311-315 Phạm Hoàng Hộ, (2000), Cây cỏ Việt Nam, Quyển II, NXB Trẻ, 477-479 Phạm Nguyễn Kim Tuyến, Bùi Thị Thanh Thúy, Nguyễn Kim Phi Phụng, (2010), Study on the chemical constituents of Hedyotis symplociformis (Pit.) Pham Hoang, Vietnam Journal of Chemistry 48(4B), 338-343 Võ Văn Chi, Trần Hợp, (1999), Cây cỏ có ích Việt Nam, I, NXB Giáo dục, 509 Adams Alicia Arias, Noris John A., Marbry T.J., (1998), A flavonoid from Hydrocotyle umbellata L (Umbelliferae, Hydrocotyleae), Revista Latinoamericana de Quimica 20(2), 67-68 Appa Rao M.V.R., Srinivasan K., Koteswara Rao, (1977), The effect of Centella asiatica on the general mental ability of mentally retarded children, Indian Journal Psychiat 19 (4), 54 – 59 Asakawa Yoshinori, Matsuda Reiko, Takemoto Tsunematsu, (1982), Mono- and sesquiterpenoids from Hydrocotyle and Centella species, Phytochemistry 21(10), 2590-2592 10 Aseer Manilal, S Sujith, G Seghal Kiran, Joseph Selvin, Chippu Shakir, (2009), Cytotoxic potential of red alga, Laurencia brandenii collected from the Indian coast, Global Journal of Pharmacology 3(2), 90-94 11 Atta- Ur- Rahman, Vigar Uddin Ahmad, (1992), 13C-NMR of Natural product, Vol 2, Plenum Press 140 12 Babu T.D., Kuttan G., Padikkala J., (1995), Cytotoxic and anti-tumour properties of certain taxa of Umbelliferae with special reference to Centella asiatica (L.) Urban, J of Ethnopharmacology 48, 53-57 13 Bohlmann Ferdinand, Zdero Christa, (1975), Polyacetylenic compounds, A new polyyne from Centella species, Chemische Berichte 108(2), 511-514 14 B Brinkhaus, M Lindner, D Schuppan, E.G Hahn, (2010), Chemical, pharmacological and clinical profile of the East Asian medical plant Centella asiatica, Phytomedicine 7(5), 427-448 15 Chidananda Swamy Rumalla, Zulfiqar Ali, Aruna D Weerasooriya, Troy J Smillie, Ikhlas A Khan, (2010), Two new triterpene glycosides from Centella asiatica, Planta Medica 76, 1016-1021 16 Cho Eui Hwan, Kim II Hyuk, (1988), Studies on the pharmaco-constituents of Hydrocotyle japonica Makino (II), Yakhak Hoechi 32(4), 281-286 17 Chun Ching-Ling, Ya-Ling Hsu, Po-Lin Kuo, Lizang Tzun Ling, (2005), Asiatic acid, a triterpene, induces apoptosis and cell cycle arrest through activation of extracellular signal-regulated kinase and P38 mitogen-activated protein kinase pathways in human breast cancer cells, J of Pharmacology and Experimental Therapeutics 313(1), 333-344 18 Corsaro Maria M., Della Greca Marina, Fiorentino Antonio, Monaco Pietro, Previtera Lucio, (1995), Ranuncoside VII - a new oleane glycoside from Hydrocotyle ranunculoides, Natural Product Letters 6(2), 95-102 19 Della Greca Marina, Fiorentino Antonio, Monaco Pietro, Previtera Lucio, (1994), Polyoxygenated oleane triterpenes from Hydrocotyle ranunculoides, Phytochemistry 35(3), 201-204 20 Della Greca Marina, Fiorentino Antonio, Monaco Pietro, Previtera Lucio, (1994), Oleane glycosides from Hydrocotyle ranunculoides, Phytochemistry 36(6), 14791483 21 Didin Mujahidin and Sven Doye, (2005), Enantioselective synthesis of (+)-(S)laudanosine and (-)-(S)-xylopinine, European Journal of Organic Chemistry 13, 2689-2693 22 Freddy R., Yoshihisa T., Kazuyoshi K., Coralia O., Carmenza D., Ricardo A., Yoshinori F., Mitsunobu S., Masato O., Tetsuya O., Sharif A., (2006), 141 Immunosuppressive diacetylenes, ceramides and cerebrosides from Hydrocotyle leucocephala, Phytochemistry 67(5), 1143-1150 23 F.X Marquart, Hastang F., Simeon A., Birembaut P., Wegrowski Y., (1999), Triterpenes from Centella asiatica stimulate extracellular matrix accumulation in rat experimental wounds, European Journal of Dermatology 9(4), 289-296 24 Haddad Claudia R B., Mazzafera Paulo, (1999), Sodium chloride-induced leaf senescence in Hydrocotyle bonarensis Lam and Foeniculum vulgare L., Brazilian Archives of Biology and Technology 42(2), 161-168 25 Hiller K., Voigt Gabriele, Koeppel H., Otto A., (1979), Isolierung von Quercetin-3O-(6-O-α-L-arabinopyranosyl)-β-D-galaktopyranosid, einem neuen Flavonoid aus Hydrocotyle vulgaris L., Pharmazie 34, 192-193 26 Hisashi Matsuda, Toshio Morikawa, Hiori Ueda, Masayuki Yoshikawa, (2001), Medicinal foodstuffs XXVII Saponin constituents of Gotu Kola: Structures of new ursane- and oleanane-type oligoglycosides, Centellasaponins B, C and D, from Centella asiatica cultivated in Sri Lanka, Chemical Pharmaceutical Bulletin 49(10), 1368-1371 27 Hu Hongwei., (2006), A Chinese medicinal composition for treating urinary calculus, Faming Zhuanli Shenqing Gongkai Shuomingshu, Patent: 20060524, (Asiapatent) 28 Hyun Gyu Park, Ho Nam Chang, Jonathan S Dordick, (2001), Chemoenzymatic synthesis of sucrose-containing aromatic polymers, Biotechnology and Bioengineering 72(5), 546-562 29 Inhee Mook-Jung, Ji-Eun Shin, Sung Hwan Yun , Kyoon Huh, Jae Young Koh, Hyung Keun Park, Sang-Sup Jew, Min Whan Jung, (1999), Protective effects of asiaticoside derivatives against beta-amyloid neurotoxicity, Journal of Neuroscience Research 58(3), 417-425 30 Irina Tsoy Nizamutdinova, Jae Ju Jeong, Guang Hua Xu, Seung Ho Lee, Sam Sik Kang, Yeong Shik Kim, Ki Churl Chang, Hye Jung Kim, (2008), Hesperidin, hesperidin methyl chalone and phellopterin from Poncirus trifoliata (Rutaceae) differentially regulate the expression of adhesion molecules in tumor necrosis factor α-stimulated human umbilical vein endothelial cells, International Immunopharmacology 8, 670-678 142 31 Jacinda T James, Ian A Dubery, (2009), Review: Pentacyclic triterpenoids from the medicinal herb, Centella asiatica L Urban, Molecules 14, 3922-3941 32 Jean Jules Kezetas Bankeu, Sufuan Awad Alkarim Mustafa, Anar Sahib Gojayev, Bruno Djakou Lenta, Diderot Tchamo Noungoue, Silvere Augustin Ngouela, Khalid Asaad, Mohamed Iqbal Choudhary, Sean Prigge, Akif Alekper Guliyev, Augustin Ephrem Nkengfack, Etienne Tsamo and Muhammad Shaiq Ali, (2010), Ceramide and Cerebroside from the stem bark of Ficus mucuso (Moraceae), Chemical Pharmaceutical Bulletin 58(12), 1661-1665 33 Jiang Z.Y, Zhang X.M., Zhou J., Chen J.J., (2005), New triterpenoid from Centella asiatica, Helvetica Chimica Acta, 88, 297-204 34 Jim-Min Fang, Shyi-Tai Jan, Yu-Shia Cheng, (1985), (+)-Calocedrin, a lignan from Calocedrus formosana, Phytochemistry 24(8), 1863-1864 35 Jim-Min Fang, Ming-Ying Liu, Yu-Shia Cheng, (1990), Lignan from wood of Calocedrus formosana, Phytochemistry 29(9), 3048-3049 36 Jing Tang, Xiangjie Meng, Hao Liu, Jianglin Zhao, Ligang Zhou, Minghua Qiu, Xiaming Zhang, and Fuyu Yang, (2010), Antimicrobial activity of sphingolipids isolated from the stems of Cucumber (Cucumis sativus L.), Molecules 15, 92889297 37 John Goad, Toshihiro Akihisa, (1993), Analysis of sterol, Blankie Academic & Professional Pub 38 K C.Wong, G L Tan, (1994), Essential oil of Centella asiatica (L.) Urb., Journal of Essential Oil Research 6(3), 307-309 39 Kohei Kazuma, Naonobu Noda, Masahiko Suzuki, (2003), Malonylated flavonol glycosides from the petals of Clitoria ternatea, Phytochemistry 62, 229-237 40 Kwon Hak Cheol, Zee Ok Pyo, Lee Kang Ro, (1998), Two new monogalactosylacylglycerols from Hydrocotyle ramiflora, Planta Medica 64(5), 477-479 41 Li Jiang, Lin Jun, Huang Zhongshi, Lin Xing, Huang Rebin, (2004), Determination of total flavones in Hydrocotyle sibthorpiodes, Guangxi Yike Daxue Xuebao 21(4), 491-492 143 42 Likhiwitayawuid K., Angerhofer C K., Chai H., Pezzuto J M., Cordell G A., Ruangrungsi N., (1993), Cytotoxic and antimalarial alkaloids from the tubers of Stephania pierrei, Journal of Natural Products 56(9), 1468-1478 43 Ling Tiejun, Tao Xia, Xiaochun Wan, Daxiang Li, Xiaoyi Wei, (2006), Ceramides from the roots of Serratula chinensis, Molecules 11, 677-683 44 Ma Chengkun, (2005), Analgesis unguentum for treating rheumatic arthritis, Faming Zhuanli Shenqing Gongkai Shuomingshu, Patent: 20050316, (Asiapatent) 45 Madanecki P., Wierzchowka Renke K., Guzewska J., Glowniak P., Ochocka J.R.; Furmanowa M., (2004), The solid phase microextraction method (SPME) in the analysis of monoterpen fraction of essential oils obtained from medicinal plants of Apiaceae family, Herba Polonica 50(3/4), 52-59 46 Maquart F.X., (1990), Stimulation of collagen synthesis in fibroblast cultures by a triterpene extracted from Centella asiatica, Connective Tissue Research 24(2), 107120 47 McKane L and Kandel J., (1996), Microbiology: Essentials and Applications, Mc Graw-Hill Inc New York, 2nd edition, 110 48 Minija Janardhanan, John Ernest Thoppil, (2002), Chemical composition of two species of Hydrocotyle (Apiaceae), Acta Pharmaceutica (Zagreb, Croatia), Published by Croatian Pharmaceutical Society 52(1), 67-69 49 Minija Janardhanan, John E Thoppil, (2002), Herbs and spice essential oils (Therapeutic, flavour and aromatic chemical of Apiaceae), Discovery Publishing House, New Delhi-110002 (India), 57 50 Muslim Tanvir, Chowdhury, Tofail A., Mosihuzzaman M., (1995), Isolation and characterization of a triterpen acid from Centella asiatica (thankuni) leaves, Dhaka University Journal of Science, 43(2), 223-228 51 Nikawa Miki, Wu Afu, Sato Takahiko, Nagase Hisamitsu, Kito Hideaki, (1995), Effects of Chinese medicinal plant extracts on mutagenicity of Trp-P-1, Natural Medicines 49(3), 329-331 52 Philip Skehan, Rista Storeng, Dominic Scudiero, Anne Monks, James McMahon, David Vistica, Jonathan T Warren, Heidi Bokesch, Susan Kenney and Michael R Boyd, (1990), New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer-drug screening, Journal of National Cancer Institute 82(13), 1107-1112 144 53 Piao MJ., Kang KA., Zhang R., Ko DO, Wang ZH., You HJ., Kim HS., Kim JS., Kang SS., Hyun JW., (2008), Hyperoside prevents oxidative damage induced by hydrogen peroxide in lung fibroblast cells via an antioxidant effect, Biochimica et Biophysica Acta 1780(12), 1448-1457 54 Pinhas H., Bondiou J.C., (1967), Sur la constitution chimique de la partie glucidique du madecassoside, Bulletin de la Societe Chimique de France 6, 18881890 55 P.K Inamdar, R.D.Yeole, A.B Ghogare, N.J.de Souza, (1996), Determination of biologically active constituents in Centella asiatica, Journal of Chromatography A 742(1-2), 127-130 56 Pointel J.P., (1987), Titrated extract of Centella asiatica in the treatment of venous insufficiency of the lower limbs, Angiology 38(1), 46-50 57 Qin Luping, Chen Yao, Chen Hanchen, (2003), Preparation and new application of total glycoside of Hydrocotyle asitica, Faming Zhuanli Shenquing Gongkai Shuomingshu, Patent: 20030101, (Asiapatent) 58 R.H.F Manske, (1956), The alkaloids of fumariaceous plants Corydalis solida (L.) Swartz, Canadian Journal of Chemistry, 34(1), Issued by The National Research Council of Canada 59 Sahu Niranjan P., Roy Subodh K., Mahato Shashi B., (1989), Spectroscopic determination of structures of triterpenoid trisacharides from Centella asiatica, Phytochemistry 28(10), 2852-2854 60 Schulte K.E., Ruecker G., Abdul Bary, (1973), Constituents of medicinal plants XXVII, Polyacetylenes aus Hydrocotyle asiatica L., Muenster, Archive der Pharmazie 306(3), 197-209 61 Seyed Medhi Razavi, Saber Zahsi, Gholamreza zarrini, Hossein Nazemiych, Sariych Mohammadi, (2009), Biological activity of quercetin 3-O-glucoside, a known plant flavonoid, Rusian Journal of Bioorganic Chemistry 35(3), 376-378 62 Shaojang Deng, Biao Yu, Yongzheng Hui, Hai Yu, Xiuwen Han, (1999), Synthesis of three diosgenyl saponins: dioscin, polyphyllin D, and balanitin 7, Carbohydrate Research 317, 53-62 145 63 Shashi B Mahato, Asish P Kundu (1994), “13C NMR spectra of pentacyclic triterpenoids – a compilation and some salient features”, Phytochemistry 37(6), 15171575 64 Shigematsu Nobuharu, Kouno Isao, Kawano Nobusuke, (1982), Quercetin 3-(6”caffeoylgalactoside) from Hydrocotyle sibthorpioides, Phytochemistry 21(8), 21562158 65 Shukla Y.N., Srivastava R., Tripathi A.K., Prajapati V., (1999), Asiaticosideinduced elevation of antioxidant level in healing wounds, Phytotherapy Research, 113, 50-54 66 Shukla Y.N., Srivastava R., Tripathi A.K., Prajapati V., (1999), In vitro and in vivo wound healing activity of asiaticoside isolated from Centella asiatica, Journal of Ethnopharmacology 65, 1-11 67 Si Wei Chen, Wen Juan Wang, Wei Jing Li, Rui Wang, Yu Lei Li, Yan Ni Huang and Xin Liang, (2006), Anxiolytic-like effect of asiaticoside in mice, Pharmacology Biochemistry and Behavior 85(2), 339-344 68 Soumyanath Amala, Zhong Yong-Ping, Gold Sandra A., Yu Xiaolin, Koop Denis R., Bourdette Denis, Gold Bruce G., (2005), Centella asiatica accelerates nerve regeneration upon oral administration and multiple active fractions increasing neurite elongation in-vitro, Journal of Pharmacy & Pharmacology 57(9), 1221-1229 69 Srivastava Ritu, Shukla Y.N., (1996), Some chemical constituents from Centella asiatica, Indian Drugs 33(5), 233-234 70 Turibio Kuiate Tabopda, Anne-Claire Mitaine-Offer, Tomofumi Miyamoto, Chiaki Tanaka, Jean-Franỗois Mirjolet, Olivier Duchamp, Bonaventure Tchaleu Ngadjui, Marie-Aleth Lacaille-Dubois, (2012), Triterpenoid saponin from Hydrocotyle bonariensis Lam, Phytochemistry 73, 142-147 71 Vlietinck A.J., VandenBerghe D.A., (1991), Can ethnopharmacology contribute to the development of antiviral drugs? Journal of Ethnopharmacology 32, 141-153 72 Vogel H.G., De Souza N.J., D’Sa A., Hoechst A.G., (1990), Effect of terpenenoids isolated from Centella asiatica on granuloma tissue, Acta Therapeutica 16(4), 285298 73 Voigt Gabriele, Hiller K., Franke P., (1981), Zur struktur der flavonoide aus Hydrocotyle vulgaris L., Pharmazie 36(5), 377-379 146 74 Ya-Ching Shen, Yun-Sheng Lin, Shaw-Men Hsu, Ashraf Taha Khlil, Shih Seng Wang, Ching-Te Chien, Yao-Haur Kuo, Chang-Hung Chou, (2007), Tasumatrols P-T, Five new taxoids from Taxus sumatrana, Helvetica Chimica Acta 90, 13191329 75 Yamada K., Hara E., Miyamoto T., Higuchi R., (1998), Isolation and structures of biologically active ganglioside molecular species from the sea cucumber Cucumaria echinata, European Journal of Organic Chemistry 2, 371-378 76 Yang Qu, Min Liu, Zhoahua Wu, Huiyuan Gao, Bohang Sun, Qiuju Su, Lijun Wu, (2007), 2,3,9,10-Tetraoxygenated protoberberine alkaloid from Corydalis yanhusuo W.T.Wang, Asian Journal of Traditional Medicines 2(2), pp 61-65 77 Yoosook C., Bunyapraphatsara N., Boonyakiat Y., Kantasuk C., (2000), Antiherpes simplex virus activities of crude water extracts of Thai medicinal plants, Phytomedicine 6(6), p 411-419 78 Yu Hongwei, Li Bogang, Chen Xiaozhen, Li Changsong, Zhang Guolin, (2010), Chemical study on Evodia vestita, Chinese Journal of Applied & Environmental Biology 16 (1), 72-75 79 Yu Q.L., Dua H.Q., Gao W.Y., Takaishi Y., (2007), A new triterpene and a saponin from Centella asiatica, Chinese Chemical Letters, 18(1), 62-64 80 Yukimi Sasaki, Aki Matsushita, Tsutomu Warashina, Toshio Miyase, Hiroshi Noguchi, David Vander Velde, (2004), Hydrocotylosides I–VII, new oleanane saponins from Hydrocotyle sibthorpioides, Journal of Natural Products 67(3), 384388 81 Yayli Nurettin, Yildirim Nuri, Usta Asu, Özkurt Serpil, Akgün Vildan, (2003), Chemical constituents of Campanula lactiflora, Turkish Journal of Chemistry 27, 749-755 82 Zhao Feng peng, Dieter Strack, Alfred Baurmert, Ramanathan Subramaniam, Ngoh Khang Goh, Tet Fatt Chia, Swee Ngin An, Lian Sai Chia, (2003), Antioxydant flavonoids from leaves of Polygum hydropiper L., Phytochemistry 62, 219-228 147 Luận án địa web tham khảo 83 Duarte N., (2008), Structural characterization and biological activities of terpenic and phenolic compounds isolated from Euphorbia lagascae and Euphorbia tuckeyana, PhD Thesis, University of Lisbon 84 Warinthorn Chavasiri, Wasana Prukchareon, Pattara Sawasdee, Siriporn Zungsontiporn, (2005), Allelochemical from Hydrocotyle umbellata Linn., Fourth World Congress on Allelopathy 85 Yu-kuan Chou, (2005), Studies on the essential oil constituent from the Hydrocotyle sibthorpioides Lam and biological assays, Chung Yuan Christian University Electronic Theses and Dissertations, etd-0816105-170131 86 en.wikipedia.org/wiki/Hydrocotyle_bonariensis, (trích dẫn ngày 15/09/2012) 87 arthritis.albb-a.com/category/arthritis-treatment (trích dẫn ngày 15/09/2012) 88 Acute toxicity test on brine shrimp (Artemia salina), Laboratory work no.6, Laboratory of ecotoxicology and LCA, Department of Environmental Chemistry, ICT Prague, (trích dẫn ngày 15/09/2012) 148 CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC ĐÃ CƠNG BỐ BÁO CÁO POSTER HỘI NGHỊ KHOA HỌC Tôn Nữ Liên Hương, Nguyễn Kim Phi Phụng, Nguyễn Bá Vi, Nguyễn Ngọc Sương, Góp phần tìm hiểu thành phần hóa học Rau má sen Hydrocotyle bonariensis L họ Apiaceae, Tuyển tập Hội nghị Khoa học lần thứ Trường ĐH KHTN TPHCM 11 / 2006 Tôn Nữ Liên Hương, Nguyễn Kim Phi Phụng, Nguyễn Ngọc Sương, Poster No 52, Chemical constituents of volatile oil and organic extract from Hydrocotyle bonariensis L (Apiaceae), Intensive Course “Medicinal Chemistry” EU-ASIA LINK Medicinal Chemistry, 2006 Tôn Nữ Liên Hương, Nguyễn Kim Phi Phụng, Nguyễn Ngọc Sương, Paper (p.68-70) and Oral presentation, Contribution to the study on chemical constituents of Hydrocotyle vulgaris (L.), family Apiaceae, The 7th VietnamJapan Joint Seminar on Collarboration in Advanced Science and Technology, Organized by University of Science, VNU-HCMC, Kyoto Institute of Technology, March 6-7, 2009 Tôn Nữ Liên Hương, Nguyễn Kim Phi Phụng, Nguyễn Ngọc Sương, Poster 57, Isolation of some phenolic and glycosidic compounds from Hydrocotyle bonariensis L & Hydrocotyle vulgaris L family Apiaceae, Quyển tóm tắt Tuyển tập Hội nghị Khoa học lần thứ Trường ĐH KHTN TPHCM, 2010 Tôn Nữ Liên Hương, Nguyễn Kim Phi Phụng, Nguyễn Ngọc Sương, Poster, Contribution to the study on the bioactivities of Hydrocotyle bonariensis L & Hydrocotyle vulgaris L., family Apiaceae, Hội nghị Khoa học lần thứ Trường ĐH KHTN TPHCM, 2010 149 BÀI BÁO Tôn Nữ Liên Hương, Nguyễn Kim Phi Phụng, Nguyễn Ngọc Sương, Chemical examination of Hydrocotyle bonariensis (L.), family of Apiaceae, Tạp chí Hóa học, 47(5), 542-546, 2009 Tơn Nữ Liên Hương, Nguyễn Kim Phi Phụng, Nguyễn Ngọc Sương, Contribution to the study on chemical constituents of Hydrocotyle vulgaris (L.), Apiaceae, Tạp chí Phát triển Khoa Học & Cơng Nghệ, NXB Đại học quốc gia, TPHCM, 12(10), 29-32, 2009 Tơn Nữ Liên Hương, Lê Hồng Ngoan, Nguyễn Kim Phi Phụng, Nguyễn Ngọc Sương, Thành phần hóa học rau má sen Hydrocotyle bonariensis Hydrocotyle vulgaris, họ Ngò (Apiaceae), tỉnh Tiền giang thành phố Cần thơ, Tạp chí Khoa học Đại học Cần Thơ, 22b, 190-199, 2012 Tôn Nữ Liên Hương, Nguyễn Ngọc Sương, Study on bioactivities and chemical constituents of Hydrocotyle bonariensis (L.), family Apiaceae, Tạp chí Hóa học, 50(4A), 187-190, 2012 150 ...ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  TÔN NỮ LIÊN HƢƠNG KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI CÂY RAU MÁ LÁ SEN HYDROCOTYLE... dung thực luận án khảo sát thành phần hóa học hai cây, phân tích xác định hợp chất hữu bậc hai thành phần tinh dầu Bên cạnh đó, vài thử nghiệm hoạt tính sinh học thực cao trích, tinh dầu vài hợp... 3.1.7 Khảo sát cấu trúc hoá học hợp chất terpenoid 110 KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CÁC TINH DẦU 116 3.2.1 Khảo sát thành phần hoá học tinh dầu H bonariensis 117 3.2.2 Khảo sát thành phần hoá học