Luận văn tốt nghiệp khảo sát sự thay đổi hàm lượng enrofloxacin và thiamphenicol trong huyết tương heo theo thời gian

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA CÔNG NGHỆ LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC KHẢO SÁT SỰ THAY ĐỔI HÀM LƢỢNG ENROFLOXACIN VÀ THIAMPHENICOL TRONG HUYẾT TƢƠNG HEO THEO THỜI GIAN BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC CÁN BỘ HƢỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN ThS Phạm Văn Dũng Nguyễn Minh Điện MSSV: 2072136 Ngành: Công Nghệ Hóa Học Khóa 33 Tháng 4/2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA CÔNG NGHỆ LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC KHẢO SÁT SỰ THAY ĐỔI HÀM LƢỢNG ENROFLOXACIN VÀ THIAMPHENICOL TRONG HUYẾT TƢƠNG HEO THEO THỜI GIAN BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC CÁN BỘ HƢỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN ThS Phạm Văn Dũng Nguyễn Minh Điện MSSV: 2072136 Ngành: Cơng Nghệ Hóa Học Khóa 33 Tháng 4/2011 NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ HƢỚNG DẪN NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN LỜI CÁM ƠN Em xin chân thành cảm ơn quý Thầy, Cô đặc biệt Thầy Cô Bộ Mơn Cơng Nghệ Hóa Học, Khoa Cơng Nghệ trƣờng Đại Học Cần Thơ Các Thầy, Cơ tận tình truyền đạt cho em kiến thức kinh nghiệm quý báo suốt thời gian em theo học trƣờng Với tất lòng biết ơn sâu sắc nhất, em xin chân thành cảm ơn Phạm Văn Dũng – phịng R&D, Cơng ty Vemedim bảo tận tình truyền đạt cho em kiến thức, kinh nghiệm vô quý báu suốt thời gian em thực Luận Văn Tốt Nghiệp Em xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Công ty Vemedim chấp nhận tạo điều kiện thuận lợi giúp em hoàn thành luận văn Em xin chân thành cảm ơn quý Cơ, Chú, Anh Chị cơng tác phịng R&D giúp đỡ em trình thực đề tài Một lần xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc gia đình động viên giúp đỡ thực luận văn Cùng tất bạn sinh viên ngành Cơng nghệ Hóa học, Khoa Công nghệ, Trƣờng Đại học Cần Thơ hỗ trợ nhiệt tình giúp tơi hồn thành luận văn Em xin chân thành cảm ơn! Cần thơ, ngày 15 tháng năm 2011 Sinh viên thực Nguyễn Minh Điện i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC HÌNH v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT vii LỜI MỞ ĐẦU PHẦN TỔNG QUAN CHƢƠNG I SƠ LƢỢC THIAMPHENICOL VÀ ENROFLOXACIN .3 Sơ lƣợc Thiamphenicol 1 Cấu tạo .3 1.2 Tính chất 3 Ứng dụng .4 Sơ lƣợc Enrofloxacin .4 Cấu tạo .4 2 Tính chất Ứng dụng .6 CHƢƠNG II PHƢƠNG PHÁP CHIẾT TÁCH Phƣơng pháp chuẩn bị mẫu Phƣơng pháp chiết mẫu .7 2.1 Kỹ thuật chiết lỏng – lỏng (Liquid – liquid extration) 2.2 Kỹ thuật chiết lỏng - rắn 2.2.1 Chiết phƣơng pháp xay trộn với dung môi 2.2.2 Chiết phƣơng pháp học trộn rung (Vortex) .9 2.2.3 Chiết phƣơng pháp chiết Soxhlet mẫu rắn .9 2.2.4 Chiết chất lỏng siêu tới hạn (supercritical fluid method) .10 2.2.5 Kỹ thuật chiết pha rắn (Solid phase extraction, SPE) 11 CHƢƠNG III PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 19 Sơ lƣợc phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 19 ii 1.1 Lịch sử phát triển HPLC 19 1.2 Khái niệm nguyên tắc hoạt động HPLC 20 Khái niệm .20 1.2 Nguyên tắc hoạt động 20 1.3 Cách phân loại sắc ký HPLC .22 1.4 Cấu tạo hệ thống HPLC 22 1.4.1 Dung môi .23 Bộ khử khí Degasse .23 Bơm (Pump) 23 4 Hệ thống tiêm mẫu (injector) 23 Cột (Column) 24 Đầu dò (Detector) 24 Hệ liệu (Data system) 25 Phân tích định tính 25 Phân tích định lƣợng 27 3.1 Dựng đƣờng chuẩn 27 3.2 Hiệu suất thu hồi .27 3.3 Xác định RSD, LOD, LOQ 28 PHẦN THỰC NGHIỆM 30 CHƢƠNG IV THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 31 Phƣơng tiện nghiên cứu 31 1.1 Hóa chất 31 1.2 Dụng cụ 31 1.3 Thiết bị .31 Địa điểm tiến hành .31 Thực nghiệm – Kết .32 3.1 Định tính Thiamphenicol Enrofloxacin phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng 32 1 Định tính Thiamphenicol 32 iii Định tính Enrofloxacin 33 3.2 Lựa chọn quy trình phân tích Enrofloxacin Thiamphenicol phƣơng pháp HPLC 34 Mục đích 34 2 Phƣơng pháp tiến hành 34 3.2 Lựa chọn quy trình 35 3.2 Lựa chọn quy trình phân tích Thiamphenicol .35 a) Quy trình phân tích Thiamphenicol theo chiết tách lỏng – lỏng 35 b) Quy trình phân tích Thiamphenicol theo chiết tách pha rắn SPE 39 3.2 Lựa chọn quy trình phân tích Enrofloxacin 41 a) Quy trình phân tích Enrofloxacin theo chiết tách lỏng – lỏng .41 b) Quy trình phân tích Enrofloxacin theo chiết tách pha rắn SPE .45 3.2.4 Đánh giá quy trình 47 3.3 Khảo sát thay đổi hàm lƣợng Enrofloxacin Thiamphenicol .48 3 Mục đích 48 3 Phƣơng pháp tiến hành khảo sát 48 3 Khảo sát hàm lƣợng Thiamphenicol 48 3 2 Khảo sát hàm lƣợng Enrofloxacin 51 PHẦN NHẬN XÉT – KIẾN NGHỊ 55 CHƢƠNG V KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ 56 Kết luận .56 Kiến nghị .57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 PHỤ LỤC: HÌNH ẢNH MỘT SỐ THIẾT BỊ SỬ DỤNG TRONG QUÁ TRÌNH THỰC HIỆN LUẬN VĂN TẠI CÔNG TY VEMEDIM .60 ĐỀ CƢƠNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP 63 iv DANH MỤC HÌNH Hình 1 Cơng thức cấu tạo Thiamphenicol Hình Cơng thức cấu tạo Enrofloxacin Hình Sơ đồ chiết Soxhlet Hình 2 Hình dạng cột SPE 12 Hình Cấu tạo chiết SPE .13 Hình Các bƣớc tiến hành kỹ thuât chiết SPE 15 Hình Hệ thống HPLC .22 Hình Bình sắc ký lớp mỏng 25 Hình 3 Mơ hình chấm sắc ký 26 Hình Chuẩn bị mỏng định tính 32 Hình Sơ đồ bố trí thí nghiệm 33 Hình 4.3 Quy trình phân tích Thiamphenicol phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng 36 Hình 4 Phƣơng trình đƣờng chuẩn Thiamphenicol 38 Hình Quy trình phân tích Thiamphenicol phƣơng pháp chiết tách SPE 39 Hình 4.6 Quy trình phân tích Enrofloxacin phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng 42 Hình Phƣơng trình đƣờng chuẩn Enrofloxacin 44 Hình Quy trình phân tích Enrofloxacin phƣơng pháp chiết tách SPE 46 Hình Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ Thiamphenicol huyết tƣơng theo thời gian 50 Hình 10 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ Enrofloxacin lại huyết tƣơng theo thời gian .53 v DANH MỤC BẢNG Bảng Các chất hấp phụ dùng kỹ thuật chiết pha rắn .14 Bảng 2 Các dung môi thƣờng dùng chiết pha rắn có tính phân cực tăng dần dựa vào số điện môi 16 Bảng Kết xây dựng đƣờng chuẩn Thiamphenicol 37 Bảng Kết tính hiệu suất thu hồi trung bình Thiamphenicol huyết tƣơng phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng 38 Bảng Kết tính hiệu suất thu hồi trung bình Thiamphenicol huyết tƣơng phƣơng pháp chiết SPE 40 Bảng 4 Kết xây dựng đƣờng chuẩn Enrofloxacin 44 Bảng Kết tính hiệu suất thu hồi trung bình Enrofloxacin huyết tƣơng phƣơng pháp chiết tách lỏng – lỏng 45 Bảng Kết tính hiệu suất thu hồi trung bình Enrofloxacin huyết tƣơng phƣơng pháp chiết SPE 47 Bảng Kết phân tích hàm lƣợng Thiamphenicol trung bình huyết tƣơng với thuốc Công ty Vemedim 49 Bảng Kết phân tích hàm lƣợng Thiamphenicol trung bình huyết tƣơng với thuốc Cơng ty khác .50 Bảng Kết phân tích hàm lƣợng Enrofloxacin trung bình huyết tƣơng Với thuốc Cơng ty Vemedim 52 Bảng 10 Kết phân tích hàm lƣợng Enrofloxacin trung bình huyết tƣơng với thuốc Công ty khác .53 vi Chương IV Thực nghiệm kết Mẫu máu sau lấy từ heo thử nghiệm đƣợc thêm vào 5% sodium EDTA nhằm giữ cho máu không bị đông lại Ly tâm với tốc độ 6000 vòng/phút Tách lấy huyết tƣơng bảo quản nhiệt độ – 20oC đến phân tích Tiến hành phân tích hàm lƣợng Enrofloxacin huyết tƣơng thu đƣợc phƣơng pháp chiết SPE phân tích HPLC theo quy trình xây dựng Sau xác định hàm lƣợng Enrofloxacin cịn lại huyết tƣơng theo cơng thức: Từ phƣơng trình đƣờng chuẩn y = 60315x + 438 Ta có nồng độ cịn lại Enrofloxacin mẫu khảo sát: C Enro HT = Trong y  438 V2   H HSPL 60315 V1 CEnro HT – nồng độ Enrofloxacin có huyết tƣơng H% - hiệu suất thu hồi quy trình phân tích xây dựng H% = 82.81% HSPL – hệ số pha loãng mẫu y – diện tích peak đo đƣợc V1 – thể tích huyết tƣơng ban đầu V2 – thể tích cuối q trình phân tích V2 = mL Kết khảo sát đƣợc trình bày qua biễu bảng đồ thị nhƣ sau: Bảng 4.9 Kết phân tích hàm lƣợng Enrofloxacin trung bình huyết tƣơng với thuốc Vemetryl Công ty Vemedim Đại lƣợng V (mL) Huyết tƣơng Diện tích peak C (ppm) thu hồi 1h sau tiêm 3.25 269820 1.6595 6h sau tiêm 288746 1.1545 24h sau tiêm 3.75 82080.5 0.4359 48h sau tiêm 34788 0.1375 Thời gian SVTH Nguyễn Minh Điện 52 Chương IV Thực nghiệm kết Bảng 4.10 Kết phân tích hàm lƣợng Enrofloxacin trung bình huyết tƣơng với thuốc Cơng ty khác Đại lƣợng V(mL) Huyết tƣơng Diện tích peak C (ppm) thu hồi 1h sau tiêm 209116.5 0.8356 6h sau tiêm 4.5 159533 0.7078 24h sau tiêm 4.75 40236.5 0.1678 48h sau tiêm 25596 0.1007 Thời gian Biếu diễn kết tính tốn đồ thị hàm lƣợng lại Enrofloxacin theo thời gian Nồng độ (ppm) 1.6 1.2 Thuốc công ty Vemedim 0.8 Thuốc công ty khác 0.4 0 10 20 30 40 50 Thời gian (h) Hình 4.10 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ Enrofloxacin lại huyết tƣơng theo thời gian Nhận xét – đánh giá Từ bảng kết đồ thị cho ta thấy, Enrofloxacin hấp thu nhanh qua đƣờng tiêm, nồng độ thuốc đạt mức cao thời gian đầu sau tiêm trì nồng độ có hiệu lực 24 sau tiêm Nồng độ Enrofloxacin giảm khoảng thời gian từ 14 – 16 sau tiêm Do điều kiện khảo sát thời gian không cho phép nên tiến hành khảo sát xác thời gian bán phân hủy thuốc Dựa vào đồ thị ta thấy, thời gian bán phân hủy hai loại thuốc gần SVTH Nguyễn Minh Điện 53 Chương IV Thực nghiệm kết Khoảng thời gian từ sau 48 sau tiêm nồng độ Enrofloxacin cịn tồn máu mức thấp, C = 0.1007 ppm (gần giới hạn định lƣợng phƣơng pháp, LOQ = 0752), điều cho phép kết thúc trình khảo sát q trình phân tích sau thời gian mang tính chất định tính nhằm xem xét tồn Enrofloxacin máu vật nuôi Giới hạn dƣ lƣợng tối đa cho phép (MRL, Maximum Residue Limits) Enrofloxacin 100 µg/kg thể trọng, tƣơng ứng với mg/kg thể trọng [TL24] So sánh thuốc công ty Vemedim (Vemetryl 5) thuốc công ty khác sản xuất cho kết nhƣ sau: thời gian sau tiêm thuốc đƣợc nồng độ Enrofloxacin máu vật nuôi thử nghiệm thực nghiệm dùng thuốc công ty khác sản xuất thấp thực nghiệm dùng thuốc Vemetryl Trong giai đoạn đầu khảo sát (từ - giờ): nồng độ Enrofloxacin máu giảm nhƣ hai loại thuốc sử dụng (Vemetryl giảm lần, thuốc công ty khác giảm lần) Giai đoạn từ 24 đến 48 giờ, nồng độ Enrofloxacin máu vật nuôi thử nghiệm sử dung thuốc công ty khác giảm nhanh so với sử dụng thuốc Vemetril (Vemetryl giảm lần, thuốc công ty khác giảm lần) Song giai đoạn cuối khảo sát nồng độ Enrofloxacin máu thử nghiệm thuốc Vemetryl nhanh Kết thời gian khảo sát 48 sau tiêm thuốc nồng độ Enrofloxacin cịn lại máu hai trƣờng hợp thuốc thử ngiệm gần nhƣ SVTH Nguyễn Minh Điện 54 PHẦN KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ CHƢƠNG V KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ Kết luận Qua trình lựa chọn quy trình phân tích đƣợc tiến hành trƣớc thực nghiệm lại quy trình điều kiện phịng thí nghiệm cho ta rút kết luận nhƣ sau: q trình phân tích kỹ thuật chiết tách SPE thu đƣợc hiệu suất chiết tách cao so với trình chiết tách theo kỹ thuật chiết lỏng lỏng Đồng thời, kỹ thuật chiết SPE dễ thực hiện, dễ tự động hóa tiết kiệm dung môi so với kỹ thuật chiết lỏng lỏng Trong kỹ thuật phân tích đại kỹ thuật chiết SPE đƣợc lựa chọn sử dụng rộng rãi so với kỹ thuật chiết tách khác Trong kỹ thuật chiết SPE, vấn đề định hiệu suất chiết tách pha rắn cột chiết, khả chiết tách phụ thuộc nhiều vào loại chất nhồi, chất kích thƣớc chất nhồi cột chiết Đồng thời việc lựa chọn dung mơi thích hợp yếu tố có ảnh hƣởng trực tiếp đến hiệu suất trình chiết tách Kỹ thuật HPLC đƣợc sử dụng rộng rãi ngành phân tích đại Cũng nhƣ kỹ thuật chiết SPE loại cột HPLC yếu tố định quy tình phân tích Tùy thuộc vào chất q trình phân tích mà có lựa chọn loại cột HPLC cho phù hợp Song song đó, khơng thể bỏ qua ảnh hƣởng dung mơi q trình phân tích Trong HPLC dung mơi phải loại dung môi đƣợc sản xuất dành riêng cho HPLC Với điều kiện làm việc phịng thí nghiệm, quy trình chiết tách SPE phân tích HPLC thu đƣợc kết nhƣ sau: Quy trình phân tích Thiamphenicol Sử dụng cột SPE StrataTM – X 33µm, polymeric Sorbent Máy HPLC Shimazdu LC – 20AD với đầu dò UV, cột RP – C18 Gemini Phenomenex 150 x mm, 5µm Pha động: Acetonitrile: nƣớc cất (tỷ lệ 1:1) Tốc độ dịng mL/phút Detecter UV 225nm Quy trình có độ lệch chuẩn tƣơng đối RSD = 7569%, giới hạn phát LOD = 0254 ppm, giới hạn định lƣợng LOQ = 0762 ppm, hiệu suất thu hồi %H = 96 25% Quy trình phân tích Enrofloxacin Sử dụng cột SPE StrataTM – X 33µm, polymeric Sorbent 56 Chương V Kết luận kiến nghị Máy HPLC Shimazdu LC – 20AD với đầu dò UV, cột RP – C18 Gemini Phenomenex 150 x 4.6 mm, 5µm Pha động: Đệm KH2PO4 0.05 M pH = điều chỉnh H3PO4 A – Đệm KH2PO4 : Acetonitrile (tỉ lệ 80 : 20) B – Acetonitrile Tỷ lệ A : B = 50 : 50 Tốc độ dòng mL/phút Detecter UV 290nm Quy trình có độ lệch chuẩn tƣơng đối RSD = 6872%, giới hạn phát LOD = 0251 ppm, giới hạn định lƣợng LOQ = 0752 ppm, hiệu suất thu hồi %H = 81 82% Sử dụng quy trình phân tích tiến hành khảo sát thực nghiệm thu đƣợc kết quả: với loại thuốc đem tiến hành khảo sát nồng độ thuốc đạt mức cao máu khoảng thời gian đầu sau tiêm Sau nồng độ thuốc giảm nhanh theo thòi gian Sau 48 tiêm thuốc, nồng độ thuốc tồn máu nên cần ý xem xét thời gian ngƣng sử dụng thuốc trƣớc tiến hành giết mổ Kiến nghị Cần tiến hành khảo sát thêm yếu tố ảnh hƣởng đến quy trình phân tích nhƣ nhiệt độ, áp suất, tốc độ dòng pha động, loại cột HPLC, để xây dựng đƣợc quy trình phân tích tối ƣu hơn, hiệu suất thu hồi cao Mở rộng khảo sát thêm nhiều đối tƣợng khác nhƣ gà, vịt, trâu, bò, nhằm phân tích đƣợc phản ứng khác vật nuôi thuốc, đánh giá đƣợc khả hấp thu, chuyển hóa thuốc vật ni khác mà có bƣớc điều chỉnh lƣợng thuốc sử dụng cho phù hợp Cần tiến hành khảo sát khoảng thời gian gần kéo dài thời gian khảo sát nhƣ khảo sát khoảng thời gian giờ, giờ, giờ, 12 giờ, 24 giờ, 36 giờ, 48 72 để có kết xác thời gian đạt nồng độ cực đại thuốc thời gian bán hủy thuốc thể vật ni, đánh giá đƣợc xác tốc độ biến thiên nồng độ thuốc máu vật ni thử nghiệm Đồng thời có thêm kết thời gian hết hẳn thuốc máu vật ni mà có khuyến cáo sử dụng thuốc hợp lý SVTH Nguyễn Minh Điện 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO Chu Phạm Ngọc Sơn Kỹ thuật sắc ký lỏng, Tháng 10/2010, Trung tâm phát triển đào tạo sắc ký Thành phố Hồ Chí Minh Phạm Thị Ánh Phân tích kỹ thuật sắc ký, 2010, Trung tâm đào tạo phát triển sắc ký Thành phố Hồ Chí Minh Hồ Viết Q Cơ sở hóa học phân tích đại, tập Các phương pháp phân chia, làm giàu ứng dụng phân tích, 2002, NXB Đại học Sƣ phạm Nguyễn Đức Huệ Các phương pháp phân tích hữu cơ, 2005, NXB Đại học Quốc Gia Hà Nội Bùi Thị Tho BSTY Nghiêm Thị Anh Đào Giáo trình dược lý thú y, 2005, NXB Hà Nội Britsh pharmacopoeic 2007 Võ Văn Ninh Kháng sinh thú y, 2001, NXB Trẻ Nguyễn Thị Phi Phụng Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, 2007, NXB Đại học Quốc Gia Thành phố Hồ Chí Minh Bộ mơn hóa phân tích – kiểm nghiệm – độc chất Giáo trình kiểm nghiệm, 2009, Trƣờng Đại học Y Dƣợc Cần Thơ 10 Nguyễn Phƣớc Tƣơng, Trần Diễm Uyên Sử dụng thuốc biệt dược thú y, 2000, NXB Nông nghiệp 11 Bùi Thị Tho Thuốc kháng sinh nguyên tắc sử dụng chăn ni, 2003, NXB Hà Nội 12 Nguyễn Đình Lâm Chun đề Sắc ký (Cơ sở lý thuyết ứng dụng), Trƣờng Đại học Bách Khoa – Đại học Đà Nẵng 13 Trần Bích Lam Thí nghiệm phân tích thực phẩm, 2006, NXB Đại học Quốc Gia Thành phố Hồ Chí Minh 14 Limian Zhao, Carol Haney Ball Determination of Chloramphenicol, Florfenicol, and Thiamphenicol in Honey Using Agilent SampliQ OPT Solid-Phase Extraction Cartridges and Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry, 2010, 1–5 58 Chương V Kết luận kiến nghị 15 EH Abdennebi, CM Stowe Pharmacokinetics and distribution of thiamphenicol in sheep given repeated intramuscular doses, 1994, 5, 489–494 16 Innovative Approaches for today’s food analysis challenges, Agilent SPE Food Safety Applications Notebook, 2009, 1, 1–35 17 J.L.Otero, N.Mestorino & J.O Errecalde Pharmacokinetics of enrofloxacin after single intravenous administration in sheep, 2009, 28, 1129–1142 18 Kanda–Nishikicho, Chiyoda-ku Analysis of Enrofloxacin in Broile Eels, Shimadzu Application News, 2010, L314 19 Shahnaz Gauhar, Syed Ayub Ali, Harris Shoaib, Syed Baqir Shyum Naqvi, Iyad Naeem Muhammad Development and Validation of a HPLC Method for Determination of Pefloxacin in Tablet and Human Plasma, 2009, 1, 33–42 20 Jakubowski P, Jarszewski JJ, Grabowski T Determination of Enrofloxacin in chicken plasma by high performance liquid chromatography for pharmacokinetic student, 2010, 60, 563–572 21 Roy P.E Yanong and eric W Curtis, Robert Simmons Pharmacokinetic Studies of Florfenicol in Koi Carp and Threespot Gourami Trichogaster trichopterus after Oral and Intramuscular Treatment, 2005, 17, 129–137 22 Sanjib Khargharia, Chandana Choudhury Barua, Pritam Mohan and Mohan Bhattacharya Pharmacokinetic Studies of Enrofloxacin in Yak after Intramuscular Administration, 2005, 2, 91–94 23 http://www.inchem.org/documents/jecfa/jecmono/v38je05.htm truy cập ngày 24 tháng năm 2011 24 Dr.H.F.De Brabander Screening for residues of antibiotics and chemotherapeutics in milk and honey, 2010, 94-95, Wim Reybroeck SVTH Nguyễn Minh Điện 59 Phụ lục PHỤ LỤC HÌNH ẢNH MỘT SỐ THIẾT BỊ SỬ DỤNG TRONG Q TRÌNH THỰC HIỆN LUẬN VĂN TẠI CƠNG TY VEMEDIM Máy HPLC Máy cô quay Máy siêu âm SVTH Nguyễn Minh Điện 60 Phụ lục Máy ly tâm Máy đo pH SVTH Nguyễn Minh Điện 61 Phụ lục Máy vortex Máy bơm Cân d = 0.01g Cân d = 0.1mg SVTH Nguyễn Minh Điện 62 Phụ lục TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ Độc lập – tự – hạnh phúc BỘ MƠN CƠNG NGHỆ HĨA Cần Thơ, ngày 11 tháng 01 năm 2010 ĐỀ CƢƠNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Năm học: 2010 - 2011 Đề tài thực hiện: Khảo sát thay đổi hàm lƣợng Enrofloxacin Thiamphenicol huyết tƣơng heo theo thời gian phƣơng pháp High performance liquid chromatography (HPLC) Sinh viên thực hiện: Nguyễn Minh Điện MSSV: 2072136 Chuyên ngành: Công nghệ hóa học - Khóa 33 Cán hƣớng dẫn: Phạm Văn Dũng Công ty Cổ Phần SXKD Vật Tƣ Thuốc Thú Y Vemedim Việt Nam A – ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, thuốc kháng sinh đƣợc sử dụng ngày nhiều vào mục đích khác nhau: phịng, điều trị bệnh kích thích tăng trọng cho vật ni Tuy nhiên, thiếu hiểu biết, ngƣời chăn nuôi sử dụng thuốc kháng sinh điều trị chƣa ngun tắc, khơng có sở khoa học dẫn đến hậu nghiêm trọng Trong số nhiều loại kháng sinh lƣu hành thị trƣờng, Enrofloxacin loại thuốc kháng sinh thuộc nhóm Fluoroquinolon Thiamphenicol loại thuốc kháng sinh thuộc nhóm Phenicol có hoạt phổ kháng khuẩn rộng đƣợc sử dụng rộng rãi việc phịng trị bệnh cho vật ni, đặc biệt heo Vấn đề đặt tồn dƣ loại kháng sinh gia súc gia cầm ảnh hƣởng xấu đến sức khoẻ cộng đồng môi trƣờng, nguyên nhân gây bệnh cho ngƣời làm tăng nguy xuất nguồn gen kháng thuốc chủng vi sinh vật, đặc biệt vi sinh vật gây bệnh Xuất phát từ nhu cầu thực tiễn, em tiến hành nghiên cứu đề tài với giúp đỡ công ty Vemedim Việt Nam SVTH Nguyễn Minh Điện 63 Phụ lục B – MỤC ĐÍCH YÊU CẦU Khảo sát thay đổi hàm lƣợng Enrofloxacin Thiamphenicol huyết tƣơng heo theo thời gian phƣơng pháp HPLC Xác định hàm lƣợng thuốc huyết tƣơng heo sau cho tiêm thuốc số thời điểm Từ tạo sở khoa học cho việc sử dụng kháng sinh Enrofloxacin Thiamphenicol đúng, hợp lý, an toàn hiệu C – ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN THỰC HIỆN Địa diểm thực hiện: Công ty Cổ Phần Sản Xuất Kinh Doanh Vật Tƣ Thuốc Thú Y - Vemedim Việt Nam Địa chỉ: 07 đƣờng 30/04, Quận Ninh Kiều, Thành phố Cần Thơ Thời gian thực hiện: Từ 20/12/2010 đến ngày 20/4/2011 D – NỘI DUNG CHÍNH VÀ GIỚI HẠN ĐỀ TÀI PHẦN 1: TỔNG QUAN Chƣơng Sơ lƣợc Enrofloxacin Thiamphenicol I Sơ lƣợc Enrofloxacin I Cấu tạo Giới thiệu công thức phân tử, công thức cấu tạo tên gọi Enrofloxacin I.2 Tính chất Sơ lƣợc tính chất vật lý, tính chất hóa học Enrofloxacin I.3 Ứng dụng Tìm hiểu ứng dụng Enrofloxacin, chức ảnh hƣởng ngƣời, vật ni môi trƣờng II Sơ lƣợc Thiamphenicol II Cấu tạo Giới thiệu công thức phân tử, công thức cấu tạo tên gọi Thiamphenicol II.2 Tính chất Sơ lƣợc tính chất vật lý, tính chất hóa học Thiamphenicol SVTH Nguyễn Minh Điện 64 Phụ lục II.3 Ứng dụng Tìm hiểu ứng dụng Thiamphenicol, chức ảnh hƣởng ngƣời, vật nuôi môi trƣờng Chƣơng Phƣơng pháp chiết tách I Phƣơng pháp chuẩn bị mẫu II Phƣơng pháp chiết mẫu Chƣơng Phƣơng pháp phân tích HPLC I Sơ lƣợc phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC II Phân tích định tính III Phân tích định lƣợng III Dựng đƣờng chuẩn III Hiệu suất thu hồi III Xác định LOD, LOQ PHẦN THỰC NGHIỆM Chƣơng Thực nghiệm kết I Phƣơng tiện nghiên cứu II Địa điểm tiến hành III Thực nghiệm – Kết III Xây dựng quy trình phân tích Enrofloxacin Thiamphenicol phƣơng pháp HPLC III 1 Mục đích III Phƣơng pháp tiến hành III Xây dựng quy trình III Đánh giá quy trình III Khảo sát thay đổi hàm lƣợng Enrofloxacin Thiamphenicol III Mục đích Khảo sát thay đổi hàm lƣợng Enrofloxacin Thiamphenicol lại huyết tƣơng heo theo thời gian SVTH Nguyễn Minh Điện 65 Phụ lục III.2.2 Phƣơng pháp tiến hành khảo sát Tiêm thuốc có chứa Enrofloxacin Thiamphenicol vào thể gia súc, gia cầm tiến hành xác định hàm lƣợng Enrofloxacin Thiamphenicol lại huyết tƣơng chúng sau khoảng thời gian khác III.2.3 Đánh giá kết Đánh giá thay đổi hàm lƣợng Enrofloxacin Thiamphenicol huyết tƣơng gia súc gia cầm theo thời gian khảo sát PHẦN NHẬN XÉT – KIẾN NGHỊ Giới hạn đề tài: có nhiều phƣơng pháp để phân tích Thiamphenicol Enrofloxacin, nội dung đề tài phân tích phƣơng pháp phân tích HPLC E – KẾT HOẠCH THỰC HIỆN Hoạt động 20–31/12/2010 01/2011 Tìm hiểu đề tài Viết đề cƣơng Xây dựng quy trình phân tích Khảo sát hàm lƣợng Enrofloxacin Thiamphenicol Viết luận văn 03/2011 04/2011 X X X X X SINH VIÊN THỰC HIỆN Nguyễn Minh Điện DUYỆT CỦA BỘ MÔN SVTH Nguyễn Minh Điện 02/2011 X X X X CÁN BỘ HƢỚNG DẪN ………………………………… DUYỆT CỦA HĐ LV&TLTN 66 ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA CÔNG NGHỆ LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC KHẢO SÁT SỰ THAY ĐỔI HÀM LƢỢNG ENROFLOXACIN VÀ THIAMPHENICOL TRONG HUYẾT TƢƠNG HEO THEO THỜI GIAN BẰNG PHƢƠNG... phát từ nhu cầu thực tiễn, em tiến hành nghiên cứu đề tài ? ?Khảo sát thay đổi hàm lƣợng Enrofloxacin Thiamphenicol huyết tƣơng heo theo thời gian phƣơng pháp High Performance Liquid Chromatography... biểu diễn phụ thuộc nồng độ Thiamphenicol huyết tƣơng theo thời gian 50 Hình 10 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ Enrofloxacin lại huyết tƣơng theo thời gian .53 v DANH MỤC BẢNG