Đánh giá hiệu quả bảo vệ của piscivac irido si phòng bệnh cá mú ngủ do iridovirus gây ra ở cá mú nuôi

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC & MÔI TRƯỜNG –––––––– ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ BẢO VỆ CỦA PISCIVAC IRIDO SI PHÒNG BỆNH CÁ MÚ NGỦ DO IRIDOVIRUS GÂY RA Ở CÁ MÚ NUÔI Giảng viên hướng dẫn: ThS Nguyễn Thị Kim Cúc Sinh viên thực : Phan Thị Hoài Thi Mã số sinh viên : 58131242 Khánh Hòa – 2020 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC & MÔI TRƯỜNG BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC –––––––– ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ BẢO VỆ CỦA PISCIVAC IRIDO SI PHÒNG BỆNH CÁ MÚ NGỦ DO IRIDOVIRUS GÂY RA Ở CÁ MÚ NUÔI GVHD: ThS Nguyễn Thị Kim Cúc SVTH : Phan Thị Hồi Thi MSSV : 58131242 Khánh Hịa – 08/2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan viết luận văn tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu tơi nhờ vào tìm hiểu, học hỏi, giúp đỡ thơng tin trích dẫn nêu rõ nguồn gốc Các kết luận văn nằm nghiên cứu TS Trần Vĩ Hích mà tơi thành viên tham dự cho phép sử dụng tất số liệu nghiên cứu dùng cho luận văn tốt nghiệp mình, Tơi xin cam đoan số liệu kết thu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Nha Trang, ngày 11 tháng năm 2020 Sinh viên thực Phan Thị Hoài Thi LỜI CẢM ƠN Thời gian làm khóa luận khoảng thời gian vô đáng quý nhờ mà tơi học hỏi nhiều kinh nghiệm bổ ích, tích lũy thêm kiến thức cho thân Qua đây, xin gửi lời cảm ơn đến cá nhân, tố chức giúp đỡ, hỗ trợ Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến mái trường Đại học Nha Trang, nơi tạo điều kiện cho học tập rèn luyện suốt bốn năm qua; quý thầy cô Viện Công nghệ Sinh học Môi trường với thầy cô môn, người cho tảng kiến thức, học, kinh nghiệm quý báu để tơi hồn thành tốt khóa luận Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến GVHD ThS Nguyễn Thị Kim Cúc, người tận tình hướng dẫn, dành nhiều cơng sức, thời gian cho suốt thời gian thực đề tài Tôi xin trân trọng cảm ơn Giám đốc Trần Vĩ Hích Trung tâm Nghiên cứu Giống Dịch bệnh Thủy sản bảo, hỗ trợ kinh phí, sở vật chất q trình thí nghiệm, anh chị, em bạn nhiệt tình giúp đỡ tơi, cho tơi ý kiến bổ ích Tôi xin chân thành cảm ơn hai cô cố vấn học tập tập thể 58 Công nghệ Sinh học đồng hành suốt bốn năm học qua, với tình cảm, kỷ niệm cho tơi học hỏi nhiều điều sống Cuối xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bố mẹ, anh chị em bên ủng hộ động viên tơi Do thời gian có hạn kiến thức hạn chế, có nhiều cố gắng khơng tránh khỏi sai sót định Tơi mong nhận quan tâm, góp ý q thầy cơ, anh chị bạn để khóa luận hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! SV: Phan Thị Hồi Thi TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Bệnh cá mú ngủ Iridovirus hoành hành gây thiệt hại nặng nề cho kinh tế thủy sản phát triển bền vững nghề ni cá mú Do đó, đề tài thiết lập nhằm đánh giá hiệu bảo vệ vaccine Piscivac irido Si cá mú trân châu nói riêng họ cá mú nói chung Trong đề tài này, chúng tơi nghiên cứu tính vơ khuẩn, đánh giá độ an toàn hiệu bảo vệ vaccine cá mú trân châu công cường Iridovirus thời điểm kháng thể đạt giá trị cao Kết cho thấy vaccine hồn tồn vơ khuẩn, an tồn, khơng ảnh hưởng đến sinh trưởng khơng gây bất thường cá mú Tại thời điểm cơng cường độc, giá trị mật độ quang trung bình biểu thị nồng độ kháng thể kháng Iridovirus đạt 0,83 cho hệ số bảo vệ (RPS) trung bình vaccine 73% Từ khóa: Cá mú, bệnh cá mú ngủ, Iridovirus MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN TRÍCH YÊU LUẬN VĂN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG i DANH MỤC CÁC HÌNH ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN .3 1.1 Tình hình ni cá mú ngồi nước 1.1.1 Vài nét đặc điểm cá mú 1.1.2 Tình hình ni cá mú giới 1.1.3 Tình hình ni cá mú Việt Nam 1.2 Bệnh cá mú ngủ Iridovirus 1.2.1 Tác nhân gây bệnh 1.2.2 Dấu hiệu bệnh lý .7 1.2.3 Lan truyền phân bố bệnh 1.2.4 Chẩn đoán bệnh Iridovirus 1.2.5 Phương pháp phòng ngừa bệnh 1.2.6 Tình hình nghiên cứu dịch bệnh cá mú ngủ giới Việt Nam 1.3 Vaccine phịng ngừa bệnh ni trồng thủy sản 10 1.3.1 Vaccine nguyên lý việc sử dụng vaccine .10 1.3.2 Tiêu chuẩn vaccine 12 1.3.3 Vai trò vaccine nuôi trồng thủy sản 14 1.3.4 Các phương pháp đưa vaccine vào cá .15 1.3.5 Tình hình nghiên cứu sử dụng vaccine ni trồng thủy sản giới 17 1.3.6 Tình hình nghiên cứu sử dụng vaccine Việt Nam 20 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Vật liệu .22 2.1.1 Đối tượng, thời gian địa điểm nghiên cứu 22 2.1.2 Hóa chất, mơi trường 22 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 2.2.1 Chuẩn bị cá thí nghiệm 24 2.2.2 Kiểm tra độ an toàn vaccine thử nghiệm cá mú 25 2.2.3 Kiểm tra hiệu bảo vệ vaccine phòng bệnh cá mú ngủ Iridovirus 27 2.2.4 Xử lý thống kê số liệu .33 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Độ an toàn vaccine thứ nghiệm cá mú 34 3.1.1 Kết vô khuẩn vaccine thử nghiệm .34 3.1.2 Ảnh hưởng vaccine đến tăng trưởng cá mú 34 3.1.3 Ảnh hưởng việc tiêm vaccine thể cá mú 36 3.2 Hiệu lực bảo vệ vaccine thử nghiệm cá mú 38 3.2.1 Kết đánh giá nồng độ kháng thể cá chống lại Iridovirus thông qua số OD450nm 38 3.2.2 Hiệu lực bảo vệ vaccine thử nghiệm 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 PHỤ LỤC PL1 Phụ lục Kết thí nghiệm an tồn PL1 Phụ lục Kết thí nghiệm đánh giá hiệu bảo vệ PL2 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số vaccine cấp phép dùng nuôi trồng thủy sản 19 Bảng 3.1 Kết thí nghiệm cơng cường Iridovirus vào ngày thứ 25 sau gây miễn dịch 41 i DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hai cách phát triển tế bào lympho B hoạt hóa 12 Hình 2.1 Cá mú trân châu 22 Hình 2.2 Sơ đồ tổng quát phương pháp nghiên cứu đề tài 24 Hình 2.3 Sơ đồ thực kiểm tra độ an toàn vaccine 26 Hình 2.4 Tiêm chủng phương pháp tiêm xoang bụng 27 Hình 2.5 Sơ đồ bố trí thí nghiệm kiểm tra hiệu bảo vệ vaccine 28 Hình 2.6 Các bước xác định nồng độ kháng thể ELISA 30 Hình 2.7 Các bể thí nghiệm cơng cường độc 31 Hình 3.1 Kiểm tra vơ khuẩn vaccine TSA PYGA 34 Hình 3.2 Sự thay đổi chiều dài cá mú hai nhóm thí nghiệm 35 Hình 3.3 Sự thay đổi khối lượng cá mú hai nhóm thí nghiệm 36 Hình 3.4 Biểu số quan cá tiêm vaccine 37 Hình 3.5 Nồng độ kháng thể cá tiêm vaccine cá đối chứng thông qua giá trị OD450nm hai lần thí nghiệm 38 Hình 3.6 Biểu quan cá mú chết 40 Hình 3.7 Kết chẩn đốn Iridovirus cá chết ELISA 40 Hình 3.8 Tỉ lệ tử vong tích lũy trung bình cá mú sau cơng cường Iridovirus hai lần thí nghiệm với nhóm đối chứng nhóm tiêm vaccine ii 41 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tên đầy đủ cs cộng DO Dissolved Oxygen ELISA Enzyme-linked Immunosorbent Assay FAO Food and Agriculture Organization GIV Grouper Iridovirus h HRP Horseradish Peroxidase MCP Major Capsid Protein NT nghiệm thức OD Optical Density PBS Phosphate Buffered Saline PCR Polymerase Chain Reaction PSS Physical Saline Solution PYGA Pepton Yeast Glucose Agar RSIV Red sea bream Iridovirus SGIV Singapore Grouper Iridovirus TCID50 Tissue Culture Infectious Dose 50 TGIV Grouper Iridovirus of Taiwan TSA Tryptic Soy Agar iii Nguyễn Quốc Bình (2012), Cơng nghệ sinh học nghiên cứu phát triển vaccine cho nuôi trồng thủy sản, Báo cáo phân tích xu hướng cơng nghệ, Trung tâm Thông tin Khoa học Công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh, Sở Khoa học Cơng nghệ Thành phố Hồ Chí Minh 10 Nguyễn Thị Phương Huyền (2011), Bước đầu nghiên cứu chế viêm cá Giị (Rachycentron canadum) sau tiêm vaccine có nhũ dầu khơng có nhũ dầu phương pháp mơ học, Luận án tốt nghiệp, Đại học Nha Trang 11 Nguyễn Thị Tâm, Nguyễn Mạnh Hùng, Phạm Công Hoạt, Trần Thế Mưu, Nguyễn Quang Linh (2015), Nghiên cứu sản xuất vắc-xin phịng bệnh hoại tử thần kinh cho cá mú ni Việt Nam, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, 1(3) 12 Nguyễn Thị Thanh, Phạm Thị Dung (2018), Kỹ thuật nuôi cá mú, Nhà xuất Đại học Vinh 13 Nguyễn Thị Xuân Sâm (2016), Công nghệ sản xuất vaccine, Nhà xuất Bách khoa Hà Nội, Trường Đại học Bách khoa Hà Nội 14 Nguyễn Văn Duy (2013), Bài giảng học phần Sinh học phân tử, Trường Đại học Nha Trang, Nha Trang 15 Nguyễn Văn Thái (2005), Diễn biến hàm lượng muối dinh dưỡng chứa N ao nuôi cá mú Cam Ranh-Khánh Hòa, Luận án tốt nghiệp, Trường Đại học Nha Trang 16 Từ Thanh Dung (2011), Thử nghiệp vaccine phòng bệnh gan thận mủ cho cá tra nuôi thâm canh, Thương mại thủy sản, Số 139/2011, Trường Đại học Cần Thơ 17 Trần Công Thịnh, Võ Văn Quang, Lê Thị Thu Thảo, Nguyễn Phi Uy Vũ, Trần Thị Hồng Hoa (2015), Thành phần loài mẫu vật cá mú (họ Serranidae) lưu trữ bảo tàng Hải dương học, Hội nghị khoa học toàn quốc Sinh thái Tài nguyên sinh vật lần thứ VI, Viện Hải dương học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam 18 Trần Ngọc Hải, Nguyễn Thanh Phương (2006), Giáo trình kỹ thuật sản xuất giống nuôi cá biển, Khoa Thủy sản, Trường Đại học Cần Thơ 48 19 Trần Vĩ Hích (2014), Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch cá chẽm (Lates calcarifer Bloch 1790) vi khuẩn Streptococcus iniae, Luận án tiến sĩ, Trường Đại học Nha Trang, Khánh Hịa 20 Trần Vĩ Hích, Nguyễn Thị Kim Cúc (2020), Đánh giá hiệu vaccine bất hoạt phòng bệnh mù mắt liên cầu khuẩn gây cá bớp ni Khánh Hịa, Tạp chí Khoa học-Công nghệ Thủy sản, Số 1/2020, Trường Đại học Nha Trang 21 Võ Văn Quang (2018), Đa dạng loài họ cá mú (Serranidae) vùng biển từ Đà Nẵng đến Bình Thuận, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Biển 2018; 18 (4A): 101-113 22 Võ Văn Quang, Trần Thị Lê Vân, Trần Cơng Thịnh (2012), Thành phần lồi trạng khai thác cá mú giống vịnh Quy Nhơn, Bình Đình, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Biển 2013, 13 (3): 241-248 23 Vũ Triệu An, Homberg JC (2001), Miễn dịch học, Nhà xuất Y học Hà Nội Tài liệu Tiếng anh 24 Adams A (2009), “Advances in disease diagnosis, vaccine development and other emerging methods to control pathogens in aquaculture”, New Technologies in Aquaculture, 7: 197-214 25 Alberti G, Nuzzaci G (1996), “SEM and TEM techniques”, In: Lindquist E E, Sabelis MW, Bruin J (eds.) Eriophyoid Mites, Their Biology, Natural Enemies and Control, World Crop Pests, 6: 399-410 26 Amend DF (1981), “Potency Testing of Fish Vaccines” Fish Biologics.: Serodiagnostics and Vaccines, 49: 447-454 27 Assefa A, Abunna F (2018), Maintenance of Fish Health in Aquaculture: Review of Epidemiological Approaches for Prevention and Control of Infectious Disease of Fish, Veterinary Medicine International 2018 28 Bloch B, Larsen JL (1993), An Iridovirus-like agent associated with systemic infection in cultured turbot Scophthalmus maximus fry in Denmark, Diseases of Aquatic Organisms, 15: 235–240 29 Bogwald J, Dalmo RA (2019), Review on Immersion Vaccines for Fish: An Update 2019, Microorganisms, 7(12): 627 49 30 Chao CB, Yang SC, Tsai HY, Chen CY, Lin CS, Huang HT (2002), A nested PCR for the detection of Grouper Iridovirus in Taiwan (TGIV) in cultured hybrid grouper, giant seaperch, and largemouth bass, Journal of Aquatic Animal Health 2002, 14(2): 104-113 31 Chen L, Klaric G, Wadsworth S, Jayasinghe S, Kuo TY, Evensen O, Mutoloki S (2014), Augmentation of the antibody response of Atlantic salmon by oral administration of alginate-encapsulated IPNV antigens, PLoS One (2014), 9(10) 32 Chi SC, Lo CF, Kou GH, Chang PS, Peng SE, Chen SN (1997), Mass mortalities associated with viral nervous necrosis (VNN) disease in two species of hatchery-reared grouper, Epinephelus fuscoguttatus and Epinephelus akaara (Temminck & Schlegel), Journal of Fish Diseases, 20: 85-193 33 Chinchar VG, Mao J (2000), Molecular diagnosis of Iridovirus infections in coldblooded animals, Seminar in Avian and Exotic Pet Medicine 2000, 9(1): 27-35 34 Chinchar VG, Hick P, Ince IA, Jancovich JK, Marschang R, Qin, Q, Subramaniam K, Waltzek TB, Whittington R, Williams T, Zhang Q (2017), ICTV Report Consortium, ICTV Virus Taxonomy Profile: Iridoviridae, Journal of General Virology, 98: 890–891 35 Chou HY, Hsu CC, Peng TY (1998), “Isolation and Characterization of a Pathogenic Iridovirus from Cultured Grouper (Epinephelus sp.) in Taiwan”, Fish Pathology, 33 (4): 201-206 36 Chua FHC, Ng M, Ng KL, Loo JJ, Wee JY (1994), Investigation of outbreaks of a novel disease, 'Sleepy Grouper Disease', affecting the brown-spotted grouper, Epinephelus tauvina Forskal, Journal of Fish Diseases, 17: 417-427 37 Danayadol Y, Direkbusarakom S, Supamattaya K (1995), “Viral nervous necrosis in brownspotted grouper, Epinephelus malabaricus, cultured in Thailand” In: Diseases in Asian Aquaculture II, Shariff M, Arthur JR and Subasinghe RP (eds.), Fish Health Section, Asian Fisheries Society, Manila, Philippines, p 227-233 50 38 Dhar AK, Manna SK, Allnutt FCT (2014), Viral vaccines for farmed finfish, Virusdisease, 25(1): 1-17 39 Fan TJ, Hu X, Wang L, Geng X, Jiang G, Yang X, Yu M (2012), Development of an inactivated Iridovirus vaccine against turbot viral reddish body syndrome, Journal of Ocean University of China, 11(1): 65-69 40 Food and Agriculture Organization of the United Nations (2014), The State of Word Fisheries and Aquaculture: Opportunities and challenges 41 Fu X, Li N, Lai Y, Liu L, Lin Q, Shi C, Huang Z, Wu S (2012), Protective immunity against Iridovirus disease in mandarin fish, induced by recombinant major capsid protein of infectious spleen and kidney necrosis virus, Fish & Shellfish Immunology 2012, 33: 880-885 42 Gudding R, Muiswinkel WBV (2013), A history of fish vaccination: sciencebased disease prevention in aquaculture, Fish Shellfish Immunology, 35(6) 43 Gudding R (2014), “Vaccination as a Preventive Measure”, In: Fish Vaccination, 1st, Oxford, UK: John Willey and Sons, Inc, 2014, pp 12–21 44 Gibson-Kueh S, Ngoh-Lim GH, Netto P, Kurita J, Nakajima K, Ng ML (2004), A systemic iridoviral disease in mullet, Mugil cephalus L., and tiger grouper, Epinephelus fuscoguttatus Forsskal: a first report and study, Journal of Fish Diseases, 27: 693-699 45 Harikrishnan R, Balasundaram C, Heo MS (2011), Fish health aspects in grouper aquaculture, Aquaculture (2011), 320: 1-21 46 Hick P, Becker J, Whittington R (2016), “Iridoviruses of Fish”, Aquaculture Virology, chapter 8: 127-152 47 Hyatt D, Grould AR, Zupanovic Z, Cunningham AA, Hengstberger S, Whittington RJ, Kattenbelt J, Coupar BEH (2000), Comparative studies of piscine and amphibian Iridoviruses, Archives of Virology (2000), 145: 301-331 48 Inouye K, Yamano K, Maeno Y, Nakajima K, Matsuoka M, Wada Y, Sorimachi M (1992), “Iridovirus infection of cultured red sea bream Pagrus major”, In: Fish Pathology, 27: 19-27 51 49 Jancovich JK, Bremont M, Touchman JW, Jacobs BL (2010), Evidence for multiple recent host species shifts among the ranaviruses (Family Iridoviridae), Journal of Virology, 84: 2636-2647 50 Kai YH, Chi SC (2007), Efficacies of inactivated vaccines againt betanodavirus in grouper larvae (Epinephelus coioides) by bath immunication, Vaccine (2008), 26: 1450-1457 51 Kasornchandra J, Khongpradit R (1997): “Isolation and preliminary characterization of a pathogenic Iridovirus in nursing grouper, Epinephelus malabaricus”, In: Diseases in Asian Aquaculture III (ed by Flegel TW and MacRae IH) Manila, Philippine, pp 61-66 52 Kennedy M (2005), Methodology in Diagnostic virology, Veterinary Clinics Exotic Animal 2005, 8: 7-26 53 Kim TJ, Jang EJ, Lee JI (2008), Vaccination of rock bream, Oplegnathus fasciatus (Temminck & Schlegel), using a recombinant major capsid protein of fish Iridovirus, Journal of Fish Diseases 2008, 31: 547-551 54 Kwak KT, Gardner IA, Farver TB, Hedrick RP (2006), Rapid detection of White Sturgeon Iridovirus (WSIV) using a polymerase chain reaction (PCR) assay, Aquaculture 2006, 254(1-4): 92-101 55 Langdon J, Humphrey JD, Williams LM (1988), Out breaks of an EHNV-like Iridovirus in cultured rainbow trout, Salmo gairdneri Richardson, in Australia Journal of Fish Diseases, 11: 93-96 56 Lillehaug A (2014), “Vaccination Strategies and Procedures” In: Fish Vaccination, 1st, Oxford: John Willey & Sons, 141-150 57 Lindberg GU, Krasyukova ZV (1969), “Fishes of the Sea of Japan and the adjacent areas of the Sea of Okhotsk and the Yellow Sea”, Part Teleostomi, XXIX Perciformes, Percoidei (XC Serranidae - CXLIV Champsodontidae), Translated and publishes for the Smithsonian Institution Library, Janpath, New Delhi, 498 p 58 Liu HI, Chiou PP, Gong HY, Chou HY (2015), Cloning of the Major Capsid 52 Protein (MCP) of Grouper Iridovirus of Taiwan (TGIV) and Preliminary Evaluation of a Recombinant MCP Vaccine against TGIV, International Journal of Molecular Science 2015, 16: 28647-28656 59 Ma J, Bruce TJ, Jones EM, Cain KD (2019), A Review of Fish Vaccine Development Strategies: Conventional Methods and Modern Biotechnological Approaches, Microorganisms, 7: 569 60 Matsuoka S, Inouye K, Nakajima K (1996), “Cultured fish species affected by red sea bream iridoviral disease from 1991 to 1995”, Fish Pathology, 31(4): 233-234 61 Murali S, Wu MF, Guo IC, Chen SC, Yang HW, Chang CY (2002), Molecular characterization and pathogenicity of a Grouper Iridovirus (GIV) isolated from yellow grouper, Epinephelus awoara (Temminck & Schlegel), Journal of Fish Diseases 2002, 26: 91-100 62 Mutoloki S, Munang’andu HM, Evensen O (2015), Oral Vaccination of Fish – Antigen Preparations, Uptake, and Immune Induction, Frontiers in Immunology, 2015, 6: 519 63 Nagasawa K, Cruz-Lacierda ER (2004), Diseases of Cultured Groupers, Southeast Asian Fisheries Development Center, Aquaculture Department, Iloilo, Philippines, 81 p 64 Nakajima K, Ito T, Kurita J, Kawakami H, Itano T, Fukuda Y, Aoi Y, Tooriyama T, Manabe S (2002), “Effective1ness of a vaccine against sea bream iridoviral disease in various cultured marine fish under laboratory conditions”, Fish Pathology, 37(2): 90-91 65 Nakajima K, Maeno Y, Honda A, Yokoyama K, Tooriyama T, Manabe S (1999), Effectiveness of a vaccine against sea bream iridoviral disease in a field trial test, Disease of Aquatic Organisms (1999), Volume 36: 73-75 66 Nakajima K, Maeno Y, Yokoyama K, Kaji C, Manabe S (1998), “Antigen Analysis of Red Sea Bream Iridovirus and Comparison with other Fish Iridoviruses”, Fish Pathology, 33(2): 73-78 53 67 Nakajima K (2003), Grouper iridoviral disease – disease card, Developed to support the NACA/FAO/OIE regional quarterly aquatic animal disease (QAAD) reporting system in the Asia – Pacific, Bangkok, Thailand, pp 68 Nelson JS (2006), Fishes of the world, John Willey and Sons, New York, p 601 69 Newman SG (1993), Bacterial diseases of fish, Annual Review of Fish Diseases, 145-185 70 Oshima S, Hata J, Hirasawa N, Ohtaka T, Hirono I, Aoki T, Yamashita S (1998), Rapid diagnosis of Red Sea Bream Iridovirus infection using the polymerase chain reaction, Diseases of Aquatic Organisms 1998, 32: 87-90 71 Ou-yang Z, Wang P, Huang X, Cai J, Huang Y, Wei S, Ji H, Wei J, Zhou Y, Qin QW (2012), Immunogenicity and protective effects of inactivated Singapore grouper Iridovirus (SGIV) vaccines in orange-spotted grouper, Epinephelus coioides, Developmental and Comparative Immunology, 38: 254-261 72 Peng C, Ma H, Su Y, Wen W, Feng J, Guo Z, Qiu L (2015), Susceptibility of farmed juvenile giant grouper Epinephelus lanceolatus to a newly isolated grouper Iridovirus (genus Ranavirus), Veterinary Microbiology, 177(3-4): 270-279 73 Plant KP, Lapatra SE (2011), Advances in fish vaccine delivery, Developmental & Comparative Immunology, 35(12): 1256-1262 74 Pomeroy R, Agbayani R, Toledo J, Sugama K, Slamet B, Tridjoko (2002), The Status of Grouper Culture in Southeast Asia, SPC Live Reef Fish Information Bulletin, 10: 22-26 75 Qin QW, Chang SF, Ngoh-Lim GH, Gibson-Kueh S, Shi C, Lam TJ (2003), Characterization of a novel Ranavirus isolated from grouper Epinephelus tauvina, Disease of Aquatic Organisms, 53: 1-9 76 Qin QW, Shi C, Gin KYH, Lam TJ (2002), Antigenic characterization of a marine fish Iridovirus from grouper, Epinephelus spp., Journal of Virological Methods, 106: 89-96 77 Qin QW, Wu TH, Jia TL, Hegde A, Zhang RQ (2006), Development and 54 characterization of a new tropical marine fish cell line from grouper, Epinephelus coioides susceptible to Iridovirus and Nodavirus, Journal of Virological Methods 2006, 131(1): 58-64 78 Ronsholdt B, McLean E (1999), The effect of vaccination and vaccine components upon short-term growth and feed conversion efficiency in rainbow trout, Aquaculture, 174(3): 213-221 79 Sadovy Y (2000), Regional Survey for fry/fingerling supply and current practices for grouper maricultura: evaluating current status and long-term prospects for grouper mariculture in South East Asia, Final report to the Collaborative APEC Grouper Research and Development Network (FWG 01/99) 80 Sarter S, Kha NHN., Hung LT, Jerome LJ, Montet D (2007), Antibiotic resistance in Gramnegative bacteria isolated from farmed catfish, Food Control, 18: 1391-1396 81 Shefat SHT (2018), Vaccines for infectious bacterial and viral diseases of fish, Journal Bacteriology and Infectious Diseases 2018, 2(2): 1-5 82 Shi C, Wei Q, Gin KYH, Lam TJ (2003), Production and characterization of monoclonal antibodies to a Grouper Iridovirus, Journal of Virological Methods 2003, 107(2): 147-154 83 Sommerset I, Krossoy B, Biering E, Frost P (2005), Vaccines for fish in aquaculture, Expert Review Vaccines, 4(1): 89-101 84 Son VM, Chang CC, Wu MC, Guu YC, Chiu CH, Cheng W (2009), Dietary administration of the probiotic, Lactobacillus plantarum, enhanced the growth, innate immune responses, and disease resistance of the grouper Epinephelus coioides, Fish and Shellfish Immunology, 26: 691-698 85 Sudthongkong C, Miyata M, Miyazaki T (2002), Viral DNA sequences of genes encoding the ATPase and the major capsid protein of tropical Iridovirus isolates which are pathogenic to fishes in Japan, South China Sea and Southeast Asian countries, Archives of Virology, 147: 2089-2109 86 Thanasaksiri K, Fukuda K, Tsubone S, Miyadai H, Murakami T, Ayana M, 55 Takano R (2018), Efficacy of a bivalent inactivated vaccine against red seabream Iridovirus and Streptococcus iniae in red seabream, Pagrus major, Aquaculture (2018), 492: 132-136 87 Thompson KD, Adams A (2004), “Current trends in immunotherapy and vaccine development for bacterial diseases of fish”, In: Current Trends in the Study of Bacterial and Viral Fish and Shrimp Diseases, Molecular Aspects of Fish and Marine Biology, World Scientific, 3: 313-362 88 Yoshimizu M, Direkbusarakom S, Nomura T, Ezura Y, Kimura T (1992), “Detection of antibody against Aeromonas salmonicida in the serum of salmonid fish by the Enzyme – linked Immunosorbent Assay”, Fish Pathology, 27(2): 73-82 89 Zheng F, Liu H, Sun X, Zhang Y, Zhang B, Teng Z, Hou Y, Wang B (2016), Development of oral DNA vaccine based on chitosan nanoparticles for the immunization against reddish body iridovirus in turbots (Scophthalmus maximus), Aquaculture 2016, 452: 263-271 56 PHỤ LỤC Phụ lục Kết thí nghiệm an toàn Bảng PL1.1 Chiều dài khối lượng cá trước sau kết thúc thí nghiệm Bắt đầu thí nghiệm Chiều dài (cm) 6 6,5 6,5 6,5 6,7 6.7 6,2 6,5 6,6 6,3 6,4 6,3 6,5 6,3 6,4 6,6 6,2 6,2 6,5 6,3 6,1 6,1 6,4 6,5 6,1 Kết thúc thí nghiệm an tồn Cá vaccine Cá đối chứng Khối lượng Chiều dài Khối lượng Chiều dài Khối lượng (g) (cm) (g) (cm) (g) 5,2 8,5 10 11 5,4 10 14,5 9,7 14,2 6,4 10,9 9,2 11,7 6,9 8,7 10,5 9,5 12,8 5,5 9,2 11,6 9,1 12,6 7,1 8,9 11,4 8,5 10,2 7,4 9,4 12,8 8,9 11 7,5 9,6 13,7 8,9 10,9 5,8 9,5 12,9 9,5 13,8 5,4 9,6 14 9,4 13,2 6,5 8,9 11,2 9,2 11,8 8,7 10,8 9,8 14,6 5,5 9,7 13,9 8,6 10,4 6,5 8,8 10,4 9,1 11,2 6,9 9,6 13,7 8,5 10 6,7 9,5 13,8 8,6 10,4 9,4 13,1 9,6 13,2 9,5 13,9 9,1 11 6,7 9,4 12,9 10,9 7,2 8,7 10,6 8,9 10,7 6,6 9,6 12,9 11 6,7 9,3 12,4 9,4 13 7,1 9,4 13,1 9,4 13,2 6,4 9,8 14,6 9,3 12,9 5,7 9,5 13,2 9,5 13,4 6,7 9,5 13 9,6 13,8 5,6 9,2 11,4 9,2 11,5 9,6 13,7 9,3 11,8 7,3 9,3 12,5 9.2 11,6 6,2 10,8 9,3 11,9 PL1 Bảng PL1.2 Các thông số môi trường nước q trình thí nghiệm kiểm tra tính an tồn vaccine Ngày 04/03/2020 05/03/2020 06/03/2020 07/03/2020 08/03/2020 09/03/2020 10/03/2020 11/03/2020 12/03/2020 13/03/2020 14/03/2020 15/03/2020 16/03/2020 17/03/2020 18/03/2020 19/03/2020 20/03/2020 21/03/2020 22/03/2020 23/03/2020 24/03/2020 25/03/2020 26/03/2020 27/03/2020 28/03/2020 29/03/2020 30/03/2020 31/03/2020 01/04/2020 02/04/2020 03/04/2020 Nhiệt độ 29 29 28 29 29 30 30 29 29 30 29 29 30 29 29 29 30 30 30 30 29 29 30 29 30 30 29 30 30 30 30 pH DO 8 8,1 8 8,1 8,1 8,2 8,2 8,1 8,1 8,1 8,2 8,2 8,1 8,1 8,1 8,2 8,2 8,2 8,1 8,2 8,2 8,2 8,1 8,1 8,2 8,1 8,1 8,1 5,5 5,5 5,6 5,4 5,5 5,2 5,4 5,6 5,5 5,4 5,6 5,6 5,5 5,5 5,4 5,6 5,6 5,4 5,5 5,3 5,3 5,4 5,4 5,2 5,4 5,3 5,3 5,6 5,5 5,6 5,5 PL1 Độ mặn (‰) 30 30 30 31 31 31 32 32 32 32 32 32 32 31 31 31 31 31 32 32 32 32 32 31 31 32 32 32 32 32 32 Hình PL1.1 Kết xử lý chiều dài cá thí nghiệm sau 31 ngày Hình PL1.2 Kết xử lý khối lượng cá thí nghiệm sau 31 ngày PL1 Phụ lục Kết thí nghiệm đánh giá hiệu bảo vệ Bảng PL2.1 Nồng độ kháng thể kháng Iridovirus thời điểm công cường độc Cá thứ 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Cá vaccine 0,88 0,86 0,75 0,94 0,92 0,76 0,83 0,86 0,79 0,82 0,77 0,81 0,84 0,83 0,78 0,9 0,79 0,76 0,83 0,85 PL2 Cá đối chứng 0,12 0,11 0,15 0,14 0,14 0,13 0,11 0,09 0,13 0,14 0,11 0,12 0,13 0,09 0,13 0,14 0,12 0,15 0,14 0,13 Hình PL2.1 Kết xử lý số OD450nm Bảng PL2.2 Thí nghiệm cơng cường độc Iridovirus cá mú Số lượng cá chết NT (30 con) Ngày sau cảm nhiễm 10 11 12 13 14 15 Tổng Đối chứng Đối chứng Vaccine Vaccine 2 11 1 25 23 PL2 Bảng PL2.3 Thông số môi trường thí nghiệm cơng cường độc Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày 10 Ngày 11 Ngày 12 Ngày 13 Ngày 14 Nhiệt độ (°C) 30 31 30 30 31 31 31 30 31 30 30 30 30 31 pH 8,1 8,1 8 8,1 8,1 8,1 8,2 8,2 8,2 8,2 8,2 8,2 PL2 DO 5,5 5,6 5,6 5,5 5,6 5,6 5,5 5,4 5,6 5,6 5,6 5,5 5,6 5,6 Độ mặn (‰) 31 31 30 30 30 31 31 31 32 32 32 32 32 32 ... nhằm đánh giá an toàn hiệu bảo vệ loại vaccine cá mú nhiễm Iridovirus với tiêu đề ? ?Đánh giá hiệu bảo vệ Piscivac Irido Si phòng bệnh cá mú ngủ Iridovirus gây cá mú ni” Các nội dung đề tài: Đánh giá. .. TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC & MÔI TRƯỜNG BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC –––––––– ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ BẢO VỆ CỦA PISCIVAC IRIDO SI PHÒNG BỆNH CÁ MÚ NGỦ DO IRIDOVIRUS GÂY RA Ở CÁ... vaccine Piscivac irido Si cá mú Đánh giá hiệu bảo vệ vaccine phòng bệnh cá mú ngủ Ý nghĩa đề tài: Ý nghĩa khoa học: Kết luận văn sở cho nghiên cứu vaccine sản xuất vaccine phòng trị bệnh cá mú ngủ Iridovirus