Hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro cây tỏi trắng hải dương sạch virus

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ QUỲNH MAI HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY TỎI TRẮNG HẢI DƯƠNG SẠCH VIRUS Ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 8.42.02.01 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Thị Lý Anh TS Nguyễn Thị Lâm Hải NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2018 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng 10 năm 2018 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Quỳnh Mai i LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực tập Viện sinh học Nông nghiệp – Học Viện Nông nghiệp Việt Nam, bên cạnh nỗ lực phấn đấu thân, nhận nhiều quan tâm giúp đỡ nhiệt tình thầy cô, cán kỹ thuật, bạn bè người thân Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thị Lý Anh TS Nguyễn Thị Lâm Hải – Bộ môn Công nghệ sinh học thực vật, khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình hướng dẫn, giúp đỡ động viên tơi suốt q trình thực đề tài hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Thầy giáo, Cô giáo Khoa Công nghệ sinh học – Học viện Nông nghiệp Việt Nam giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy, cô, cán nhân viên môn Công nghệ sinh học thực vật – Viện sinh học Nông nghiệp – Học viện nông nghiệp Việt Nam tạo điều kiện tốt cho hồn thành luận văn Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tất người thân, bạn bè, người bên cạnh động viên giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài Hà Nội, ngày tháng 10 năm 2018 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Quỳnh Mai ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục biểu đồ vii Danh mục hình viii Tóm tắt Error! Bookmark not defined Phần Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Yêu cầu Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Giới thiệu chung tỏi 2.1.1 Nguồn gốc, phân loại, đặc điểm thực vật học tỏi 2.2 Yêu cầu sinh thái tỏi 2.2.1 Các yếu tố tự nhiên 2.2.2 Các yếu tố dinh dưỡng 2.3 Giá trị tỏi 2.3.1 Thành phần dinh dưỡng tỏi 2.3.2 Tác dụng tỏi 2.4 Tình hình sản xuất tiêu thụ tỏi giới Việt Nam 2.4.1 Tình hình sản xuất tiêu thụ tỏi giới 2.4.2 Tình hình sản xuất tiêu thụ tỏi Việt Nam 10 2.5 Sâu bệnh hại tỏi biện pháp phòng trừ 11 2.6 Một số cơng trình nghiên cứu tỏi 13 2.6.1 Nghiên cứu giới 13 2.6.2 Nghiên cứu nước 14 Phần Nội dung phương pháp nghiên cứu 16 3.1 Địa điểm nghiên cứu 16 iii 3.2 Thời gian nghiên cứu 16 3.3 Đối tượng/Vật liệu nghiên cứu 16 3.4 Nội dung nghiên cứu 17 3.4.1 Tạo mẫu tỏi in vitro virus: 17 3.4.2 Giai đoạn nhân nhanh: Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi 17 3.4.3 Giai đoạn tạo củ in vitro: 18 3.4.4 Giai đoạn vườn ươm 19 3.4.5 Phương pháp nghiên cứu 19 Phần Kết thảo luận 23 4.1 Kết 23 4.1.1 Tạo mẫu tỏi in vitro virus: 23 4.1.2 Giai đoạn nhân nhanh: Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi 25 4.1.3 Giai đoạn tạo củ 32 4.1.4 Giai đoạn vườn ươm 37 4.1.5 Ảnh hưởng thời vụ trồng tỏi khác đến khả sống sinh trưởng củ in vitro vườn ươm 39 4.2 Thảo luận 41 4.2.1 Tạo virus nuôi cấy meristem 41 4.2.2 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến nhân nhanh in vitro 41 4.2.3 Tạo củ in vitro 42 4.2.4 Giai đoạn ex vitro (trồng củ in vitro vườn ươm) 42 Phần Kết luận kiến nghị 44 5.1 Kết luận 44 5.2 Kiến nghị 46 Tài liệu tham khảo 47 Phụ lục 49 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt BA : Benzyl adenine BVTV : Bảo vệ thực vật cs : Cộng CT : Công thức CTTD : Chỉ tiêu theo dõi CTTN : Cơng thức thí nghiệm C.V% : Sai số thí nghiệm IBA : Indol butyric acid 5%LSD : Độ lệch chuẩn mức ý nghĩa 5% LYSV : Leek yellow stripe virus MS : Môi trường Murashige and Skoog (1962) NXB : Nhà xuất OYDV : Onion yellow dwarf virus SYSV : Shallot yellow stripe virus α-NAA : α-naphtyl axetic acid v DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Ảnh hưởng kích thước meristem đến khả tái sinh chồi tỏi (sau tuần nuôi cấy) 23 Bảng 4.2 Kết kiểm tra độ bệnh tái sinh từ kích thước meristem khác 23 Bảng 4.3 Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi tỏi (sau tuần nuôi cấy) 25 Bảng 4.4 Ảnh hưởng tổ hợp BA IBA đến khả nhân nhanh chồi tỏi (sau tuần nuôi cấy) 28 Bảng 4.5 Ảnh hưởng tổ hợp BA α-NAA đến khả nhân nhanh chồi tỏi (sau tuần nuôi cấy) 30 Bảng 4.6 Ảnh hưởng nồng độ đường đến khả tạo củ từ chồi tỏi 31 Bảng 4.7 Ảnh hưởng tuổi in vitro đến khả tạo củ (sau tuần nuôi cấy) 34 Bảng 4.8 Xác định kích thước củ in vitro đến khả sống sinh trưởng vườn ươm (sau tuần nuôi cấy) 36 Bảng 4.9 Ảnh hưởng thời vụ đưa củ in vitro vườn ươm đến khả sống sinh trưởng 37 vi DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.1 Ảnh hưởng nồng độ đường đến khả tạo củ từ chồi tỏi 33 Biểu đồ 4.2 Ảnh hưởng tuổi in vitro đến khả tạo củ 36 Biểu đồ 4.3 So sánh hệ số nhân chồi cao thí nghiệm bổ sung BA, tổ hợp BA với IBA tổ hợp BA với α-NAA đến khả nhân nhanh chồi tỏi 42 vii DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Kết kiểm tra họ Potyvirus mẫu tái sinh từ meristem 24 Hình 4.2 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi tỏi 26 Hình 4.3 Ảnh hưởng tổ hợp BA IBA đến khả nhân nhanh chồi tỏi 28 Hình 4.4 Ảnh hưởng tổ hợp BA α-NAA đến khả nhân nhanh chồi tỏi 30 Hình 4.5 Ảnh hưởng nồng độ đường đến khả tạo củ từ chồi tỏi 32 Hình 4.6 Ảnh hưởng tuổi in vitro đến khả tạo củ 35 Hình 4.7 Xác định kích cỡ củ tỏi in vitro đến khả sống sinh trưởng vườn ươm 36 Hình 4.8 Xác định thời vụ đưa củ in vitro vườn ươm đến khả sống sinh trưởng 38 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Quỳnh Mai Tên Luận văn: Hồn thiện quy trình nhân giống in vitro tỏi trắng Hải Dương virus Ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 8.42.02.01 Tên sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: Ứng dụng thành cơng kỹ thuật nuôi cấy meristem để tạo tỏi trắng Hải dương virus Nghiên cứu hồn thiện quy trình nhân giống kỹ thật nuôi cấy mô tỏi trắng Hải Dương làm sở cho sản xuất giống chất lượng cao đáp ứng nhu cầu sản xuất Phương pháp nghiên cứu Đề tài thực nội dung nghiên cứu đối tượng tép tỏi chồi tỏi tuần tuổi giống tỏi trắng thu thập tỉnh Hải Dương giai đoạn tạo mẫu virus; giai đoạn nhân nhanh nghiên cứu chất điều tiết sinh trưởng đến hệ số nhân nhanh chồi tỏi; giai đoạn tạo củ tỏi in vitro tốt ươm trồng củ tỏi in vitro vườn ươm để hồn thiện quy trình nhân giống virus đánh giá khả sinh trưởng phát triển giống phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật tách meristem (đỉnh sinh trưởng), Phương pháp đánh giá mức độ virus chồi tái sinh kỹ thuật RT-PCR, Phương pháp trồng củ in vitro vườn ươm số liệu tính tốn chương trình IRRISTAT5.0 (Phương pháp xử lý số liệu) Kết kết luận Kết đạt sau: (1) Kích thước meristem thích hợp để làm virus cho tỏi < 0,5mm; (2) Môi trường tốt để nhân nhanh chồi tỏi MS + 30g/l saccarose + 5,0 g/l agar + 1,0 mg/l BA + 0,25 mg/l α-NAA, với hệ số nhân chồi 3,24 chồi/mẫu, chiều cao 10,84 cm sau tuần;(3) Tuổi tốt cho vào tạo củ in vitro tuần tuổi; (4) Mơi trường thích hợp cho việc tạo củ in vitro: MS + 120 g/l saccarose; (5) Kích cỡ củ in vitro đủ tiêu chuẩn để đưa ươm trồng có đường kính 0,9- 1,5cm khối lượng trung bình 0,89- 1,42g Và kích cỡ thích hợp đưa ngồi vườn ươm củ in vitro có đường kính 1,5cm trọng lượng trung bình 1,42g; (6) Thời vụ thích hợp để đưa củ in vitro vườn ươm khoảng tháng 10 với tỷ lệ sống đạt 92,7% ix 5.2 KIẾN NGHỊ - Ứng dụng kết nêu để nuôi cấy đỉnh sinh trưởng (meristem) tỏi trắng Hải Dương nhân nhanh virus nhằm tạo nguồn chất lượng cao phục vụ cho sản xuất giống - Ứng dụng kết nghiên cứu: nhân nhanh, tạo củ in vitro, trồng củ in vitro vườn ươm giống tỏi trắng Hải Dương để nghiên cứu mở rộng thêm giống tỏi khác - Cần tiến hành nghiên cứu đánh giá khả sinh trưởng phát triển suất tỏi virus hệ để thiết lập hệ thống sản xuất tỏi giống bắt nguồn từ nuôi cấy mô bệnh cho Hải Dương 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Nguyễn Thị Lý Anh (2005) Sự tạo củ lily in vitro sinh trưởng lily trồng từ củ in vitro Tạp chí Khoa học kỹ thuật nông nghiệp, số 5/2005 tr 349-353 Tạ Thu Cúc, Hồ Hữu An Nghiêm Thị Bích Hà (2000) Giáo trình rau NXB Nơng nghiệp, Hà Nội Trịnh Văn Hải (2007) Nghiên cứu nuôi cấy Meristem tỏi, Khóa luận tốt nghiệp, ĐH Bách khoa Hà Nội Hoàng Văn Lương (2013) Dự án điều tra sinh vật dược liệu biển Học viện Quân y Vũ Triệu Mân Lê Lương Tề (2001) Giáo trình Bệnh nông nghiệp NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh Nguyễn Thị Phương Thảo (2005) Giáo trình Cơng nghệ sinh học Nơng nghiệp NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Xuân Trường (2004) Ứng dụng công nghệ cao sản xuất khoai tây giống bệnh, Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn, Hà Nội Nguyễn Thị Thanh Phương Nguyễn Thị Lý Anh (2012) Nghiên cứu làm virus cho tỏi ta (Allium sativum L.) ni cấy meristem Tạp chí Khoa học Phát triển 10 (2) tr 244-255 Bùi Huy Hiền (2014) Kỹ thuật thâm canh bón phân cho tỏi đạt suất cao Báo dân việt ngày 15/10/2014 10 Trần Văn Giang (2016) Xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro tỏi cô đơn Lý Sơn tỏi Jum-bo Nhật Bản (Allium sp.) 11 Nguyễn Thị Thu Hằng cs (2015), Trưòng Ðại học Khoa học Tự nhiên, ÐHQÐHN Ảnh hưởng điều kiện ánh sáng thành phần dinh dưõng (đưòng, benzyl adenine, chlorocholine chloride) đến khả tạo củ bi Khoai tây (Solanum tuberosum L.) ni cấy in vitro Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học tự nhiên Công nghệ 31 (3) tr 9- 15 Tiếng Anh: 12 Alizadeh B., S D Royandazagh, K M Khawar and S Ozcan (2013) Micropropagation of garlic chives (Allium tuberosum ROTTL.EX Sprang) using mesocotyl axis, The Journal of Plant Sciences 23(2) pp 543-549 45 13 Arifin N S., O Ykio and O Hiroshi (2000) Genetic diversity in Indonesian shallot (Allium cepa var, ascalonicum) and Allium x wakegi reveal by RAPD maker and origin of A x wakegi reveal by RFLP analyses of amplified chloroplast genes Euphytica 111 (1) pp 23–31 14 Barg E., D.E Lesemann and H.J Vetten (1994) Identification, partial characterization, and distribution of viruses infecting Allium crops in south and southeast Asia Acta Hor-tic (358) pp 251- 258 15 Bos L N Huijberts, H Huttinga and D.Z Maat (1978) Leek yellow stripe virus and its relationships to onion yellow dwarf virus; characterization, ecology and possible control Neth.J Plant Pathol 84 pp 185- 204 16 Bruna (1992) Effect of thermotherapy and meristem – tip culture on production of virus – free garlic in Chile, ISHS Acta Horticulture pp 433 17 Dijk Van P (1994) Virus desease of Allium species and products for their control, Acta, Hortic pp 299-305 18 Huidrom S D and I Sanglakpam (2013) High frequency plant regeneration system of Aerides odorata Lour, through foliar and shoot tip culture Not Bot Horti Agrobo, 41(1) pp 169- 176 19 Haim D Rabinowitch PhD., James L Brevoster, Dr Phil (1990), Onion and Allied crops, CRC Press Inc Boca R Boca Raton, Florida pp 236- 238 20 Jump up (2017) "City of Gilroy: a community with a spice for life" City of Gilroy California 2017 Retrieved January 21, 2017 21 Muhammad S H., W Tomikichi and H Kazumi (2003) Shoot regeneration and bulblet formation from shoot and root meristem of garlic Cv Bangladesh local, Asian Journal of Plant Science pp 23-27 22 Novak F.J (1983) Production of garlic (Allium sativum L.) tetraploid in shoot-tip in vitro culture, Pflan-zen zecht pp 91 – 329 23 Rashmi K., A.N Sekh, D Bhupinder, Mahmooduzzafar and M Abdul (2011): Selenium treatment alters phytochemical and biochemical activity of in vitro grown tissues and organs of Allium sativum L Dev Biol Plant, 48 pp 411-416 24 Van Regenmortel et al (2000) Virus Taxonomy Seventh Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses Academic Press, San Diego 46 PHỤ LỤC PHỤ LỤC I: CÁC MÔI TRƯỜNG SỬ DỤNG TRONG CÁC NGHIÊN CỨU Môi trường MS (1962) Lượng lấy Thành phần Đa lượng 1l dung dịch mẹ 1l môi truờng sử dụng (g) NH4NO3 33, 00 KNO3 38,00 MgSO4.7H2O 10,00 KH2PO4 3,40 CaCl2 (Pha riêng) 6,60 Vi lượng (mg) H3BO3 620,00 MnSO4.4H2O 2230,00 ZnSO4.4H2O 860,00 KI 83,00 MoNa2.2H2O 25,00 CoCl2.6H2O 2,50 CuSO4.5H2O 2,50 Sắt (g) FeSO4.7H2O 5,56 Na2EDTA 7,46 Vitamin (mg) Glycine 400 Axit Nicotinic (B5) 100 Pyridoxin (B6) 100 Thyamin HCl (B1) 20 Inositol 100 47 50 ml/l 10 ml/l ml/l ml/l Phụ Lục II: Kết xử lý thống kê chương trình IRRISTAT 5.0 TN1: Ảnh hưởng kích thước meristem đến khả virus chồi tái sinh BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE MTN1 15/ 9/18 21:47 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V003 CCC CHIEU CAO CHOI (CM) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 937500E-01 937500E-01 624.98 0.001 NL 999998E-04 499999E-04 0.33 0.750 * RESIDUAL 300011E-03 150005E-03 * TOTAL (CORRECTED) 941500E-01 188300E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MTN1 15/ 9/18 21:47 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 NOS CCC 1.24000 1.49000 SE(N= 3) 0.707120E-02 5%LSD 2DF 0.424323E-01 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCC 1.37000 1.36500 1.36000 SE(N= 2) 0.866041E-02 5%LSD 2DF 0.519688E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MTN1 15/ 9/18 21:47 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 6) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | CCC 1.3650 0.13722 0.12248E-01 0.9 0.0010 0.7496 |NL | TN2: Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi tỏi (sau 4tuần nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE MTN2 15/ 9/18 13:24 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB 48 VARIATE V003 HSNC HE SO NHAN CHOI (CHOI/MAU) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.22809 307023 ****** 0.000 NL 973332E-03 486666E-03 3.17 0.096 * RESIDUAL 122674E-02 153343E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.23029 878781E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE MTN2 15/ 9/18 13:24 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V004 CC CHIEU CAO (CM) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.53337 1.13334 227.88 0.000 NL 641331E-02 320666E-02 0.64 0.554 * RESIDUAL 397872E-01 497340E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 4.57957 327112 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE MTN2 15/ 9/18 13:24 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V005 SL SO LA (LA/MAU) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.05389 263473 349.74 0.000 NL 624000E-02 312000E-02 4.14 0.058 * RESIDUAL 602674E-02 753342E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.06616 761543E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MTN2 15/ 9/18 13:24 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 NOS 3 3 HSNC 1.66000 2.05000 2.54333 2.22667 2.17333 CC 8.56000 8.84000 10.1367 9.48333 9.07333 SL 4.15333 4.65667 4.95333 4.66000 4.44667 SE(N= 3) 0.714943E-02 0.407161E-01 0.158466E-01 5%LSD 8DF 0.233136E-01 0.132771 0.516741E-01 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS HSNC CC SL 2.12400 9.22800 4.54600 2.12600 9.19000 4.58200 2.14200 9.23800 4.59400 SE(N= 5) 5%LSD 8DF 0.553792E-02 0.315385E-01 0.122747E-01 0.180586E-01 0.102844 0.400266E-01 49 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MTN2 15/ 9/18 13:24 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 15) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | HSNC 15 2.1307 0.29644 0.12383E-01 0.6 0.0000 0.0959 CC 15 9.2187 0.57194 0.70522E-01 0.8 0.0000 0.5537 SL 15 4.5740 0.27596 0.27447E-01 0.6 0.0000 0.0579 |NL | TN3: Ảnh hưởng tổ hợp BA IBA đến khả nhân nhanh chồi tỏi (sau tuần nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE MTN3 14/ 9/18 23:23 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V003 HSNC HE SO NHAN CHOI (CHOI/MAU) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.76389 1.25463 ****** 0.000 NL 816669E-03 408335E-03 2.07 0.207 * RESIDUAL 118406E-02 197343E-03 * TOTAL (CORRECTED) 11 3.76589 342354 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE MTN3 14/ 9/18 23:23 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V004 CC CHIEU CAO (CM) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 7.45836 2.48612 284.30 0.000 NL 466672E-03 233336E-03 0.03 0.975 * RESIDUAL 524677E-01 874462E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 7.51129 682845 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE MTN3 14/ 9/18 23:23 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V005 SL SO LA (LA/MAU) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.48940 829800 246.47 0.000 NL 466666E-03 233333E-03 0.07 0.933 * RESIDUAL 202003E-01 336672E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.51007 228188 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MTN3 14/ 9/18 23:23 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB 50 MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 NOS 3 3 HSNC 1.62000 3.16667 2.64333 2.32667 CC 8.77333 10.8900 10.3900 10.2433 SL 4.07333 5.25667 5.05667 4.98667 SE(N= 3) 0.811054E-02 0.539896E-01 0.334999E-01 5%LSD 6DF 0.280557E-01 0.186759 0.115881 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS HSNC CC SL 2.43000 10.0725 4.83500 2.43750 10.0825 4.85000 2.45000 10.0675 4.84500 SE(N= 4) 0.702394E-02 0.467563E-01 0.290117E-01 5%LSD 6DF 0.242969E-01 0.161738 0.100356 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MTN3 14/ 9/18 23:23 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | HSNC 12 2.4392 0.58511 0.14048E-01 0.6 0.0000 0.2069 CC 12 10.074 0.82634 0.93513E-01 0.9 0.0000 0.9747 SL 12 4.8433 0.47769 0.58023E-01 1.2 0.0000 0.9335 |NL | TN4: Ảnh hưởng tổ hợp BA NAA đến khả nhân nhanh chồi tỏi (sau tuần nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE MTN4 14/ 9/18 23:28 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V003 HSNC HE SO NHAN CHOI (CHOI/MAU) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.22822 1.40941 ****** 0.000 NL 349998E-03 174999E-03 0.51 0.626 * RESIDUAL 205010E-02 341683E-03 * TOTAL (CORRECTED) 11 4.23062 384602 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE MTN4 14/ 9/18 23:28 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V004 CC CHIEU CAO (CM) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 7.05817 2.35272 720.80 0.000 NL 221669E-02 110835E-02 0.34 0.727 * RESIDUAL 195843E-01 326405E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 7.07997 643633 51 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE MTN4 14/ 9/18 23:28 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V005 SL SO LA (LA/MAU) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.42567 808555 546.09 0.000 NL 251666E-02 125833E-02 0.85 0.476 * RESIDUAL 888381E-02 148063E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.43707 221551 - TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MTN4 14/ 9/18 23:28 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 NOS 3 3 HSNC 1.62333 3.24000 2.81333 2.47333 CC 8.78000 10.8433 10.2867 10.2833 SL 4.05000 5.22667 5.01333 4.93667 SE(N= 3) 0.106721E-01 0.329851E-01 0.222159E-01 5%LSD 6DF 0.369166E-01 0.114101 0.768482E-01 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS HSNC CC SL 2.53500 10.0400 4.82250 2.54500 10.0375 4.81000 2.53250 10.0675 4.78750 SE(N= 4) 0.924234E-02 0.285659E-01 0.192395E-01 5%LSD 6DF 0.319707E-01 0.988141E-01 0.665525E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MTN4 14/ 9/18 23:28 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | HSNC 12 2.5375 0.62016 0.18485E-01 0.7 0.0000 0.6265 CC 12 10.048 0.80227 0.57132E-01 0.6 0.0000 0.7274 SL 12 4.8067 0.47069 0.38479E-01 0.8 0.0000 0.4756 |NL | TN5: Ảnh hưởng nồng độ đường đến khả tạo củ từ chồi tỏi (sau tuần nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE MTN5 15/ 9/18 10:44 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V003 HSNC HE SO NHAN CHOI (CHOI/MAU) 52 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 635600E-01 158900E-01 138.17 0.000 NL 133330E-04 666651E-05 0.06 0.944 * RESIDUAL 920006E-03 115001E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 644933E-01 460667E-02 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE MTN5 15/ 9/18 10:44 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V004 CC CHIEU CAO (CM) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 14.2346 3.55864 930.78 0.000 NL 421334E-02 210667E-02 0.55 0.601 * RESIDUAL 305864E-01 382330E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 14.2694 1.01924 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE MTN5 15/ 9/18 10:44 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V005 SL SO LA (LA/MAU) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.66404 416010 585.92 0.000 NL 185332E-02 926662E-03 1.31 0.324 * RESIDUAL 568009E-02 710011E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.67157 119398 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KLCT FILE MTN5 15/ 9/18 10:44 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V006 KLCT KHOI LUONG CU TUOI (G) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 930672 232668 ****** 0.000 NL 624005E-04 312002E-04 1.36 0.311 * RESIDUAL 183606E-03 229507E-04 * TOTAL (CORRECTED) 14 930918 664942E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MTN5 15/ 9/18 10:44 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 NOS 3 3 HSNC 1.64000 1.57000 1.53333 1.51000 1.44333 CC 8.87333 8.53333 7.75000 6.93000 6.25667 SL 4.07333 3.81000 3.66333 3.48000 3.08000 KLCT 0.169333 0.621000 0.788000 0.889333 0.706333 53 SE(N= 3) 0.619141E-02 0.356992E-01 0.153841E-01 0.276591E-02 5%LSD 8DF 0.201896E-01 0.116412 0.501660E-01 0.901935E-02 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS HSNC CC SL 1.54000 7.67400 3.63200 1.54000 7.68600 3.60600 1.53800 7.64600 3.62600 KLCT 0.637600 0.634000 0.632800 SE(N= 5) 0.479585E-02 0.276525E-01 0.119165E-01 0.214246E-02 5%LSD 8DF 0.156388E-01 0.901720E-01 0.388584E-01 0.698636E-02 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MTN5 15/ 9/18 10:44 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 15) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | HSNC 15 1.5393 0.67872E-010.10724E-01 0.7 0.0000 0.9439 CC 15 7.6687 1.0096 0.61833E-01 0.8 0.0000 0.6006 SL 15 3.6213 0.34554 0.26646E-01 0.7 0.0000 0.3238 KLCT 15 0.63480 0.25786 0.47907E-02 0.8 0.0000 0.3108 |NL | TN6: Ảnh hưởng tuổi in vitro đến khả tạo củ (sau tuần nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE MTN6 15/ 9/18 13:37 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V003 HSNC HE SO NHAN CHOI (CHOI/MAU) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 190758 635861E-01 ****** 0.000 NL 150000E-03 749999E-04 1.42 0.313 * RESIDUAL 316677E-03 527795E-04 * TOTAL (CORRECTED) 11 191225 173841E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE MTN6 15/ 9/18 13:37 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V004 CC CHIEU CAO (CM) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 623000 207667 51.59 0.000 NL 405001E-02 202501E-02 0.50 0.631 * RESIDUAL 241501E-01 402502E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 651200 592000E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE MTN6 15/ 9/18 13:37 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB 54 VARIATE V005 SL SO LA (LA/MAU) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 247625 825416E-01 70.75 0.000 NL 286666E-02 143333E-02 1.23 0.358 * RESIDUAL 700000E-02 116667E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 257492 234083E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE KLCT FILE MTN6 15/ 9/18 13:37 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V006 KLCT KHOI LUONG CU TUOI (G) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 794771 264924 ****** 0.000 NL 126167E-03 630835E-04 7.89 0.021 * RESIDUAL 479478E-04 799130E-05 * TOTAL (CORRECTED) 11 794945 722677E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MTN6 15/ 9/18 13:37 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 NOS 3 3 HSNC 1.53333 1.19667 1.27667 1.38333 CC 7.03333 7.60333 7.54000 7.26333 SL 3.55667 3.31333 3.22667 3.18667 KLCT 0.980667 0.292000 0.438333 0.617333 SE(N= 3) 0.419442E-02 0.366288E-01 0.197203E-01 0.163211E-02 5%LSD 6DF 0.145092E-01 0.126705 0.682155E-01 0.564571E-02 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS HSNC CC SL 1.34500 7.38250 3.34250 1.35250 7.33750 3.31250 1.34500 7.36000 3.30750 KLCT 0.577500 0.584500 0.584250 SE(N= 4) 0.363247E-02 0.317215E-01 0.170782E-01 0.141344E-02 5%LSD 6DF 0.125653E-01 0.109730 0.590764E-01 0.488933E-02 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MTN6 15/ 9/18 13:37 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | HSNC 12 1.3475 0.13185 0.72649E-02 0.5 0.0000 0.3130 CC 12 7.3600 0.24331 0.63443E-01 0.9 0.0003 0.6313 SL 12 3.3208 0.15300 0.34156E-01 1.0 0.0001 0.3581 KLCT 12 0.58208 0.26883 0.28269E-02 0.5 0.0000 0.0214 55 |NL | Thí nghiệm 7: Nghiên cứu ảnh hưởng kích cỡ củ in vitro khác đến khả sống sinh trưởng vườn ươm BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE MTN7 15/ 9/18 11:29 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V003 CC CHIEU CAO (CM) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.12029 2.06014 48.77 0.003 NL 313756 156878 3.71 0.123 * RESIDUAL 168978 422446E-01 * TOTAL (CORRECTED) 4.60302 575378 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE MTN7 15/ 9/18 11:29 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V004 SL SO LA (LA/CAY) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.13389 566944 91.52 0.001 NL 219555E-01 109778E-01 1.77 0.281 * RESIDUAL 247778E-01 619445E-02 * TOTAL (CORRECTED) 1.18062 147578 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MTN7 15/ 9/18 11:29 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 NOS CC 10.7567 9.88667 9.10000 SL 3.31667 3.05000 2.46667 SE(N= 3) 0.118666 0.454402E-01 5%LSD 4DF 0.465144 0.178116 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CC 9.74000 9.83000 10.1733 SL 3.00000 2.88000 2.95333 SE(N= 3) 0.118666 0.454402E-01 5%LSD 4DF 0.465144 0.178116 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MTN7 15/ 9/18 11:29 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 9) SD/MEAN | | | 56 |NL | NO BASED ON OBS TOTAL SS CC 9.9144 0.75854 SL 2.9444 0.38416 BASED ON % | | | RESID SS | | | 0.20553 2.1 0.0028 0.1229 0.78705E-01 2.7 0.0012 0.2813 TN8: Ảnh hưởng thời vụ đưa in vitro vườn ươm đến khả sống sinh trưởng tỏi BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE MTN8 15/ 9/18 11:31 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V003 CC CHIEU CAO (CM) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.50942 1.25471 8.07 0.041 NL 113556E-01 567779E-02 0.04 0.965 * RESIDUAL 622178 155544 * TOTAL (CORRECTED) 3.14295 392869 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE MTN8 15/ 9/18 11:31 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB VARIATE V004 SL SO LA (LA/CAY) LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 883267 441633 34.41 0.005 NL 182000E-01 910000E-02 0.71 0.547 * RESIDUAL 513333E-01 128333E-01 * TOTAL (CORRECTED) 952800 119100 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MTN8 15/ 9/18 11:31 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 NOS CC 9.38000 9.78667 10.6467 SL 2.56000 2.76667 3.30333 SE(N= 3) 0.227702 0.654047E-01 5%LSD 4DF 0.892542 0.256372 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CC 9.98333 9.93333 9.89667 SL 2.81333 2.91333 2.90333 SE(N= 3) 0.227702 0.654047E-01 5%LSD 4DF 0.892542 0.256372 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MTN8 15/ 9/18 11:31 :PAGE Phuong sai ANOVA cho thi nghiem thiet ke theo khoi ngau nhien RCB 57 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 9) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | CC 9.9378 0.62679 0.39439 4.0 0.0411 0.9653 SL 2.8767 0.34511 0.11328 3.9 0.0045 0.5472 58 |NL | ... giống thu thập Hải Dương) Hình 3.1 tỏi trắng thu thập Hải Dương Tép tỏi trắng giống Hải Dương làm vật liệu nghiên cứu Hình 3.2 Chồi in vitro tuần tuổi giống tỏi trắng Hải Dương làm vật liệu nghiên... kỹ thuật nuôi cấy meristem để tạo tỏi trắng Hải dương virus Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhân giống kỹ thật ni cấy mô tỏi trắng Hải Dương làm sở cho sản xuất giống chất lượng cao đáp ứng nhu... nâng cao chất lượng giống tỏi Hải Dương Nhưng cơng trình nghiên cứu tỏi Hải Dương hạn chế Trong biện pháp phục tráng giống tỏi, kỹ thuật nuôi cấy đỉnh sinh trưởng nhân giống in vitro bệnh nhiều