Xây dựng quy trình nhân giống nấm linh chi cổ cò (ganoderma lucidum (curtis) p karst) được thu hái tại vườn quốc gia konkakinh tỉnh gia lai

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜ NG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH MÔI TRƯỜNG LÊ VĂN KIÊM XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG NẤM LINH CHI CỔ CÒ (Ganoderma lucidum (Curtis) P Karst) ĐƯỢC THU HÁI TẠI VƯỜN QUỐC GIA KONKAKINH TỈNH GIA LAI Đà Nẵng – Năm 2017 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜ NG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH MÔI TRƯỜNG LÊ VĂN KIÊM XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG NẤM LINH CHI CỔ CÒ (Ganoderma lucidum (Curtis) P Karst) ĐƯỢC THU HÁI TẠI VƯỜN QUỐC GIA KONKAKINH TỈNH GIA LAI Ngành: Công nghê ̣sinh ho ̣c Người hướng dẫn: ThS Nguyễn Thi Bi ̣ ́ch Hằ ng Đà Nẵng – Năm 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan là công trình nghiên cứu của riêng Các số liê ̣u, kết quả khóa luận là trung thực và chưa từng được công bố bất kỳ công trình nào khác Đà Nẵng, ngày 06 tháng 05 năm 2017 Lê Văn Kiêm LỜI CÁM ƠN Để hoàn thành tốt khóa luâ ̣n tốt nghiêp̣ này đã nhâ ̣n đươ ̣c rất nhiều sự quan tâm và giúp đỡ từ cá nhân và tâ ̣p thể suốt thời gian thực hiêṇ khóa luâ ̣n Đầu tiên xin chân thành bày tỏ lòng cám ơn quý báu tới ThS Nguyễn Thi ̣Bi ch ́ Hằng đã ta ̣o mo ̣i điều kiêṇ và giúp đỡ thực hiêṇ và hoàn thành tốt khóa luâ ̣n tốt nghiêp ̣ Tôi xin chân thành cám ơn BCN khoa cùng toàn thể quý thầy cô giáo khoa Sinh – Môi Trường trường Đa ̣i ho ̣c Sư pha ̣m – Đa ̣i ho ̣c Đà Nẵng đã giúp đỡ xuyên suốt quá tri ̀nh ho ̣c tâ ̣p và nghiên cứu, xây dựng thành công khóa luâ ̣n Tôi xin cám ơn tâ ̣p thể lớp 13CNSH các ba ̣n sinh viên NCKH ta ̣i phòng Công nghê ̣ sinh ho ̣c đã đô ̣ng viên và giúp đỡ suốt quá tri nh ̀ thực hiêṇ đề tài Cuối cùng xin chân thành cám ơn tới Ba, Me ̣ và gia nh ̀ đã lo lắng, chăm sóc và ta ̣o mo ̣i điều kiêṇ cho suốt quá tri nh ̀ ho ̣c tâ ̣p, nghiên cứu và hoàn thành tốt khóa luâ ̣n tốt nghiêp̣ này Đà Nẵng, ngày 06 tháng 05 năm 2017 Lê Văn Kiêm MU ̣C LU ̣C DANH MU ̣C CHỮ VIẾT TẮT i DANH MU ̣C BẢNG BIỂU ii DANH MU ̣C HÌNH ẢNH, ĐỒ THI ̣ iii MỞ ĐẦU 1 Tinh ́ cấ p thiế t Mu ̣c tiêu đề tài Ý nghiã khoa ho ̣c và thực tiễn của đề tà i 3.1 Ý nghiã khoa hoc̣ 3.2 Ý nghiã thực tiễn CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀ I LIỆU 1.1 NẤM LINH CHI 1.1.1 Giới thiê ụ về nấ m 1.1.2 Biế n đổi dinh dưỡng nấ m 1.1.3 Nhu cầu dinh dưỡng nấm 1.1.4 Chu kỳ số ng của nấ m linh chi 1.1.5 Thành phầ n hóa hoc̣ chính của nấ m linh chi 1.2 NẤM LINH CHI CỔ CÒ 1.2.1 Giới thiê ụ về nấ m linh chi Cổ cò 1.2.2 Giá tri cu ̣ ̉ a nấ m linh chi Cổ cò 1.2.3 Đă ̣t điểm hinh ̀ thái, cấ u trúc và sinh thái nấ m linh chi Cổ cò 1.2.4 Mô ̣t số dươ ̣c tinh ́ của linh chi Cổ cò 10 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀ I NƯỚC 12 1.3.1 Tinh ̀ hinh ̀ nghiên cứu nước 13 1.3.2 Tinh ̀ hinh ̀ nghiên cứu ngoài nước 14 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 17 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 17 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.3.1 Phương pháp đánh giá tính dươ ̣c liê ụ nấ m linh chi Cổ cò 18 a Xác định hàm lượng polysaccharides thô 18 b Xác định hàm lượng protein phương pháp Lowry 18 c Phương pháp đinh ̣ tinh ́ alkaloid 20 d Phương pháp đinh ̣ tinh ́ hơ ̣p chấ t saponin 21 e Định tính triterpenoid (phản ứng Liebermann-Burchard) 22 2.3.2 Xác định hoạt tính kháng khuẩn 23 2.3.3 Xác đinh ̣ khả kháng oxy hóa của nấ m linh chi Cổ cò 23 a Thử hoa ̣t tinh ́ chố ng oxy hóa bằ ng phương pháp reducing power 23 2.3.4 Phương pháp xây dựng quy trinh ̀ nhân giố ng nấ m linh chi Cổ cò 25 a Phương pháp phân lập thể nấm 25 b Phương pháp nhân giống cấp I khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng giống cấp I 27 c Phương pháp nhân giống cấp II khảo sát ảnh hưởng mơi trường dinh dưỡng đến q trình nhân giống cấp II 28 2.3.5 Phương pháp đo phát triển chiều dài hệ sợi tính tốc độ lan sợi theo thời gian 29 2.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 29 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 30 3.1 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ GIÁ TÍ NH DƯỢC LIỆU CỦA NẤM LINH CHI CỔ CÒ 30 3.1.1 Đinh ̣ lươ ̣ng hơ ̣p chấ t polysacchride nấ m Cổ cò 30 3.1.2 Đinh ̣ lươ ̣ng hàm lươ ̣ng protein có nấ m Cổ cò 31 3.1.3 Đinh ̣ tinh ́ alkaloid nấ m Cổ cò 33 3.1.4 Đinh ̣ tính hơ ̣p chấ t saponin nấ m Cổ cò 34 a Đinh ̣ tinh ́ saponin nấ m 34 b Đinh ̣ tinh ́ trierpenoid (phản ứng Liebermann-Burchard) 35 3.1.5 Xác đinh ̣ khả kháng khuẩn của nấ m Cổ cò 36 3.1.6 Khả kháng oxy hóa của nấ m linh chi Cổ cò 38 a Khả oxy hóa của nấ m bằ ng phương pháp Reducing power 38 b Khả ức chế peroxy hóa lipid (thử nghiê m ̣ MDA) 40 3.2 XÂY DỰN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG NẤM LINH CHI CỔ CÒ 43 3.2.1 Ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đế n sự sinh trưởng của sơ ̣i nấ m phân lâ ̣p 43 3.2.2 Ảnh hưởng của môi trường đế n khả phát triển của sơ ̣i nấ m môi trường nhân giố ng cấ p I 46 3.2.3 Ảnh hưởng của chấ t đế n khả phát triển của sơ ̣i nấ m môi trường nhân giố ng cấ p II 49 3.2.4 Quy trinh ̀ nhân giố ng nấ m cổ cò 52 a Sơ đồ quy trinh ̀ nhân giố ng 52 b Thuyế t minh quy tri nh ̀ nhân giố ng 53 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHI ̣ 54 Kế t luâ ̣n 54 Kiế n nghi ̣ 55 Phu ̣ lu ̣c 63 i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT PDA Potato Dextro Agar CT Công thức MDA Malonyl dialdehyd BTH Bán tổ ng hơp̣ PDA-C Potato Dextro Agar – Cám PDA-R Potato Dextro Agar – Rơm PDA-CT Potato Dextro Agar – Cải tiế n MT Môi trường ii DANH MỤC BẢ NG BIỂU Số hiêụ bảng Tên bảng 2.1 Cách bố tri ́ thi ́ nghiêm ̣ thử hoa ̣t ti nh ́ chống oxy hóa 2.2 Chỉ tiêu đánh giá cảm quan mật độ hệ sợi 3.1 Hàm lươ ̣ng polysaccharides thô nấm linh chi 3.2 bằng phương pháp reducing power Cổ cò Khả kháng khuẩn nấm linh chi Cổ cò E.coli 3.3 Khả phát sinh và ảnh hưởng của môi trường 3.4 Ảnh hưởng của môi trường nhân giống cấp I đến sự 3.5 phân lâ ̣p đến nấm linh chi Cổ cò phát triển của ̣ sơ ̣i nấm linh chi Cổ cò Ảnh hưởng của nguồn nguyên liêụ nông nghiêp̣ đến quá tri nh ̀ nhân giống cấp II của nấm linh chi Cổ cò Trang 23 29 30 37 44 46 50 51 Bảng 3.5 cho thấy ̣ sơ ̣i nấm Cổ Cò phát triển tốt môi trường nghiên cứu Trong đó , môi trường chất que sắn ̣ sơ ̣i nấm phát triển ma ̣nh nhất với thời gian lan ki ń 20 ngày đa ̣t tốc đô ̣ lan tơ 0,54 cm/ ngày, riêng môi trường nhân bằng ̣t thóc và lõi ngô sau 20 ngày chi ̉ lan đươ ̣c 8,75 cm và 8,67 cm Hai môi trường có chất hạt thóc lõi ngơ cần đến 24 ngày sơ ̣i tơ mới lan ki ́n bich ̣ Vi ̀ môi trường que sắn có diêṇ ti ch ́ tiếp xúc lớn giúp ̣ sơ ̣i nấm thi ch ́ nghi nhanh và phát triển ma ̣nh, mă ̣t khác que sắn có khả hấp thu ̣ nước kem ́ nên có đô ̣ thoáng lớn không bi ụ ́ ng nước làm cho sơ ̣i nấm không bi ạ ̉ nh của đô ̣ ẩ m lớn loa ̣i bỏ khả sơ ̣i nấm bi ự ́ c chế môi trường chứa nhiều nước Theo nghiên cứu của kỹ sư Võ Văn Ninh cho thấy viêc̣ sử du ̣ng que sắn, phế phu ̣ phẩ m nông nghiêp̣ giúp thời gian sinh trưởng của ̣ sơ ̣i nấm nhanh với ti ̉ lê ̣ bich ̣ phôi đươ ̣c cấy giống bằng que sắn đa ̣t từ 80 – 99%, ́ đó viêc̣ sử du ̣ng nguồn nguyên liêụ cũ ti ̉ lê ̣ chi ̉ đa ̣t 50 – 90% và suất của phương pháp truyêǹ thống chi ̉ đa ̣t 40% Đă ̣c biêṭ que sắn là phế phu ̣ phẩ m nông nghiêp̣ nên giá thành rẻ giúp giảm chi phi ́ sản xuất, giảm thời gian nhân giống Bên cạnh đó ở môi trường nhân giống cấp II từ lúa và lõi ngô thừa nhiều chất dinh dưỡng nên vi sinh vâ ̣t dễ phát triển ức chế sơ ̣i nấm phát, điều này đươ ̣c thể hiêṇ qua ti ̉ lê ̣ nhiễm môi trường lúa -11,23%, môi trường lõi ngô là 11,23% cao nhiều so với môi trường que sắn Môi trường lúa và lõi ngô có bề mă ̣t tiếp xúc lớn nên ̣ sơ ̣i khó thi ́ch nghi làm kéo dài thời gian lan sơ ̣i Sử du ̣ng phương pháp đánh giá cảm qua cho điểm thông qua viêc̣ quan sát ̣sơ ̣i môi trường nhân giống đươc̣ kết quả ở bảng 3.5 Mâ ̣t đô ̣ cảm quan ̣ sơ ̣i có sự khác biêṭ giữa các công thức thực nghiêm ̣ Trong đó, môi trường que sắn (MT 1) đươ ̣c đánh giá có ̣sơ ̣i dày và đep̣ nhất với 4,8 điểm Hê ̣ sơ ̣i nấm đươ ̣c nhân giống bằng que sắn có màu trắng, khỏe, sơ ̣i dài và dày, đươ ̣c liên kết chặt với lan que sắn sơ ̣i nấm bám toàn 52 bô ̣ vào que sắn Đối với sự phát triển của sơ ̣i nấm môi trường ̣t thóc kết quả đánh giá cho thấy sơ ̣i nấm phát triển yếu và châ ̣m, sơ ̣i nấm mảnh Môi trường lõi ngô sơ ̣i nấm phát triển không đồng nhất, sơ ̣i nấm lan không đều tốc đô ̣ lan tơ châ ̣m so với môi trường que sắn Qua tốc đô ̣ phát triển ̣ sơ ̣i môi trường nhân giống và cảm quan ̣ sơ ̣i nấm cho thấy Môi trường que sắn là môi trường tối ưu nhất cho viêc̣ nhân giống cấp II 3.2.4 Quy trin ̀ h nhân giống nấm cổ cò a Sơ đồ quy trin ̀ h nhân giống Mẫu nấm linh chi Cổ cò thu hái ta ̣i vườn quốc gia KonKaKinh MT- Hansen Phân Lâ ̣p Giống gốc MT – PDA Cám Cấy chuyển Giống cấp I MT – Que sắn Bảo quản Bảo quản Cấy chuyển Giống cấp I Hình 3.17 Sơ đồ quy trình nhân giống nấm linh chi Cổ cò 53 b Thuyế t minh quy trinh ̀ nhân giố ng Qủa thể nấm linh chi Cổ cò đươ ̣c thu hái ta ̣i vườn quốc gia KonKaKinh ti n̉ h Gia Lai đươ ̣c bảo quản la ̣nh ở nhiêṭ đô ̣ 4oC để vâ ̣n chuyển về phòng thi ́ nghiêm ̣ Công nghê ̣ sinh ho ̣c của khoa Sinh – Môi trường Tiêń hành phân phâ ̣p môi trường Hansen chúng ta thu đươ ̣c giống nấm gốc phân lập từ mô thể nấm Giống gốc phải ổn định đặc tính di truyền, đảm bảo suất hiệu kinh tế Thực cấy chuyền giống gốc sang môi trường thạch PDA - CÁ M cấp I, hệ sợi nấm sinh trưởng tạo thành ống giống hoă ̣c ã giống cấp I Ta tiến hành lựa chọn ống giống cấp I đạt tiêu chuẩn để sử dụng nhân giống cấp II môi trường que ăn kín đáy chai, hình thành chai giống cấp II Sau đó tiến hành cấy vào bich ̣ phôi để tiến hành lan tơ cho quả thể Lưu ý: Trong quá trình nhân giống ở các cấp giống nếu quá trình cấy chuyể n với số lượng lớn, không thể sử dụng hết chúng ta tiến hành bảo quản giống tủ lạnh oC 54 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHI ̣ Kế t luâ ̣n Qua quá tri nh ̀ đánh giá chất lươ ̣ng và nghiên cứu quy tri nh ̀ nhân giống nấm linh chi Cổ cò, chúng rút những kết luâ ̣n sau: - Kêt́ quả đánh giá tri ̣ dươc̣ liêụ nấm linh chi Cổ cò đươ ̣c thu hái ta ̣i vườn quốc gia KonKaKinh cho thấy nấm linh chi Cổ cò là loa ̣i nấm có giá tri ̣dươ ̣c liêụ và có nhiều hơ ̣p chất sinh ho ̣c có hoa ̣t ti ́nh cao như: + Có hàm lươ ̣ng polysaccharides cao chiếm 10,05% chất khô, protein nấm chiếm 10%, khoáng tổ ng số chiếm 1,27% Đinh ̣ ti nh ́ cho thấy quả thể nấm có alkaloid, saponin triterpenoid là các hơ ̣p chất sinh ho ̣c có hoa ̣t ti nh ́ sinh ho ̣c cao +Nấm linh chi Cổ cò còn có khả kháng khuẩ n E.coli với vòng phân giải 28,8 mm sau 24h Khả kháng oxy hóa ma ̣nh ở nồng đô ̣ 1,5-2ml dich ̣ chiết, đă ̣c biêṭ nấm linh chi Cổ cò còn có khả peroxy hóa lipid với chi ̉ số HTCO 37,01% ở nồng đô ̣ không pha loãng - Đã xây dựng đươ ̣c quy tri nh ̀ nhân giống nấm linh chi Cổ cò mô ̣t loài nấm quý có giá tri ̣dươ ̣c liêụ ta ̣i vườn quốc gia KonKaKinh + Môi trường tối ưu cho quá tri nh ̀ phân lâ ̣p từ quả thể nấm linh chi Cổ cò tươi là môi trường Hansen (glucose 50g, pepton 10g, K2HPO4 3g, MgSO4 7H2O 2,5g, cao nấm men 1g, agar 20g) với thời gian bắt đầu bung sơ ̣i là ngày sau phân lâ ̣p và 16 ngày để lan ki ń ống nghiêm ̣ Sơ ̣i nấm linh chi Cổ cò môi trường Hansen phát triển khỏe, dày +Môi trường thi ch ́ hơ ̣p cho quá tri nh ̀ nhân giống cấp I là PDA – Cám là môi trường PDA cải tiến (khoai tây 200g, glucose 20g, pepton 2g, cao nấm men 2g, agar 20g) có bổ sung thêm 2% cám ga ̣o giúp ̣ sơ ̣i phát triển ma ̣nh, thi ch ́ nghi nhanh và chi ̉ mất có 12 ngày để sơ ̣i tơ ăn ki ń ã tha ̣ch 55 +Môi trường nhân nhanh giống cấp II loa ̣i chất với kết quả môi trường que sắn cho tốc đô ̣ lan tơ nhanh nhất, tốc đô ̣ 0,56 cm/ngày Kiế n nghi ̣ Qua quá tri nh ̀ nghiên cứu đề tài, rút các kiến nghi ̣ sau: - Đinh ̣ lươ ̣ng mô ̣t số hơ ̣p chất có hoa ̣t ti nh ́ sinh ho ̣c nấm alkaloid, saponin triterpenoid - Kiểm tra ti nh ́ thoái hóa giống qua từng giai đoa ̣n nhân giống bằng phương pháp sinh ho ̣c phân tử - Xây dựng quy tri ̀nh trồng nấm linh chi Cổ cò chất tổ ng hơ ̣p với các giá thể phù hơ ̣p - Nghiên cứu nuôi ̣ sơ ̣i nấm linh chi Cổ Cò môi trường dich ̣ lỏng để thu sinh khối nhanh 56 Danh mu ̣c tài liê ̣u tham khảo Tiế ng Viê ̣t [1] Đỗ Huy Bình (2004), "Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam – tập II", Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội 2004 [2] Trương Thi ̣ Mỹ Chi, Nguyễn Thi ̣ Thu Hương "Nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa in vitro in vivo số loài nấm Linh chi (Ganoderma lucidum) nấm vân chi (Trametes Versicolor))", Trung tâm Sâm Dược liệu Tp HCM – Viện Dược liệu, tr 135-141 [3] Nguyễn Thượng Dong (2005), "Nghiên cứu số tác dụng sinh học ba loài nấm linh chi Ganoderma applanatum (Pers.) Pat.; G lobatum (Schw.) Atk vaf G lucidum (Leyss ex Fr) Karst" [4] Nguyễn Lân Dũng (2004), "Công nghệ nuôi trồng nấm , tập I , II", NXB nông nghiệp [5] Cao Ngọc Điệp, Võ Văn Phước (2011), "Phân lập nhận diện vi khuẩn phân giải cellulose", Tạp chí khoa học, tâp 18a, tr 177-184 [6] Nguyễn Hữu Đống, Đinh Xuân Linh, Nguyễn Thi ̣ Sơn (2000), "Nấm ăn – sở khoa học công nghệ nuôi trồng", Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội [7] Lê Trung Hiếu, Trương Thi Như ̣ Tâm, Nguyễn Thi ̣Á i Huyền, Lê Thùy Trang (2014), "Bước đầu nghiên cứu đánh giá khả kháng oxy hoá số đối tượng làm nguồn dược liệu", Tạp chí khoa học cơng nghệ, trường đại học khoa học Huế, tr 20-30 [8] Trần Hùng (2004), "Phương pháp nghiên cứu dược liê ̣u", Đại học Y Dược Tp.Hồ Chí Minh [9] ThS Nguyên Minh Khang (2010), "Cơng nghệ ni trồng nấm", Đại học Bình Dương, Bình Dương 57 [10] Nguyễn Phương Đại Nguyên (2015), "Đa dạng thành phần loài chi Ganoderma vườn quốc gia Kon Ka Kinh tỉnh Gia Lai, Việt Nam", Hội nghị khoa học toàn quốc sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ 6, tr 738-742 [11] Nguyễn Thi ̣ Ngo ̣c Hằng Nguyễn Thi ̣ Thu Hương (2010), Nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa theo hướng bảo vệ gan nấm linh chi đỏ (Ganoderma lucidum), Trung tâm Dược liệu Tp HCM- Viện Dược liệu, tr 129 - 134 [12] Nguyễn Như Quỳnh (2006), "Tìm hiểu loại nấm linh chi thu hái Thủ Đức – Tp Hồ Chí Minh" [13] Viện Dược liệu – Bộ Y Tế (2006), "Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ Dược thảo", NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, tr 279-292 [14] Lê Xuân Thám (2010), "Nấm công nghệ chuyển hóa mơi trường – Nấm linh chi Ganoderma lucidum Donk", Nhà xuất Khoa học Và Kỹ Thuật, Hà Nội [15] Lê Xuân Thám (1996), "Nghiên cứu đặc điểm sinh học đặc điểm hấp thu khoảng nấm Linh chi Ganoderma lucidum (Leyss.ẽ Fr)Kát phân tích hạt nhân đánh dấu đồng vị kỹ thuật liên hợp", ĐH Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội [16] Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn (2009), "Giáo trình modun nhân giống nấm, Hà Nội" [17] Nguyễn Phúc Thuâ ̣n (2001), "Giáo tri nh ̀ sinh hóa, phần 1", Nhà xuất bản Đại học Quốc Gia Tp Hờ Chí Minh [18] ThS Tạ Bích Th ̣n (2007), Đánh giá số tính chất sinh y học nấm Linh Chi Ganoderma lucium, Đại học Khoa học Tự nhiên (ĐHQG Hà Nội) 58 [19] Cồ Thi ̣Thùy Vân (2015), "Nghiên cứu quy trình phân lập, nhân giống dạng dịch thể để nuôi trồng nấm đầu khỉ (hericium erinaceus (Bull.: FR) PERS.) tách chiết số polysaccharide có hoạt tính sinh học" [20] Ngũn Lân Dũng (2004), Công nghệ nuôi trồng nấm , tập I , II NXB nông nghiệp Tiế ng Anh [21] Adams M., Plitzko I., Zimmermann S., Brun R., Kaiser M., Hamburger M., Christen M (2010), "Antiplasmodial Lanostanes from the Ganoderma lucidum Mushroom", pp 897-900 [22] Afyon A., Yaiz D., Helfer S., Konuk M (2005), "A study of wood decaying macrofungi of the western Black Sea Region", Turkey, pp 319-322 [23] Agarwal K., Verma S., Chakarborthy G S (2012), "In vitro antioxidant activity of different extract of Ganoderma lucidum " 3(1) 24] Boh B., Zhang J., Zhi-Bin L., Berovic M (2007), "Ganoderma lucidum and its pharmaceutically active compounds" 13, pp 265-301 [25] Carlos A.Z.C., Fabisan C.N.A., Jorge R-C., Melva L-L., Maria X.R-B., Marisa C.R.R (2011), "Optimizing a culture medium for biomass and phenolic compounds production using Ganoderma lucidum", an Journal of Microbiology 44(1), pp 215-223 [26] Claudia I.M., James o., Navindra P.S., David H., Koeffler p., Takashi K (2006), "Ganoderma lucidum causes apoptosis in leukemia, lymphoma and multiple myeloma cells", Leukemia Research, pp 841848 [27] Chee W.L, Angelo V., Sheot H.C (2011), "Feed-forward neural network assisted by discriminant analysis for the spectroscopic discriminantion of cracked spores Ganoderma lucidum", A prospective biotechnology production tool, AMB Express 59 [28] Cheng P-G., Sabaratnam V., Abdullah N., Abdulla M.A., Kuppusamy U.R., Phan C-W (2013), "Polysaccharides-Rich Extract of Ganoderma lucidum (M.A Curtis:Fr.) P Karst Accelerates Wound Healing in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats", Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine [29] Cheng P-G., Sabaratnam V., Abdullah N., Abdulla M.A., Kuppusamy R.U., Phan C.W (2013), "Polysaccharides-Rich Extract of Ganoderma lucidum (M.A Curtis:Fr.) P Karst Accelerates Wound Healing in treptozotocin-Induced Diabetic Rats" [30] Du M., Hu X.S., Zhao GH., Wang C (2008), "Biological properties of different protein extracts from selenium-enriched Ganoderma lucidum" 59(2), pp 134-147 [31] Helenoa S.A., Martinsa A.,Queiroz R.P.J.M., Barrosa L (2012), "ruiting body, spores and in vitro produced mycelium of Ganoderma lucidum from Northeast Portugal: A comparative study of the antioxidant potential of phenolic and polysaccharidic extracts", Food Research International 46, pp 135-140 [32] Helenoa A.S., Vaz A J., Almeida M.G., Tavares.C (2006), "Ganoderma lucidum methanolic extract: chemical characterization in phenolic compounds and study of growth inhibitory activity in human tumour cell lines" 49, pp 159-170 [33] Hexiang Wang (2010), "Ganodermin, an antifungal protein from fruiting bodies of the medicinal mushroom Ganoderma lucidum", Peptides 27, pp 27-30 [34] Hirokazu M., Iwata N., Kamiuchi S., Suzuki F, Iizuka H., Hibino Y., Okazaki M., Shimizu Y (2013), "Antidepressant-like effects of a water-soluble extract from the culture medium of Ganoderma lucidum mycelia in rats", BioMed central 60 [35] Jayasinghe C., Hur H., Lee G.W., Lee TS., Lee UY., Imtiaj A (2008), "Favorable Culture Conditions for Mycelial Growth of Korean Wild Strains in Ganoderma lucidum" 36(1), pp 28-33 [36] Jia J, Hua Y.S., Wu Y., Wang Q-Z., Li N-N., Guo Q-C., Dong X-C., Zhang X (2009), "Evaluation of in vivo antioxidant activities of Ganoderma lucidum polysaccharides in STZ-diabetic rats", Food Chemistry, pp 32-36 [37] Jiang J, Valachovicova T, Harvey K, Sliva D., Slivova V (2004), "Ganoderma lucidum Suppresses Growth of Breast Cancer Cells Through the Inhibition of Akt/NF-κB Signaling", pp 209-216 [38] Jiang J., Valachovicova T., Harvey K., Sliva D., Slivova V (2004), "Ganoderma lucidum inhibits proliferation and induces apoptosis in human prostate cancer cells PC-3", pp 1093-1099 [39] Ko H-H., Wang J-P., Hung C-F (2007), "Antiinflammatory triterpenoids and steroids from Ganoderma lucidum and G tsugae", Article in press 69, pp 234-239 [40] Lin H-J., Lin L-H., Haung C-F., Wu C-Y., Ou K-L., Chang Y-S (2014), "An Immunomodulatory Protein (Ling Zhi-8) from a Ganoderma lucidum Induced Acceleration of Wound Healing in Rat Liver Tissues after Monopolar Electrosurgery" [41] Lin J-M., Chen M-F., Ujiie T., Takada A., Lin C-C (1995), "Radical scavenger and antihepatotoxic activity of Ganoderma formosanum", Journal of Ethnopharmacology, pp 33-41 [42] Liu G-Q., Han W-J., Lin Q-L., Wang X-L (2012), "Improving the Fermentation Production of the Individual Key Triterpene Ganoderic Acid Me by the Medicinal Fungus Ganoderma lucidum in Submerged Culture, Molecules" 17, pp 12575-12586 61 [43] Ma B., Zhou Y.,Ma J., Ruan Y., Wen C-N., Ren W (2011), "Triterpenoids from the spores of Ganoderma lucidum", NCBI 3(11), pp 495 - 498 [44] Paterson R., Russell M (2006), "Ganoderma – A therapeutic fungal biofactory", Phytochemistry", pp 1985-2001 [45] Saltarelli R., Lotti M., Zambonelli A., Buffalini M., Casadei L., Vallorani L., Stocchi V., Ceccaroli P (2009), "Biochemical characterisation and antioxidant activity of mycelium of Ganoderma lucidum from Central Italy", Food Chemistry, pp 143-151 [46] Sandrina A H., Anabela M., Maria J.R.P.Q., Celestino S-B., Isabel C.F.R F., Lillian B (2012), "Fruiting body, spores and in vitro produced mycelium of Ganoderma lucidum from Northeast Portugal: A comparative study of the antioxidant potential of phenolic and polysaccharidic extracts", Food Research International, pp 135-140 [47] Sandrina A.H., Ana P.E., Ana C., Jasmina G., Anabela M, Marina S., Maria R.P.Q., Isabel C.F.R.F (2013), "Antimicrobial and demelanizing activity of Ganoderma lucidum extract, p-hydroxybenzoic and cinnamic acids and their synthetic acetylated glucuronide methyl esters", Food and Chemical Toxicology, pp 95-100 [48] Wong KL., Chan P., Chang LP., Liu CF., Chao HH (2004), "Antioxidant activity of Ganoderma lucidum in acute ethanol-induced heart toxicity" 18(12) [49] Xu Z., Zhong Z., Chen L., Wang Y., Chen X (2011), "Ganoderma lucidum polysaccharides: immunomodulation and potential anti-tumor activities" 39(1), pp 15 - 27 [50] Yegenoglu H., Oke F., Aslim B (2011), "Comparison of Antioxidant Capacities of Ganoderma lucidum (Curtis) P Karst and Funalia trogii 62 (Berk.) Bondartsev & Singer by Using Different In Vitro Methods", Journal Of Medicinal Food, pp 512-16 [51] Zaidman.Z-B., Nevo E., Mahajna J., Solomon P.W (2007), "Androgen receptor-dependent and -independent mechanisms mediate Ganoderma lucidum activities in LNCaP prostate cancer cells", Foof Chemistry, pp 959-967 63 Phu ̣ lu ̣c Hình vi ̣ trí lấy mẫu nấm linh chi Cổ cò Hình phân lập nấm linh chi Cổ cò sau ngày 64 Hình ảnh nhân giông cấp môi ống nghiê ̣m 65 Hình ảnh nhân giống cấp điã petri: (a)- BTH, (b)-PDA, (c)- PDA-R, (d) Hansen ... khả pha? ?p triển của ̣ sơ ̣i nấm linh chi Cổ cò (Ganoderma lucidum (Curtis) P Karst) - Xây dựng quy trình nhân giống c? ?p I c? ?p II nấm linh chi Cổ cò (Ganoderma lucidum (Curtis) P Karst). .. SƯ PHẠM KHOA SINH MÔI TRƯỜNG LÊ VĂN KIÊM XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG NẤM LINH CHI CỔ CÒ (Ganoderma lucidum (Curtis) P Karst) ĐƯỢC THU HÁI TẠI VƯỜN QUỐC GIA KONKAKINH TỈNH GIA LAI. .. tài ? ?Xây dựng quy tri nh ̀ nhân giống nấm linh chi Cổ cò (Ganoderma lucidum (Curtis) P Karst) đươ ̣c thu hái ta ̣i vườn quốc gia KonKaKinh ti n̉ h Gia Lai? ?? Mu ̣c tiêu đề tài - Đánh gia? ?