Bài viết này tiến hành nghiên cứu, chọn lựa đất tại các khu vực trong thành phố để xác định hệ vi nấm và khảo sát sơ bộ tính kháng vi sinh vật là một số tác nhân gây bệnh cho người.
Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 11 41 Phân lập vi nấm kháng vi sinh vật từ đất cơng viên Tp Hồ Chí Minh Mai Hà Thanh Bình, Lê Quang Hạnh Thư* Khoa Dược, Đại học Nguyễn Tất Thành * lqhthu@ntt.edu.vn Tóm tắt Nghiên cứu phân lập 103 chủng vi nấm sợi từ đất công viên thuộc Tp.HCM, có 69 chủng xác định thuộc chi Penicillium sp., Aspergillus sp., Trichoderma sp., Mucor sp., Fusarium sp., Phoma sp., Curvularia sp., Paecilomyces sp., Cladosporium sp., chủng chưa xác định khác Hoạt tính kháng vi sinh vi nấm khảo sát số đối tượng Staphylococcus aureus, MRSA, Streptococcus feacalis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, C glabrata C tropicalis Kết khảo sát cho thấy 27 chủng có hoạt tính kháng khuẩn, gồm 10 chủng Penicillium sp., 11 chủng Aspergillus sp., 03 chủng Trichoderma sp 03 chủng khác 12 chủng cho hoạt tính kháng nấm, gồm 02 chủng Penicillium sp., 01 chủng Aspergillus sp., 01 chủng Trichoderma sp 08 chủng khác Đặc biệt, 03 chủng gồm Penicillium sp T33, Aspergillus sp G51 H34 vừa kháng khuẩn vừa kháng nấm Thêm vào đó, mơi trường gồm cao nấm men nước chiết ngô chứng minh phù hợp cho vi nấm sinh trưởng Các kết cho thấy vi nấm phân lập từ đất nguồn tiềm cho việc khám phá chất kháng sinh ® 2020 Journal of Science and Technology - NTTU Đặt vấn đề Trong đời sống, vi nấm sản xuất hoạt chất có tính kháng vi sinh vật để chống lại tác nhân gây tổn thương tế bào, cạnh tranh môi trường sống… Các hoạt chất vi nấm tiết mơi trường ngoại cảnh lưu lại bên tế bào Nhiều hoạt chất có tính kháng khuẩn, kháng nấm sử dụng việc phòng ngừa điều trị bệnh người, vật ni trồng Điển kháng sinh penicillin có nguồn gốc từ nấm mốc Penicillium notatum kháng sinh aminosid có nguồn gốc từ vi nấm Streptomyces, Microspora… Do đó, vi sinh vật nói chung vi nấm nói riêng coi nguồn tiềm cung cấp hoạt chất có tác dụng sinh học Watanabe cộng người tiên phong việc nghiên cứu vi nấm có đất [1] Ông phân lập đặt tên cho 04 loài nấm men 11 loài nấm mốc bao gồm Aspergillus glaucus, Penicillium glaucus Mucor stolonifer Các nghiên cứu tác giả/nhóm tác giả khu vực khác giới cho thấy Aspergillus Nhận 17.09.2020 Được duyệt 06.10.2020 Công bố 30.10.2020 Từ khóa kháng khuẩn, kháng Candida, vi nấm, đất, Aspergillus sp… sp., Penicillium sp., Mucor/Rhizopus, Fusarium… chi nấm thường tìm thấy đất [1-3] Trong nước, số đề tài khảo sát vi nấm đất thực vùng Tp.Cần Thơ, huyện Cần Giờ… Tuy nhiên, hầu hết nghiên cứu thường ứng dụng để bảo vệ trồng Chỉ có số đề tài tiến hành phân lập vi nấm sợi có hoạt tính kháng vi sinh vật gây bệnh người động vật Các nghiên cứu chủ yếu phân lập vi nấm Aspergillus sp (như A.terreus, A.oryzae, A.japonicus …), Penicillium sp., Fusarium sp., có hoạt tính kháng khuẩn số vi khuẩn E.coli Bacillus subtilis; Trichoderma sản xuất enzyme ngoại bào hoạt chất có tính đối kháng với vi nấm gây bệnh thối thân ứng dụng phòng trừ bệnh hại trồng; vi nấm tiết hoạt chất giúp cải tạo đất Các tác giả/nhóm tác giả chủ yếu lựa chọn vùng đất khắc nghiệt đất nhiễm mặn, đất phèn, đất nông nghiệp lâu năm… để phân lập vi nấm có hoạt tính sinh học yếu tố thúc đẩy vi nấm sản xuất hoạt chất để bảo vệ tế bào [4-7] Hiện nay, nguồn đất thành phố bị ô nhiễm nhiều yếu tố, trồng tại công viên tuyến đường chăm sóc thuốc bảo Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 11 42 vệ thực vật… Do vậy, điều kiện thúc đẩy vi nấm sản xuất hoạt chất để thích nghi Vì vậy, nghiên cứu chọn lựa đất tại khu vực thành phố để xác định hệ vi nấm khảo sát sơ tính kháng vi sinh vật số tác nhân gây bệnh cho người Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứu Vi nấm sợi thu thập từ đất công viên Tp.HCM gồm: + Công viên Tao Đàn, 55C Nguyễn Thị Minh Khai, P Bến Thành, Q (kí hiệu mẫu: Tx, x số thứ tự mẫu); + Công viên Gia Định, đường Hoàng Minh Giám, P.9, Q Phú Nhuận (kí hiệu mẫu: Gx, x số thứ tự mẫu); + Cơng viên Hồng Văn Thụ, đường Hồng Văn Thụ, P.2, Q Tân Bình (kí hiệu mẫu: Hx, x số thứ tự mẫu) Loại đất chọn đất trồng cổ thụ cơng viên, nơi có bóng râm mát Thời gian lấy mẫu: tháng 07/2018 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp thu xử lí mẫu từ đất Đất lấy độ sâu 05 cm – 10 cm dụng cụ sạch đặt petri vơ trùng Đất rây qua lưới kích thước lỗ mm để loại bỏ đá sỏi Mẫu xử lí bảo quản 40C không 48 Tại địa điểm thu mẫu đất vị trí lấy mẫu định vị ngẫu nhiên diện tích địa điểm lấy mẫu cơng cụ đồ trực tuyến Pha lỗng mẫu đất với dung dịch NaCl 0,9% để có độ pha lỗng từ 10-1 đến 10-5 Hút 0,1 mL dung dịch độ pha loãng, trải mặt thạch PDA (potato dextrose agar) bổ sung chloramphenicol (50 mg/L) để ngăn chặn phát triển vi khuẩn Các đĩa thạch ủ nhiệt độ phòng theo dõi phát triển vi nấm – ngày 2.2.2 Phân lập tinh sạch vi nấm Thu sợi khuẩn ti từ đĩa thạch ủ mẫu cấy chuyển sang môi trường PDA bổ sung chloramphenicol (50 mg/L) Thực cấy chuyển vi nấm nhiều lần để tinh sạch mẫu Tùy theo tốc độ phát triển vi nấm, tiến hành ủ mẫu nhiệt độ phòng theo dõi phát triển vi nấm khoảng – tuần lâu Kiểm tra độ tinh sạch mẫu cách quan sát phát triển đồng khóm nấm đặc điểm hiển vi 2.2.3 Định danh vi nấm sợi Định danh chủng vi nấm có hoạt tính kháng vi sinh vật phương pháp hình thái học dựa vào khóa phân loại Đặng Vũ Hồng Miên cộng sự, Watanabe cộng sự, G.S.de Hoog cộng [1,8,9] Vi nấm nuôi cấy môi trường PDA nhiệt độ phòng từ – ngày Theo dõi phát triển khóm nấm ghi nhận màu sắc khóm, đặc điểm bề mặt khóm, sắc tố/chất tiết vi nấm tiết ra… Để quan sát đặc điểm hiển vi, cần nhuộm vi nấm với thuốc nhuộm lactophenol cotton blue (LPCB) sau xé sợi nấm Đại học Nguyễn Tất Thành thực nuôi cấy vi nấm lam kính Quan sát hiển vi ghi nhận đặc điểm sợi nấm (có/khơng có màu, có/khơng có vách ngăn, dạng sợi nấm đặc biệt/rễ giả…), bào tử cấu trúc mang bào tử đặc trưng, cấu tử đặc biệt (tế bào Hull, thể quả…) 2.2.4 Khảo sát sơ hoạt tính kháng vi sinh vật - Vi khuẩn thử nghiệm gồm Staphylococcus aureus ACTT29213, MRSA ATCC43300, Streptococcus feacalis ATCC29212, Escherichia coli ATCC25922 Pseudomonas aeruginosa ATCC27853 hoạt hóa pha lỗng đến mật độ tương đương 108 tế bào/mL - Vi nấm Candida sp thử nghiệm gồm C.albicans ATCC20231, C.glabrata PK12B C.tropicalis PK12C hoạt hóa pha lỗng đến mật độ tương đương 106 tế bào/mL - Vi nấm hoạt hóa mơi trường PDA, theo dõi vi nấm – ngày đến vi nấm sinh bào tử Cấy chuyển bào tử vi nấm sang môi trường nghèo dinh dưỡng nhằm thúc đẩy trình sản sinh chất biến dưỡng có hoạt tính kháng vi sinh vật, gồm: + Mơi trường 1: Cao chiết nấm men (yeast extract 2%, sucrose 15%) + Môi trường 2: Hỗn hợp nước chiết ngô (R.Koffler & Liggett W., 1948) cao chiết nấm men (yeast extract) Môi trường pha chế môi trường thay nước cất nước chiết Ngô [10] Ni cấy vi nấm nhiệt độ phịng, lắc nhẹ, thể tích mơi trường ni cấy chiếm 1/5 thể tích vật chứa Sau 10 ngày, thu dịch nuôi cấy nhằm thu chất biến dưỡng ngoại bào để thực khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật mơi trường MHA (Mueller Hinton Agar) phương pháp đục lỗ [2,3] Hoạt tính kháng khuẩn/kháng nấm xác định theo đường kính vịng ức chế (mm) Sinh khối vi nấm chứa chất có hoạt tính kháng vi sinh vật cần phải thực biện pháp phá vỡ tế bào vi nấm, sử dụng dung môi phù hợp để chiết thường cần phải sử dụng lượng lớn nguyên liệu Do số hạn chế điều kiện labo nên nghiên cứu thực thử nghiệm tính kháng vi sinh vật với dịch nuôi vi nấm Kết thảo luận 3.1 Phân lập định danh vi nấm Nghiên cứu phân lập 103 chủng vi nấm sợi từ đất công viên thuộc Tp.HCM gồm 69 chủng thuộc chi Penicillium sp (37 chủng), Aspergillus sp (17 chủng), Trichoderma sp (06 chủng), Mucor sp (03 chủng), Fusarium sp (02 chủng), Phoma sp (01 chủng), Curvularia sp (01 chủng), Paecilomyces sp (01 chủng) Cladosporium sp (01 chủng) định danh phương pháp hình thái học 34 chủng không đủ sở để định danh Kết phân lập định danh chứng tỏ hệ vi nấm sợi đất thuộc Tp.HCM đa dạng phù hợp với nghiên cứu Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 11 tương tự vào nước nghiên cứu Admetz, Oudermans Koning… [1,3,5,7,8] 3.2 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn Có 27 chủng vi nấm thể hoạt tính kháng khuẩn gồm 10 chủng Penicillium sp., 11 chủng Aspergillus sp., 03 chủng Trichoderma sp.và 03 chủng không đủ sở định danh Cả 27 chủng vi nấm thể hoạt tính kháng vi khuẩn Gram dương vi khuẩn S.feacalis và/hoặc S.aureus Hoạt tính kháng MRSA xuất chủ yếu 10/11 chủng Aspergillus sp., rải rác 03 chủng Penicillium sp., 01 chủng Trichoderma sp chủng H34 Chỉ có 13 chủng thể hoạt tính kháng vi khuẩn Gram âm gồm chủng Aspergillus sp., chủng Penicillium sp., chủng Trichoderma sp.và chủng TD212 Cụ thể: - Các chủng Penicillium sp thể tính kháng chủ yếu với vi khuẩn Gram dương, bật chủng H23 kháng S.aureus với vòng ức chế 26 mm Chủng Penicillium sp cho hoạt tính kháng vi khuẩn Gram âm yếu với chủng 43 T216 kháng E.coli (11 mm) chủng H43 kháng P.aeruginosa (08 mm) - 11 chủng Aspergillus sp thể hoạt tính kháng khuẩn 05 loài vi khuẩn thử nghiệm, trội chủng G13, G31, G33, G51 H13; riêng G52 thể tính kháng S.aureus MRSA; G53 thể tính kháng vi khuẩn Gram dương, đặc biệt S.feacalis (20 mm) - 03 chủng Trichoderma sp thể tính kháng chủ yếu với vi khuẩn Gram dương, T35 cho tác động kháng 04/05 loài vi khuẩn thử nghiệm, đặc biệt S.feacalis S.aureus (16 20 mm) - 03 chủng chưa định danh thể hoạt tính kháng khuẩn Trong đó, chủng T212 cho hoạt tính kháng khuẩn tốt E.coli P.aeruginosa với vòng ức chế 20 mm Bên cạnh đó, kết cho thấy đa phần chủng Aspergillus sp nuôi cấy môi trường thể tính kháng khuẩn tốt mơi trường phù hợp với Trichoderma sp Bảng Các chủng vi nấm thể tính kháng khuẩn Escherichia coli (Ec), Streptococcus feacalis (Sf), Pseudomonas aeruginosa (Pa), Staphylococcus aureus (SA) MRSA TT Chủng nấm 10 11 12 13 Penicillium sp T17 Penicillium sp T18 Penicillium sp T11 Penicillium sp T33 Penicillium sp T216 Penicillium sp G55 Penicillium sp G57 Penicillium sp G58 Penicillium sp H23 Penicillium sp H43 Trichoderma sp.G56 Trichoderma sp.G34 Trichoderma sp.T35 Mơi Đường kính vịng ức chế (mm) trường Ec Sf Pa Sa MRSA 15 12 17 13 2 12 13 11 18 15 2 17 14 26 26 08 21 12 13 07 16 09 20 11 - TT Chủng nấm 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Aspergillus sp G33 Aspergillus sp H13 Aspergillus sp G51 Aspergillus sp G52 Aspergillus sp G53 Aspergillus sp G54 Aspergillus sp.G42 Aspergillus sp.G13 Aspergillus sp.G21 Aspergillus sp.G24 Aspergillus sp.G31 25 T212 26 H14 27 H34 Mơi Đường kính vịng ức chế (mm) trường Ec Sf Pa Sa MRSA 09 20 13 10 13 15 12 21 19 15 09 12 12 10 10 14 15 12 11 16 11 12 14 12 12 10 10 20 09 11 15 12 14 12 12 15 12 18 18 12 17 13 09 10 10 10 18 10 11 15 11 12 09 10 10 10 15 14 10 12 14 10 17 20 20 11 10 07 - Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 11 44 3.3 Khảo sát hoạt tính kháng Candida sp Cả 12 chủng cho tính kháng Candida sp thể tính kháng C.glabrata và/hoặc C.tropicalis – chủng Candida sp gây bệnh lâm sàng tỉ lệ đề kháng thuốc cao Các chủng vi nấm trội Pencillium sp.T33, Penicillium sp T34, Trichoderma sp H32 04 chủng G36, G38, G49, H34 Trong số đó, có chủng thể tính kháng C.albicans chủng Candida thường gây bệnh người, bật Pencillium sp T33, Penicillium sp T34 chủng H34 Penicillium T33 T34 vi nấm tiềm sản xuất chất biến dưỡng ngoại bào có tính kháng lồi Candida sp thử nghiệm với vịng vô khuẩn lớn (trên 20 mm) nuôi cấy môi trường cao nấm men bổ sung nước chiết Ngô Penicillium sp T33, Aspergillus sp G51 chủng H34 chủng nấm có khả sản xuất chất biến dưỡng ngoại bào vừa có tính kháng khuẩn vừa kháng Candida sp Việc bổ sung nước chiết Ngô vào môi trường ni cấy thúc đẩy vi nấm sản xuất chất có tính kháng Candida sp Khi ni cấy hỗn hợp nước chiết Ngô cao nấm men, chủng T33, T34, G44, H17 H32 thể tính kháng Candida sp., chủng Penicillium sp., chủng lại khơng có tính kháng Candida sp ni cấy mơi trường cao nấm men Các chủng G38, H19, G49 H34 cho vịng ức chế lớn ni cấy cao nấm men bổ sung nước chiết Ngô Bảng Các chủng vi nấm thể hoạt tính kháng Candida sp Đường kính vịng ức chế (mm) Mơi Candida Candida Candida trường albicans glabrata tropicalis Penicillium sp T33 21 22 28 Penicillium sp T34 20 25 28 12 Aspergillus sp G51 Trichoderma sp H32 20 16 10 19 G36 10 08 15 18 G38 12 09 18 TT Chủng nấm Theo kết đạt được, Aspergillus sp Penicillium sp vi nấm chủ yếu có khả sản xuất chất biến dưỡng ngoại bào cho hoạt tính kháng khuẩn Kết tương đồng với nghiên cứu đặc tính Aspergillus sp Penicillium sp Tính kháng Candida sp điểm bật đa số nghiên cứu tập trung vào tính kháng khuẩn tính đối kháng vi nấm kí sinh trồng Nhiều nghiên cứu tính kháng vi sinh vật Trichoderma sp enzym ngoại bào, hoạt chất biến dưỡng tương tự Aspergillus sp Penicillium sp [11] Do đó, vi nấm thường cấy trực tiếp lên trồng để cạnh tranh với vi nấm gây bệnh sử dụng làm nguồn nguyên liệu để chiết tách hoạt chất có tiềm sinh học Về bản, hệ vi nấm đặc tính vi nấm đất tại Tp.HCM có điểm tương đồng với vùng đất khác nước Để so sánh cụ thể hơn, việc định danh đến loài phương pháp định danh khác tối ưu hóa mơi trường ni cấy cần thiết Kết luận đề xuất Theo kết thực nghiệm, vi nấm sợi đất công viên Đại học Nguyễn Tất Thành TT Chủng nấm G44 G47 G49 10 H17 11 H19 12 H34 Đường kính vịng ức chế (mm) Mơi Candida Candida Candida trường albicans glabrata tropicalis 11 16 15 15 13 13 13 18 10 12 15 10 16 11 14 20 18 nội thành Tp.HCM chiếm tỉ lệ cao gồm Penicillium sp (35,9%), Aspergillus sp (16,5%), Trichoderma sp (5,8%)… Qua khảo sát sơ hoạt tính kháng khuẩn kháng Candida sp cho thấy số chủng vi nấm tiềm có khả sản xuất chất biến dưỡng ngoại bào thể hoạt tính sinh học tốt Có chủng gồm Penicillium sp T33, Aspergillus sp G51 chủng H34 vừa thể tính kháng khuẩn vừa thể tính kháng Candida sp Tuy vậy, nghiên cứu tập trung vào tính kháng vi sinh vật chất biến dưỡng ngoại bào từ vi nấm nên chưa đánh giá đặc tính chất biến dưỡng nội bào Khảo sát tính kháng vi sinh vật sinh khối vi nấm nhằm đánh giá tiềm hợp chất nội bào thực nghiên cứu tiếp sau Tối ưu hóa điều kiện ni cấy chủng tiềm cần thiết để thu chất biến dưỡng từ vi nấm Ngồi ra, đất khn viên xung quanh bệnh viện, đặc biệt khu vực gần nguồn thải từ bệnh viện mẫu nghiên cứu đáng quan tâm Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 11 45 Lời cảm ơn Nghiên cứu tài trợ Quĩ Phát triển Khoa học Công nghệ - Đại học Nguyễn Tất Thành, đề tài mã số 2020.01.074/HĐ-KHCN Tài liệu tham khảo Watanabe T (2010) Pictorial Atlas of Soil and Seed Fungi: morphologies of cultured fungi and key to species – Third edition, CRC PRESS Gharaei-Fathabad E, Tajick-Ghanbary M.A, Shahrokhi N (2014) Antimicrobial Properties of Penicillium Species Isolated from Agricultural Soils of Northern Iran Research Journal of Toxins, (1), 1-7 Svahn K.S, Göransson U, El-Seedi H et al (2012) Antimicrobial activity of filamentous fungi isolated from highly antibiotic-contaminated river sediment Infection Ecology and Epidemiology, 2:1, DOI: 10.3402/iee.v2i0.11591 Trần Thị Minh Định, Trần Thị Thanh Thủy (2013) Nghiên cứu điều kiện ni cấy thích hợp để chủng Aspergillus terreus phân lập từ rừng ngập mặn Cần Giờ sinh tổng hợp chất kháng sinh Tạp chí Khoa học ĐHSP Tp.HCM, 47, 119-125 Nguyễn Thị Hà (2014) Phân lập tuyển chọn số chủng nấm sợi có hoạt tính kháng khuẩn quận Ninh Kiều, Tp Cần Thơ Tạp chí Khoa học Đại học Cần Thơ, 34, 7-11 Phạm Thị Ánh Hồng, Đinh Minh Hiệp cộng (2005) Điều tra khảo sát phân bố chủng nấm Trichoderma thành phố Hồ Chí Minh tỉnh Đông Nam Bộ Hội nghị tổng kết NCCB KHTN khu vực phía Nam tháng 9/2005,17-19 Nguyễn Thiện Phú, Vũ Thị Phương (2016) Phân lập, tuyển chọn chủng nấm sợi có khả tạo lovastatin từ rừng ngập mặn Cần Giờ Tạp chí Khoa học ĐHSP Tp.HCM, 87, 113-126 Đặng Vũ Hồng Miên (2005) Hệ nấm mốc Việt Nam Nhà xuất Khoa học Kĩ thuật G.S.de Hoog, J.Guarro, J.Gené and M.J.Figueras (2010) Atlas of clinical fungi 2nd edition Amer Society for Microbiology 10 R Koffler, Liggett W (1948) Corn steep liquor in microbiology Bacteriol Reviews, 12(4), 297–311 11 Awad N.E, Kassem H.A, Hamed M.A et al (2018) Isolation and characterization of the bioactive metabolites from the soil derived fungus Trichoderma viride Mycology, 9(1), 70-80 Antimicrobial activity of filamentous fungi isolated from soil at parks in Ho Chi Minh City, Vietnam Mai Ha Thanh Binh, Le Quang Hanh Thu* Faculty of Pharmacy, Nguyen Tat Thanh University * lqhthu@ntt.edu.vn Abstract This study has isolated 103 species of fungi from soil at parks in Ho Chi Minh city, including 69 species of Penicillium sp., Aspergillus sp., Trichoderma sp., Mucor sp., Fusarium sp., Phoma sp., Curvularia sp., Paecilomyces sp., and Cladosporium sp., and other 34 unknown species Antimicrobial activities of these fungi were investigated on Staphylococcus aureus, MRSA, Streptococcus feacalis, Escherichia coli, and Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, C.glabrata and C.tropicalis Among them, 27 species possess antibacteria, including 10 Penicillium sp., 11 Aspergillus sp., Trichoderma sp and unidentified species and other 12 species showed anti-fungi effects, including Penicillium sp., Aspergillus sp., Trichoderma sp and unidentified species Especially, species belonging to Penicillium sp T33, Aspergillus sp G51 and H34 exhibited both antibacterial and anti-fungi abilities In addition, culture medium containing yeast and corn extracts is appropriate for the growth of fungi These results indicated that fungi from soil are a potential source of novel antimicrobial agents Keywords soil fungi, antibacterial, anti-Candida, Aspergillus sp., Penicillium sp Đại học Nguyễn Tất Thành ... cứu thực thử nghiệm tính kháng vi sinh vật với dịch ni vi nấm Kết thảo luận 3.1 Phân lập định danh vi nấm Nghiên cứu phân lập 103 chủng vi nấm sợi từ đất công vi? ?n thuộc Tp.HCM gồm 69 chủng thuộc... khảo sát sơ tính kháng vi sinh vật số tác nhân gây bệnh cho người Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứu Vi nấm sợi thu thập từ đất công vi? ?n Tp.HCM gồm: + Công vi? ?n Tao Đàn,... PDA, theo dõi vi nấm – ngày đến vi nấm sinh bào tử Cấy chuyển bào tử vi nấm sang môi trường nghèo dinh dưỡng nhằm thúc đẩy trình sản sinh chất biến dưỡng có hoạt tính kháng vi sinh vật, gồm: +