Luận án tiến sĩ khảo sát thành phần hóa học cây ô môi (cassia grandis l f) họ đậu (fabaceae) ở đồng bằng sông

GIÁO D C VÀ ÀO T O VI N HÀN LÂM KHOA H C VÀ CÔNG NGH VI T NAM C VI N KHOA H C VÀ CÔNG NGH NGÔ QU C LUÂN KH O SÁT THÀNH PH N HÓA H C CÂY Ô MÔI (CASSIA GRANDIS L.F), H U (FABACEAE) NG B NG SÔNG C U LONG LU N ÁN TI N S HÓA H C THÀNH PH H CHÍ MINH - 2017 GIÁO D C VÀ ÀO T O VI N HÀN LÂM KHOA H C VÀ CÔNG NGH VI T NAM C VI N KHOA H C VÀ CÔNG NGH - NGÔ QU C LUÂN KH O SÁT THÀNH PH N HĨA H C CÂY Ơ MƠI (CASSIA GRANDIS L.F), H U (FABACEAE) NG B NG SÔNG C U LONG Chuyên ngành : Hóa h c h p ch t thiên nhiên Mã s : 62.44.01.17 LU N ÁN TI N S HÓA H C NG IH NG D N KHOA H C: PGS.TS Nguy n Ng c H nh GS.TS Nguy n Kim Phi Ph ng THÀNH PH H CHÍ MINH, 2017 -i- IC M - N - Trong trình nghiên c u th c hi n lu n án, ã h c c r t nhi u ki n th c, kinh nghi m k n ng chun mơn b ích, thi t th c t quý th y cô b n bè i t m lòng trân tr ng bi t n sâu s c, xin g i l i c m n n: PGS.TS Nguy n Ng c H nh, Vi n Cơng ngh Hóa h c - Vi n Hàn lâm Khoa c Công ngh Vi t Nam GS.TS Nguy n Kim Phi Ph ng, Tr Qu c gia TP.HCM hai ng i tr c ti p h ng i h c Khoa h c T nhiên - ih c ng d n, Quý Th y - Cô: PGS.TS Nguy n C u Khoa, TS Phan Thanh Th o, Vi n Cơng ngh Hóa h c - Vi n Hàn lâm Khoa h c Công ngh Vi t Nam; GS.TSKH Nguy n Công Hào, Phân vi n Hóa h c h p ch t thiên nhiên t i TP.HCM; PGS.TS Nguy n Ng c S ng, Tr ng i h c Khoa h c T nhiên - i h c Qu c gia TP.HCM; PGS.TS Tr n Công Lu n, Trung tâm Sâm D c li u TP.HCM; TS Nguy n Th Thu Th y, TS Lê Thanh Ph c, PGS.TS Bùi Th B u Huê, Tr ng i h c C n Th nh ng ng i th y ã truy n t ki n th c kinh nghi m quý báu, Các Anh - Ch : TS Mai ình Tr , TS Lê Ti n D ng, TS Hoàng Th Kim Dung, TS Nguy n Th Kim Ph ng, TS ng Chí Hi n, TS Phùng V n Trung, ThS Phan Nh t Minh, ThS Nguy n T n Phát…, Vi n Cơng ngh Hóa h c - Vi n Hàn lâm Khoa h c Công ngh Vi t Nam; TS Tôn N Liên H ng, TS Nguy n Tr ng Tuân, Tr ng i h c C n Th nh ng ng i b n ng môn ã giúp trình h c t p, nghiên c u ,t o u ki n thu n l i cho su t Các Em: ThS Huy Phong, ThS V Duy Khánh, ThS Ngô Kh c Không Minh, ThS Hu nh Th Phi Y n, ThS Nguy n Th Thùy Trang, ThS Lê V n Ril, ThS Nguy n V n Ki t, ThS Phùng Th Y n Thanh, Tr ng i h c C n Th nh ng c ng tác viên ã h tr cho giai n nghiên c u Xin g i l i c m n n c p lãnh o Tr ng i h c C n Th ã t o u ki n thu n l i v cơng tác c ng nh kinh phí giúp tơi hồn thành ch ng trình t o c ti n s t l n n a, xin chân thành c m n TP H Chí Minh, tháng 05 n m 2017 Ngô Qu c Luân -ii- I CAM OAN - - Tôi xin cam oan ây cơng trình khoa h c c a riêng tơi nhóm nghiên c u, s li u, k t qu nghiên c u hoàn toàn trung th c ch a t ng c công b m t lu n án c p khác TP H Chí Minh, tháng 05 n m 2017 Tác gi lu n án Ngô Qu c Luân b t -iii- DANH M C CÁC KÝ HI U, T max BHT 13 C-NMR 1D-NMR H-NMR 2D-NMR brs C:M C:M:W CDCl3 COSY CS (%) CTPT d dd DEPT DMSO: E:M ESI EtOAc EtOH FT-IR GC GC/MS Glc H:E HMBC HPLC HSQC IC50 In vitro VI T T T : Chemical shift ( d i hóa h c) : S sóng (ngh ch o c a t n s dao ng) : B c sóng h p thu c c i : Butylated hydroxyl toluene : Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance : One Dimensional Nuclear Magnetic Resonance : Proton Nuclear Magnetic Resonance : Two Dimensional Nuclear Magnetic Resonance : Broad singlet (Tín hi u n r ng) : H dung môi chloroform methanol : H dung môi chloroform, methanol n c : CHCl3 ã th hydrogen (H) b ng deuterium (D) : Correlation Spectroscopy : Cells survival percent (Ph n tr m t bào s ng sót) : Cơng th c phân t : Doublet (Tín hi u ôi) : m c : Doublet of doublet (Tín hi u ôi ôi) : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer : Dimethylsulfoxide : H dung môi ethyl acetate methanol : Electrospray ionization (Ion hóa phun mù n) : Ethyl acetate : Ethanol : Fourier Transformation Infrared (Ph h ng ngo i bi n i Fourier) : Gas Chromatography (S c ký khí) : Gas Chromatography-Mass Spectrometry (S c ký khí ghép kh i ph ) : Glucoside : H dung môi n-hexane ethyl acetate : Heteronuclear Multiple Bond Correlation (T ng quan d h t nhân qua nhi u liên k t) : High Performance Liquid Chromatography (S c ký l ng hi u n ng cao) : Heteronuclear Single Quantum Correlation (T ng quan d h t nhân qua m t liên k t) : 50% Inhibitory Concentration (N ng c ch 50%) : Trong u ki n phịng thí nghi m -ivIn vivo IGPT IR J KLPT LC LC/MS : Trên c th s ng : Ion gi phân t : Infrared Spectroscopy (Ph h ng ngo i) : H ng s ghép spin : Kh i l ng phân t : Liquid Chromatography : Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (S c ký l ng ghép kh i ph ) m : Multiplet (Tín hi u a) mass : n v kh i l ng phân t , nguyên t m/z (v i z = 1) -Me : -CH3 MeOH : Methanol MHz : Mega Hertz MIC : Minimum inhibit concentration (N ng c ch t i thi u) mp : Melting point ( m ch y) MS : Mass Spectrum (Ph kh i l ng) M:W : H dung môi methanol n c n-BuOH : n-Butanol NMR : Nuclear Magnetic Resonance (C ng h ng t h t nhân) OD : Optical Density (M t quang) P acnes : Propionibacterium acnes PE : Petroleum Ether ppm : Part per million q : Quartet (Tín hi u b n) qui : Quintet (Tín hi u n m) Rf : Retention factor Rha : Rhamnopyranoside RP18 : C18-reversed phase silica gel s : Singlet (Tín hi u n) SG : Silica gel SKCP : S c ký c t pha o SKCPT : S c ký c t pha th ng SKLM : S c ký l p m ng t : Triplet (Tín hi u ba) TT : Th t TYEG agar : Tryptone-Yeast Extract-Glycerol agar UV : Ultraviolet (Tia t ngo i, tia c c tím) UV-Vis: : Ultraviolet Visible Spectroscopy (Ph t ngo i kh ki n) (“s ”) : S ký hi u c a h p ch t ã phân l p [“s ”] : S th t tài li u tham kh o c trích d n -v- DANH M C CÁC B NG ng 1.1 Th ng kê loài chi Cassia ng 1.2 Thành ph n hóa h c c a m t s lồi phân tích b ng GC/MS .5 ng 1.3 Th ng h p ch t phân l p t 24 loài chi Cassia .8 ng 1.4 C u t o hóa h c m t s nhóm h p ch t phân l p t chi Cassia 13 ng 1.5 Th ng kê nghiên c u v ho t tính sinh h c c a chi Cassia 18 ng 1.6 Thành ph n hóa h c ã cơng b c a loài Cassia grandis L.f 23 ng 3.1 K t qu nh tính nhóm h p ch t ô môi 52 ng 3.2.1.1 D li u ph NMR c a h p ch t apigenin 54 ng 3.2.1.2 D li u ph NMR c a h p ch t apigetrin .56 ng 3.2.1.3 D li u ph NMR c a h p ch t 14 vitexin 58 ng 3.2.1.4 D li u ph NMR c a h p ch t kaempferol 59 ng 3.2.1.5 D li u ph NMR c a h p ch t astragalin 60 ng 3.2.1.6 D li u ph NMR c a h p ch t afzelin 61 ng 3.2.1.7 D li u ph NMR c a h p ch t 10 nicotiflorin 63 ng 3.2.1.8 D li u ph NMR c a h p ch t 12 luteolin .64 ng 3.2.1.9 D li u ph NMR c a h p ch t 13 cynaroside 65 ng 3.2.1.10 D li u ph NMR c a h p ch t quercetin 67 ng 3.2.1.11 D li u ph NMR c a h p ch t isoquercetin 68 ng 3.2.1.12 D li u ph NMR c a h p ch t quercitrin 69 ng 3.2.1.13 D li u ph NMR c a h p ch t 11 rutin 70 ng 3.2.1.14 D li u ph NMR c a h p ch t ombuin .72 ng 3.2.1.15 D li u ph NMR c a h p ch t 15 (-)-epiafzelechin .73 ng 3.2.1.16 D li u ph NMR c a h p ch t 16 (-)-epicatechin 75 ng 3.2.2.1 D li u ph NMR c a h p ch t 17 aloe-emodin 78 ng 3.2.2.2 D li u ph NMR c a h p ch t 39 h p ch t tham kh o 81 ng 3.2.2.3 D li u ph NMR c a h p ch t 40 h p ch t tham kh o 83 ng 3.2.2.4 D li u ph NMR c a h p ch t 18 parietinic acid 85 ng 3.2.2.5 D li u ph NMR c a h p ch t 19 chrysophanol 86 ng 3.2.2.6 D li u ph NMR c a h p ch t 20 pulmatin 87 -ving 3.2.3.1 D li u ph NMR c a h p ch t 21 h p ch t tham kh o 89 ng 3.2.3.2 D li u ph NMR c a h p ch t 22 h p ch t 21 .91 ng 3.2.3.3 D li u ph NMR c a h p ch t 23 h p ch t tham kh o 93 ng 3.2.3.4 D li u ph NMR c a h p ch t 25 D-mannitol 94 ng 3.2.4.1 D li u ph NMR c a h p ch t 27 -sitosterol .95 ng 3.2.4.2 D li u ph NMR c a h p ch t 28 daucosterol .97 ng 3.2.4.3 D li u ph NMR c a h p ch t 29 brassicasterol 98 ng 3.2.5.1 D li u ph NMR c a h p ch t 30 lupeol .100 ng 3.2.5.2 D li u ph NMR c a h p ch t 31 betulinic acid 102 ng 3.2.5.3 D li u ph NMR c a h p ch t 32 oleanolic acid 104 ng 3.2.6.1 D li u ph NMR c a h p ch t 33 gallic acid .105 ng 3.2.6.2 D li u ph NMR c a h p ch t 34 vanillic acid 107 ng 3.2.6.3 D li u ph NMR c a h p ch t 35 o-anisic acid 108 ng 3.2.6.4 D li u ph NMR c a h p ch t 36 trans-cinnamic acid 109 ng 3.2.7.1 D li u ph NMR c a h p ch t 24 -adenosine 111 ng 3.2.7.2 D li u ph NMR c a h p ch t 26 (+)-lyoniresinol 113 ng 3.2.7.3 D li u ph NMR c a h p ch t 37 h p ch t tham kh o 114 ng 3.2.7.4 D li u ph NMR c a h p ch t 38 -L-rhamnopyranose .117 ng 3.2.7.5 D li u ph NMR c a h p ch t 41 h p ch t tham kh o 119 ng 3.2.7.6 D li u ph NMR c a h p ch t 42 moracin B .120 ng 3.3.1.1 t qu th ho t tính gây c t bào h p ch t 122 ng 3.3.1.2 Giá tr IC50 c a CGLE01 dòng t bào 122 ng 3.3.2.1 Kh n ng c ch vi khu n P acnes c a cao ô môi 122 ng 3.3.2.2 Kh n ng c ch dòng P acnes c a cao phân n 123 ng 3.3.2.3 Kh n ng c ch dòng Pa08 c a quercitrin, rutin, aloe-emodin 124 ng 3.3.2.4 K t qu xác nh giá tr MIC c a m u th dòng Pa08 124 -vii- DANH M C CÁC HÌNH, S Hình 1.1 Cành, lá, hoa, trái mơi chín trái mơi cịn xanh 21 Hình 1.2 Trái, c m h t mơi chín .21 Hình 1.3 V thân r ô môi .21 Hình 3.1 Các flavone nhóm th 53 Hình 3.2 Các flavone nhóm th 57 Hình 3.3 Các flavone nhóm th 66 Hình 3.4 Các h p ch t nhóm flavane 74 Hình 3.5 Các h p ch t nhóm anthraquinone .76 Hình 3.6 T Hình 3.7 Con Hình 3.8 T ng quan HMBC c u trúc h p ch t 39 80 ng sinh t ng h p ngh hình thành h p ch t 39 40 81 ng quan HMBC c u trúc h p ch t 40 83 Hình 3.9 Các h p ch t nhóm polyalcol glyceryl ester m ch dài bão hịa 89 Hình 3.10 T ng quan HMBC c u trúc h p ch t 22 91 Hình 3.11 Các h p ch t nhóm sterol .94 Hình 3.12 Các h p ch t nhóm triterpene 99 Hình 3.13 Các h p ch t nhóm d n xu t m t vịng benzene .106 Hình 3.14 Các h p ch t khác 110 Hình 3.15 T ng quan HMBC c u trúc h p ch t 37 115 Hình 3.16 T ng quan HMBC c u trúc h p ch t 41 118 2.1 Quy trình chung u ch cao chi t t b ph n ô môi .30 2.2 Phân l p h p ch t t cao EtOAc ô môi 33 2.3 Phân l p h p ch t t cao MeOH ô môi 36 2.4 Phân l p h p ch t t cao EtOAc v ô môi 39 2.5 Phân l p h p ch t t cao EtOAc r ô môi .42 2.6 Phân l p h p ch t t cao BuOH r ô môi 43 2.7 Phân l p h p ch t t cao EtOAc trái ô môi 45 2.8 Phân l p h p ch t t cao BuOH trái ô môi 46 2.9 Phân l p h p ch t t cao EtOAc h t ô môi 49 2.10 Phân l p h p ch t t cao acetone h t ô môi .50 -viii- CL C TRANG PH BÌA I C M N i I CAM OAN ii DANH M C CÁC KÝ HI U T VI T T T iii DANH M C CÁC B NG v DANH M C CÁC HÌNH, S vii C L C viii U TV N C TIÊU, N I DUNG NGHIÊN C U CH NG T NG QUAN 1.1 GI I THI U V CHI CASSIA 1.1.1 c m th c v t 1.1.2 Các nghiên c u v thành ph n hóa h c 1.1.2.1 nh tính nhóm h p ch t h u c b ng thu c th hóa h c 1.1.2.2 Phân tích h p ch t h u c b ng h th ng GC/MS, LC/MS 1.1.2.3 Phân l p h p ch t h u c tinh t xác nh c u trúc 1.1.3 Các nghiên c u v ho t tính sinh h c kh n ng ng d ng 17 1.2 GI I THI U CÂY Ô MÔI 19 1.2.1 Phân lo i khoa h c 19 1.2.2 c m th c v t 20 1.2.3 Công d ng theo y h c dân gian 23 1.2.4 Tình hình nghiên c u th gi i 23 1.2.4.1 Nghiên c u v thành ph n hóa h c 23 1.2.4.2 Nghiên c u v ho t tính sinh h c 24 1.2.5 Nh n xét t ng quan 25 CH NG PH NG PHÁP VÀ TH C NGHI M 27 2.1 NGUYÊN LI U HÓA CH T THI T B 27 2.1.1 Nguyên li u 27 2.1.2 Hóa ch t 27 ... HÀN L? ?M KHOA H C VÀ CÔNG NGH VI T NAM C VI N KHOA H C VÀ CÔNG NGH - NGÔ QU C LUÂN KH O SÁT THÀNH PH N HÓA H C CÂY Ô MÔI (CASSIA GRANDIS L. F), H U (FABACEAE) NG B NG SÔNG C U LONG... ô môi .30 2.2 Phân l p h p ch t t cao EtOAc ô môi 33 2.3 Phân l p h p ch t t cao MeOH ô môi 36 2.4 Phân l p h p ch t t cao EtOAc v ô môi 39 2.5 Phân l p h p ch t t cao EtOAc r ô môi. .. o sát thành ph n hóa h c ô môi (Cassia grandis L. f), h Vang (Caesalpiniaceae) m c ng b ng sông C u Long” c th c hi n nh m óng góp thêm nh ng hi u bi t v thành ph n hóa th c v t loài Cassia grandis