Phân lập và đánh giá khả năng đối kháng của các chủng nấm từ đất nông nghiệp

Bài viết thực hiện nhằm phân lập và xác định khả năng đối kháng với nấm bệnh của các chi nấm bản địa có trong đất vườn cây có múi tại thành phố Cần Thơ và đây có thể coi là bước đầu của nghiên cứu sử dụng nấm rễ như một chế phẩm sinh học.

pISSN 1859-1388 eISSN 2615-9678 Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa học Tự nhiên Tập 130, Số 1A, 87–96, 2021 PHÂN LẬP VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG CỦA CÁC CHỦNG NẤM TỪ ĐẤT NÔNG NGHIỆP Lê Thanh Tồn*, Phạm Văn Hướng Khoa Nơng nghiệp, Trường Đại học Cần Thơ, Đường 3/2, Ninh Kiều, Cần Thơ, Việt Nam * Tác giả liên hệ Lê Thanh Toàn (Ngày nhận bài: 19-05-2020; Ngày chấp nhận đăng: 12-11-2020) Tóm tắt Các tác giả phân lập 39 chủng nấm từ đất vườn trồng có múi, chủng nấm rễ vùng rễ có khả đối kháng tốt với Fusarium solani chủng nấm rễ vùng rễ đối kháng tốt với Rhizoctonia solani đạt hiệu đối kháng 60% ngày thứ bảy sau đặt khoanh nấm Trong đó, chủng nấm Penicillium citrinum – loại nấm rễ nội sinh rễ trồng – cho hiệu đối kháng 60,63% với F solani 73,13% với R solani Từ khóa: Fusarium solani, nấm rễ, phân lập, Rhizoctonia solani Isolation and assessment of antagonistic ability of Mycorrhizae from agricultural soil Le Thanh Toan*, Pham Van Huong College of Agriculture, Can Tho University, 3/2 St., Ninh Kieu, Can Tho, Vietnam * Correspondence to Le Thanh Toan (Received: 19 May 2020; Accepted: 12 November 2020) Abstract The authors isolated 39 fungal species from soil planting citrus trees Seven fungi have high antagonistic efficacy against Fusarium solani, and eight fungi are effective in inhibiting the growth of Rhizoctonia solani These fungi have antagonistic efficacy values of more than 60% on the 7th day after applying fungal slices Among the effective isolates, Penicillium citrinum – a kind of Mycorrhizae – has an antagonistic efficacy of 60.63% toward F solani and 73.13% toward R solani Keywords: Fusarium solani, isolation, Mycorrhizae, Rhizoctonia solani Đặt vấn đề nước lớn [1] Tuy nhiên, việc sản xuất có múi Việt Nam cịn nhiều khó khăn cần Cam, quýt, chanh, bưởi thuộc nhóm ăn giải Hiện tại, việc áp dụng tiến kỹ chủ lực, có lịch sử phát triển lâu đời thuật sản xuất trái có múi kỹ thuật trồng khắp vùng sinh thái Việt Nam cắt tỉa, tạo tán, kỹ thuật bón phân, kỹ thuật tưới Trái có múi mặt hàng xuất nước quản lý độ ẩm đất vùng trồng cam chủ lực, có nhu cầu tiêu thụ qt cịn hạn chế kinh nghiệm; việc quản lý DOI: 10.26459/hueunijns.v130i1A.5797 87 Lê Thanh Toàn Phạm Văn Hướng sâu, bệnh hại ln gặp nhiều khó khăn [2] Việc tìm gồm G pentatum, F caledonium, C claroideum, F kiếm lồi vi sinh vật có hiệu giúp thúc đẩy constrictum, R iruityis, G macrocarpum, F mosseae trình phát triển rễ, hấp thu dinh dưỡng, Gi margarita đất vùng rễ giống táo tăng trưởng, suất khả chống chịu sâu ‘Gold Milenium’ từ Ba Lan Sarwade cs [10] bệnh hại thúc đẩy nhà nghiên cứu khám phá công bố quần thể nấm Acaulospora squamosa từ khả sử dụng nấm rễ áp dụng sản Maharashtra, Ấn Độ, với A squamosa loài ưu xuất lồi trồng khác Nhóm nấm rễ Sukhada [11] nghiên cứu đa dạng nấm rễ đóng vai trị tác động lên suất rễ xồi tìm thấy Glomus Acaulporpora ổn định hệ sinh thái nơng nghiệp, tạo chi vùng rễ, với R fasciculatus F tiềm lớn cho nơng nghiệp bền vững mosseae hai lồi nấm rễ chiếm ưu Do đó, Khoảng 100.000 lồi nấm đất nhà khoa học phát mơ tả, phần lớn tập trung tầng đất canh tác [3] Trong tầng đất này, bên cạnh nấm gây bệnh cho trồng cịn có mặt lồi nấm có lợi Một số lồi nấm rễ nghiên cứu cho thấy khả kiểm soát nghiên cứu thực nhằm phân lập xác định khả đối kháng với nấm bệnh chi nấm địa có đất vườn có múi thành phố Cần Thơ coi bước đầu nghiên cứu sử dụng nấm rễ chế phẩm sinh học tốt mầm bệnh đất nấm Fusarium, Phytophthora, Pythium, Rhizoctonia Sclerotium, nhờ hạn chế thất thu suất cho trồng Nhờ đặc tính này, nấm rễ sử dụng Phương tiện phương pháp 2.1 Phương tiện nhằm hạn chế lượng phân bón thuốc hóa học Nấm F solani gây bệnh vàng thối rễ R canh tác nông nghiệp Khade [4] công bố solani gây bệnh lở cổ rễ nhóm cam qt 17 lồi nấm rễ từ giống chuối lấy mẫu từ ba Phòng thí nghiệm Phịng trừ Sinh học, Bộ mơn Bảo địa điểm bắc Goa, Ấn Độ Trong đó, Glomus vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp, Trường Đại học chiếm ưu loài (13), Acaulporpora Cần Thơ cung cấp (3 loài) Gigaspora (1 loài) Soares cs [5] xác định loài nấm rễ địa R clarus, G spurcum, S fulgida, G macrocarpum, G invermaium, A colombiana, S pellucida, A appendiculata S heterogama từ đồn điền trái Brazil, với R clarus G spurcum loài chiếm ưu Tương tự, Singh Prasad [6] quan sát quần thể bào tử vườn vải từ Uttar Pradesh cơng bố có mặt loài nấm rễ thuộc bốn chi Glomus, Gigaspora, Rhizophagus Acaulporpora Nấm rễ có vai trị ngày quan trọng hệ thống sản xuất nho, nhiều vườn nho nhận nước trồng đất màu mỡ [7] Sự cộng sinh nấm rễ vào rễ nho ảnh hưởng đến tăng trưởng, tăng cường hấp thu dinh dưỡng cải thiện khả chịu hạn [8] Sumorok cs [9] xác định loài nấm 88 2.2 Phương pháp thu mẫu phân lập Nguồn nấm rễ vùng rễ phân lập từ 150 mẫu đất nông nghiệp với hai lần thu thập từ vườn có múi khác Cần Thơ Các mẫu đất để phân lập nấm rễ vùng rễ thu thập độ sâu 5–20 cm (500 g/mẫu) xung quanh gốc trồng khỏe vườn có múi nhiều năm tuổi Các mẫu đất đựng túi nilon, dán nhãn, mang phịng thí nghiệm phân lập Nấm rễ vùng rễ phân lập theo phương pháp Kumar cs [12] Theo đó, nấm vùng rễ thu thập cách pha loãng g đất nồng độ 1×10–1, 1×10–2, 1×10–3 nước cất vơ trùng Tiếp theo, 20 µL dung dịch pha lỗng nồng độ 1×10–2 1×10–3 lấy chà lên pISSN 1859-1388 eISSN 2615-9678 Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa học Tự nhiên Tập 130, Số 1A, 87–96, 2021 đĩa môi trường Các đĩa giữ nhiệt độ phịng Dtt bán kính khuẩn lạc nấm bệnh đĩa thử 96 Tản nấm khác hình thái có thật (mm) [14] Thí nghiệm thực hai lần tính đối kháng với nấm khác đĩa Petri với kết tương tự trình phân lập cấy chuyển sang đĩa mơi trường khác Sau đó, mẫu nấm tiếp 2.4 phân lập nấm vùng rễ, phân lập nấm rễ khác Khảo sát khả đối kháng chủng nấm phân lập từ đất với R solani điều kiện in vitro bước đầu phải tách g rễ từ mẫu đất, rửa Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu đất, sau hịa vào 10 mL nước cất vô trùng Tiến nhiên, nhân tố, nghiệm thức gồm lần lặp hành bước tương tự cách phân lại, tương ứng với đĩa Petri lần lặp lại lập nấm vùng rễ Các mẫu nấm sử Các chủng nấm phân lập từ hai lần thu mẫu đất dụng cho thí nghiệm Các nguồn nấm chia làm hai lần bố trí thí nghiệm rễ vùng rễ sau phân lập đặt tên theo Nấm bệnh R solani, nguồn nấm rễ vùng rễ trình tự: (1) chữ viết tắt tỉnh thu mẫu; (2) chữ nuôi cấy khoảng ngày đĩa Petri môi viết tắt ký hiệu phịng thí nghiệm; (3) số thứ tự trường Potato Dextrose Agar Thí nghiệm bố mẫu phân lập; (4) số lần lặp lại mẫu đất trí, ghi nhận tiêu xác định hiệu đối tục phân lập đến [13] Tương tự cách kháng tương tự thí nghiệm mục 2.3 Thí nghiệm 2.3 Khảo sát khả đối kháng chủng nấm phân lập từ đất với F solani điều kiện in vitro thực hai lần, với kết thí nghiệm Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu chủng nấm đối kháng có hiệu chọn nhiên, nhân tố, nghiệm thức gồm lần lặp tương tự Từ kết đối kháng chủng nấm phân lập từ đất F solani R solani, để định danh lại, tương ứng với đĩa Petri lần lặp lại Các chủng nấm phân lập từ hai lần thu mẫu đất 2.5 chi làm hai lần bố trí Nguồn nấm bệnh F solani, nguồn nấm rễ vùng rễ nuôi cấy khoảng ngày đĩa Petri môi trường Potato Dextrose Agar Khoanh khuẩn ty nấm đường kính mm chuẩn bị cách sử dụng dụng cụ đục khoanh nấm Khoanh nấm chủng nấm rễ (vùng rễ) đặt đối xứng với khoanh giấy thấm chứa dung dịch nước cất trùng, cách thành đĩa Petri 1,5 cm Hai khoanh giấy Định danh chủng vi khuẩn vùng rễ có hiệu đối kháng tốt Mẫu nấm nuôi cấy môi trường King’B Sau 48 giờ, mẫu nấm gửi đến cơng ty Sinh hóa Phù Sa, Tp Cần Thơ để thực PCR, giải trình tự gene định danh tên lồi nấm vùng rễ 2.6 Phân tích số liệu thấm đặt đường thẳng đối xứng qua Số liệu tổng hợp, xử lý phần mềm hạch nấm F solani Đo bán kính khoanh nấm vào Microsoft Excel Thống kê phân tích ANOVA so ngày thứ nhất, thứ ba, thứ năm thứ bảy sau sánh khác biệt nghiệm thức phần đặt khoanh nấm (SĐKN), xác định hiệu đối mềm MSTATC qua kiểm định Duncan kháng chủng nấm rễ vùng rễ đối kháng với với nấm F solani theo công thức (1) 𝐻= 𝐷đc −𝐷tt 𝐷đc × 100% (1) H hiệu đối kháng (%); Dđc bán kính khuẩn lạc nấm bệnh đĩa đối chứng (mm); DOI: 10.26459/hueunijns.v130i1A.5797 89 Lê Thanh Toàn Phạm Văn Hướng Ở lần bố trí thứ với 19 chủng nấm đối Kết thảo luận kháng với F solani, bảy chủng đạt hiệu đối 3.1 Khả đối kháng chủng nấm phân lập với F solani điều kiện in vitro kháng cao khác biệt có ý nghĩa so với chủng Nhìn chung, kết lần bố trí thí CTND-1303: 57,14%; CTND-1403: 58,01%; CTND- nghiệm (lần với 19 chủng nấm lần với 20 1704: 56,55%; CTND-1804: 62,86%) ngày thứ bảy chủng nấm, phân lập từ 150 mẫu đất thu về) SĐKN Duy chủng CTND-0501 đạt hiệu cho thấy hầu hết nấm có tính đối kháng với đối kháng 62,05% ngày thứ năm SĐKN Vào F solani chưa cao Bảy số 39 chủng, ngày thứ thứ ba SĐKN hiệu đối tương ứng 17,95% (ngày thứ bảy SĐKN), có mức kháng chủng nấm chưa thể rõ Vì đối kháng 60% vậy, CTND-0501 chủng nấm có hiệu đối nấm cịn lại (CTND-0101: 62,87%; CTND-0501: 68,26%; CTND-0602: 62,37%; CTND-1002: 61,01%; kháng mạnh (Bảng 1) Bảng Hiệu đối kháng 19 chủng nấm với F solani điều kiện in vitro Nghiệm thức Hiệu đối kháng trung bình sau ngày đặt khoanh nấm (%) Thứ Thứ ba CTND-0101 0,00 29,88 CTND-0201 12,50 7,16b–d 3,17ij 0,00f 5,7h CTND-0301 0,00 1,32d 33,0d–f 51,37bc 21,42e–g CTND-0401 8,33 13,19a–c 36,35c–e 53,73b 27,90b–e CTND-0501 0,00 25,18a 62,05a 68,26a 38,87a CTND-0602 0,00 17,96ab 47,77bc 62,37ab 32,02a–c CTND-0702 8,33 1,67d 6,01i 7,56e 5,89h CTND-0802 0,00 16,49ab 0,00k 0,00f 4,12hi CTND-0902 0,00 4,90cd 1,92jk 0,74f 1,89i CTND-1002 0,00 5,36cd 43,88b–d 61,01ab 27,56b–e CTND-1103 0,00 0,00d 35,2de 51,05bc 21,56e–g CTND-1203 8,33 1,67d 20,00g 42,53cd 18,13fg CTND-1303 0,00 1,79d 12,00h 57,14ab 17,73fg CTND-1403 0,00 1,79d 38,53c–e 58,01ab 24,58c–f CTND-1503 0,00 8,04b–d 35,66de 53,32bc 24,25c–f CTND-1604 8,33 0,00d 25,17fg 42,86cd 19,09fg CTND-1704 0,00 0,00d 31,64ef 56,55ab 22,05d–g CTND-1804 0,00 21,43ab 36,50de 62,86ab 30,20a–d CTND–1904 6,25 1,67d 20,77g 39,34d 17,01g Mức ý nghĩa ns * * * * CV(%) 11,22 47,41 11,27 8,03 11,23 a Thứ năm 51,46 ab Thứ bảy 62,87 ab Trung bình 36,05ab Ghi chú: Các trung bình cột theo sau chữ giống khơng khác biệt ý nghĩa thống kê Duncan; *: khác biệt mức ý nghĩa 5%; ns: không khác biệt mức ý nghĩa 5%; NSĐKN: Ngày sau đặt khoanh nấm 90 pISSN 1859-1388 eISSN 2615-9678 Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa học Tự nhiên Tập 130, Số 1A, 87–96, 2021 Ở lần bố trí thứ với 20 chủng nấm cịn lại, chủng nấm có mức tương đồng cao nên tạo kết tương tự lần bố trí thứ Theo khác biệt chủng nấm, có chủng đến ngày thứ bảy SĐKN, ba chủng đạt hiệu nấm đạt hiệu khác biệt có ý nghĩa cao khác biệt có ý nghĩa thống kê so với (CTND-3307: 20,83% ngày thứ nhất, CTND-2405: chủng nấm lại (CTND-2405: 60,63%; CTND- 36,55% ngày thứ ba CTND-3107: 63,13% 3107 63,13%; CTND-3307; 58,75%) Ở ngày thứ ngày thứ năm) Chủng nấm có hiệu đối kháng nhất, thứ ba thứ năm SĐKN, hiệu cao CTND-2405 (Bảng 2) Bảng Hiệu đối kháng (%) 20 chủng nấm với F solani điều kiện in vitro Hiệu đối kháng trung bình sau ngày đặt khoanh nấm (%) Nghiệm thức Thứ Thứ ba Thứ năm Thứ bảy Trung bình CTND-2005 0,00b 30,21ab 50,00a–c 55,63cd 33,96a–c CTND-2105 2,50ab 21,88bc 46,15c–e 43,13h 28,41c–g CTND-2205 0,00b 27,36ab 50,71a–c 56,25b–d 33,58a–c CTND-2305 2,50ab 23,12bc 42,86d–f 50,00ef 29,62c–f CTND-2405 5,00ab 36,55a 55,00a 60,63ab 39,29a CTND-2505 10,00ab 3,13f–h 0,00h 0,00j 3,28j CTND-2606 2,50 24,23 CTND-2706 7,78ab 21,06bc CTND-2806 0,00b CTND-2906 de 31,91b–e 41,83ef 48,75fg 29,85c–f 23,90ab 48,57bc 50,63ef 30,77b–e 2,78ab 27,00ab 30,71g 39,38i 24,97f–h CTND-3006 16,67ab 1,47gh 38,33f 53,75de 27,56d–h CTND-3107 0,00b 13,51de 52,39ab 63,13a 32,26b–d CTND-3207 0,00b 4,41fg 45,19c–e 56,88b–d 26,62d–h CTND-3307 20,83a 16,18cd 50,00a–c 58,75a–c 36,44ab CTND-3407 0,00b 0,00h 29,31g 44,38h 18,42i CTND-3507 6,25ab 1,47gh 40,10f 51,25ef 24,77f–h CTND-3608 0,00b 6,07ef 38,10f 51,25ef 23,86gh CTND-3708 0,00b 1,39gh 39,30f 49,38e–g 22,52hi CTND-3808 0,00b 2,94f–h 46,16c–e 56,25b–d 26,34e–h CTND-3908 0,00b 0,00h 30,36g 45,63gh 19,00i Mức ý nghĩa * * * * * CV(%) 10,36 19,12 3,96 2,74 6,17 ab bc 47,14 b–d 53,75 Ghi chú: Các trung bình cột theo sau chữ giống khơng khác biệt ý nghĩa thống kê Duncan; *: khác biệt mức ý nghĩa 5%; NSĐKN: Ngày sau đặt khoanh nấm DOI: 10.26459/hueunijns.v130i1A.5797 91 Lê Thanh Tồn Phạm Văn Hướng Hình Hiệu đối kháng CTND-2405 với F solani A: Bán kính vơ khuẩn CTND-2405; B: Mảng nấm F solani bị hóa đen chất độc CTND-2405 tiết Khoanh giấy tẩm nước cất; Khoanh nấm Fusarium; Khoanh giấy tẩm CTND-2405 Dựa vào kết thu hai chủng nấm CTND-0501 CTND-2405 đạt kết tốt Trong đó, chủng nấm CTND-2405 cịn tiết độc chất làm hóa đen mảng nấm F solani, làm cho sợi nấm F solani khơng cịn khả phát triển phía có đặt chủng nấm CTND-2405 (Hình 1) 3.2 Khả đối kháng chủng nấm phân lập với R solani điều kiện in vitro CTND-1704 (tương ứng 57,78, 56,67 57,22%) Ở ngày thứ năm SĐKN thay đổi lớn so với ngày thứ ba SĐKN Theo đó, chủng đạt hiệu đối kháng cao CTND-0602 (65,00%), kế Nhìn chung, kết hai lần bố trí (lần đến CTND-1403 (61,11%); chủng CTND- thứ với 19 chủng lần hai với 20 chủng nấm 0702, CTND-1503 CTND-1704 đạt hiệu đối phân lập từ mẫu đất thu về) cho thấy đa kháng khoảng 52–60% Ở ngày thứ bảy số chủng nấm có khả đối kháng với nấm R SĐKN ghi nhận kết cao solani Tám chủng có tỷ lệ hiệu đối kháng lớn chủng nấm CTND-0602 (65,00%), cịn chủng 60% (20,31%, Bảng 3) Khơng có khác biệt CTND-0702, CTND-1403, CTND-1503 CTND- nghiệm thức bố trí hiệu 1704 đạt hiệu đối kháng khoảng 50–60% đối kháng 19 chủng nấm phân lập với R solani Như vậy, CTND-0602 chủng có hiệu đối lần bố trí thứ thí nghiệm Ở kháng với R solani cao lần bố trí thí ngày thứ ba SĐKN, hiệu đối kháng chủng nghiệm Các chủng nấm không nhắc đến nấm CTND-0602 cao (63,33%), kế lần bố trí chủng khơng có tính đối CTND-1503 (60,56%), CTND-0702, CTND-1503, kháng với R solani (Bảng 3) Bảng Hiệu đối kháng 19 chủng nấm với R solani điều kiện in vitro Hiệu đối kháng trung bình sau ngày đặt khoanh nấm (%) Nghiệm thức Thứ Thứ ba Thứ năm Thứ bảy Trung bình CTND-0101 29,17 0,00c 0,00d 0,00d 7,29b CTND-0201 15,42 0,00c 0,00d 0,00d 3,85b CTND-0301 12,66 0,00c 0,00d 0,00d 3,17b CTND-0401 30,00 0,00c 0,00d 0,00d 7,50b 92 pISSN 1859-1388 eISSN 2615-9678 Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa học Tự nhiên Tập 130, Số 1A, 87–96, 2021 Hiệu đối kháng trung bình sau ngày đặt khoanh nấm (%) Nghiệm thức Thứ Thứ ba Thứ năm Thứ bảy Trung bình CTND-0501 25,00 0,00c 0,00d 0,00d 6,25b CTND-0602 21,35 63,33a 65,00a 65,00a 53,67a CTND-0702 27,78 58,89b 57,78b 57,78b 50,56a CTND-0802 8,75 0,00c 0,00d 0,00d 2,19b CTND-0902 0,00 0,00c 0,00d 0,00d 0,00b CTND-1002 6,25 0,00c 0,00d 0,00d 1,56b CTND-1103 8,33 0,00c 0,00d 0,00d 2,08b CTND-1203 5,00 0,00c 0,00d 0,00d 1,25b CTND-1303 0,00 0,00c 0,00d 0,00d 0,00b CTND-1403 23,33 56,67b 61,1ab 60,00b 50,28a CTND-1503 7,14 60,56ab 60,00b 60,00b 46,92a CTND-1604 7,14 0,00c 0,00d 0,00d 1,79b CTND-1704 0,00 57,22b 52,78c 51,11c 40,28a CTND-1804 16,25 0,00c 0,00d 0,00d 4,06b CTND-1904 6,25 0,00 0,00d 0,00d 1,56b Mức ý nghĩa ns * * * * CV(%) 10,63 7,68 7,54 7,66 37,98 Ghi chú: Các trung bình cột theo sau chữ giống khơng khác biệt ý nghĩa thống kê Duncan; *: khác biệt mức ý nghĩa 5%; ns: không khác biệt mức ý nghĩa 5%; NSĐKN: Ngày sau đặt khoanh nấm Mười chủng 20 chủng nấm cịn lại có đối kháng với R solani ngày thứ bảy sau đề cập Chín chủng nấm cịn lại khơng có tính đối kháng với R solani (Hình 2, Bảng 4) đặt khoanh nấm Ở ngày thứ SĐKN, hiệu đối kháng chủng nấm không khác biệt lớn Từ ngày thứ ba đến ngày thứ bảy, chủng nấm thể tính kháng Theo đó, chủng CTND-2305, CTND-2405 CTND3307 liên tục trì hiệu đối kháng mức cao khác biệt có ý nghĩa so với chủng nấm lại (ngoại trừ hiệu CTND-2005, CTND2105, CTND-2505, CTND-3107 CTND-3908 hai ngày thứ năm thứ bảy) Trong chủng nấm này, CTND-2405 có hiệu đối kháng 70% chủng nấm có hiệu đối kháng cao lần bố trí Trong chủng nấm cịn lại, tám chủng nấm có đối kháng với R solani mức Hình Hiệu đối kháng CTND-2405 với R solani cao không đáng kể với ba chủng nấm DOI: 10.26459/hueunijns.v130i1A.5797 93 Lê Thanh Toàn Phạm Văn Hướng Bảng Hiệu đối kháng 20 chủng nấm với R solani điều kiện in vitro Hiệu đối kháng trung bình sau ngày đặt khoanh nấm (%) Nghiệm thức Thứ Thứ ba Thứ năm Thứ bảy Trung bình CTND-2005 18,79ab 60,63b–d 53,13ab 53,13ab 46,42a–c CTND-2105 16,66ab 58,13b–d 53,75ab 52,50ab 45,26bc CTND-2205 13,14ab 0,00f 0,00d 0,00d 3,28g CTND-2305 3,57b 72,50a 70,63a 68,75a 53,86ab CTND-2405 33,33ab 72,50a 73,13a 73,13a 63,02a CTND-2505 23,55ab 61,88bc 61,88ab 61,88ab 52,29ab CTND-2606 12,08ab 0,00f 0,00d 0,00d 3,02g CTND-2706 14,77ab 0,00f 0,00d 0,00d 3,69g CTND-2806 3,64b 0,00f 0,00d 0,00d 0,91g CTND-2906 26,00ab 55,63d 0,00d 0,00d 20,41ef CTND-3006 2,50b 0,00f 0,00d 0,00d 0,63g CTND-3107 4,61b 62,50b 61,88ab 61,88ab 47,71a–c CTND-3207 16,07ab 49,38e 23,13c 23,13c 27,92de CTND-3307 35,42a 68,75a 67,50a 67,50a 59,79ab CTND-3407 16,90ab 0,00f 0,00d 0,00d 4,23g CTND-3507 4,17b 45,00e 0,00d 0,00d 12,29f CTND-3608 7,74ab 58,13b–d 55,63ab 55,63ab 44,28bc CTND-3708 2,94b 47,50e 46,88b 46,88b 36,05cd CTND-3808 14,10ab 0,00f 0,00d 0,00d 3,53g CTND-3908 30,83ab 56,25cd 55,00ab 52,50ab 48,65a–c Mức ý nghĩa * * * * * CV(%) 18,61 4,76 18,33 18,39 14,57 Ghi chú: Các trung bình cột theo sau chữ giống khơng khác biệt ý nghĩa thống kê Duncan; *: khác biệt mức ý nghĩa 5%; NSĐKN: Ngày sau đặt khoanh nấm Dựa vào kết thống kê CTND-0620 giải trình tự 577 so sánh với CTND-2405 coi hai chủng nấm có kết liệu Genebank trang web NCBI công cụ tốt thí nghiệm Từ kết đối kháng đối BLAST SEARCH Kết giải trình tự gen vùng với nấm F solani R solani thí nghiệm, ITS tra cứu Blast search cho thấy độ tương chủng nấm CTND-2405 chọn để xác định tên đồng 99,83% với trình tự gen vùng ITS lồi lồi Penicillium citrinum, mã số truy cập MH665234.1 Vì vậy, chủng nấm rễ CTND-2405 xếp vào chi 3.3 Định danh chủng nấm rễ CTND-2405 Vùng Internal Transcribed Spacer (ITS) chủng nấm rễ CTND-2405 có tổng số nucleotide 94 Penicillium, lồi Penicillium citrinum Sự tích lũy nấm rễ làm giảm phát sinh bệnh số lượng số mầm bệnh truyền qua Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa học Tự nhiên Tập 130, Số 1A, 87–96, 2021 đất Rhizoctonia [15] Kết thí nghiệm pISSN 1859-1388 eISSN 2615-9678 Tài liệu tham khảo khả đối kháng chủng nấm rễ với nấm bệnh F solani R solani tương đồng với kết tác giả [15] Trong tổng số 39 chủng nấm rễ phân lập có tới 34 chủng nấm rễ cho kết đối kháng với F solani 16 chủng cho kết đối kháng với R solani Việc định danh chủng nấm CTND-2405 cho kết P citrinum Theo Khan cs [16] P citrinum có khả sản xuất Gibberellins sản sinh enzyme chitinase Với khả việc nấm P citrinum tạo vành khăn vơ khuẩn có hiệu đối kháng cao với R solani F solani hoàn toàn hợp lý nghiên cứu (Hình 2) Ngồi khả trên, P citrinum cịn có số khả khác sinh tổng hợp phenol [17], sản sinh enzyme pectinase thủy phân chất pectin [18], sản xuất chất ức chế cholesterogensis [19] Kết luận kiến nghị Từ 150 mẫu đất vườn có múi Cần Thơ phân lập mơi trường Potato Dextrose Agar thu 39 chủng nấm rễ vùng rễ Hiệu đối kháng chủng nấm khác F solani R solani biến động lớn tùy theo chủng Ở ngày thứ bảy, hiệu đối kháng chủng nấm rễ vùng rễ phân lập từ đến 73,13% Trong chủng nấm phân lập, hai chủng cho hiệu đối kháng cao với F solani điều kiện in vitro (CTND-2405 CTND-0501), chủng CTND-2405 có hiệu cao Chủng nấm CTND-2405 có hiệu kháng cao R solani điều kiện in vitro Chủng nấm rễ CTND-2405 Penicillium citrinum Ảnh hưởng nấm Penicillium citrinum sinh trưởng tăng chống chịu bệnh trồng tiếp tục nghiên cứu điều kiện nhà lưới đồng DOI: 10.26459/hueunijns.v130i1A.5797 Thuận HN Kỹ thuật chọn tạo trồng cam quýt Hà Nội (VN): Nxb Nông nghiệp; 2004 230 p Hưng ND Nghiên cứu tuyển chọn phát triển giống cam, qt khơng hạt phía Bắc Hà Nội (VN): Nxb Nông nghiệp; 2015 Mão TV Sử dụng vi sinh vật có ích, Tập Ứng dụng nấm cộng sinh vi sinh vật phòng trừ sâu hại Hà Nội (VN): Nxb Nông nghiệp; 2004 197 p Khade SW Mycorrhizal association in different varieties of banana (Musa sp.) in soils of Goa [master's thesis] Goa (India): Goa University; 1999 Soares ACF, Martins MA, Mathias L, Freitas MSM Arbuscular mycorrhizal fungi and the occurrence of flavonoids in roots of passion fruit seedlings Scientia Agricola 2005;62(4):331-336 Singh RP, Prasad V Occurrence and population dynamics of vesicular arbuscular mycorrhizae in the Indian orchards of litchi Litchi chinensis Sonn., aonla Phyllanthus emblica L and banana Musa paradisiaca L Asian Journal of Bio Science 2006;1(2):154-156 Schreiner RP Mycorrhizas and Mineral Acquisition in Grapevines In: Christensen LP, Smart DR, editors Proceedings of the soil environment and vine mineral nutrition symposium San Diego, CA (USA); American Society for Enology and Viticulture; 2005 pp 49-60 Schreiner RP Effects of native and non native arbuscular mycorrhizal fungi on growth and nutrient uptake of ‘Pinot noir’ (Vitis vinifera L.) in two soils with contrasting levels of phosphorus Applied Soil Ecology 2007;36(2-3):205-215 Sumorok B, Sas-Paszt L, Głuszek S, Derkowska E, Żurawicz E The effect of mycorrhisation and mulching of apple trees ‘Gold Millennium’ and blackcurrant bushes ‘Tiben’ on the occurrence of arbuscular mycorrhizal fungi Journal of Fruit and Ornamental Plant Research 2011;19(1):35-49 10 Sarwade PP, Chandanshive SS, Kanade MB, Bhale UN Diversity of Arbuscular mycorrhizal (AM) fungi in some common plants of Marathwada region International Multidisciplinary Research Journal 2011;1(12):11-12 11 Sukhada M Arbuscular mycorrhizal fungi benefit mango (Mangifera indica L.) plant growth in the field Scientia Horticulturae 2012;143:43-48 95 Lê Thanh Toàn Phạm Văn Hướng 12 Kumar V, Wingfield JC, Dawson A, Ramenofsky M, Rani S, Bartell P Biological clocks and regulation of seasonal reproduction and migration in birds Physiological and Biochemical Zoology 2010;83(5):827-835 13 Choi YW, Hyde KD, Ho WH Single spore isolation of fungi Fungal Diversity 1999;3: 29-38 14 Atlas RM Handbook of Microbiological Media, 4th ed New York (USA): CRC Press; 2010; p 771-779 15 Abdel-Fattah GM, El-Haddad SA, Hafez EE, Rashad YM Induction of defense responses in common bean plants by arbuscular mycorrhizal fungi Microbiological Research 2011;166(4):268-281 16 Khan S, Hamayun M, Yoon H, Kim H, Suh S, Hwang S, et al Plant growth promotion and Penicillium citrinum BMC Microbiology 2008;8(1):231 96 17 Curtis RF, Hassall CH, Nazar M The biosynthesis of phenols Part XV Some metabolites of Penicillium citrinum related to citrinin Journal of the Chemical Society C: Organic 1968;1:85-93 18 Lan PTN, Châu NTB, Chi NQ Phân lập tuyển chọn chủng nấm mốc có khả phân giải pectin Hội nghị khoa học toàn quốc Sinh thái Tài nguyên sinh vật lần thứ 7; 2017; Hà Nội Hà Nội: Nxb Khoa học tự nhiên Công nghệ; 2017 p 13041310 19 Endo A, Kuroda M, Tsujita Y ML-236A, ML-236B, and ML-236C, new inhibitors of cholesterogensis produced by Penicillium citrinum The Journal of Antibiotics 1976;29(12): 1346-1348  ... kết tương tự trình phân lập cấy chuyển sang đĩa mơi trường khác Sau đó, mẫu nấm tiếp 2.4 phân lập nấm vùng rễ, phân lập nấm rễ khác Khảo sát khả đối kháng chủng nấm phân lập từ đất với R solani... lại lập nấm vùng rễ Các mẫu nấm sử Các chủng nấm phân lập từ hai lần thu mẫu đất dụng cho thí nghiệm Các nguồn nấm chia làm hai lần bố trí thí nghiệm rễ vùng rễ sau phân lập đặt tên theo Nấm. .. lần lặp tương tự Từ kết đối kháng chủng nấm phân lập từ đất F solani R solani, để định danh lại, tương ứng với đĩa Petri lần lặp lại Các chủng nấm phân lập từ hai lần thu mẫu đất 2.5 chi làm hai