XÁC ĐỊNH tác NHÂN VI KHUẨN gây BỆNH XUẤT HUYẾT TRÊN cá BỐNG kèo (pseudapocryptes elongatus)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ NGUYỄN THU DUNG XÁC ĐỊNH TÁC NHÂN VI KHUẨN GÂY BỆNH XUẤT HUYẾT TRÊN CÁ BỐNG KÈO (Pseudapocryptes elongatus) LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Cần Thơ, 2016 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ NGUYỄN THU DUNG XÁC ĐỊNH TÁC NHÂN VI KHUẨN GÂY BỆNH XUẤT HUYẾT TRÊN CÁ BỐNG KÈO (Pseudapocryptes elongatus) LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN CÁN BỘ HƢỚNG DẪN PGS.TS ĐẶNG THỊ HOÀNG OANH Cần Thơ, 2016 ii LỜI CẢM TẠ Để hoàn thành nội dung luận văn tốt nghiệp, cố gắng học hỏi thân, tơi cịn nhận giúp đỡ khơng nhỏ từ nhiều tổ chức, quan cá nhân Trước hết tơi xin bày tỏ lịng kính trọng chân thành biết ơn tới Ban Giám hiệu, Ban lãnh đạo Khoa Sau đại học, Ban Chủ nhiệm Khoa Thủy sản, quý thầy, cô Trường Đại học Cần Thơ tạo điều kiện thuận lợi để học tập, nghiên cứu nâng cao trình độ thời gian qua Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới PGS TS Đặng Thị Hồng Oanh trực tiếp, hướng dẫn, tận tình dìu dắt đóng góp ý kiến q báu để giúp tơi hồn thành luận văn Xin cảm ơn cô em Bộ môn Bệnh học thủy sản nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình học tập làm đề tài Bộ môn Cám ơn em học viên Cao học em sinh viên lớp Bệnh học thủy sản hỗ trợ q trình thực đề tài Tơi xin cảm ơn Lãnh đạo Sở Nông nghiệp & PTNT, Trung tâm Khuyến nông Khuyến ngư Bạc Liêu tạo điều kiện cho tơi hồn thành chương trình học Trường Đại học Cần Thơ Nhân đây, xin gửi lời cảm ơn tới tất bạn bè, bạn đồng nghiệp người góp ý, chia sẻ chân thành, hỗ trợ động viên tơi suốt thời gian hồn thành khóa học Cuối tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân bạn bè tạo điều kiện để vượt qua khó khăn, trở ngại suốt q trình học tập làm việc TÁC GIẢ i TÓM TẮT Bệnh xuất huyết cá bống kèo (Pseudapocryptes elongatus) gây thiệt hại lớn cho người nuôi Qua kết điều tra vấn trực tiếp 90 hộ nuôi Bạc Liêu cho thấy, mật độ nuôi cá bống kèo dao động từ 100 – 150 con/m2, suốt thời gian nuôi hầu hết hộ nuôi không thay nước mà cấp thêm nước, xử lý hóa chất vi sinh nhằm cải thiện môi trường nuôi Cá tập trung bệnh giai đoạn 02 tháng tuổi với dấu hiệu bệnh lý xuất huyết thân, vi hậu môn với tỉ lệ chết cao diện rộng, ảnh hưởng đến suất lợi nhuận người nuôi Kết phân lập vi khuẩn sau lần thu mẫu thu 252 khuẩn lạc, tiến hành kiểm tra số tiêu sinh hóa vi khuẩn cho thấy vi khuẩn thu vi khuẩn Gram (+), hình trịn, khơng di động, oxidase catalase âm tính Sau tiến hành định danh vi khuẩn kit API 20 Strep phương pháp giải trình tự gen 16S rRNA xác định vi khuẩn gây bệnh Streptococcus dysgalactiae Quy trình PCR sử dụng đoạn mồi STRD-DyI/dys-16S-23S-2 chuẩn hóa để chẩn đoán nhanh S dysgalactiae gây bệnh xuất huyết cá bống kèo Kết xác định liều lượng gây chết LD50 vi khuẩn 4,25 x 104 CFU/ml Vi khuẩn S dysgalactiae gây bệnh cá bống kèo nhạy cao với kháng sinh florfenicol doxycycline Kết điều trị phịng thí nghiệm cho thấy gây cảm nhiễm cá bống kèo chủng vi khuẩn B1-6T với liều lượng vi khuẩn 4,25 x 104 CFU/cá, sử dụng 02 loại thuốc kháng sinh florfenicol doxycycline liều lượng 20 mg thuốc/kg trọng lượng cá, sau 21 ngày theo dõi hai loại kháng sinh (ở dạng nguyên liệu thành phẩm) cho tỷ lệ điều trị đạt cao, tỉ lệ sống cá đạt từ 65,56 % – 71,11 %, giá trị RPS (%) đạt từ 45,27% – 61,16 % ii ABSTRACT Hemorrhagic disease has caused huge losses in the cultured mudskipper (Pseudapocryptes elongates) Result interviewed 90 farmers in Bac Lieu province showed that the farmers culture mudskipper density from 100-150 fish/m2, almost no change water but they add water in the pond, they use chemical processing and microbiology for improving farming environment Fish concentrate disease stage 02 months old with clinical signs of hemorrhage in the body, at the fin and anal with a high mortality rate and widespread, affecting the productivity and profitability of farmers Results were obtained sampling 252 colonies after times collecting bacteria sample, examined some basic biochemical indicators of bacteria showed that bacterial is Gram (+), cocci, non-motile, oxidase and catalase-negative After conducting identification of bacteria by API 20 Strep kit and method of 16S rRNA gene sequence analysis has identified the bacteria is Streptococcus dysgalactiae PCR using primers STRD-DYI/dys-16S-23S-2 is standardized to provide rapid diagnosis pathogenic S dysgalactiae in hemorrhage mudskipper The results determine the LD50 in lethal doses of bacteria is 4.25 x 104 CFU/ml S dysgalactiae bacteria were sensitized with florfenicol and doxycycline The results of treatment in the laboratory showed that when the mudskippers are causing susceptibility by strain B1-6T with dose 4.25 x 104 CFU/fish, use florfenicol and doxycycline in dose 20 mg/kg fish, after 21 days, the result of the experiment showed that two kinds of antibiotics (materials and products) are for reaching higher treatment rates, survival rate is from 65.56% 71.11%, the value RPS (%) was from 45.27% - 61.16% iii CAM KẾT KẾT QUẢ Tôi xin cam kết luận án hoàn thành dựa kết nghiên cứu khuôn khổ đề tài ‟Nghiên cứu bệnh xuất huyết cá bống kèo (Pseudapocryptes lanceolatus) nuôi thương phẩm đề xuất giải pháp phòng, trị” (Mã số: B2013- 16-29) Bộ Giáo dục Đào tạo tài trợ Đề tài có quyền sử dụng kết luận án để phục vụ cho đề tài Cần Thơ, ngày tháng năm 2016 Tác giả Nguyễn Thu Dung iv MỤC LỤC Trang Lời cảm tạ i Tóm tắt ii Abstract iii Cam kết kết iv Chƣơng I: Giới thiệu 1.1 Mục tiêu nghiên cứu 1.2 Phạm vi nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu 1.4 Giới hạn nghiên cứu 1.5 Ý nghĩa nghiên cứu 1.6 Điểm luận án Chƣơng II: Tổng quan tài liệu 2.1 Phân loại cá bống kèo 2.2 Tình hình ni cá bống kèo giới nước 2.2.1 Tình hình ni cá bống kèo giới 2.2.2 Tình hình ni cá bống kèo nước 2.3 Tình hình xuất bệnh cá bống kèo 2.4 Bệnh xuất huyết cá 2.4.1 Dấu hiệu bệnh lý 2.4.2 Đặc điểm mô bệnh học 2.4.3 Đặc điểm huyết học 2.5 Tổng quan đặc điểm vi khuẩn gây bệnh cá 2.5.1 Bệnh vi khuẩn Vibrio 2.5.2 Bệnh vi khuẩn Pseudomonas 10 2.5.3 Bệnh vi khuẩn Streptococcus 11 2.5.4 Bệnh vi khuẩn Flexibacter 12 2.5.5 Bệnh vi khuẩn Aeromonas 13 2.5.6 Bệnh vi khuẩn Edwardsiella 15 2.6 Tổng quan bệnh vi khuẩn Streptococcus cá nước lợ, mặn 16 2.6.1 Bệnh vi khuẩn Streptococcus iniae 17 2.6.2 Bệnh vi khuẩn Streptococcus agalactiae 18 2.6.3 Bệnh vi khuẩn Streptococcus dysgalactiae 19 2.6.4 Cơ chế gây bệnh 20 2.6.5 Phương thức lây truyền bệnh môi trường nuôi 20 2.6.6 Phương thức chẩn đoán 21 2.7 Xác định độc lực số chủng vi khuẩn gây bệnh xuất huyết cá 21 v 2.8 Chẩn đoán bệnh xuất huyết cá 22 2.9 Phòng trị bệnh xuất huyết cá 23 2.9.1 Hóa chất 23 2.9.2 Thuốc kháng sinh 23 2.9.3 Vắc xin 25 Chƣơng III: Phƣơng pháp nghiên cứu 27 3.1 Vật liệu nghiên cứu 27 3.1.1 Dụng cụ 27 3.1.2 Hóa chất 27 3.1.3 Môi trường 27 3.1.4 Thuốc kháng sinh 28 3.1.5 Địa điểm thời gian thực 28 3.2 Phương pháp nghiên cứu 28 3.2.1 Điều tra vấn 28 3.2.2 Phương pháp thu mẫu cá 29 3.2.3 Phương pháp kiểm tra ký sinh trùng 29 3.2.4 Phương pháp phân tích mẫu vi khuẩn 29 3.2.5 Định danh vi khuẩn phương pháp giải trình tự 32 3.2.6 Phương pháp mô bệnh học 33 3.2.7 Phương pháp huyết học 33 3.2.8 Phương pháp chẩn đoán nhanh bệnh xuất huyết 34 3.2.9 Phương pháp lập kháng sinh đồ 37 3.2.10 Phương pháp bố trí thí nghiệm 38 3.3 Phương pháp xử lý số liệu 41 Chƣơng IV: Kết thảo luận 42 4.1 Khảo sát tình hình ni cá bống kèo 42 4.1.1 Kỹ thuật nuôi cá bống kèo 42 4.1.2 Tình hình bệnh cá bống kèo nuôi thương phẩm 49 4.2 Kết kiểm tra ký sinh trùng cá bống kèo 50 4.3 Phân lập định danh vi khuẩn cá bống kèo bệnh xuất huyết 51 4.3.1 Kết phân lập vi khuẩn 51 4.3.2 Đặc điểm hình thái, sinh lý sinh hóa vi khuẩn gây bệnh cá bống kèo 52 4.3.3 Kết định danh vi khuẩn kit API 20 Strep 53 4.3.4 Kết định danh vi khuẩn phương pháp giải trình tự 53 4.4 Xác định tác nhân vi khuẩn gây bệnh xuất huyết cá bống kèo 55 4.4.1 Xác định đặc điểm bệnh học bệnh xuất huyết cá bống kèo 55 4.4.2 Đặc điểm mô bệnh học bệnh xuất huyết cá bống kèo 58 4.4.3 Đặc điểm huyết học cá bống kèo bệnh 63 vi 4.5 Phát triển quy trình chẩn đốn bệnh xuất huyết cá bống kèo phương pháp sinh học phân tử 69 4.5.1 Kết chiết tách DNA trực tiếp từ mô thận cá 69 4.5.2 Kết chiết tách DNA vi khuẩn 69 4.5.3 Kết khảo sát cặp mồi cho qui trình PCR phát Streptococcus dysgalactiae 69 4.5.4 Kiểm tra tính đặc hiệu độ nhạy qui trình PCR phát vi khuẩn S dysgalactiae 70 4.5.5 Kiểm tra khả ứng dụng qui trình PCR phát vi khuẩn S dysgalactiae 71 4.6 Phương pháp điều trị bệnh xuất huyết cá bống kèo qui mơ phịng thí nghiệm 72 4.6.1 Lập kháng sinh đồ xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) thuốc kháng sinh lên vi khuẩn gây bệnh xuất huyết cá bống kèo 72 4.6.2 Kết thí nghiệm cảm nhiễm 77 4.6.3 Kết thí nghiệm xác định giá trị LD50 80 4.6.4 Kết thí nghiệm điều trị bệnh qui mơ phịng thí nghiệm 82 Chƣơng 5: Kết luận đề xuất 86 5.1 Kết luận 86 5.1.1 Kết điều tra 86 5.1.2 Kết nghiên cứu 86 5.2 Đề xuất 87 TÀI LIỆU THAM KHẢO 88 Tài liệu tiếng Anh 88 Tài liệu tiếng Việt 100 PHỤ LỤC 106 Phụ lục A: Phiếu điều tra ao nuôi 106 Phụ lục B: Hóa chất phương pháp phân tích mẫu 108 Phụ lục B.1: Phương pháp xác định khả tan huyết vi khuẩn 108 Phụ lục B.2: Phương pháp định danh vi khuẩn kit API 20 Strep 108 Phụ lục B.3: Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu thuốc kháng sinh 109 Phụ lục C: Số liệu nghiên cứu 112 Phụ lục C.1: Kết điều tra 112 Phụ lục C.2: Kết thu mẫu phân lập vi khuẩn 121 Phụ lục C.3: Định danh vi khuẩn kit API 20 Strep 141 Phụ lục C.4: Kết giải mã gen định danh vi khuẩn 142 Phụ lục C.5: Kết quan sát mẫu mô cá bống kèo 154 Phụ lục C.6: Kết thí nghiệm cảm nhiễm 157 vii Phụ lục C.7: Kết thí nghiệm LD50 158 Phụ lục C.8: Kết thí nghiệm điều trị 160 viii Query 481 Sbjct 926 Query 541 Sbjct 866 Query 601 Sbjct 806 Query 661 Sbjct 746 Query 721 Sbjct 686 Query 781 Sbjct 626 Query 841 Sbjct 566 Query 901 Sbjct 506 Query 961 Sbjct 446 TTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAG 540 TTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTCCGGCACTAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTCCGGCACTAA 600 GCCCCGGAAAGGGCCTAACACCTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GCCCCGGAAAGGGCCTAACACCTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATC 660 TAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGCCGC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGCCGC 720 TTTCGCCACCGGTGTTCCTCCATATATCTACGCATTTCACCGCTACACATGGAATTCCAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTTCGCCACCGGTGTTCCTCCATATATCTACGCATTTCACCGCTACACATGGAATTCCAC 780 TCTCCCCTTCTGCACTCAAGTTCTCCAGTTTCCAAAGCGTACAATGGTTGAGCCACTGCC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TCTCCCCTTCTGCACTCAAGTTCTCCAGTTTCCAAAGCGTACAATGGTTGAGCCACTGCC 840 TTTAACTTCAGACTTAAAGAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTTAACTTCAGACTTAAAGAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAAC GCTCGGGACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTCCCTTTCTGGTTA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GCTCGGGACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTCCCTTTCTGGTTA GTTACCGTCACA |||||||||||| GTTACCGTCACA 867 807 747 687 627 567 900 507 960 447 972 435 Vi khuẩn B6-9TT Kết giải trình tự gen 16S AAGTAGAACGCTGAGGACTGGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTA ACGCGTAGGTAACCTACCTCATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCG CATGACAATGGAGGACTCATGTCTTTCATTTAAAAGGTGCAATTGCATCACTATGAGATG GACCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGC CGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGA GGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAG TGAAGAAGGTTTTCGAATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGATGGTGGGAGTGG AAAATCCACCATGTGACGGTAACTAACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGC CGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAG GCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAAGGCAGTGGCTCAACCATTGTACGCTTTGGAAACTG GAGAACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA TATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTC GAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAG TGCTAGGTGTTAGGCCCTTTCCGGGGCTTAGTGCCGGAGCTAACGCATTAAGCACTCCGC CTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCG GTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTC CTGACCGGTCTAGAGATAGGCTTTCCCTTCGGGGCAGGAGTGACAGG 136 Streptococcus dysgalactiae subsp dysgalactiae strain TSOD1 16S ribosomal RNA gene, partial sequence Sequence ID: gb|KM077497.1|Length: 1426Number of Matches: Range 1: to 1005GenBankGraphicsNext MatchPrevious Match Alig nment stati sti cs fo r matc h #1 Score Expect Identities Gaps Strand 1836 bits(994) 0.0 996/997(99%) 0/997(0%) Plus/Plus Query Sbjct Query 61 Sbjct 69 Query 121 Sbjct 129 Query 181 Sbjct 189 Query 241 Sbjct 249 Query 301 Sbjct 309 Query 361 Sbjct 369 Query 421 Sbjct 429 Query 481 Sbjct 489 Query 541 Sbjct 549 Query 601 Sbjct 609 Query 661 Sbjct 669 Query 721 Sbjct 729 Query 781 Sbjct 789 Query 841 Sbjct 849 AAGTAGAACGCTGAGGACTGGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGTAGAACGCTGAGGACTGGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTAA 60 CGCGTAGGTAACCTACCTCATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CGCGTAGGTAACCTACCTCATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCA 120 TGACAATGGAGGACTCATGTCTTTCATTTAAAAGGTGCAATTGCATCACTATGAGATGGA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TGACAATGGAGGACTCATGTCTTTCATTTAAAAGGTGCAATTGCATCACTATGAGATGGA 180 CCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCG 240 ACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGC 68 128 188 248 300 308 AGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAA 360 GAAGGTTTTCGAATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAAT ||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAAT 420 CCACCATGTGACGGTAACTAACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCACCATGTGACGGTAACTAACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGT 480 AATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTC 540 TTTAAGTCTGAAGTTAAAGGCAGTGGCTCAACCATTGTACGCTTTGGAAACTGGAGAACT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTTAAGTCTGAAGTTAAAGGCAGTGGCTCAACCATTGTACGCTTTGGAAACTGGAGAACT 600 TGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGA 660 GGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGT 720 GGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTG 780 TTAGGCCCTTTCCGGGGCTTAGTGCCGGAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTAGGCCCTTTCCGGGGCTTAGTGCCGGAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGT 840 ACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATG 900 137 368 428 488 548 608 668 728 788 848 908 Query 901 Sbjct 909 Query 961 Sbjct 969 TGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCCTGACCGGTC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCCTGACCGGTC TAGAGATAGGCTTTCCCTTCGGGGCAGGAGTGACAGG ||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TAGAGATAGGCTTTCCCTTCGGGGCAGGAGTGACAGG 960 968 997 1005 Vi khuẩn A1F1 Kết giải trình tự gen 16S TAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATCAAGTA GAACGCTGAGGACTGGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGTGTGAGTAAC GCGTAGGTAACCTACCTCATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACC GCATAAAAGTGTTTAACCCATGTTAAACATTTAACAGGTGCAACTGCATCACTATG AGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACG ATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCA GACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGACGGAAGTCTGACC GAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTCTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGAG AAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAATCCACCATGTGACGGTAAATAACCAGAAAGG GACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGGGGTAATACGTAGGTCCCGAGCTTTGTCCG GATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAAGGCA GTGGCT CAAC Streptococcus dysgalactiae 16S ribosomal RNA, partial sequence Sequence ID: gb|AF433167.1|AF433167Length: 1466Number of Matches: Score Expect Identities Gaps Strand 1099 bits(595) 0.0 607/613(99%) 0/613(0%) Plus/Plus Query 12 Sbjct Query 72 Sbjct 61 Query 132 Sbjct 121 Query 192 Sbjct 181 Query 252 Sbjct 241 Query 312 Sbjct 301 Query 372 Sbjct 361 Query 432 Sbjct 421 Query 492 Sbjct 481 CCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCTGAGGACT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCTGAGGACT 71 GGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGTGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTACCTC |||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||| GGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTACCTC 131 ATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAAAGTGTTTAACCCATG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAAAGTGTTTAACCCATG 191 TTAAACATTTAACAGGTGCAACTGCATCACTATGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAG |||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTAAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTATGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAG 251 TTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGC 311 CACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGG 371 CAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTCTCGGATCGTAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||| CAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAA 431 AGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAATCCACCATGTGACGGTAAAT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| | AGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAATCCACCATGTGACGGTAACT 491 AACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGGGGTAATACGTAGGTCCCGAGCT ||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||||||||| AACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCG 138 60 120 180 240 300 360 420 480 551 540 Query 552 Sbjct 541 Query 612 Sbjct 601 TTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAAG GCAGTGGCTCAAC ||||||||||||| GCAGTGGCTCAAC 611 600 624 613 Vi khuẩn A1F2 Kết giải trình tự gen 16S TAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGT AGAACGCTGAGGACTGGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTTA CGCGTAGGTAACCTACCTCATACCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATAC CGCATAGAAGTGTTTAACCCATGTTAAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTAT GAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGAC GATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCC AGACT CCTACGGGAG GCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGACGGAAGTCTGAC CGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGA GAAG AATGAAGGTG GGATTGGAAA ATCCACCATG TGACGGTAACTTACCAGAAA GGGAGGGCTA ACTACGTGCC AGCAACCGCG GTTATACGTA GGTCCC Streptococcus dysgalactiae 16S ribosomal RNA, partial sequence Sequence ID: gb|AF433167.1|AF433167Length: 1466Number of Matches: Score Expect Identities Gaps Strand 939 bits(508) 0.0 526/535(98%) 0/535(0%) Plus/Plus Query 12 Sbjct Query 72 Sbjct 61 Query 132 Sbjct 121 Query 192 Sbjct 181 Query 252 Sbjct 241 Query 312 Sbjct 301 Query 372 Sbjct 361 Query 432 Sbjct 421 Query 492 Sbjct 481 CCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCTGAGGACT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCTGAGGACT GGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTTACGCGTAGGTAACCTACCTC ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||||||||||| GGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTACCTC 71 60 131 120 ATACCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAGAAGTGTTTAACCCATG ||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||||||| ATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAAAGTGTTTAACCCATG 191 TTAAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTATGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTAAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTATGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAG 251 TTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGC 311 CACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGG 371 CAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAA 431 AGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGAAGGTGGGATTGGAAAATCCACCATGTGACGGTAACT |||||||||||||||||||||||| ||||||| ||||||||||||||||||||||||||| AGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAATCCACCATGTGACGGTAACT 491 TACCAGAAAGGGAGGGCTAACTACGTGCCAGCAACCGCGGTTATACGTAGGTCCC |||||||||||| ||||||||||||||||||| ||||||| ||||||||||||| AACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCC 139 546 535 180 240 300 360 420 480 Vi khuẩn A1F4 Kết giải trình tự gen 16S TAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGT AGAACGCTGAGGACTGGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTA ACGCGTAGGTAACCTACCTCATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATA CCGCATAAAAGTGTTTAACCAATGTTTAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTAT GAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGAC GATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCC AGACTCCTACGGAAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGACGGAAGTCTGAC CGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGA GAAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAATCCACCATGTGACGGTAACTAACCAGAAAG GGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCGGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCC GGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAAGG Streptococcus dysgalactiae 16S ribosomal RNA, partial sequence Sequence ID: gb|AF433167.1|AF433167Length: 1466Number of Matches: Score Expect Identities Gaps Strand 1088 bits(589) 0.0 597/601(99%) 0/601(0%) Plus/Plus Query 12 Sbjct Query 72 Sbjct 61 Query 132 Sbjct 121 Query 192 Sbjct 181 Query 252 Sbjct 241 Query 312 Sbjct 301 Query 372 Sbjct 361 Query 432 Sbjct 421 Query 492 Sbjct 481 Query 552 Sbjct 541 Query 612 Sbjct 601 CCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCTGAGGACT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCTGAGGACT 71 GGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTACCTC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTACCTC 131 ATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAAAGTGTTTAACCAATG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||| ATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAAAGTGTTTAACCCATG 191 TTTAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTATGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAG || ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTAAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTATGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAG 60 120 180 251 240 TTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGC 311 CACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGAAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGG |||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||||||||||| CACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGG 371 CAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAA 431 AGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAATCCACCATGTGACGGTAACT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAATCCACCATGTGACGGTAACT 491 AACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCGGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCG ||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||| AACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCG 551 TTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAAG 611 G | G 612 601 140 300 360 420 480 540 600 Vi khuẩn A1F6 Kết giải trình tự gen 16S CATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAAAGTGTTTAAC CCATGTTAAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTATGAGATGGACCTGCGTTGT ATTAGCTAGTTAGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGA GAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCA GCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGTGTGAGT GAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGATGGTGGGAGT GGAAAATCCACCATGTGACGGTAACTAACCAGAAAGGGACAGCTAACTACGTGCC AGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAG CGAGCGCAGGCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAAGGCAGTGGCTCAACCATTGTAC GCTCTGGAAACTGGAGAACTTGAGTGCAGAAGGAGAGAGTGGAATTCCATGTGTA GCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAA GC Streptococcus dysgalactiae 16S ribosomal RNA, partial sequence Sequence ID: gb|AF433167.1|AF433167Length: 1466Number of Matches: Score Expect Identities Gaps Strand 1085 bits(587) 0.0 597/602(99%) 0/602(0%) Plus/Plus Query Sbjct 120 Query 61 Sbjct 180 Query 121 Sbjct 240 Query 181 Sbjct 300 Query 241 Sbjct 360 Query 301 Sbjct 420 Query 361 Sbjct 480 Query 421 Sbjct 540 Query 481 Sbjct 600 Query 541 Sbjct 660 Query 601 Sbjct 720 CATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAAAGTGTTTAACCCAT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAAAGTGTTTAACCCAT 60 GTTAAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTATGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GTTAAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTATGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTA 120 GTTAGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGG ||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGG 180 CCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCG 240 GCAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGTGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTA |||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||| GCAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTA 300 AAGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAATCCACCATGTGACGGTAAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAATCCACCATGTGACGGTAAC 360 TAACCAGAAAGGGACAGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGC ||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TAACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGC 179 239 299 359 419 479 420 539 GTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAA 480 GGCAGTGGCTCAACCATTGTACGCTCTGGAAACTGGAGAACTTGAGTGCAGAAGGAGAGA ||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||||| |||| GGCAGTGGCTCAACCATTGTACGCTTTGGAAACTGGAGAACTTGAGTGCAGAAGGGGAGA 540 GTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAA 600 GC || GC 602 721 141 599 659 719 Vi khuẩn A1F9 Kết giải trình tự gen 16S TAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGT AGAACGCTGAGGACTGGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTA ACGCGTAGGTAACCTACCTCATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATA CCGCATAAAAGTGTTTAACCCATGTTAAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTA TGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGA CGAAACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCC CAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGATTCTTCGGCAATGGACGGAAGTCTGAC CGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGA GAAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAATCCACCATGTGACGGTAACTAACCAGAAAG GGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCC GGA TTTATTGGGC GTAAA Streptococcus dysgalactiae 16S ribosomal RNA, partial sequence Sequence ID: gb|AF433167.1|AF433167Length: 1466Number of Matches: Score Expect Identities Gaps Strand 1031 bits(558) 0.0 562/564(99%) 0/564(0%) Plus/Plus Query 12 Sbjct Query 72 Sbjct 61 Query 132 Sbjct 121 Query 192 Sbjct 181 Query 252 Sbjct 241 Query 312 Sbjct 301 Query 372 Sbjct 361 Query 432 Sbjct 421 Query 492 Sbjct 481 Query 552 Sbjct 541 CCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCTGAGGACT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCTGAGGACT 71 GGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTACCTC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTACCTC 131 ATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAAAGTGTTTAACCCATG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAAAGTGTTTAACCCATG 191 TTAAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTATGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTAAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTATGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAG 251 TTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGAAACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGC ||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||| TTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGC 311 CACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGATTCTTCGG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||| CACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGG 371 CAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAA 431 AGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAATCCACCATGTGACGGTAACT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGCTCTGTTGTTAGAGAAGAATGATGGTGGGAGTGGAAAATCCACCATGTGACGGTAACT 491 AACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCG 551 TTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAA |||||||||||||||||||||||| TTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAA 575 564 142 60 120 180 240 300 360 420 480 540 10 Vi khuẩn A5F4 Kết giải trình tự gen 16S TAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGT AGAACGCTGAGGACTGGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGGACGGGTGAGTAC CGCGTAGGTAACCTACCTCATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATAC CGCATAAAAGTGTTTAACCCATGTTAAACATTTACAAGGTGCAACTGCATCACTAT GAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGAAGTAACGGCTCACCAAGGTGAC GATACATAGCCGACCTGAGAGAGTGATCGGCCAAACTGGGACTGAAACACGGCCC AGCCT CCTAC Streptococcus dysgalactiae 16S ribosomal RNA, partial sequence Sequence ID: gb|AF433167.1|AF433167Length: 1466Number of Matches: Score Expect Identities Gaps Strand 568 bits(307) 3e-158 325/334(97%) 0/334(0%) Plus/Plus Query 12 Sbjct Query 72 Sbjct 61 Query 132 Sbjct 121 Query 192 Sbjct 181 Query 252 Sbjct 241 Query 312 Sbjct 301 CCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCTGAGGACT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCTGAGGACT 71 GGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGGACGGGTGAGTACCGCGTAGGTAACCTACCTC |||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||| ||||||||||||||||||| GGTGCTTGCACCGGTCCAAGGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTACCTC 131 ATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAAAGTGTTTAACCCATG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAAAGTGTTTAACCCATG 191 TTAAACATTTACAAGGTGCAACTGCATCACTATGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAG ||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTAAACATTTAAAAGGTGCAACTGCATCACTATGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAG 251 TTGGTGAAGTAACGGCTCACCAAGGTGACGATACATAGCCGACCTGAGAGAGTGATCGGC ||||||| ||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||| ||||||||| TTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGC 311 CAAACTGGGACTGAAACACGGCCCAGCCTCCTAC || ||||||||||| ||||||||||| ||||||| CACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTAC 143 345 334 60 120 180 240 300 Phụ lục C.5 Kết quan sát mẫu mô cá bống kèo Ao Cá ĐỢT 1 A1F1 A1F2 A1F3 A1F4 A1F5 A2F1 A2F2 A2F3 A2F4 A2F5 A2F6 A2F7 A2F8 A2F9 A2F10 A3F1 A3F2 A3F3 A3F4 A3F5 A3F6 A3F7 A3F8 A3F9 A3F10 A4F1 A4F2 A4F3 A4F4 A4F5 A4F6 A4F8 A4F9 A4F10 ĐỢT A6F1 A6F2 A6F3 A6F4 A6F6 A6F7 A6F8 Mang Gan Thận Sợi mang thứ cấp dính lại, biến đổi cấu trúc phiến mang, tăng sinh tế bào biểu mơ, có tượng nhiễm khuẩn, động mạch vào sợi mang thứ cấp bị sung huyết Sợi mang thứ cấp dính lại, sợi mang thứ cấp phình to thối hóa ngắn lại Sung huyết tĩnh mạch gan, biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mơ, quản cầu thận biến đổi cấu trúc, phình to teo nhỏ nhiễm khuẩn Sung huyết tĩnh mạch gan, biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mô, quản cầu thận biến đổi cấu trúc, phình to teo nhỏ nhiễm khuẩn Sợi mang thứ cấp dính lại, sợi mang thứ cấp phình to thối hóa ngắn lại Biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mô, quản cầu thận biến đổi cấu trúc, phình to teo nhỏ nhiễm khuẩn Sợi mang thứ cấp dính lại, sợi mang thứ cấp phình to thối hóa ngắn lại Biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mơ Sợi mang thứ cấp dính lại Biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mơ Sợi mang thứ cấp dính lại Biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mô Sợi mang thứ cấp dính lại Biến đổi cấu trúc mơ Sung huyết xuất huyết vùng mô 144 A6F9 A6F10 A7F1 A7F2 A7F3 A7F4 A7F5 A7F6 A7F7 A7F8 A7F9 A7F10 A8F5 A9F4 ĐỢT A10-1 A10-2 A10-3 A10-6 A10-7 A10-10 A11-1 A11-3 A11-4 A11-5 A11-6 A11-7 A11-8 A11-9 A11-10 A12-1 A12-2 A12-3 A12-4 A12-6 A12-7 A12-8 A12-9 A12-10 ĐỢT B1-1 B1-2 B1-3 B1-4 Sợi mang thứ cấp dính lại, biến đổi cấu trúc phiến mang, tăng sinh tế bào biểu mơ, có tượng nhiễm khuẩn, động mạch vào sợi mang thứ cấp bị sung huyết Sung huyết tĩnh mạch gan, biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mơ, quản cầu thận biến đổi cấu trúc, phình to teo nhỏ nhiễm khuẩn Sợi mang thứ cấp dính lại Sợi mang thứ cấp dính lại Biến đổi cấu trúc mô Biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mô Sung huyết xuất huyết vùng mơ Sợi mang thứ cấp dính lại Biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mô Sợi mang thứ cấp dính lại Sợi mang thứ cấp dính lại Sợi mang thứ cấp dính lại Biến đổi cấu trúc mô Biến đổi cấu trúc mô Biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mô Sung huyết xuất huyết vùng mô Sung huyết xuất huyết vùng mơ Sợi mang thứ cấp dính lại Biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mơ Sợi mang thứ cấp dính lại Biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mô Sợi mang thứ cấp dính lại Biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mô Sợi mang thứ cấp dính lại, biến đổi cấu trúc phiến mang, tăng sinh tế bào biểu mơ, có Sung huyết tĩnh mạch gan, biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mô, quản cầu thận biến đổi cấu trúc, phình to teo 145 B1-5 B1-6 B1-7 B1-8 B1-9 B1-10 B2-1 B2-3 B2-4 B2-5 B2-6 B2-7 B2-8 B2-9 B2-10 B3-1 B3-2 B3-3 B3-4 B4-1 B4-2 B4-3 B4-4 B4-5 B4-6 B4-7 B5-1 B5-2 B5-3 B5-4 B5-5 B5-6 B5-7 B5-8 B5-9 B5-10 B6-3 B6-4 B6-5 B6-6 B6-9 B6-10 tượng nhiễm khuẩn, động mạch vào sợi mang thứ cấp bị sung huyết nhỏ nhiễm khuẩn Sợi mang thứ cấp dính lại Sợi mang thứ cấp dính lại, sợi mang thứ cấp phình to thối hóa ngắn lại Biến đổi cấu trúc mơ Biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mô Sung huyết xuất huyết vùng mô Sợi mang thứ cấp dính lại, sợi mang thứ cấp phình to Biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mơ Sợi mang thứ cấp dính lại, sợi mang thứ cấp phình to Biến đổi cấu trúc mơ Sung huyết xuất huyết vùng mô Sợi mang thứ cấp dính lại, biến đổi cấu trúc phiến mang, tăng sinh tế bào biểu mơ, có tượng nhiễm khuẩn, động mạch vào sợi mang thứ cấp bị sung huyết Sung huyết tĩnh mạch gan, biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mô, quản cầu thận biến đổi cấu trúc, phình to teo nhỏ nhiễm khuẩn Sợi mang thứ cấp dính lại, sợi mang thứ cấp phình to Biến đổi cấu trúc mơ Sung huyết xuất huyết vùng mô Sợi mang thứ cấp dính lại, sợi mang thứ cấp phình to Biến đổi cấu trúc mô Sung huyết xuất huyết vùng mô Ký hiệu: A: ao cá bệnh, F: cá; T: Thận, G: gan; TT: tỳ tạng ; K: ao cá khỏe 146 Phụ lục C.6 Kết thí nghiệm cảm nhiễm Ngày Tổng cá chết Tỷ lệ (%) Đối chứng L1 L2 L3 B1-6T L1 L2 L3 B2-3TT L1 L2 L3 B2 L1 L 10 10 10 10 10 10 10 1 1 1 1 1 1 1 13,3 2 2 2 7 0 23 76,7 147 10 0 0 7 10 0 22 73,3 10 0 8 0 9 86 Phụ lục C.7 Kết thí nghiệm LD50 Số liệu cá thí nghiệm LD50 với chủng vi khuẩn B1-6T Ngiệm thức Ngiệm thức L1 L2 L3 20 0 7 7 7 7 20 9 9 9 20 0 7 7 7 Ngày 10 11 12 13 14 Tổng cá chết Tỷ lệ (%) L1 L2 20 11 13 13 13 13 13 13 13 13 Ngiệm thức L3 20 0 1 8 8 8 8 L1 L2 L3 20 0 11 12 13 13 13 13 13 13 13 20 9 9 9 9 20 0 8 8 8 8 20 8 8 8 8 Ngiệm thức L1 L2 20 13 14 16 16 16 16 16 16 16 16 Ngiệm thức L3 20 10 13 15 16 16 16 16 16 16 16 L1 20 0 10 11 12 12 12 12 12 12 12 L2 20 11 15 16 16 16 16 16 16 16 16 16 Ng L3 20 12 13 15 15 15 15 15 15 15 15 L1 20 10 13 15 16 16 16 16 16 16 16 16 23 29 30 44 47 38,3 48,3 50 73,3 78,3 20 10 14 17 18 18 18 18 18 18 18 18 Nghiệm thức 1: 4,25 x 102 CFU/ml; Nghiệm thức 2: 4,25 x 103 CFU/ml; Nghiệm thức 3: 4,25 x 104 CFU/ml; Nghiệm thức 4: 4,25 x 105 CFU/ml; Nghiệm thức 5: 4,25 x 106 CFU/ml; Nghiệm thức 6: 4,25 x 107 CFU/ml; Nghiệm thức 7: 4,25 x 108 CFU/ml; Nghiệm thức đối chứng: cá tiêm nước muối sinh lý Số liệu cá thí nghiệm LD50 với chủng vi khuẩn B2-5G Ngiệm thức Ngày 10 11 L1 L2 L3 20 0 11 12 12 12 12 20 0 9 9 20 0 8 8 8 Ngiệm thức L1 20 1 2 10 10 10 10 L2 20 12 13 13 13 13 L3 Ngiệm thức L1 L2 L3 20 1 11 11 11 11 11 20 2 12 14 14 14 14 20 10 11 12 13 13 13 13 13 20 0 10 12 12 12 12 148 Ngiệm thức L1 20 10 12 14 16 16 16 16 L2 20 0 10 11 13 13 13 L3 20 2 10 12 13 13 13 Ngiệm thức L1 20 0 8 9 10 11 14 15 L2 20 0 13 13 13 13 13 L3 20 12 14 15 15 15 15 15 Ngiệm L1 20 0 13 14 14 14 14 L 12 13 14 12 12 12 Tổng cá chết Tỷ lệ chết (%) 9 8 10 10 10 13 13 13 12 12 12 11 11 11 14 14 14 13 13 13 16 16 16 13 13 13 13 14 14 16 17 17 13 13 13 29 35 38 43 45 48,33 58,33 63,33 71,67 75 15 15 15 14 14 14 81 Nghiệm thức 1: 3,5 x 102 CFU/ml; Nghiệm thức 2: 3,5 x 103 CFU/ml; Nghiệm thức 3: 3,5 x 104 CFU/ml; Nghiệm thức 4: 3,5 x 105 CFU/ml; Nghiệm thức 5: 3,5 x 106 CFU/ml; Nghiệm thức 6: 3,5 x 107 CFU/ml; Nghiệm thức 7: 3,5 x 108 CFU/ml; Nghiệm thức đối chứng: cá tiêm nước muối sinh lý Phụ lục C.8 Kết thí nghiệm điều trị Ngày thí nghiệm NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 3 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 2 4 2 4 2 3 3 3 1 1 2 2 4 1 1 1 2 0 0 0 0 1 2 1 0 0 0 0 1 10 1 0 0 0 0 11 0 0 0 0 0 12 0 0 0 0 0 13 0 0 0 0 1 14 0 0 0 0 0 0 15 0 0 0 0 0 0 0 16 0 0 0 0 0 0 0 17 0 0 0 0 0 0 0 18 0 0 0 0 0 0 19 0 0 0 0 0 0 0 20 0 0 0 0 0 0 0 21 0 0 0 0 0 0 0 10 11 10 9 10 10 10 21 23 23 20 19 20 21 21 22 21 20 20 21 20 22 7 33,33 36,67 33,33 30 30 26,67 30 33,33 33,33 30 33,33 26,67 70 76,67 76,67 Tổng cộng cá chết Số cá lại Tỉ lệ cá chết % 149 Tỉ lệ cá sống (%) 66,67 63,33 66,67 70 70 73,33 70 66,67 66,67 70 66,67 73,33 30 23,33 23,33 NT1: cá gây cảm nhiễm cho ăn thức ăn trộn kháng sinh DO nguyên liệu từ ngày thứ NT2: cá gây cảm nhiễm cho ăn thức ăn trộn kháng sinh DO thành phẩm từ ngày thứ NT3: cá gây cảm nhiễm cho ăn thức ăn trộn kháng sinh FFC nguyên liệu từ ngày th NT4: cá gây cảm nhiễm cho ăn thức ăn trộn kháng sinh FFC thành phẩm từ ngày th NT5: cá gây cảm nhiễm cho ăn thức ăn không trộn thuốc NT6: cá tiêm nước muối sinh lý cho ăn thức ăn không trộn thuốc NT7: cá không gây cảm nhiễm, không tiêm nước muối sinh lý cho ăn thức ăn khôn 150 ... huyết cá bống kèo nuôi thương phẩm 1.1 Điều tra, khảo sát trạng bệnh cá bống kèo nuôi 1.2 Phân lập định danh vi khuẩn gây bệnh xuất huyết cá bống kèo Xác định tác nhân vi khuẩn gây bệnh xuất huyết. .. khuyến cáo người ni phịng, trị bệnh cách hiệu Vì thế, đề tài ? ?Xác định tác nhân vi khuẩn gây bệnh xuất huyết cá bống kèo (Pseudapocryptes elongatus)? ?? góp phần vào vi? ??c kiểm sốt dịch bệnh cá bống kèo. .. tác nhân gây bệnh xuất huyết cá bống kèo phương pháp PCR Đề xuất số loại kháng sinh điều trị bệnh xuất huyết cá bống kèo Chƣơng II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Phân loại cá bống kèo Hiện cá bống kèo