Bộ giáo dục đào tạo trường đại học nông nghiệp hà nội lê thị huệ nghiên cứu số tiêu sinh học bảo tồn tinh dịch chó berger luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành M· sè : thó y : 60.62.50 Ngêi híng dÉn khoa học: ts đỗ văn thu hà nội 2008 Lời cam đoan Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình Tôi xin cam đoan thông tin trích dẫn luận văn đà rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Lê Thị Huệ i Lời cảm ơn Để hoàn thành luận văn này, nỗ lực thân, nhận hướng dẫn trực tiếp Thầy hướng dẫn: TS Đỗ Văn Thu Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới bảo tận tình Thầy Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tơi toàn thầy cô thuộc khoa Thú y Trường ĐHNN Hà Nội, người trực tiép truyền dạy cho kiến thức bản, bổ ích suốt trình học tập khoa Tôi xin chân thành cảm ơn Phòng Sinh học tế bào sinh sản, Viện Công nghệ Sinh học – ViƯn Khoa häc & C«ng nghƯ ViƯt Nam, Trung tâm Huấn luyện chó nghiệp vụ (C32)- Bộ Công an Xin chân thành cảm ơn gia đình bạn bè, đà tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành luận văn Hà Nội, ngày tháng năm ii Mục lục STT 1.1 1.2 2.1 Mở đầu Đặt vấn đề Mục đích nghiên cứu Tổng quan nghiên cứu Tình hình phát triển sử dụng chó nghiệp vụ Việt Nam 2.2 Tình hình nghiên cứu giới 2.3 Một số đặc điểm sinh học tinh dịch chó Berger 2.4 Môi trường pha loÃng đông lạnh tinh dịch chó 16 2.5 Sơ lược trình giao phối phóng tinh 23 Đối tượng, nội dung phương pháp nghiên cứu 25 3.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 25 3.2 3.2.1 Néi dung nghiªn cøu Nghiªn cøu mét sè chØ tiêu sinh học tinh dịch yếu tố ảnh hưởng lên phẩm chất tinh dịch 3.2.2 Pha loÃng, bảo tồn tinh dịch chó 50C 3.2.3 Đông lạnh tinh dịch chó - 1960C 3.2.4 Thụ tinh nhân tạo chó 3.3 Phương pháp nghiên cứu Kết thảo luận 4.1 Sinh học tinh dịch chó yÕu tè ¶nh hëng 4.2 Pha lo·ng, b¶o tån tinh dịch chó 50C 4.3 Đông lạnh tinh dịch chó - 1960C 4.4 Thụ tinh nhân tạo chó Kết luận đề nghị 5.1 Kết luận 5.2 Đề nghị Tài liệu tham khảo iii Trang 1 4 25 25 26 26 26 26 46 46 57 68 74 78 78 79 80 Danh mơc c¸c bảng Bảng Một số tiêu sinh học tinh dịch chó Berger 46 Bảng Tính chất lý hóa tinh dịch chó Berger 52 ảnh hưởng mùa vụ lên chất lượng tinh dịch 54 Bảng ảnh hưởng chu kỳ khai thác lên phẩm chất tinh dịch 56 Bảng ảnh hưởng môi trường pha loÃng lên phẩm chất tinh dịch trình bảo tồn ảnh hưởng nhiệt độ bảo tồn lên phẩm chất tinh dịch 58 Bảng Bảng Bảng 60 ảnh hưởng tỷ lệ lòng đỏ trứng gà môi trường lên phẩm chất tinh dịch Bảng ảnh hưởng số loại đường môi trường lên phẩm chất tinh dịch Bảng So sánh ảnh hưởng glycerol Dimethyl sulfoxide lên phẩm chất tinh dịch Bảng 10 ảnh hưởng thời gian cân tinh dịch trước đông lạnh lên phẩm chất tinh dịch đông lạnh Bảng 11 ảnh hưởng thời điểm bổ sung glycerol lên chất lượng tinh dịch đông lạnh Bảng 12 ảnh hưởng tốc độ giải đông lên phẩm chất tinh đông lạnh 62 Bảng 13 Kết thụ tinh nhân tạo tinh bảo tồn dạng lỏng 0C 75 Bảng 14 Kết thụ tinh nhân tạo tinh đông lạnh 77 iv 64 67 69 71 72 Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề Từ lâu chó động vật gần gũi, thân thiện với người người nuôi dưỡng hóa, vật thông minh hiểu ý trung thành với chủ Ngoài chó có khả đặc biệt mà loài vật khác không có: mắt có khả nhìn xuyên bóng tối, mũi có khả phân biệt 19000 mùi khác Chính mà ngày số giống chó đà huấn luyện, biệt hóa để trở thành chó nghiệp vụ phục vụ công tác an ninh, quốc phòng Năm 1960 đà xây dựng đàn chó nghiệp vụ từ nguồn giống nhập lai tạo Hiện cã gièng chã ngo¹i (chã Berger, Cocker, Rottweiler, Bèc sơ Labrador) sử dụng vào công tác nghiệp vụ ngành Công an Quân đội Hai giống chó sử dụng nhiều có khả chó Berger Việt Nam chó Cocker (Tây Ban Nha) Gièng chã Berger ViƯt Nam lµ lai hỗn hợp từ chó Berger Trung Quốc (được nhập từ năm 1960), Berger Liên Xô CHDC Đức (nhập từ năm 1970, 1980) Đây hai giống chó chủ lực, huấn luyện trang bị cho đơn vị, quản lý sử dụng chó nghiệp vụ Công an tỉnh, thành phố sở giam giữ thuộc ngành Công an đồn biên phòng Giống chó nước ta có hàng nghìn nuôi Trung tâm Huấn luyện chó nghiệp vụ Bộ Công an trường D24 Bộ đội biên phòng Tại Trung tâm Huấn luyện chó nghiệp vụ có đàn chó tương đối thuần, số lượng Trong khu vực nhân dân, chúng phổ biến nuôi dưỡng dùng việc bảo vệ làm kinh tế, lai tạp nhiều không chọn lọc việc nhân giống tự phát Chó Cocker (Tây Ban Nha) nhập từ Liên Xô, Cu-ba năm 1980, thường sử dụng vào mục đích huấn luyện để phát đặc định (ma tuý chất nổ) Đây giống chó dễ nuôi, tính thích nghi cao, dễ phát triển Cũng nh gièng chã Berger, viƯc nh©n gièng tù phát, đàn chó Cocker có nguy bị thoái hoá tạp pha Tuy đàn chó Berger Cocker có số lượng lớn, chưa có hệ thống nhân giống theo quy hoạch, đà làm đặc điểm, khả vốn cã cđa gièng chã nghiƯp vơ MỈc dï chã nghiƯp vụ có vai trò lớn việc giữ gìn an ninh, quốc phòng số lượng ®a sè c¸c gièng chã nghiƯp vơ ®Ịu nhËp gièng từ nước giá thành nhập nội từ 5000USD - 8000USD ë ViƯt Nam, hiƯn m¹ng líi thơ tinh nhân tạo tinh pha loÃng bò, lợn, trâu, ngựa, đà phổ biến toàn quốc, đà xây dựng ngân hàng tinh đông lạnh phục vụ cho công tác thụ tinh nhân tạo lưu giữ gen quí Bởi vậy, việc nghiên cứu để nhân giống chó nghiệp vụ việc cần thiết cấp bách Vấn đề đặt cần có biện pháp cụ thể để nhân giống, lai tạo giống chó Thụ tinh nhân tạo phương pháp tối ưu để sử dụng có hiệu đực giống tốt, có khả di truyền cao, nhằm cải tạo giống, giảm số lượng đực giống, với công nghệ gen di truyền, thụ tinh nhân tạo đà đưa công nghệ sinh sản đạt đến đỉnh cao Nghiên cứu đặc điểm sinh học tinh dịch sở khoa học để đánh giá chất lượng tinh dịch, từ giúp xác định pha loÃng bảo tồn tinh đạt chất lượng cao Chỉ tinh dịch có chất lượng tốt đưa vào pha loÃng bảo tồn đông lạnh Nếu biết lượng tinh dịch, nồng độ, hoạt lực, sức sống, kỳ hình, kỳ hình acrosome tinh dịch xác định tỷ lệ pha loÃng thÝch hỵp HiƯn nay, ë níc ta viƯc thơ tinh nhân tạo đông lạnh tinh dịch chó vấn đề quan tâm, kể Trung tâm Huấn luyện chó nghiệp vụ sử dụng hình thức phối tự nhiên, giới đà có từ lâu Để tạo ®ỵc chã nghiƯp vơ cã phÈm gièng tèt, ®ång thêi lưu giữ bảo tồn quỹ gen quí giống chó nghiệp vụ tiến hành thực đề tài: Nghiên cứu số tiêu sinh học bảo tồn tinh dịch chó Berger 1.2 Mục đích nghiên cứu - Xác định số tiêu sinh học tinh dịch chó Berger làm sở khoa học để đánh giá phẩm chất tinh dịch tuyển chọn đực giống - Bảo tồn tinh dịch chó - Thụ tinh nhân tạo chó nghiệp vụ tổng quan nghiên cứu 2.1 Tình hình phát triển sử dụng chó nghiệp vụ Việt Nam Năm 1960 đà xây dựng đàn chó nghiệp vụ từ nguồn giống nhập lai tạo Hiện nay, có giống chó ngoại sử dụng vào công tác nghiệp vụ ngành Công an Quân đội (chó Berger, Cocker, Rottweiler, Bốc sơ Labrador) Hai giống chó sử dụng nhiều có khả chó Berger Việt Nam chó Cocker (Tây Ban Nha) Giống chó Berger Việt Nam lai hỗn hợp từ chó Berger Trung Quốc (được nhập từ năm 1960), Berger Liên Xô CHDC Đức (nhập từ năm 1970, 1980) Đây hai giống chó chủ lực, huấn luyện trang bị cho đơn vị, quản lý sử dụng chó nghiệp vụ công an tỉnh, thành phố sở giam giữ thuộc ngành Công an đồn biên phòng, cửa lực lượng Bộ đội biên phòng Giống chó nước ta có tới hàng nghìn nuôi Trung tâm Huấn luyện chó nghiệp vụ Bộ Công an, trường D24 Bộ đội biên phòng Ngay từ năm đầu đà tiến hành giữ giống thuần, lai tạo cho sinh sản phát triển Cho tới nay, chúng đà có ngoại hình, thể chất lực làm việc không so với giống gốc ban đầu, chúng đà thích nghi tốt điều kiện khí hậu, nuôi dưỡng nước ta đà có thành tích xuất sắc phục vụ chiến dấu Tại Trung tâm Huấn luyện chó nghiệp vụ có đàn chó tương đối thuần, số lượng Trong khu vực nhân dân, chúng phổ biến nuôi dưỡng dùng việc bảo vệ làm kinh tế, lai tạp nhiều không chọn lọc việc nhân giống tự phát Chó Cocker (Tây Ban Nha) nhập từ Liên Xô, Cu-ba năm 1980, thường sử dụng vào mục đích huấn luyện để phát đặc định (ma tuý chất nổ) Đây giống chó dễ nuôi, tính thích nghi cao, dễ phát triển Cũng giống chó Berger, việc nhân giống tự phát, đàn chó Cocker có nguy bị thoái hoá tạp pha Tuy đàn chó Berger Cocker cã sè lỵng lín, nhng cha cã mét hệ thống nhân giống theo quy hoạch, việc nuôi dưỡng tự phát, đà làm đặc điểm, khả vốn có giống chó nghiệp vụ Chó nghiệp vụ sử dụng Bộ Công an, nguồn gốc từ Việt Nam mà nhập từ Nga, Đức, Cuba Trung Quốc (với giá 5000 8000 USD/con) Các giống chó bảo tồn phát triển Việt Nam, đà sử dụng lĩnh vực bảo vệ, truy tìm dấu vết hơi, phát ma tuý Hàng năm chúng thực 10.000 nhiệm vụ khác HiƯn nay, chóng ta ®· sư dơng chã nghiƯp ®Ĩ vụ kiểm tra, phát chất ma tuý cửa Tân Sơn Nhất (Quang Khải, 2004) Tuy chó nghiệp vụ có vai trò lớn công tác an ninh, quốc phòng, truy tìm ma túy, số lượng chó nên đáp ứng cho cấp tỉnh thành phố Bộ Công an đà có kế hoạch trang bị chó nghiệp vụ tới cấp huyện khó khăn khan gièng Sư dơng chã nghiƯp vơ lµ mét biƯn pháp công tác quan trọng công tác bảo vệ an ninh trật tự thể đạo ngành Công an xuyên suốt lịch sử công tác, chiến đấu ngành Cụ thể: thị số 312/CT- BNV ngày 18/6/1982 việc tăng cường hiệu công tác nuôi dạy sử dụng chó nghiệp vụ; Chỉ thị số 13/CT- BNV ban hành kèm theo định số 178/QĐ- BNV ngày 29/9/1992 việc tăng cường hiệu công tác huấn luyện, sử dụng chó nghiệp vụ lực lượng Công an nhân dân; gần thị số 09/CT- BCA(C12) ban hành kèm theo định số 564/QĐBCA (C12) Bộ trưởng Bộ Công an ngày 16/6/2004 tăng cường hiệu công tác quản lý, sử dụng chó nghiệp vụ lực lượng Công an nhân dân Trong đặc biệt nhấn mạnh nội dung: - Xác định chó nghiệp vụ công cụ hỗ trợ quan trọng công tác đấu tranh ngăn chặn phòng chống tội phạm lực lượng Công an nhân dân - Quản lý sử dụng chó nghiêp vụ nhiệm vụ công tác Công an 4.3.2 ảnh hưởng thời điểm bổ sung glycerol lên chất lượng tinh dịch Hoạt lực tiến thẳng tinh trùng trước đông lạnh khác ý nghĩa thời điểm bổ sung glycerol Bổ sung phần môi trường có glycerol vào tinh dịch thời điểm sau ñ tinh pha lo·ng ë 50C, cho ho¹t lùc tiÕn thẳng tinh trùng sau đông lạnh cao có ý nghÜa so víi víi bỉ sung m«i trêng cã glycerol thời điểm 0, 1, Hoạt lực tiến thẳng tinh trùng sau đông lạnh trường hợp bổ sung môi trường có glycerol thời điểm (37,68%; 35,39%) cao có ý nghĩa so với thời điểm bổ sung môi trường có glycerol thời điểm (32,82%) Hoạt lực tiến thẳng tinh trùng sau đông lạnh thấp (31,74%) trường hợp bổ sung môi trường có glycerol thời điểm Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng trước sau đông lạnh khác ý nghĩa thời điểm bổ sung m«i trêng cã glycerol Tû lƯ sèng cđa tinh trïng trước đông lạnh (85,93%) trường hợp bổ sung môi trường có glycerol thời điểm cao có ý nghĩa so với thời điểm bổ sung môi trường có glycerol thời điểm 0, 1, giê (tû lƯ sèng cđa tinh trïng t¬ng øng 82,52%, 80,87%, 82,66%, 80,75%) Với kết nhận cho thấy bổ sung phần môi trường có glycerol thời điểm sau ủ tinh dịch 50C cho phẩm chất tinh dịch sau đông lạnh tốt so víi bỉ sung ë thêi ®iĨm 0, 1, hc giê A (%) 50 45 40 35 30 25 20 15 10 43.83 37.68 35.39 31.74 giê giê giê giê 32.87 Thời điẻm bổ sung glycerol Biểu đồ3 ảnh hưởng thời điểm bổ xung glycerol lên hoạt lực tinh trùng sau đông lạnh 71 Bảng 11: ảnh hưởng thời điểm bổ sung glycerol lên chất lượng tinh dịch đông lạnh (n=32) Hoạt lực tinh trùng (%) Tỷ lƯ tinh trïng kú h×nh (%) Tû lƯ tinh trïng sống (%) Thời điểm bổ sung glycerol Trước đông lạnh Sau đông lạnh Trước đông lạnh Sau đông lạnh Trước đông lạnh Sau đông lạnh 70,37 a 3,16 31,74a ± 4,63 18,83a ± 2,58 24,15 a ± 2,65 82,50 a ± 4,57 55,15a ± 3,47 giê 73,68 a ± 4,27 37,68a ± 3,48 20,15a ± 3,41 25,73 a ± 3,16 80,87 a ± 3,64 62,85b ± 3,65 giê 72,26 a ± 3,50 43,83b ± 3,52 19,74a ± 2,69 24,36 a ± 2,58 85,93 b ± 4,96 65,23b ± 2,69 giê 70,73 a ± 3,64 35,39a ± 2,64 21,81a ± 2,53 23,35 a ± 2,73 82,66 a ± 4,29 58,45a ± 3,61 giê 70,93 a ± 2,78 32,87a ± 3,75 19,35a ± 3,63 25,94 a ± 3,51 80,75 a ± 5,16 59,50a ± 2,43 Ghi chó: Các giá trị mét hµng cđa cïng chØ tiªu có chữ giống sai khác khơng có ý nghĩa thống kê (P>0,05), giá tr cựng hàng tiêu cú chữ khác khác có ý nghĩa thống kê (P0,05), giá trị mét cét có chữ khác khỏc cú ý ngha thng kờ (P