Nghiên cứu tiêu chuẩn hóa và đánh giá một số tác dụng sinh học của sâm việt nam (panax vietnamensis ha et grushv , araliaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH DƯƠNG HỒNG TỐ QUYÊN NGHIÊN CỨU TIÊU CHUẨN HÓA VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA SÂM VIỆT NAM (PANAX VIETNAMENSIS HA ET GRUSHV., ARALIACEAE) LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC TP HỒ CHÍ MINH, Năm 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH DƯƠNG HỒNG TỐ QUYÊN NGHIÊN CỨU TIÊU CHUẨN HÓA VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA SÂM VIỆT NAM (PANAX VIETNAMENSIS HA ET GRUSHV., ARALIACEAE) NGÀNH: DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 62720406 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC GS.TS NGUYỄN MINH ĐỨC PGS.TS NGUYỄN THỊ THU HƯƠNG TP.HỒ CHÍ MINH, Năm 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận án Dương Hồng Tố Quyên MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ii DANH MỤC CÁC BẢNG .v DANH MỤC CÁC HÌNH vii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 TỔNG QUAN VỀ CHI PANAX .3 1.2 SÂM VIỆT NAM 15 1.3 NGHIÊN CỨU VỀ TIÊU CHUẨN HÓA SÂM VIỆT NAM .27 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 32 NGHIÊN CỨU .32 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU .32 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .35 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 58 3.1 XÂY DỰNG VÀ ĐÁNH GIÁ QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI MỘT SỐ SAPONIN TRONG SÂM VIỆT NAM TRỒNG 58 3.2 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN SÂM VIỆT NAM TRỒNG 82 3.3 ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA SÂM VIỆT NAM TRỒNG TUỔI 86 CHƯƠNG BÀN LUẬN 110 4.1 XÂY DỰNG VÀ ĐÁNH GIÁ QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI MỘT SỐ SAPONIN TRONG SÂM VIỆT NAM TRỒNG 110 4.2 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN SÂM VIỆT NAM TRỒNG 115 4.3 ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA SÂM VIỆT NAM TRỒNG TUỔI 117 KẾT LUẬN 134 KIẾN NGHỊ .136 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt ADN AOAC AST ALT AF AAPH CCl4 CY CS DCF-DA DĐVN DAD EC50 EDTA ELSD EP ESI FST GGABA GSH HPLC HEPES I.P LD50 MDA MMS NO NS OD OCT P PPD Từ đầy đủ Acid deoxyribonucleic Aspartate aminotransferase Alanine aminotransferase Asymetric factor (2,2’- azobis (2-amidinopropane hydrochloride)) Carbon tetrachlorid Cyclophosphamide Cộng 2’,7‘-Dichlorodihydrofluoresceindiacetat Dược điển Việt Nam Diode Array Detector Effective Concentration 50% Ethylenediaminetetra acid Evaporative light scattering detector European Pharmacopeia Electrospray Ionization Forced swimming test Ginsenoside Gamma-aminobutyric acid Glutathione High Perfomance Liquid Chromatography (4-(2-hydroxyethyl)-1piperazineethanesulfonic acid) Intraperitoneally Lethal dose 50% Malonyl dialdehyde Majonoside Mass Spectroscopy Nitrogen oxide Nhân sâm Optical Density Ocotillol Panax Protopanaxadiol Nghĩa tiếng Việt Hệ số bất đối Cyclophosphamid Detector dãy diốt quang Nồng độ kháng oxy hóa 50% Acid Ethylenediaminetetra Đầu dị tán xạ ánh sáng bay Dược điển Châu Âu Ion hóa phun điện Thực nghiệm bơi bắt buộc Ginsenosid Acid aminobutyric Glutathion Sắc ký lỏng hiệu cao Acid (4-(2-hydroxyethyl)-1piperazineethanesulfonic) Tiêm phúc mô Liều chết 50% Malonyl dialdehyd Saponin majonosid Phổ khối Mật độ quang Saponin nhóm ocotillol Chi Panax Nhóm Protopanaxadiol Từ viết tắt PPT Q-TOF-MS ROS Rt SKĐ SKLM Sâm VN Sâm VN-MH TBA TCA TST TNF Từ đầy đủ Nghĩa tiếng Việt Protopanaxatriol Nhóm Protopanaxatriol Quadrupole Time of Flight Mass Máy đo phổ khối tứ cực – Spectrometer thời gian bay Reactive Oxygen Species Gốc tự oxy hóa Retention time Thời gian lưu Sắc ký đồ Sắc ký lớp mỏng Sâm Việt Nam Sâm Việt Nam trồng Sâm Việt Nam mọc hoang Thiobarbituric acid Acid thiobarbituric Trichloroacetic acid Acid Trichloroacetic Tail suspension test Thực nghiệm treo đuôi chuột Tumor necrosis factor Yếu tố hoại tử khối u DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các loài sâm chấp nhận thuộc chi Panax .3 Bảng 1.2 Chỉ tiêu kiểm nghiệm vài loài sâm theo chuyên luận Dược điển Bảng 1.3 Thành phần saponin Sâm Việt Nam .18 Bảng 1.4 Một số tác dụng dược lý khác Sâm Việt Nam 25 Bảng 2.5 Cách pha dung dịch đường chuẩn 38 Bảng 2.6 Nồng độ giai mẫu mẫu xây dựng đường tuyến tính HPLC-DAD 41 Bảng 3.7 Thông số detector phổ khối áp dụng định lượng saponin .59 Bảng 3.8 Kết HPLC-MS nhận dạng ion saponin đối chiếu 61 Bảng 3.9 Hàm lượng saponin chiết siêu âm chiết lắc .62 Bảng 3.10 Saponin chiết với methanol nồng độ định lượng HPLC-MS 62 Bảng 3.11 Hàm lượng saponin chiết nhiệt độ định lượng HPLC-MS 62 Bảng 3.12 Hàm lượng saponin chiết thời gian định lượng HPLC-MS .63 Bảng 3.13 Tính tương thích hệ thống HPLC-MS định lượng saponin 63 Bảng 3.14 Thời gian lưu saponin HPLC-MS sau lần tiêm mẫu 64 Bảng 3.15 Dữ liệu xác nhận khối lượng ion số saponin chuẩn .64 Bảng 3.16 Kết phương trình tính tuyến tính 66 Bảng 3.17 Độ lặp lại ngày phương pháp HPLC-MS 66 Bảng 3.18 Độ lặp lại liên ngày phương pháp HPLC-MS .67 Bảng 3.19 Kết độ định lượng G-Rg1 HPLC-MS 68 Bảng 3.20 Kết độ định lượng M-R2 HPLC-MS 68 Bảng 3.21 Độ phương pháp định lượng V-R2 HPLC-MS 68 Bảng 3.22 Kết độ định lượng G-Rb1 HPLC-MS 69 Bảng 3.23 Kết độ phương pháp định lượng G-Rd HPLC-MS 69 Bảng 3.24 Giới hạn phát định lượng saponin HPLC-MS .69 Bảng 3.25 Hàm lượng saponin chiết xuất ba nồng độ MeOH 72 Bảng 3.26 Hàm lượng saponin chiết mức nhiệt độ khác 72 Bảng 3.27 Hàm lượng saponin theo thời gian chiết xuất 73 Bảng 3.28 Hàm lượng saponin từ số lần chiết xuất khác 73 Bảng 3.29 Giá trị thông số sắc ký ứng với pic G-Rg1 mẫu chuẩn 73 Bảng 3.30 Giá trị thông số sắc ký ứng với pic M-R2 mẫu chuẩn 74 Bảng 3.31 Giá trị thông số sắc ký ứng với pic G-Rb1 mẫu chuẩn 74 Bảng 3.32 Giá trị thông số sắc ký ứng với pic G-Rd mẫu chuẩn 74 Bảng 3.33 Diện tích pic tương ứng với nồng độ mẫu đối chiếu 78 Bảng 3.34 Phương trình hồi quy chất chuẩn G-Rg1, G-Rb1, G-Rd, M-R2 78 Bảng 3.35 Giới hạn phát giới hạn định lượng HPLC-DAD 79 Bảng 3.36 Độ lặp lại ngày phương pháp HPLC-DAD 79 Bảng 3.37 Kết độ lặp liên ngày phương pháp HPLC-DAD 80 Bảng 3.38 Kết độ phương pháp HPLC-DAD định lượng G-Rg1 80 Bảng 3.39 Kết độ phương pháp HPLC-DAD định lượng M-R2 81 Bảng 3.40 Kết độ phương pháp HPLC-DAD định lượng G-Rb1 81 Bảng 3.41 Kết độ phương pháp HPLC-DAD định lượng G-Rd .81 Bảng 3.42 Kết hàm lượng số saponin Sâm Việt Nam trồng 86 Bảng 3.43 Khối lượng cao toàn phần saponin toàn phần 86 Bảng 3.44 Hàm lượng saponin cao Sâm Việt Nam trồng tuổi .87 Bảng 3.45 Thời gian bơi tuyệt đối nhóm chuột thử nghiệm Brekhman 88 Bảng 3.46 Thời gian bơi tương đối nhóm chuột thực nghiệm Brekhman 89 Bảng 3.47 Thời gian bơi tuyệt đối thử nghiệm bơi điều chỉnh tốc độ dòng 89 Bảng 3.48 Thời gian bơi tương đối thực nghiệm bơi điều chỉnh tốc độ dòng 90 Bảng 3.49 Hoạt tính kháng oxy hóa tế bào Hep G2 91 Bảng 3.50 Hoạt độ AST, ALT huyết tương thực nghiệm CCl4 .92 Bảng 3.51 Hàm lượng MDA, GSH gan chuột thực nghiệm CCl4 94 Bảng 3.52 Hàm lượng MDA GSH gan chuột thực nghiệm CY .95 Bảng 3.53 Sự thay đổi trọng lượng thể lô chuột thử nghiệm .96 Bảng 3.54 Hoạt độ AST, ALT huyết tương thực nghiệm ethanol 97 Bảng 3.55 Kết hàm lượng MDA, GSH gan chuột vào tuần 98 Bảng 3.56 Tiềm thời thời gian ngủ lô chuột sau tuần thí nghiệm .99 Bảng 3.57 Tác dụng cao Sâm Việt Nam tiềm thời thời gian ngủ 100 Bảng 3.58 Thời gian sáng số lần sáng lô chuột liều 102 Bảng 3.59 Thời gian sáng số lần sáng điều trị sau ngày 103 Bảng 3.60 Thời gian bất động lơ chuột thí nghiệm liều 104 Bảng 3.61 Thời gian bất động lô chuột điều trị sau 14 ngày 105 Bảng 3.62 Thời gian ngăn sáng số lần ngăn sáng thực nghiệm .107 Bảng 3.63 Thời gian bất động chuột thực nghiệm FST TST 107 Bảng 3.64 Hàm lượng MDA, GSH tế bào não chuột trầm cảm cô lập 109 Bảng 4.65 So sánh hiệu detector Q-TOF-MS DAD 114 Bảng 4.66 So sánh tác dụng dược lý Sâm VN với Nhân Sâm Sâm VN-MH 130 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Khung saponin thuộc chi Panax .5 Hình 1.2 Bộ phận mặt đất (A) phận mặt đất Sâm Việt Nam (B) 16 Hình 3.3 SKĐ thăm dị chương trình pha động điều kiện 58 Hình 3.4 SKĐ tổng ion (TIC) từ saponin đối chiếu HPLC-MS 60 Hình 3.5 SKĐ extract ion (EIC) saponin đối chiếu HPLC-MS 60 Hình 3.6 Phổ MS saponin đối chiếu 61 Hình 3.7 Phổ MS saponin đối chiếu sau cắt phân tử đường 65 Hình 3.8 SKĐ mẫu thử điều kiện 71 Hình 3.9 SKĐ độ tinh khiết saponin hỗn hợp mẫu đối chiếu 75 Hình 3.10 SKĐ độ tinh khiết pic saponin định lượng mẫu thử 76 Hình 3.11 SKĐ mẫu trắng 77 Hình 3.12 SKĐ mẫu đối chiếu saponin .77 Hình 3.13 SKĐ saponin định lượng mẫu thử 77 Hình 3.14 SKĐ mẫu thử thêm saponin mẫu đối chiếu 77 Hình 3.15 Bộ phận mặt đất Sâm Việt Nam trồng tuổi 82 Hình 3.16.Vi phẫu thân rễ Sâm Việt Nam trồng tuổi 83 Hình 3.17 Vi phẫu rễ củ Sâm Việt Nam trồng tuổi 84 Hình 3.18 Đặc điểm bột thân rễ rễ củ Sâm Việt Nam .85 Hình 3.19 Sắc ký lớp mỏng mẫu Sâm Việt Nam trồng tuổi 85 Hình 3.20 SKĐ cao toàn phần Sâm Việt Nam trồng tuổi 87 Lô uống cao toàn phần nhân sâm liều 200 mg/kg AST (U/L) ALT (U/L) OD MDA 78 104 74 36 74 84 68 77 48 60 40 36 42 44 42 55 0,148 0,229 0,101 0,162 0,113 0,201 0,151 0,131 OD GSH 1,104 0,587 1,112 0,977 1,183 1,396 1,332 1,051 MDA (nM/g protein) 91,65 144,31 61,1 100,74 68,91 126,1 93,61 80,59 GSH (nM/g protein) 3624,18 1859,87 3651,48 3190,78 3893,77 4620,66 4402,25 3443,31 Lô uống cao toàn phần nhân sâm liều 100 mg/kg AST (U/L) ALT (U/L) OD MDA 103 92 82 86 82 80 74 51 54 54 54 50 40 44 36 17 0,202 0,173 0,162 0,198 0,188 0,119 0,269 0,21 OD GSH 1,005 0,969 1,392 1,128 1,162 1,304 0,749 0,745 MDA (nM/g protein) 126,76 107,89 100,74 124,16 117,67 72,81 170,3 131,94 GSH (nM/g protein) 3286,33 3163,48 4607,01 3706,08 3822,11 4306,7 2412,71 2399,06 OD GSH 1,399 1,116 1,418 1,108 1,079 0,723 0,873 1,167 MDA (nM/g protein) 98,15 94,24 115,7 122,2 144,97 161,87 163,15 83,21 GSH (nM/g protein) 4630,89 3665,13 4695,73 3637,83 3538,86 2323,98 2835,87 3839,17 OD GSH 1,045 0,861 0,965 0,928 0,901 0,66 0,545 0,775 MDA (nM/g protein) 141,69 170,96 137,16 178,77 148,22 220,34 258,05 176,14 GSH (nM/g protein) 3422,97 2795,05 3149,96 3023,56 2931,56 2108,98 1716,67 2501,57 Lô uống silymarin liều 100 mg/kg AST (U/L) ALT (U/L) OD MDA 96 102 86 92 104 130 41 74 56 62 46 78 56 66 38 41 0,158 0,152 0,185 0,195 0,23 0,256 0,258 0,135 Nhóm EtOH (+) Lơ chứng, uống nước cất AST (U/L) ALT (U/L) OD MDA 72 115 138 78 110 114 270 118 39 47 42 164 36 24 40 36 0,225 0,27 0,218 0,282 0,235 0,346 0,404 0,278 Lô uống cao toàn phần sâm Việt Nam liều 200 mg/kg PL-110 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn AST (U/L) ALT (U/L) OD MDA 100 60 106 68 82 93 76 86 52 27 52 42 44 68 30 36 0,212 0,172 0,181 0,153 0,144 0,191 0,247 0,184 OD GSH 1,14 0,915 1,148 1,691 1,593 1,305 1,071 1,109 MDA (nM/g protein) 133,26 107,26 113,11 94,9 89,06 119,6 156 115,05 GSH (nM/g protein) 3747,03 2979,33 3774,33 5627,51 5293,07 4310,25 3511,7 3641,38 Lô uống cao toàn phần sâm Việt Nam liều 100 mg/kg AST (U/L) ALT (U/L) OD MDA 77 48 76 116 78 92 75 89 53 26 50 46 34 45 49 44 0,153 0,138 0,122 0,13 0,273 0,177 0,104 0,192 OD GSH 1,187 0,797 1,446 1,094 1,07 1,022 1,23 0,989 MDA (nM/g protein) 94,9 85,15 74,75 79,96 172,9 110,51 63,06 120,26 GSH (nM/g protein) 3907,56 2576,65 4791,29 3590,05 3508,15 3344,34 4054,16 3231,87 MDA (nM/g protein) 99,46 109,86 142,35 79,31 120,26 149,5 153,4 96,21 GSH (nM/g protein) 3443,45 3218,22 2989,43 2958,86 3241,97 3074,89 3730,1 4276,12 Lơ uống cao tồn phần nhân sâm liều 200mg/kg AST (U/L) ALT (U/L) OD MDA 68 78 76 92 84 92 80 87 44 48 28 42 56 34 50 0,16 0,176 0,226 0,129 0,192 0,237 0,243 0,155 OD GSH 1,051 0,985 0,918 0,909 0,992 0,943 1,135 1,295 Lơ uống cao tồn phần nhân sâm liều 100 mg/kg AST (U/L) ALT (U/L) OD MDA 86 82 80 74 98 72 92 98 62 42 54 28 62 57 54 44 0,142 0,108 0,148 0,253 0,197 0,134 0,189 0,111 OD GSH 1,014 1,026 0,911 1,391 1,009 1,099 0,911 1,024 Lô uống silymarin liều 100 mg/kg PL-111 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn MDA (nM/g protein) 87,74 65,66 91,65 159,9 123,51 82,56 118,29 67,6 GSH (nM/g protein) 3317,04 3358 2965,68 4603,73 3300,12 3607,25 2965,68 3351,17 AST (U/L) ALT (U/L) OD MDA 68 84 98 90 106 68 84 77 108 37 48 38 178 36 68 79 0,205 0,173 0,157 0,151 0,13 0,155 0,124 0,148 OD GSH 0,909 1,008 1,184 0,769 1,229 1,056 1,24 1,004 PL-112 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn MDA (nM/g protein) 128,7 107,89 97,49 93,61 79,96 96,21 76,06 91,65 GSH (nM/g protein) 2958,86 3296,57 3897,19 2481,09 4050,89 3460,37 4088,29 3282,92 Phụ lục Tác dụng chống stress Sâm Việt Nam Phụ lục 5.1 Kết tiềm thời thời gian ngủ mơ hình stress lập chuột nhắt trắng - Nhóm bình thường Stress (-) STT Stress (-) STT Cân (g) 19 20 20 20 19 21 20 19 Cân (g) 30 28 32 34 40 38 36 34 Tuần đầu tiên tiềm thời ngủ (phút) (phút) 3,01 80 5,42 72 5,2 37 3,4 66 3,39 63 3,42 96 3,15 63 2,57 62 Tuần tiềm thời (phút) 1,47 3,25 4,21 2,4 3,15 2,56 3,37 3,2 Tuần Cân (g) 23 23 21 19 26 24 23 21 tiềm thời (phút) 5,28 3,36 4,21 3,58 3,25 3,19 3,24 2,57 ngủ (phút) 59 61 64 65 51 71 64 56 Cân (g) 31 30 32 32 33 29 30 32 Tuần tiềm thời (phút) 3,45 2,28 2,45 4,5 3,4 3,52 3,2 3,58 Cân (g) 40 44 34 42 35 40 39 37 Tuần 10 tiềm thời (phút) 2,1 3,07 4,21 3,15 3,07 2,45 3,48 3,45 Tuần ngủ (phút) 68 62 71 53 58 62 54 59 Cân (g) 38 40 38 39 40 36 36 38 tiềm thời (phút) 2,3 3,1 2,34 2,51 3,18 3,27 3,08 2,47 ngủ (phút) 61 54 51 63 57 56 45 73 - Nhóm ni lập Stress (+) T̀n đầu Tuần STT Stress (+) Cân (g) 20 20 19 20 20 19 19 20 Cân (g) 34 34 33 29 29 31 33 35 tiềm thời (phút) 3,35 2,49 3,35 4,05 3,07 4,18 4,2 3,32 ngủ (phút) 38 59 34 41 44 41 34 47 Tuần Tuần PL-113 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Cân (g) 29 32 35 33 35 33 32 33 Tuần tiềm thời (phút) 3,55 3,45 4,5 3,53 4,02 2,26 3,36 3,22 ngủ (phút) 32 41 43 51 45 50 28 39 Tuần 10 ngủ (phút) 70 59 66 65 63 69 64 49 ngủ (phút) 54 50 64 70 57 61 53 46 Cân (g) 34 38 38 36 42 34 36 37 tiềm thời (phút) 3,59 4,30 4,13 4,15 5,00 3,19 3,49 3,03 ngủ (phút) 44 52 49 40 55 43 50 40 Cân (g) 41 33 44 43 42 40 40 38 tiềm thời (phút) 3,37 3,43 2,45 2,17 3,33 3,07 3,22 2,53 ngủ (phút) 59 45 66 47 49 45 46 65 Cân (g) 42 44 42 41 40 42 44 41 tiềm thời (phút) 4,26 3,22 3,4 5,15 6,26 4,17 4,06 3,47 Phụ lục Kết tác dụng chống stress tâm lý cao chiết Phụ lục 6.1 Kết tác dụng Sâm Việt Nam rút ngắn giấc ngủ pentobarbital gây stress lập Nhóm bình thường PL-114 Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ngủ (phút) 66 57 50 58 51 47 81 59 Sâm Việt Nam 200 mg/kg Nước STT tiềm thời (phút) ngủ (phút) tiềm thời (phút) ngủ (phút) 3,04 2,3 2,35 3,28 2,84 4,47 3,44 2,15 52 76 77 48 87 53 65 55 3,38 4,1 3,23 2,25 4,54 3,1 3,47 4,45 56 74 107 88 111 59 50 60 Nhân sâm 100 mg/kg STT tiềm thời (phút) ngủ (phút) 3,13 3,5 2,47 4,12 3,1 4,19 4,11 3,49 48 94 52 48 30 76 71 51 Sâm Việt Nam 50 mg/kg ngủ tiềm thời (phút (phút) ) 2,1 49 3,51 63 54 3,2 76 5,14 53 3,12 66 3,2 36 5,35 63 PL-115 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Nhân sâm 200 mg/kg ngủ tiềm thời (phút (phút) ) 3,15 74 3,54 64 5,07 71 2,55 34 3,46 49 74 3,23 71 3,15 110 Nhân sâm 50 mg/kg Sâm Việt Nam 100 mg/kg tiềm thời (phút) ngủ (phút) 3,21 4,38 4,02 2,53 4,33 3,56 2,33 3,3 98 70 65 46 99 89 90 53 Diazepam 0,5 mg/kg tiềm thời (phút) ngủ (phút) tiềm thời (phút) ngủ (phút) 3,56 3,2 3,45 3,28 2,48 3,4 50 51 76 48 87 75 79 5,1 3,3 2,3 2,45 3,3 4,5 1,45 2,45 87 93 110 125 95 121 118 130 Nhóm lập Stress (+) Nước STT tiềm thời (phút) 2,18 2,09 3,31 3,12 2,91 3,2 3,7 3,5 Stress(+ ) STT Sâm Việt Nam 200 mg/kg ngủ (phút ) 57 43 39 42 64 50,33 52,22 Nhân Sâm 100 mg/kg tiềm ngủ thời (phút) (phút) 3,04 24 3,38 70 23 4,04 42 4,28 42 2,35 59 2,3 92 3,17 87 Nhân Sâm 200 mg/kg tiềm thời (phút) ngủ (phút) tiềm thời (phút) ngủ (phút) 2,35 3,02 2,13 3,2 2,25 3,25 3,04 3,43 68 52 58 53 61 55 60 75 3,55 3,5 3,16 3,23 2,46 3,08 31 37 102 59 112 77 75 Sâm Việt Nam 50 mg/kg tiềm ngủ thời (phút) (phút) 4,6 44 4,25 94 3,09 54 3,27 103 4,2 73 2,47 61 3,18 65 3,38 102 PL-116 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Nhân Sâm 50 mg/kg tiềm ngủ thời (phút) (phút) 3,33 49 6,48 104 3,39 67 2,57 88 2,24 75 3,14 101 3,31 84 3,21 72 Sâm Việt Nam 100 mg/kg tiềm thời (phút) 3,2 3,15 2,49 3,14 3,35 4,18 6,13 ngủ (phút) 38 45 117 118 71 135 137 113 Diazepam 0,5 mg/kg tiềm thời (phút) ngủ (phút) 3,3 4,12 2,46 3,58 3,82 2,47 1,62 1,93 68,3 56,4 76,03 100,08 95,59 53,4 64,07 106,5 Phụ lục 6.2 Kết thời gian bất động chuột mơ hình bơi bắt buộc Lơ ni bình thường Stress (-) STT TB SEM To 110 160 56 78 47 37 126 134 93,50 16,03 Nước T7 51 75 76 70 45 130 57 94 74,75 9,65 Thời gian bất động (giây) Stress (-) STT TB SEM Stress (-) STT TB SEM T14 78 77 81 100 73 79 71 102 82,63 4,17 Thời gian bất động (giây) SVN 500 NS 500 Fluoxetin 20 mg To To To T7 T14 177 63 175 120 136 132 163 15 137 125 166 110 126 103 127 113 212 164 107 20 158 142 155 93 122 146 200 184 115 143 48 48 96 72 30 136 127 164 90 101 134,50 133,13 134,88 104,63 100,50 14,29 20,87 19,86 7,09 17,05 NS 200 T7 39 98 41 55 88 80 79 171 81,38 14,93 To 103 48 26 126 111 83 143 72 89,00 13,98 SVN 50 T7 106 157 100 100 140 155 135 95 123,50 9,20 T14 105 104 79 99 94 108 93 72 94,25 4,53 T14 52 53 50 74 126 86 61 133 79,38 11,78 To 134 87 97 112 126 69 108 125 107,25 7,77 SVN 200 T7 135 169 175 106 89 102 96 98 121,25 12,09 Thời gian bất động (giây) NS 50 SVN 100 T7 T14 T7 T14 84 90 122 93 96 82 122 120 132 79 151 109 149 96 137 56 36 106 94 98 84 110 65 101 95 70 130 49 111 69 52 93 98,38 87,75 109,13 89,88 12,08 5,47 12,49 8,76 PL-117 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn T14 107 131 59 58 108 110 112 62 93,38 10,23 NS 100 T7 119 150 92 160 98 51 54 163 110,88 15,85 T14 71 135 25 101 39 75 46 55 68,38 12,66 Lô nuôi cô lập: Stress (+) STT TB SEM Nước To 125 137 167 139 150 179 148 182 149,29 7,64 T7 152 94 119 137 141 133 216 143 141,71 14,24 Stress (+) STT TB SEM T14 54 99 120 88 46 117 74 94 86,50 9,56 Thời gian bất động (giây) Stress (+) STT TB SEM Thời gian bất động (giây) SVN NS 500 Fluoxetin 500 T14 To To To T7 137 38 101 146 73 163 84 139 95 38 98 34 86 79 178 107 139 185 118 113 136 72 91 25 154 10 101 67 139 134 53 28 108 89 173 86 94 101 60 143,75 66,00 84,00 109,88 77,63 9,90 18,38 19,32 13,33 13,50 To 124 148 25 82 29 62 63 73 75,75 14,47 SVN 50 T7 T14 73 65 53 68 51 67 60 30 56 83 70 101 46 60 62 118 58,88 74,00 3,29 10,16 NS 200 T7 80 123 120 62 121 86 81 138 101,38 9,87 T14 79 72 97 97 75 88 48 69 78,13 6,20 To 109 100 110 67 115 23 86 94 88,00 10,78 SVN 200 T7 126 71 121 58 20 47 43 94 72,50 11,99 Thời gian bất động (giây) NS 50 mg/kg SVN 100 mg/kg T7 T14 T7 T14 38 64 10 92 102 82 105 50 118 85 149 101 99 56 45 51 126 120 96 66 94 56 58 118 89 93 114 108 121 100 99 97 98,38 82,00 84,50 85,38 5,12 8,17 15,59 9,96 PL-118 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn T14 57 70 36 32 85 123 79 53 66,88 11,16 NS 100 mg/kg T7 T14 70 102 41 33 101 31 79 117 122 76 63 120 57 89 73 93 75,75 82,63 9,01 12,16 Phụ lục Tác dụng chống stress tâm lý M-R1, M-R2 V-R2 Phụ lục 7.1 Kết số lần ngăn sáng tối Nhóm nuôi chung Thời gian ngăn sáng (giây) Nước muối Số lần vào ngăn STT Số lần vào ngăn Thời gian ngăn sáng (giây) MR1 Thời gian ngăn sáng (giây) Số lần vào ngăn VR2 17 253 10 167 179 10 171 18 215 125 175 11 258 285 170 18 136 10 182 13 260 12 147 15 238 12 163 14 153 16 242 10 15 204 178 19 15 188 210 8 232 160 Nhóm nuôi cô lập ST T Số lần vào ngăn Thời gian ngăn sáng (giây) Nước muối 3 31 57 54 56 37 32 54 22 Số lần vào ngăn Thời gian ngăn sáng (giây) MR1 (5 mg/kg) 6 47 162 73 150 118 250 135 172 Số lần vào ngăn Thời gian ngăn sáng (giây) MR1 (10 mg/kg) 3 9 11 13 96 126 197 101 85 70 122 212 Số lần vào ngăn Thời gian ngăn sáng (giây) MR2 (5 mg/kg) 15 19 15 14 13 12 12 170 153 81 186 209 156 110 209 PL-119 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Số lần vào ngăn Thời gian ngăn sáng (giây) MR2 (10 mg/kg) 12 21 11 17 18 13 223 162 141 162 159 170 201 141 Số lần vào ngăn Thời gian ngăn sáng (giây) VR2 (5 mg/kg) 10 13 14 56 276 120 130 213 252 282 100 Số lần vào ngăn Thời gian ngăn sáng (giây) VR2 (10 mg/kg) 16 15 19 8 200 199 147 238 285 222 271 202 Số lần vào ngăn Thời gian ngăn sáng (giây) Fluoxetin (20 mg/kg) 219 258 89 116 12 117 16 121 10 160 10 131 Phụ lục 7.2 Kết TST, FST Nhóm nuôi chung Nuôi Chung STT Lô Thời gian bất động (giây) Thời gian bất động (giây) Nước muối MR1 (10 mg/kg) VR2 (10 mg/kg) 92 72 110 81 47 52 86 54 102 85 65 27 21 74 21 64 36 102 95 45 137 24 70 79 71 56 61 65 87 96 70 69 102 49 71 43 70 60 78 102 73 42 113 72 85 49 108 95 Nhóm nuôi cô lập Nuôi Cô lập STT Lô Thời gian bất động (giây) TS T FS T Nước muối 13 18 13 19 17 19 7 7 18 17 13 19 18 17 18 17 13 19 19 2 32 10 32 10 91 10 51 MR2 (5 mg/kg) 10 10 32 32 9 10 10 51 51 8 10 51 84 65 MR1 (5 mg/kg) 19 19 2 7 65 65 4 Cô lập 3 MR2 (10 mg/kg) 3 91 91 8 7 84 84 9 Cô lập Nuôi STT Lô Thời gian bất động (giây) TS T FS T Nuôi STT Lô Thời gian bất động (giây) 4 5 6 VR2 (10 mg/kg) TS T FS T 19 65 91 84 47 MR1 (10 mg/kg) 10 10 47 47 4 10 10 96 96 0 10 10 13 12 VR2 (5 mg/kg) 13 12 13 12 9 13 128 54 90 54 54 90 10 10 8 96 4 90 Fluoxetin (20 mg/kg) 32 93 32 93 32 93 32 93 60 50 62 50 62 50 62 50 62 72 PL-120 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 60 72 60 72 60 58 72 41 5 54 90 47 96 Phụ lục 7.3 Kết hàm lượng GSH, MDA Nhóm nuôi chung Nuôi STT Chung 0,30 0,27 0,24 0,23 0,30 0,27 1 Lô GSH MD A Nuôi STT Nước muối 0,24 0,30 0,23 0,27 7 0,24 0,23 0,30 0,27 Lô GSH MD A 0,24 0,41 0,23 0,36 7 Chung 0,23 0,23 0,41 0,36 MR1 (10 mg/kg) 0,23 0,41 0,23 6 0,23 0,36 0,23 7 7 0,41 0,36 0,23 0,23 7 0,42 0,37 0,28 0,23 0,38 0,38 0,35 0,31 VR2 (10 mg/kg) 0,41 0,33 0,41 0,33 0,41 0,33 0,41 0,33 0,41 0,33 0,41 0,33 0,41 0,33 0,416 0,330 Nhóm nuôi cô lập Nuôi STT Cô lập 0,30 0,18 0,39 0,21 0,30 0,18 Lô GSH MD A Nuôi STT Lô GSH MD A 0,42 0,37 0,40 0,39 Nước muối 0,39 0,30 7 0,21 0,18 0,39 0,21 0,30 0,18 MR1 (10 mg/kg) 0,42 0,40 0,42 0,40 4 0,37 0,39 0,37 0,39 0 0 0,42 0,37 0,39 0,42 0,21 0,37 Cô lập 0,40 0,39 0,38 0,38 0,28 0,23 0,42 0,37 0,35 0,31 MR1 (5 mg/kg) 0,28 0,42 0,28 5 0,23 0,37 0,23 9 MR2 (5 mg/kg) 0,38 0,35 0,38 0,35 5 0,38 0,31 0,38 0,31 6 PL-121 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Ni STT Cơ lập 0,34 0,41 0,22 0,28 0,34 0,41 Lô GSH MD A Nuôi STT Lô GSH MD A 0,41 0,42 0,30 0,28 MR2 (10 mg/kg) 0,22 0,34 0,22 0,28 0,41 0,28 5 VR2 (10 mg/kg) 0,41 0,30 0,41 0,30 7 0,42 0,28 0,42 0,28 7 0,34 0,41 0,41 0,42 0,22 0,35 0,28 0,38 5 Cô lập 0,30 0,28 0,35 0,36 0,40 0,24 0,35 0,38 0,25 0,26 VR2 (5mg/kg) 0,40 0,35 0,24 0,38 5 0,40 0,24 0,35 0,38 0,40 0,24 6 0,35 0,36 0,25 0,26 Fluoxetin (20 mg/kg) 0,35 0,25 0,35 0,25 4 0,36 0,26 0,36 0,26 9 PL-122 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Phụ lục Chấp thuận Hội đồng Y đức PL-123 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Phụ lục Hình ảnh đại thể gan chuột Mô bị tổn thương Mô bị tổn thương Hình ảnh đại thể gan chuột tiêm Cyclophosphamid sau ngày nhóm uống nước cất Hình ảnh đại thể gan chuột uống ethanol sau tuần nhóm uống nước cất PL-124 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH DƯƠNG HỒNG TỐ QUYÊN NGHIÊN CỨU TIÊU CHUẨN HÓA VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA SÂM VIỆT NAM (PANAX VIETNAMENSIS HA ET. .. dựng tiêu chuẩn Sâm Việt Nam trồng Đánh giá số tác dụng sinh học Sâm Việt Nam trồng năm tuổi: - Tác dụng tăng lực cao Sâm Việt Nam trồng tuổi - Tác dụng bảo vệ gan cao Sâm Việt Nam trồng tuổi - Tác. .. heptadeca- 1,8 (E ), 10(E)-trien- 4,6 -diyn, 3,1 0-diol [89] 1.2.4 Một số tác dụng sinh học Sâm Việt Nam Sâm Việt Nam phát từ năm 197 3, nhiên có nghiên cứu ngồi nước tác dụng sinh học loài loài sâm Năm 199 8, Konoshima