Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro cây hoa phong lữ (pelargonium zonale l )

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA SINH – MÔI TRƢỜNG    NGUYỄN THỊ HOA NGHIÊN CỨU HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY HOA PHONG LỮ (Pelargonium zonale L.) Đà Nẵng – Năm 2015 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA SINH – MÔI TRƢỜNG    NGUYỄN THỊ HOA NGHIÊN CỨU HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY HOA PHONG LỮ (Pelargonium zonale L.) Ngành: Sƣ phạm Sinh học Ngƣời hƣớng dẫn: ThS Bùi Thị Thơ Đà Nẵng – Năm 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết khóa luận trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Tác giả Nguyễn Thị Hoa LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực khố luận tốt nghiệp, tơi xin chân thành cảm ơn tất quý thầy cô Bộ môn Công nghệ Sinh học, Khoa Sinh – Môi trƣờng, Trƣờng Đại học Sƣ phạm – Đại học Đà Nẵng Đặc biệt, xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến cô giáo – Ths Bùi Thị Thơ ngƣời ln tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ trực tiếp cho suốt trình tơi thực đề tài Tơi xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến thầy, cô giáo thuộc Khoa Sinh – Môi trƣờng, Trƣờng Đại học Sƣ phạm – Đại học Đà Nẵng dạy bảo suốt năm học qua Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn gia đình, bạn bè ln động viên, khích lệ tơi vật chất lẫn tinh thần để tơi đạt đƣợc kết tốt Đà Nẵng, tháng năm 2014 Sinh viên thực Nguyễn Thị Hoa MỤC LỤC MỞ ĐẦU .1 Đặt vấn đề .1 Mục tiêu đề tài Ý nghĩa đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 ĐẠI CƢƠNG VỀ HOA .3 1.1.1 Vai trị hoa tình hình sản xuất hoa 1.1.2 Yêu cầu ngoại cảnh hoa .7 1.2 GIỚI THIỆU HOA PHONG LỮ (PELARGONIUM ZONALE L.) 10 1.3 SƠ LƢỢC VỀ NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT 10 1.3.1 Lịch sử phát triển 11 1.3.2 Vai trò 12 1.3.3 Một số phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 13 1.3.4 Các yếu tố ảnh hƣởng đến q trình ni cấy mơ tế bào thực vật 14 1.4 NHỮNG THÀNH TỰU NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÁC LOÀI HOA 18 1.4.1 Trong nƣớc .18 1.4.2 Trên giới 20 1.5 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CHI PELARGONIUM TRÊN THẾ GIỚI 22 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 25 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.2.1 Tái sinh chồi từ protocorm 26 2.2.2 Tạo rễ in vitro 26 2.2.3 Huấn luyện vƣờn ƣơm 26 2.2.4 Xử lí thống kê 26 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT ĐHST ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH CHỒI IN VITRO CÂY HOA PHONG LỮ 27 3.1.1 Ảnh hƣởng BA phối hợp NAA đến khả nhân nhanh chồi in vitro hoa phong lữ 27 3.1.2 Ảnh hƣởng KIN phối hợp riêng rẽ với IBA, NAA đến khả nhân nhanh chồi in vitro hoa phong lữ 29 3.2 ẢNH HƢỞNG CỦA MÔI TRƢỜNG DINH DƢỠNG KHỐNG VÀ CHẤT ĐHST ĐẾN KHẢ NĂNG HÌNH THÀNH RỄ IN VITRO CÂY HOA PHONG LỮ 33 3.2.1 Ảnh hƣởng mơi trƣờng dinh dƣỡng khống đến khả hình thành rễ in vitro hoa phong lữ 34 3.2.2 Ảnh hƣởng môi trƣờng chứa chất ĐHST đến khả hình thành rễ in vitro hoa phong lữ 35 3.3 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG THÍCH NGHI CỦA CÂY PHONG LỮ IN VITRO TRONG ĐIỀU KIỆN NHÀ LƢỚI: 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 4.1 KẾT LUẬN 41 4.2 KIẾN NGHỊ .41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 2,4 - D : diclorophenoxyacetic acid BA : 6-benzyl adenine BAP : 6-benzylaminopurine B5 : Gamborg (1968) cs : cộng ĐHST : điều hòa sinh trƣởng EDTA : ethylendiamin tetraacetic axit IAA : indole 3-acetic acid IBA : indole 3-butyric acid KC : Knudson C (1965) KIN : kinetin LS : Linsmainer Skoog (1965) MS : Murashige Skoog (1962) NAA : α-naphthalen acetic acid SH : Schenk Hildebrandt (1972) TDZ : thidiazuron (N-phenyl-N‟-1,2,3-thidiazol-5ylurea) ZT : zeatin DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Giá trị xuất hoa số nƣớc năm 2002 1.2 Giá trị nhập hoa số nƣớc năm 2000 1.3 Ngƣỡng nhiệt độ số hoa 1.4 Ảnh hƣởng số tác nhân vô trùng 16 3.1 Ảnh hƣởng BA NAA đến khả nhân nhanh chồi 28 in vitro phong lữ sau tuần nuôi cấy 3.2 Ảnh hƣởng KIN NAA đến khả nhân nhanh chồi 30 in vitro phong lữ sau tuần nuôi cấy 3.3 Ảnh hƣởng KIN IBA đến khả nhân nhanh chồi 31 in vitro phong lữ sau tuần nuôi cấy 3.4 Ảnh hƣởng mơi trƣờng dinh dƣỡng khống đến khả 34 hình thành rễ in vitro phong lữ sau tuần nuôi cấy 3.5 Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả hình thành rễ in vitro 35 phong lữ sau tuần nuôi cấy 3.6 Đánh giá khả sống sót phong lữ in vitro điều kiện nhà lƣới 39 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Tên hình Trang 2.1 Cây phong lữ tự nhiên 25 2.2 Protocorm phong lữ 25 2.3 Sơ đồ thí nghiệm 25 3.1 Chồi in vitro phát sinh từ protocorm sau tuần nuôi cấy 29 môi trƣờng BA phối hợp với NAA: (a) Chồi in vitro không phát sinh môi trƣờng MS bổ sung 2,0 mg/L BA 0,2 mg/L NAA (b) Chồi in vitro phát sinh môi trƣờng MS bổ sung 1,0 mg/L BA 0,1 mg/L NAA (c) Chồi in vitro phát sinh môi trƣờng MS bổ sung 0,5 mg/L BA 0,05 mg/L NAA 3.2 Chồi in vitro phát sinh từ protocorm sau tuần nuôi cấy 31 môi trƣờng KIN phối hợp với NAA: (a) Môi trƣờng MS bổ sung 0,5 mg/L KIN 0,05 mg/L NAA (b) Môi trƣờng MS bổ sung 1,0 mg/L KIN 0,1 mg/L NAA 3.3 Chồi in vitro không phát sinh từ protocorm sau tuần nuôi 32 cấy môi trƣờng MS bổ sung 1,5 mg/L KIN phối hợp với 0,15 mg/L IBA 3.4 Chồi in vitro hình thành rễ in vitro sau tuần nuôi cấy: 35 (a) Mơi trƣờng MS (b) Mơi trƣờng ½ MS (c) Mơi trƣờng ¼ MS 3.5 Chồi in vitro hình thành rễ in vitro sau tuần nuôi cấy môi trƣờng ¼ MS bổ sung 1,0 mg/L IBA phối hợp với NAA (0,1 – 1,0 mg/L): 36 (a) 0,10 mg/L NAA (b) 0,25 mg/L NAA (c) 0,50 mg/L NAA (d) 1,0 mg/L NAA 3.6 Cây phong lữ in vitro sau tuần đƣợc trồng thử nghiệm với giá thể cát + xơ dừa + phân chuồng hoai mục + trấu hun (1:1:1:1) nhà lƣới 38 34 Ở đây, chồi in vitro sau khoảng tuần nuôi cấy đƣợc chúng tơi cấy mơi trƣờng MS, ½ MS, ¼ MS để khảo sát khả tạo rễ Kế thừa kết nghiên cứu trƣớc, chọn môi trƣờng tối ƣu bổ sung IBA 1,0 mg/L phối hợp với NAA ( 0,1 – 1,0 mg/L) đánh giá so sánh khả tạo rễ in vitro thơng qua tiêu chí: tỉ lệ rễ, số rễ/ chồi chiều dài rễ Kết đƣợc trình bày bảng 3.4 3.5 3.2.1 Ảnh hƣởng mơi trƣờng dinh dƣỡng khống đến khả hình thành rễ in vitro hoa phong lữ Bảng 3.4 Ảnh hƣởng mơi trƣờng dinh dƣỡng khống đến khả hình thành rễ in vitro phong lữ sau tuần nuôi cấy Khả phát sinh rễ Môi trƣờng Tỉ lệ rễ (%) Số rễ/chồi (rễ) Chiều dài rễ (cm) MS 95,57 5,65c 3,29b ½ MS 100 10,00b 3,70ab ¼ MS 100 13,45a 4,35a Chú thích: Các chữ khác cột sai khác có ý nghĩa thống kê trung bình mẫu với p