Nghiên cứu phân lập, xác định cấu trúc và thử hoạt tính sinh học của một số dịch chiết từ lá cây kim giao núi đất

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG VĂN QUỐC HOÀNG NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT TỪ LÁ CÂY KIM GIAO NÚI ĐẤT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Đà Nẵng - Năm 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG VĂN QUỐC HOÀNG NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT TỪ LÁ CÂY KIM GIAO NÚI ĐẤT Chuyên ngành : Hóa hữu Mã số : 60.40.01.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS GIANG THỊ KIM LIÊN Đà Nẵng - Năm 2015 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận văn Văn Quốc Hoàng MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Cấu trúc luận văn CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ HỌ PODOCARPACEAE Ở VIỆT NAM 1.1.1 Kim giao (nageia fleuryi) 1.1.2 Kim giao núi đất (Nageia wallichiana) 1.1.3 Thông tre (Podocarpus neriifolius) 1.1.4 Thông tre ngắn (Podocarpus pilgeri) 1.1.5 Thông la hán (Podocarpus macrophyllus) 1.1.6 Thông nàng (Dacrycarpus imbricatus) 10 1.1.7 Thông vẩy (Dacrydium elatum) 12 1.2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC VỀ CÁC LOÀI THUỘC HỌ PODOCARPACEAE 13 1.2.1 Thông la hán (Podocarpus macrophyllus) 13 1.2.2 Podocarpus elongatus 15 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ 21 2.1.1 Nguyên liệu 21 2.1.2 Hóa chất, thiết bị 21 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1 Phương pháp chiết mẫu thực vật 22 2.2.2 Phương pháp tách tinh chế chất 22 2.2.3 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học chất 23 2.2.4 Phương pháp thăm dò hoạt tính sinh học 23 2.2.5 Phương pháp lựa chọn chất hấp phụ dung môi chạy cột sắc kí 26 2.2.6 Tỉ lệ lượng mẫu chất cần tách với kích thước cột [9] 27 2.2.7 Cách nạp silicagel vào cột [9] 27 2.2.8 Cách nạp mẫu vào cột [9] 29 2.3 CÁC NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 30 2.3.1 Sơ đồ điều chế cao chiết 30 2.3.2 Chạy cột sắc kí phần cao EtOAc 31 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT TÁCH ĐƯỢC 34 3.1.1 Số liệu phổ chất tách 34 3.1.2 Xác định cấu trúc chất tách 40 3.2 KẾT QUẢ THĂM DỊ HOẠT TÍNH SINH HỌC 67 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT br : Broad (NMR) COSY : Correlation Spectroscopy d : Doublet (NMR) δ : Độ chuyển dịch hoá học (NMR) DEPT : Distortionless enhancement by polarisation transfer DMSO : Dimethyl sulfoxide DMSO–d6 : DMSO đơteri hoá D2O : Nước đơteri hoá EI : Electronic impact EtOAc : Ethyl acetate FT : Fourier transform Glc : β–D–glucose HMBC : Heteronuclear multiple bond correlation HMQC : Heteronuclear multiple quantum coherence IR : Infrared J : Hằng số tương tác (NMR) m : Multiplet (NMR) Me : Methyl MeOH : Methanol MS : Mass spectrometry NMR : Nuclear magnetic resonance ppm : Parts per million Rf : Retention factor s : Singlet (NMR) t : Triplet (NMR) UV : Ultraviolet DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu Tên bảng bảng Trang 3.1 Kết phổ 1H-NMR NWE.CS1 34 3.2 Số liệu phổ 13C-NMR DEPT chất NWE.CS1 35 3.3 Kết phổ 1H-NMR NWE.CS2 38 3.4 Số liệu phổ 13C-NMR DEPT chất NWE.CS2 38 3.5 3.6 Số liệu phổ 1H-NMR NWE.CS1 Podocarpusflavone A Số liệu phổ 13C-NMR NWE.CS1 Podocarpusflavone A 41 45 3.7 Số liệu phổ 1H-NMR NWE.CS2 Nagilactone B 55 3.8 Số liệu phổ 13C-NMR NWE.CS1 Nagilactone B 59 3.9 Kết thử hoạt tính sinh học NWE.CS2 67 DANH MỤC CÁC HÌNH Số hiệu Tên hình hình Trang 1.1 Nageia fleuryi 1.2 Nageia wallichiana 1.3 Podocarpus neriifolius 1.4 Podocarpus pilgeri 1.5 Podocarpus macrophyllus 10 1.6 Dacrycarpus imbricatus 11 1.7 Dacrydium elatum 12 1.8 1.9 1.10 Cấu trúc hợp chất phân lập từ loài Podocarpus macrophyllus Cấu trúc hợp chất phân lập từ loài Podocarpus elongatus Cấu trúc hợp chất phân lập từ loài Podocarpus nagi 14 17 20 2.1 Sơ đồ điều chế cao chiết 30 2.2 Sơ đồ tổng quát phân lập chất từ cao EtOAc 31 3.1 Phổ 1H-NMR (Acetone-D6) chất NWE.CS1 42 3.2 3.3 Phổ 1H-NMR giãn rộng (6,2-8,2 ppm) (Acetone-D6) chất NWE.CS1 Phổ 1H-NMR giãn rộng (1-4 ppm) (Acetone-D6) chất NWE.CS1 43 44 3.4 Phổ 13C-NMR (Acetone-D6) chất NWE.CS1 47 3.5 Phổ 13C-NMR (Acetone-D6) chất NWE.CS1(giãn rộng) 48 3.6 Phổ DEPT 13C-NMR (Acetone-D6) chất NWE.CS1 49 3.7 3.8 Phổ DEPT 13C-NMR (Acetone-D6) chất NWE.CS1(giãn rộng) Phổ HMBC (Acetone-D6) chất NWE.CS1 50 51 Số hiệu Tên hình Trang 3.9 Phổ HMBC (Acetone-D6) chất NWE.CS1 (phổ giãn 1) 52 3.10 Phổ HMBC (Acetone-D6) chất NWE.CS1 (phổ giãn 2) 53 3.11 Phổ HMBC (Acetone-D6) chất NWE.CS1 (phổ giãn 3) 54 3.12 Phổ 1H-NMR (CDCl3&MeOD) chất NWE.CS2 56 hình 3.13 3.14 3.15 3.16 3.17 3.18 3.19 3.20 3.21 Phổ 1H-NMR (CDCl3&MeOD) chất NWE.CS2 (giãn từ 3.2-5.4) Phổ 1H-NMR (CDCl3&MeOD) chất NWE.CS2 (giãn từ 1.2-2.4) Phổ13C-NMR (Pyridine-D5) chất NWE.CS2 Phổ 13C-NMR (Pyridine-D5) chất NWE.CS2 (phổ giãn) Phổ DEPT 13C-NMR (Pyridine-D5) chất NWE.CS2 Phổ HMBC (CDCl3&MeOD) chất NWE.CS2 Phổ HMBC (CDCl3&MeOD) chất NWE.CS2 (phổ giãn 1) Phổ HMBC (CDCl3&MeOD) chất NWE.CS2 (phổ giãn 2) Phổ HMBC (CDCl3&MeOD) chất NWE.CS2 (phổ giãn 3) 57 58 60 61 62 63 64 65 66 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Việt Nam nước có khí hậu thuận lợi cho phát triển hệ thực vật, nguồn tài nguyên cung cấp cho nhiều loài quý làm thuốc chữa bệnh có giá trị cao Những năm gần xu hướng tìm kiếm số hoạt chất lồi thảo mộc có tác dụng chữa bệnh ngày tăng, thu hút nhà khoa học nước khắp nơi giới tìm tịi, nghiên cứu Nước ta có nguồn tài nguyên sinh vật phong phú đa dạng, vùng có tính đa dạng sinh học lớn giới Theo số liệu thống kê thảm thực vật Việt Nam có 12000 lồi, số có 3200 lồi thực vật sử dụng làm thuốc Y học dân gian [1], [2] Từ xưa đến nay, thuốc dân gian đóng vai trị quan trọng việc chăm sóc sức khoẻ cho người Ngày nay, hợp chất tự nhiên phân lập từ cỏ, đặc biệt chất có hoạt tính sinh học ứng dụng nhiều ngành công nghiệp, nông nghiệp y học Chúng dùng để trực tiếp sản xuất thuốc chữa bệnh, thuốc bảo vệ thực vật, làm nguyên liệu cho ngành công nghiệp thực phẩm, mỹ phẩm v.v Chúng dùng nguồn nguyên liệu trực tiếp, gián tiếp cung cấp chất đầu cho cơng nghệ bán tổng hợp nhằm tìm kiếm chất mới, dược phẩm có hoạt tính, tác dụng chữa bệnh tốt hơn, hiệu Các số liệu gần cho thấy rằng, có khoảng 60% dược phẩm dùng chữa bệnh nay, thử cận lâm sàng có nguồn gốc từ thiên nhiên [3] Tuy nhiên, phần lớn sử dụng làm thuốc dân gian chưa nghiên cứu đầy đủ có hệ thống mặt hóa học cũng hoạt tính sinh học mà chủ yếu dựa kinh nghiệm dân gian Vì chưa phát huy hết hiệu nguồn tài nguyên quý giá 60 Hình 3.15 Phổ13C-NMR (Pyridine-D5) chất NWE.CS2 61 Hình 3.16 Phổ 13C-NMR (Pyridine-D5) chất NWE.CS2 (phổ giãn) 62 Hình 3.17 Phổ DEPT 13C-NMR (Pyridine-D5) chất NWE.CS2 63 *Phổ HMBC: Trên phổ HMBC (hình 3.18) phổ HMBC giãn rộng (các hình từ 3.19 đến 3.21) cho thầy có tương tác C-9 với H-11, C-8 với H-7, C-14 với H-15 điều cho biết dị vòng bị ba lần vị trí C-9, C-8 C-14 Hình 3.18 Phổ HMBC (CDCl3&MeOD) chất NWE.CS2 64 Hình 3.19 Phổ HMBC (CDCl3&MeOD) chất NWE.CS2 (phổ giãn 1) 65 Hình 3.20 Phổ HMBC (CDCl3&MeOD) chất NWE.CS2 (phổ giãn 2) 66 Hình 3.21 Phổ HMBC (CDCl3&MeOD) chất NWE.CS2 (phổ giãn 3) 67 Từ kết phân tích so sánh số liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT phổ HMBC chất NWE.CS2 với số liệu tương ứng Nagilactone B cho phép xác định NWE.CS2 Nagilactone B có cơng thức phân tử C19H24O7 O OH O CH3 HO CH3 OH H3C CH3 O O 3.2 KẾT QUẢ THĂM DỊ HOẠT TÍNH SINH HỌC Do thời gian không cho phép nên nghiên cứu tơi trình bày kết thăm dị hoạt tính sinh học chất NWE.CS2 Thí nghiệm lặp lại lần để đảm bảo tính xác thí nghiệm liệu Kết thu sau: Bảng 3.9 Kết thử hoạt tính sinh học NWE.CS2 Nồng độ (µg/ml) % Ức chế Dịng HepG2 Dòng KB NWE.CS2 Ellipticine NWE.CS2 Ellipticine 100 102.38 106.83 102.75 96.27 20 88.98 72.52 101.82 80.17 49.93 52.18 68.86 47.82 0.8 6.83 20.33 14.47 14.54 IC50 4.99 0.44 3.02 0.52 100 88.46 94.85 89.32 95.12 68 Nồng độ (µg/ml) % Ức chế Dịng HepG2 Dịng KB NWE.CS2 Ellipticine NWE.CS2 Ellipticine 20 78.07 81.96 73.81 72.91 45.47 42.86 47.13 48.44 0.8 19.93 10.56 15.22 19.86 IC50 5.28 0.60 5.97 0.51 100 93.01 99.07 81.25 89.35 20 86.89 79.01 69.58 74.93 51.11 47.46 59.77 50.51 0.8 4.59 11.07 2.55 12.82 IC50 5.59 0.55 2.70 0.58 100 99.08 102.87 101.24 98.68 20 79.75 77.94 81.82 80.28 47.84 51.63 48.45 53.22 0.8 3.98 18.72 12.19 21.17 IC50 6.13 0.43 5.04 0.40 Kết cho thấy hoạt chất NWE.CS2 có hoạt tính mạnh với giá trị IC50 2.70 – 6.13 g/ml dòng tế bào ung thư Chất NWE.CS2 có mức hoạt tính trung bình yếu dòng khác Chất đối chứng dương Ellipticine hoạt động ổn định thí nghiệm Các kết xác với r2 ≥ 0,99 69 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Thành phần hoá học - Từ dịch chiết EtOAc kim giao núi đất (Nageia wallichiana), phương pháp sắc kí cột silicagelkết hợp với sắc kí lớp mỏng tách xác định cấu trúc hợp chất: - Chất NWE.CS1: Podocarpusflavone A (4’’’-Ome-Amentoflavone) Chất phân lập trước từ loài Podocarpus henkelii xác định có hoạt tính chống lại E faecalis P aeruginosa [12] - Chất NWE.CS2: Nagilactone B Chất phân lập trước từ loài Podocapus nagi chưa có nghiên cứu hoạt tính sinh học hợp chất Hoạt tính sinh học - Từ kết thăm dị hoạt tính sinh học cho thấy hoạt chất NWE.CS2 có hoạt tính mạnh với giá trị IC50 2.70 – 6.13 g/ml dịng tế bào ung thư Hoạt chất có triển vọng để thử nghiệm mức cao in vivo Kiến nghị Tiếp tục phân lập phân đoạn lại dịch chiết EtOAc, n-hexan MeOH kết hợp với phương pháp phổ để xác định thành phần hoá học Đồng thời thử hoạt tính sinh học chất tách để có nhìn tổng thể hố thực vật cũng hoạt tính sinh học lồi kim giao núi đất (Nageia wallichiana), góp phần làm tăng giá trị sử dụng loài y học TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT [1] Võ Văn Chi (1996), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội, Việt Nam [2] Trần Đình Đại (1998), Khái quát hệ thực vật Việt Nam, Hội thảo Việt – Đức hoá học hợp chất thiên nhiên, Hà Nội [3] Phạm Quốc Long, Châu Văn Minh (2006), Lipit axit béo hoạt tính sinh học có nguồn gốc thiên nhiên, NXB KHKT [4] Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học [5] Trần Đình Lý cộng (1993), 1900 lồi có ích Việt Nam, NXB Thế giới [6] Nguyễn Hoàng Nghĩa (2004), Các loài kim Việt Nam – trang 65 [7] Nguyễn Hoàng Nghĩa (2007), Át lát rừng tập 1, NXB Nông nghiệp, Hà Nội [8] Nguyễn Hoàng Nghĩa (2010), Át lát rừng tập 3, NXB Nông nghiệp, Hà Nội [9] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Các phương pháp cô lập hợp chất tự nhiên, NXB ĐHQG Tp HCM TIẾNG ANH [10] Alírica I Suárez, Beth Diaz M., Franco Delle Monache, Reinaldo S Compagnone (2003), “Biflavonoids from Podocalyx loranthoides”, Fitoterapia 74, 473–475 [11] A Monks, D Scudiero, P Skehan, R Shoemake, K Paull, D Vistica, C Hose, J Langley, P Cronise, H Campbell, J Mayo, M Boyd (1991), “Feasibility of a high-flux anticancer drug screen using a diverse panel of cultured human tumor cell lines”, Journal of National Cancer Institute 83(11), 757-766 [12] Bagla, Victor P; McGaw, Lyndy J; Elgorashi, Esam E; Eloff, Jacobus N (2014), “Antimicrobial activity, toxicity and selectivity index of two biflavonoids and a flavone isolated from Podocarpus henkelii (Podocarpaceae) leaves”, BMC Complementary and Alternative Medicine 14(1), 383-389 [13] Bai-Ping Ying, Isao Kubo (1993), “Norditerpene dilactones from podocarpus nagi”, Phytochemistry 34(4), 1107- 1110 [14] Bai-Ping Ying, Isao Kubo, Chairul Takeshi Matsumoto, Yuji Hayashi (1990), “Congeners of norditerpene dilactones from podocarpus nagi”, Phytochemistry 29(12), 3953-3955 [15] Carlos Alberto Carbonezi, Lidilhone Hamerski, A A Leslie Gunatilaka, Alberto Cavalheiro, Ian Castro-Gamboa, Dulce Helena Siqueira Silva, Maysa Furlan, Maria Claudia Marx Young, Marcia Nasser Lopes, Vanderlan da Silva Bolzani (2007), “Bioactive flavone dimers from Ouratea multiflora (Ochnaceae)”, Brazilian Journal of Pharmacognosy, 17(3), 319-324 [16] Chang-Ming Sun, Wan-Jr Syu, Yi-Tsau Huang, Chien-Chih Chen and Jun-Chih Ou (1997), “Selective Cytotoxicity of Ginkgetin from c Selaginella moellendorffii”, J Nat Prod 60, 382-384 [17] Cheng, K.T., Hsu, F.L., Chen, S.H., Hsieh, P.K., Huang, H.S., Lee, C.K., Podocarpus Lee, M.H macrophyllus (2007), “New var constituent macrophyllus from shows antityrosinase effect and regulates tyrosinase-related proteins and mRNA in human epidermal melanocytes”, Chemical and Pharmaceutical Bulletin 55, 757–761 [18] D A Scudiero, R H Shoemaker, K D Paull, A Monks, S Tierney, T H Nofziger, M J Currens, D Seniff, M R Boyd (1988), “Evaluation of a soluble Tetrazolium/Formazan assay for cell growth and drug sensivity in culture using human and other tumor cell lines” Cancer Research 48, 4827-4833 [19] Haraguchi H, Oike S, Muroi H, Kubo I (1996), “Mode of antibacterial action of totarol, diterpene from Podocarpus nagi”, Planta Med 62(2), 122-125 [20] Haraguchi, H., Ishikawa, H., Kubo, I., 1997 Antioxidative action of diterpenoids from Podocarpus nagi Planta Medica 63, 213– 215 [21] H Haraguchi; H Ishikawa; S Sakai; B -P Ying; I Kubo (1996), “Inhibition of lipid peroxidation by diterpenoid from Podocarpus nagi”, Cellular and Molecular Life Sciences 52(6), 573-576 [22] Hitender Sharma, Munish Garg (2015), “A review of traditional use, phytoconstituents and biological activities of Himalayan yew, Taxus wallichiana”, Journal of Integrative Medicine 13(2), 80-90 [23] Hyun-Sun Park, Naoki Yoda, Haruhiko Fukaya, Yutaka Aoyagi and Koichi Takeya (2004), “Rakanmakilactones A– F, new cytotoxic sulfur-containing norditerpene dilactones from leaves of Podocarpus macrophyllusvar.maki”, Tetrahedron 60, 171–177 [24] H.S Abdillahi, J.F Finnie, J Van Staden (2011), “Anti- inflammatory, antioxidant, anti-tyrosinase and phenolic contents of four Podocarpus species used in traditional medicine in South Africa”, Journal of Ethnopharmacology 136, 496 – 503 [25] Isao Kubo, Bai-Ping Yang (1991), “Two nor-diterpene dilactones from podocarpus nagi”, Phyfochemistry 30(6), 1967-1969 [26] Isao Kubo, Bai-Ping Yang (1991), “A bisnorditerpene dilactone from podocarpus nagi”, Phytochemistry 30(10), 3476 - 3477 [27] Isao Kubo, Masaki Himejiwa, Bai-Ping Ying (1991), “An antifungal norditerpene dilactone from podocarpus nagi”, Phytochemisrry 30(5), 1467-1469 [28] Kenneth R Markham, Carolyn Sheppard and Hans Geige (1987), “13C NMR studies of some naturally occurring amentoflavone and hinokiflavone biflavonoids”, Phytochemistry 26(12), 3335-3337 [29] Kubo, Isao; Muroi, Hisae; Himejima, Masaki (1992), “Antibacterial Activity of Totarol and Its Potentiation”, Journal of Natural Products 55(10), 1436-1440 [30] Laura Faiella, Abeer Temraz, Nunziatina De Tommasi, Alessandra Braca (2012), “Diterpenes, ionol-derived, and flavone glycosides from Podocarpus elongatus”, Phytochemistry 76, 172–177 [31] L B S Kardono, C K Angerhofer, S Tsauri, K Padmawinata, J M Pezzuto, A D Kinghorn (1991), “Cytotoxic and antimalarial constituents of the roots of Eurycoma longifolia”, J Nat Prod 54(5), 1360-1367 [32] Li-Jang Xuan, diterpene Ya-Min dilactone Xu, Sheng-Ding glycosides from Fang (1995), “Three podocarpus nagi”, Phytochemistry 39(5), 1143-1145 [33] McLaughlin JL, et al (1981), “19-Hydroxybaccatin III, 10- deacetylcephalomannine, and 10-deacetyltaxol: new antitumor taxanes from Taxus wallichiana”, J Nat Prod 44(3), 312-319 [34] M C Alley, D A scudiero, A Monks, M L Hursey, M J Czerwinski, D L Fine, B J Abbott, J G Mayo, R H Shoemaker, M R Boyd (1988), “Feasibility of drug screening with panels of human tumor cell lines using a microculture tetrazolium assay”, Cancer Research 48, 589-601 [35] R H Shoemaker, D A Scudiero, E A Suasville (2002) “Application of high-throughput, molecular – targeted screening to anticancer drug discovery”, Curr Top Med Chem 3(2), 229-246 [36] S Imai, S Fujioka, E Murata, Y Sasakawa, K Nakanishi (1968), “The structures podocarpus of three macrophyllus, additional phytoecdysones makisterone B, C from and D”, Tetrahedron Letter 36, 3887 - 3890 [37] Teruo Hayashi, Hiroshi Kakisawa, Yuh Pan Chen, Hong-Yen Hsu (1972), “Structure of the further norditerpenoids of podocarpus macrophyllus Inumakilactone A glucoside, a plant growth inhibitor and inumakilactone E”, Tetrahedron Letter 33(3), 3385 - 3388 [38] Yûji Hayashi, Shigenobu Takahashi, Hisao Ona and Takeo Sakan (1968), “Structures of nagilactone A, B, C and D, novel norand bisnorditerpenoids” Tetrahedron Letters 9(17), 2071-2076 [39] Yûji Hayashi, Takeshi Matsumoto, Motokazu Uemura, Masato Koreeda Hayashi (1980), “Carbon-13 NMR studies of the biologically active nor-diterpenoid dilactones from Podocarpus plants”, Magnetic Resonance in Chemistry 14(2), 86-91 [40] Yuji Hayashi, Takeo Sakan, Ken Hirotsu, And Akira Shimada (1972), “Stereochemistry of nagilactone A and B”, Chemistry Letters, 349-352 [41] Yuji Hayashi, Yo-ichi Yiiki, Takeshi Matsumoto (1977), “New congeners of cytotoxic nor-diterpenoid dilactones in podocarpus nagi: three highly polar components with α-pyrone ring”, Tetrahedron Letters 34, 2953 – 2956 [42] Zhang JZ, Fang QC, Liang XT, He CH, Kong M, He WY, Jin XL (1995), “Taxoid from barks of Taxus wallichiana”, Phytochemistry 40(3), 881-884 ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG VĂN QUỐC HOÀNG NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT TỪ LÁ CÂY KIM GIAO NÚI ĐẤT Chuyên ngành : Hóa hữu Mã số :... wallichiana) - Phân lập, tinh chế số hợp chất hóa học có mẫu cao chiết từ kim giao núi đất - Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập - Thăm dị hoạt tính sinh học số hợp chất phân lập Phương pháp nghiên. .. cứu thực nghiệm ứng dụng, thăm dị hoạt tính sinh học hợp chất kim giao núi đất qua góp phần làm tăng thêm giá trị sử dụng loại Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu phân lập, xác định cấu trúc thử hoạt