Nghiên cứu phân lập chất β sitosterol glucosid từ phân đoạn dịch chiết chloroform của hoa đu đủ đực thu hái tại quảng nam – đà nẵng

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP β-SITOSTEROL GLUCOSID TỪ PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT CHLOROFORM CỦA HOA ĐU ĐỦ ĐỰC THU HÁI TẠI QUẢNG NAM – ĐÀ NẴNG BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Sinh viên thực : NGUYỄN NHẬT TUYẾN Lớp : 14CHD Giảng viên hướng dẫn : PGS.TS GIANG THỊ KIM LIÊN Đà Nẵng - năm 2018 LỜI CẢM ƠN Lời em xin chân cảm ơn đến cô giáo PGS.TS Giang Thị Kim Liên giúp đỡ hướng dẫn em nhiệt tình suốt trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn thầy giáo khoa Hóa, đặc biệt thầy cơng tác phịng thí nghiệm trường Đại học Sư phạm – đại học Đà Nẵng tạo điều kiện thuận lợi trình nghiên cứu thực để tài Trong trình thực hiện, bước đầu làm quen với việc nghiên cứu nên không tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận góp ý thầy để khóa luận hoàn thiện Đà Nẵng, ngày 20 tháng 04 năm 2018 Tác giả luận văn Nguyễn Nhật Tuyến MỤC LỤC CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY ĐU ĐỦ 1.2 Các nghiên cứu thành phần hóa học Đu đủ nước 1.3 Nghiên cứu thành phần hóa học Đu đủ nước 1.4 Những nghiên cứu hoạt tính sinh học Đu đủ 1.5 Các phương pháp nghiên cứu tính gây độc tế bào 1.5.1 Phương pháp MTT 1.5.2 Phương pháp SRB 10 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.1 Nguyên liệu, hóa chất, thiết bị nghiên cứu 11 2.1.1 Nguyên liệu 11 2.1.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 11 2.2 Phương pháp nghiên cứu 12 2.2.1 Phương pháp chiết mẫu thực vật 12 2.2.2 Phương pháp tách tinh chế chất 13 2.2.3 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất 13 2.3 Định tính số lớp chất hoa Đu đủ đực 13 2.3.1 Alkaloid 13 2.3.2 Flavonoid 13 2.3.3 Coumarin 14 2.3.4 Saponin 14 2.3.5 Đường khử 14 2.3.6 Polyphenol 14 2.3.7 Steroid 15 2.3.8 Axit hữu 15 2.3.9 Chất béo 15 2.3.10 Carotene 15 2.3.11 Polysaccairid 15 2.3.12 Iridoid 16 2.4 Sơ đồ điều chế cao chiết 16 2.5 Thử hoạt tính sinh học dịch chiết chloroform 18 2.5.1 Quy trình chiết xuất dịch chiết hoa Đu đủ đực để nghiên cứu tác dụng ức chế tế bào ung thư 18 2.5.2 Các dòng tế bào 18 2.5.3 Phương pháp 18 2.5.4 Thử độc tế bào 19 2.7 Chạy cột sắc ký phần cao chloroform 19 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Kết định tính lớp chất hoa Đu đủ đực 21 3.2 Thử hoạt tính sinh học dịch chiết chloroform từ hoa Đu đủ đực 22 3.3 Kết khảo sát sơ thành phần hóa học dịch chiết chloroform hoa Đu đủ đực phương pháp GC-MS 24 3.4 Phân lập chất phân đoạn dịch chiết chloroform 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT d: Doublet (NMR) J(Hz): Hằng số tương tác (NMR) Rf: Retention factor s: Singlet (NMR) ppm: Parts per million δ: Độ chuyển dịch hóa học (NMR) BuOH: Butanol CD3OD: Methanol- D CHCl3: chloroform D: Dichlomethane DMSO: Dimethyl sunfoxide DEPT: Distortionless enhancement by polarisation transfer EtOAc: Ethyl acetate EtOH: Ethanol GC-MS: Gas chromatography-Mass spectrometry HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC: Heteronuclear Single Quantum Corelation MeOH: Methanol Me: Methyl NMR: Nuclear magnetic resonance UV: Ultraviolet DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Số hiệu Tên bảng Trang 3.1 Định tính lớp chất hoa Đu đủ đực 22 3.2 Hoạt tính độc tế bào phân đoạn dịch chiết chloroform 23 3.3 Thành phần hóa học dịch chiết chloroform hoa Đu đủ đực 26 bảng 3.4 Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz) và13C-NMR (125 MHz) β-sitosterol glucoside chất so sánh DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH 34 Số hiệu Tên hình Trang 1.1 Hình ảnh Đu đủ 1.2 β- sitosterol 1.3 Daucosterol 1.4 Sterculin A 1.5 Cycloart-25-ene-3β,24 (R/S)-diol 1.6 Carpaine 1.7 Pseudocarpaine 1.8 Dehydrocarpaine I 1.9 Dehydrocarpaine II 1.10 Prunasin 1.11 Sambunigrin 1.12 5,7-dimethoxycoumair 1.13 Axit protocatechuic 1.14 Axit chlorogenic 2.1 Hoa Đu đủ đực Bột hoa Đu đủ đực 11 2.2 Sơ đồ điều chế cao chiết 16 hình 2.3 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn dịch chiết chloroform hoa Đu đủ đực 20 3.1 Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết chloroform hoa Đu đủ đực 25 3.2 Phổ MS 2(3H)-Furanonedihydro-3-hydroxy-4,4-dimetyl 27 3.3 Phổ MS 3,3,5,5-tetrametylcyclohexanol 28 3.4 Phổ MS 2H-Quinolizine-1-metanol, octahydro 28 3.5 Phổ IR chất β-sitosterol glucoside 29 3.6 Phổ 1H-NMR β-sitosterol glucoside 30 3.7 Phổ 13C-NMR β-sitosterol glucoside 31 3.8 Phổ HSQC β-sitosterol glucoside 32 3.9 Phổ HMBC β-sitosterol glucoside 33 MỞ ĐẦU 1.Tính cấp thiết đề tài Cây Đu đủ (Carica papaya Linn) loại ăn có nguồn gốc từ vùng nhiệt đới châu Mỹ Hiện nay, Đu đủ trồng nước vùng nhiệt đới, nơi có nhiệt độ bình qn năm không thấp 150C Sản lượng Đu đủ giới khoảng triệu quả/năm Ở Việt Nam, Đu đủ trồng hầu hết tỉnh miền Bắc miền Nam Tuy nhiên, chúng trồng nhiều tỉnh đồng bằng, dọc theo sông, loại đất phù sa Các tỉnh trồng nhiều Đu đủ như: Hà Nội, Hưng Yên, Hà Nam, Vĩnh Phúc, Tiền Giang, Cần Thơ, tỉnh Tây Nguyên,… Diện tích trồng Đu đủ nước ước khoảng 10000 – 17000 hecta với sản lượng khoảng 200 – 350 nghìn Cây Đu đủ có lợi loại dễ trồng, sớm, suất cao đồng thời toàn thân, lá, sử dụng với nhiều mục đích khác Ngồi việc lấy tươi, dùng làm nguyên liệu cho chế biến, Đu đủ trồng để lấy nhựa, dùng làm thức ăn chăn nuôi Trong dân gian Đu đủ sử dụng để sát khuẩn, kháng nấm, kháng viêm, chữa sốt rét, trừ giun sán… Đã có nhiều cơng trình nghiên cứu hoạt tính sinh học Đu đủ Lá Đu đủ chứng minh có khả chống oxy hóa mạnh Hoạt tính chống oxy hóa hợp chất phenol gây Lá Đu đủ có hoạt tính kháng khuẩn tốt, có khả kháng nhiều loại vi khuẩn gram âm, gram dương, loại nấm Ngoài ra, Đu đủ cịn có khả kháng viêm, giảm đau Ở nước ta, cao chiết với cồn từ Đu đủ nghiên cứu số mơ hình ung thư thực nghiệm chứng minh có tác dụng ức chế phát triển khối u gây tế bào ung thư Sarcoma TG-180 chuột nhắt trắng Người dân nước Úc dùng Đu đủ chữa trị bệnh ung thư Đầu năm 2010, nhóm nghiên cứu Nhật Bản Mỹ thông báo dịch chiết nước Đu đủ có tác dụng ức chế số dòng tế bào ung thư người ung thư dày, ung thư phổi, ung thư máu,… Ngoài ra, dịch chiết từ Đu đủ cịn có tác dụng hỗ trợ hệ miễn dịch để công vào tế bào ung thư Bằng cách thúc đẩy gia tăng sản phẩm cytokine dạng Th1 IL-12p40, IL-12p70, INF-γ TNF-α, cytokine có khả chống lại khối u Gần đây, người dân địa phương Quảng Nam – Đà Nẵng sử dụng hoa Đu đủ đực để điều trị bệnh đường hơ hấp viêm họng, ho… Ngồi ra, hoa Đu đủ đực coi thần dược để hỗ trợ điều trị bệnh ung thư như: ung thư phổi, ung thư vú ung thư gan… Chính công dụng chữa bệnh Đu đủ trên, có nhiều đề tài nghiên cứu tập trung xác định thành phần hóa học hoạt tính sinh học lồi Thế cịn nghiên cứu phận hoa chúng Việc sử dụng hoa đủ đực theo kinh nghiệm dân gian Vì vậy, việc tìm hiểu thành phần hóa học cao chứng minh thành phần hoạt chất cụ thể hoa Đu đủ đực việc làm cần thiết, tạo sở khoa học cho việc ứng dụng nguồn nguyên liệu sẵn có Việt Nam làm thuốc điều trị bệnh hiểm nghèo, có bệnh ung thư Trong điều kiện cho phép luận văn tốt nghiệp chọn đề tài “Nghiên cứu phân lập chất β-sitosterol glucosid từ phân đoạn dịch chiết chloroform của hoa Đu đủ đực thu hái tại Quảng Nam – Đà Nẵng” làm đề tài luận văn Mục tiêu nghiên cứu Phân lập β-sitosterol glucoside từ phân đoạn dịch chiết chloroform hoa Đu đủ đực, xác định cấu trúc hố học, góp phần cung cấp thơng tin có ý nghĩa khoa học thành phần hóa học hoa Đu đủ, nâng cao giá trị sử dụng loài thực vật thực tiễn Đối tượng phạm vi nghiên cứu -Hoa Đu đủ đực thu hái Quảng Nam-Đà Nẵng -Phân đoạn dịch chiết từ lồi hoa với dung mơi chloroform -Hợp chất β-sitosterol glucoside phân lập từ dịch chiết nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu 4.1 Phương pháp nghiên cứu lý thuyết - Phương pháp nghiên cứu hợp chất tự nhiên - Nghiên cứu mạng Internet, tham khảo cơng trình nghiên cứu giới loài - Tổng quan tài liệu đặc điểm hình thái thực vật, thành phần hố học, ứng dụng phận Đu đủ 4.2 Phương pháp nghiên cứu thực nghiệm -Các phương pháp xử lý mẫu thực nghiệm -Các phương pháp chiết mẫu, phân lập hợp chất hữu -Các phương pháp phân tích sắc ký lớp mỏng, sắc ký cột -Các phương pháp nghiên cứu cấu tạo hợp chất hóa học: kết hợp phương pháp đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR, 13C-NMR, phổ hồng ngoại (IR), phổ tử ngoại (UV), sắc ký lỏng – khối phổ (LC-MS) phương pháp khác Bố cục luận văn Luận văn gồm: 40 trang, bảng, 26 hình, ảnh, 46 tài liệu tham khảo 19 phụ lục Với: -Phần mở đầu (3 trang) -Chương 1- Tổng quan (11 trang) -Chương – Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu (10 trang) -Chương – Kết thảo luận (14 trang) -Kết luận kiến nghị (1 trang) -Tài liệu tham khảo (5 trang) Hình 3.3 Phổ MS 3,3,5,5-tetrametylcyclohexanol Hình 3.4 Phổ MS 2H-Quinolizine-1-metanol, octahydro 27 3.4 Phân lập chất phân đoạn dịch chiết chloroform ❖ Hợp chất β-sitosterol glucoside Cấu trúc chất phân lập dự đoán β-sitosterol glucoside CTPT: C35H60O6 nhờ phân tích dự liệu phổ IR, phổ1H-NMR (MeOH, 500MHz) 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz), so sánh mỏng phổ IR (hình 3.9) với chất β-sitosterol glucosid chuẩn Hình 3.9 Phổ IR chất C2 Hình 3.5 Phổ IR chất β-sitosterol glucoside Phổ IR (KBr) max cm-1): 3430; 2939; 1644; 1463; 1370; 1029; 999; 830; 769; 663; 603; 433 Phổ1H-NMR cho thấy tín hiệu nhóm methyl phần aglycone phân từ CH3-18, CH3-19, CH3-21, CH3-26; CH3-27; CH3-29 δH 0,66; 1,01; 0,90; 0,88; 0,84; 0,82 ppm δC 11,94; 19,87; 18,77; 19,25; 20,75 11,82 ppm Tín hiệu đặc trưng nối đơi ba lần (C-5; C-6) xuất δH 5,33 ppm Các proton δH 3,34 3,60 ppm tương ứng với proton nhóm hydroxymethylene 2H – 6’ Một tín hiệu multiplet proton δH 3,52 phù hợp với proton nhóm methine H-3α Các tín hiệu 5,33 4,22 gán tương ứng với proton nhóm methin H-6 H1’ Các proton phần đường xuất từ 2,91 đến 3,60 ppm 28 Hình 3.6 Phổ 1H-NMR β-sitosterol glucoside Phổ 13C-NMR chất phân lập cho tín hiệu 35 carbon Tín hiệu đặc trưng nối đơi lần, chuyển dịch phía trường thấp xuất δC 140,62; 121,40 ppm (C5 C6) Các tín hiệu khác cho thấy dấu hiệu đặc trưng cho đường glucose với nguyên tử C anome δC 100,9 ppm δH 4,22 ppm; tín hiệu δC 61,25 phù hợp với nguyên tử C nhóm hydroxymethylene phần đường 29 Hình 3.7 Phổ 13C-NMR C2 30 Phổ HSQC cho thấy rõ tương tác trực tiếp C-H C anome (C1’) với proton H-1’ nhóm methine phân tử đường Hình 3.8 Phổ HSQC C2 Các tương tác qua nhiều liên kết C-3’ proton H-2’; H-4’; C-4’ proton H-5’; H-6’cũng thể rõ phổ HMBC 31 Hình 3.9 Phổ HMBC C2 32 Cấu trúc chất phân lập khẳng định thêm nhờ so sánh số liệu phổ với chất β-sitosterol glucoside phân lập từ nhiều lồi thực vật cơng bố, từ dịch chiết Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk [42] Smiiax china L [37].Trên phổ chất C2 chất so sánh có số tín hiệu có khác biệt với nhau, đặc biệt tín hiệu nguyên tử carbon phần đường glucose, điều giải thích việc sử dụng dung môi đo phổ chất khác Bảng 3.4 Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz) chất βsitosterol glucoside chất so sánh Vị trí β-sitosterol glucoside(DMSO) Chất so sánh (CD3OD)[42] δC δH δC δH 36,37 37,27 31,53 29,90 76,90 42,01 38,54 140,62 140,30 121,40 31,59 31,81 33,49 31,81 49,77 50,13 10 36,37 36,60 11 20,88 20,94 12 38,45 39,68 13 42,01 42,22 14 56,34 56,68 15 24,02 24,14 16 29,40 28,11 17 55,58 55,97 18 11,94 0,66 11,62 0,65 19 19,87 1,01 19,07 0,97 20 35,62 21 18,77 3,15 78,99 5,33 121,94 3,78 5,36 36,03 0,90 18,54 33 1,08 Vị trí β-sitosterol glucoside(DMSO) Chất so sánh (CD3OD)[42] 22 36,98 33,83 23 25,58 25,95 24 45,30 45,79 25 28,88 29,04 26 19,25 0,88 18,73 0,75 27 20,75 0,84 19,50 0,88 28 22,77 29 11,82 0,82 11,67 0,79 1’ 100,90 4,22 101,05 4,38 2’ 73,62 2,91 73,50 3,32 3’ 77,17 3,45 76,45 3,54 4’ 70,27 3,00 70,09 3,32 5’ 76,87 3,15 75,89 3,38 6’ 61,25 3,34/3,60 61,61 3,18/3,18 22,94 Từ việc phân tích liệu phổ chất β-sitosterol glucoside so sánh với tài liệu tham khảo [42], cho phép khẳng định cấu trúc chất phân lập β-sitosterol glucoside (daucosterol) 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ➢ KẾT LUẬN -Đã định tính sơ lớp chất thường gặp thực vật phản ứng hóa học cho kết mẫu hoa Đu đủ đực dùng nghiên cứu có lớp chất là: alkaloid, flavonoid, saponin steroid, đường khử, polyphenol, sterol, coumarin, polysaccarid, carotene, chất béo - Từ nguyên liệu ban đầu, phương pháp khác thu loại dịch chiết chloroform Đã thử hoạt độc tế bào dịch chiết chloroform dòng tế bào ung thư phổi (A549), ung thư gan (Hep 3B), ung thư vú (MCF-7), kết cho thấy phân đoạn dịch chiết chloroform thể hoạt tính tốt, cụ thểphân đoạn cao chiết chloroform từ cao tổng ethanol có tác dụng mạnh tế bào ung thư gan (Hep 3B); phân đoạn cao chiết chloroform từ cao tổng nước có tác dụng mạnh dòng tế bào ung thư phổi (A549) vú (MCF-7); phân đoạn cao chiết chloroform từ cao tổng methanol (mẫu M/C) có tác dụng dòng tế bào ung thư (A549), gan (Hep 3B) vú (MCF-7) -Đã định danh sơ thành phần hóa học cao chloroform phương pháp phổ GC/MS.có 9/9 cấu tử định danhvới hàm lượng lớn bao gồm: 2HQuinolizine-1-metanol, octahydro(23,74%), 2(3H)-Furanonedihydro-3-hydroxy4,4dimetyl(24,22%);3,3,5,5tetrametylcyclohexanol(15,88%);Ethylbenzene(9,56 %); Glycyl-L-proline (8,31%); 4(1H)-pyrimidinone,6-amino-2-metyl-5-nitroso (7,51%); Benzene, 1,3,dimethyl (5,29% ), D-Limonene (2,78%); 2-Pentanone, 4hydroxy-4methyl (2,7%) - Từ cao chiết chloroform, phương pháp sắc ký cột silicagel, kết hợp với sắc ký lớp mỏng phương pháp phổ đại NMR, DEPT, HMBC, HSQC, phân lập xác định cấu trúc chất sạch: β-sitosterol glucosid ➢ KIẾN NGHỊ - Tiếp tục phâp lập thêm xác định cấu trúc chất phân lập từ phân đoạn lại dịch chiết chloroform hoa Đu đủ đực - Thăm dị hoạt tính sinh học khác chất phân lập dịch chiết hợp chất phân lập khác 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung (2006),Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, tập 1, pp 824-827 [2] Nguyễn Văn Đàm, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, Nxb Y học, Hà Nội [3] Đỗ Trung Đàm (1996), Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc, Nxb Y học, Hà Nội [4] Trần Thanh Hà, Trịnh Thị Điệp (2012) “Hai cycloratane triterpene lần phân lập từ Đu đủ (carica papaya L.)“, Tạp chí hóa họctập 50 (4A), pp 166-169 [5] Hồ Thị Hà (2014),Nghiên cứu hoạt tính sinh học số hợp chất chiết tách từ Đu đủ(Carica papaya Linn), Luận án tiến sĩ Đại học Bách khoa Hà nội [6] Giang Thị Kim Liên Đỗ Thị Lệ Uyên(2015),“Khảo sát thành phần hoá học số dịch chiết từ hoa Đuđủ đực thu hái Đà Nẵng“,Tạp chí Khoa học Cơng nghệ ĐHĐN; Số 03(88) ; Trang 119 [7] Đỗ Tất Lợi (1986), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học kỹ thuật, Hà Nội,Trang 360-362 [8] Phạm Kim Mãn cộng (2001),“Nghiên cứu thuốc Panacrin ức chế u dùng điều trị ung thư“, Tạp chí dược liệu, 6(2+3), pp 58-62 [9] Hà Thị Bích Ngọc, Trần Thị Huyền Nga, Nguyễn Văn Mùi (2007) ‘‘Điều tra hợp chất carotenoid số thực vật Việt Nam“, Tạp chí khoa học ĐHQGHN, khoa học tự nhiên công nghệ, (23), pp 130-134 [10] Nguyễn Văn Rư, Vũ Quang Thái,(2013) "Tách chiết chymopapain từ nhựa Đu đủ xanh (Carica papaya) chế thử thành dạng bột để pha tiêm", Tạp chí HóaHọc 50(6): 767-771 [11] Trần Thế Tục, Đoàn Thế Lư (2004),Cây Đu đủ kỹ thuật trồng, Nxb lao động xã hội [12] Đỗ Thị Thảo (2006) Nghiên cứu xác định khả phòng chống ung thư chất hóa học số thuốc Việt Nam, Luận án tiến sĩ sinh học [13] Nguyễn Tường Vân, Đặng Hồng Vân, Phạm Gia Khôi, Trần Mạnh Bình, Phan Quốc Kinh (1983) “Chiết xuất xác định carpaine alkaloid Đu đủ‘‘,Tạp chí dược học số [14] Viện Dược liệu- Bộ Y tế (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý củathuốc từ dược 36 thảo, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật- Hà Nội [15] Đỗ Quốc Việt, Nghiên cứu thành phần hố học hoạt tính sinh học bầu đất (Gynura sarmentosa DC.), cải đồng (Grangea maderaspatana poir.) chuối hột (Musa balbisiana colla), Luận án tiến sĩ (2006) [16] Aravind G., Debjit Bhowmik, Duraivel S., Harish G (2013) ‘’Traditional and medicinal uses of carica papaya”,Journal of medicinal plants studies, vol 1, Issue 1,pp 7-15 [17] Asmah Rahmat, Rozita Rosli, Wan Nor I`zzah Wan Mohd Zain, Susi Endrini and Huzaimah Abdullah Sani (2002) “Antiproliferative Activity of Pure Lycopene Compared to Both Extracted Lycopene and Juices from Watermelon (Citrullus vulgaris) and Papaya (Caricapapaya) on Human Breast and Liver Cancer Cell Lines”,Journal of Medical Sciences, vol 2.Isuae 2.page 55-58 [18] Abrham W.B., (1978), “Techniques of Animal and Clinical toxicology”, Med Pub Chicago, p 55 – 68 [19] Antonella Canini, Daniela Alesiani, Giuseppe D’Arcangelo, Pietro Tagliatesta (2007) “Gas chromatography-mass spectrometry analysis of phenolic compounds from carica papaya L leaf”,Journal of food composition and analysis, vol 20, pp 584-590 [20].Beverly A Teicher, (1997), Anticancer drug development guide: Preclinical screening, clinical trials, and approval, Humana Press, Totowa, New Jersey [21] Bamidele V, Owoyele, Olubori M, Adebukola, Adeoye A, Funmilayo and Ayodele O, Soladoye (2008) “Anti - inflammatory activities of ethanolic extract of Carica papaya leave”, Inflammopharmacology, 16 (2008), pp 168 – 173 [22] Chung-Shih Tang (1979) “New macrocyclic Δ1–piperideine alkaloids from papaya leaves: dehydrocarpaine I and II”,Phytochemistry, 1979, vol 18, pp 651-652 [23] David S., Seigler, Guido F., Pauli, Adolf Nahrstedt, Rosemary Leen (2002) “Cyanogenic allosides and glucosides from passiflora edulis and carica papaya”, Phytochemistry, vol 60, pp 873-882 [24] Eno AE, Owo OI, Itam EH, Konya RS, (2000), “Blood pressure depression by the fruit juice of Carica papaya (L.) in renal and DOCA-induced hypertension in the rat”, Phytother Res, Jun;14(4):235-9 37 [25] Gopalakrishnan M, Rajasekharasetty MR., (1978 ), “Effect of papaya(Carica papaya Linn) on pregnancy and estrous cycle in albino rats of Wistar strain”, Indian J Physiol Pharmacol, Jan-Mar;22(1):66-70 [26] Giordani R., Cardenas M.L., Moulin-Traffort J., Regli P., (1996), “Fungicidal activity of latex sap from Carica papaya and antifungal effect of D(+)-glucosamine on Candida albicans growth”, Mycoses, 39, 103-110 [27] Govindachari T.R., Naga rajan K and Viswanathan N (1965) “Carpaine and pseudocarpaine”, Tetrahedron letters No 24, pp 1907-1916 [28] Hewitt H, Whittle S, Lopez S, Bailey E, Weaver S,(2000), “Topical use of papaya in chronic skin ulcer therapy in Jamaica”, West Indian Med J Mar; 49(1):32-3 [29] John R., Van (1998), “Mechanism of Action of Non Stervidal Anti inflammatory Drug”, The American Jour of Med March 30, vol 104 (3A) p.2s -3s [30] Krishna K.L., Paridhavi M and Jagruti A Patel (2008) “Review on nutritional,medicinal and pharmacological properties of papaya (Carica papaya Linn.)’’,Natural product radiance, vol 7(4), pp 364-373 [31] Kermanshai R, McCarry BE, Rosenfeld J, Summers PS, Weretilnyk EA, Sorger GJ (2001), “Benzyl isothiocyanate is the chief or sole anthelmintic in papaya seed extracts”,Phytochemistry, Jun; 57(3):427-35 [32] Lohiya NK, Kothari LK, Manivannan B, Mishra PK, Pathak N, (2000), “Human sperm immobilization effect of Carica papaya seed extracts: an in vitro study”,Asian J Androl Jun;2(2):103-9 [33] Marline Nainggolan and Kasmirul“Cytotoxicity activity of male Carica papaya L flowers on MCF-7 breast cancer cells”,Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 2015, 7(5):772-775 , ISSN : 0975-7384 [34] Mikhal'chik EV, Ivanova AV, Anurov MV, Titkova SM, Pen'kov LY, Kharaeva ZF, Korkina LG, (2004), “Wound-healing effect of papaya-based preparation in experimental thermal trauma”, Bull Exp Biol Med, Jun;137(6):560-2 [35] Maisarah A.M., Nurul Amira B., Asmah R and Fauziah O (2013) “Antioxidant analysis of different parts of Carica papaya”, International Food Research Journal,20(3), pp 1043-1048 [36] Pathak N,Mishra PK, Manivannan B, Loyhia NK, (2000), “Stertility due to inhibition of sperm motility by oral administration of benzene chromatographic fraction 38 of the chloroform extract of the seeds of Carica papaya in rats”, Phytomedicine, 7, 325333 [37] Prawez Alam1,2, Mohammed Ali*1, Kamran Javed Naquvi1,3, Shahnaz Sultana, “New long chain fatty acids and steroidal glycosides from rhizomes of Smiiax chinaL”, Asian Journal of Biochemical and Pharmaceutical ResearchIssue 3(Vol 5), ISSN: 2231-2560 (2015) [38] Rahman S., Imran M., Muhammad N., Hassan N., Chisthi A.K., Khan A.F., Sadozai K.S and Khan S.M (2011) “Antibacetial screening of leaves and stem of Carica papaya”,Journal of Medicinal Plants Research, vol 5(20), pp 5167-5171 [39] Rumiyati, Sismindari dan Ariyani (2006) “Effect of protein fraction of Carica papaya L leaves on the expressions of p53 and Bcl - in breast cancer cells line”,Majalah Farmasi Indonesia, 17(4), pp 170 – 176 [40] Satrija F, Nansen P, Bjorn H, Murtini S, He S., (1994), “Effect of papaya latex against Ascaris suum in naturally infected pigs”, J Helminthol Dec;68(4):343-6 [41] Scudiero D.A., Shoemaker R.H., Kenneth D.P., Monks A., Tierney S., Nofziger T.H., Currens M.J., Seniff D., Boyd M.R (1988), “Evaluation of a soluable tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines”, Cancer Reseach.48: 4827 – 4833 [42] Somsak Nualkaew, Peerawit Padee and Chusri Talubmook, “Hypoglycemic activity in diabetic rats of stogmasterol and sitosterol-3-O-b-D-glucopyranoside isolated from Pseuderanthemum palatiferum(Nees), Radlk Leaf extract”, Journal of Medicinal Plants Research, Vol 9(20), 629-635 (2015) [43] Sripanidkulchai B, Wongpanich V, Laupattarakasem P, Suwansaksri J, Jirakulsomchok D, (2001), “Diuretic effects of selected Thai indigenous medicinal plants in rats”, J Ethnopharmacol May;75(2-3):185-90 [44] Stephen Chinwendu Ukpabi Emmanuel O.Chukwu Henry C.Ezikpe Chizaram (2015) “Chemical Composition Of Carica Papaya Flower (Paw-Paw)”, International Journal of Scientific Research and Engineering Studies (IJSRES), Volume Issue 3, ISSN: 2349-8862 [45] Tahehiko Fukunaga, Koichi Nishya, Ikuko Kạikawa, Yoshikuni Watanabe, Noubo Suzuki, Koichi Takeya and Hideji Itokawa (1988), “Chemical studies on the 39 constituents of Hyphear Tanakae Hosokawa from different host treé ”, Chem.Pharm.Bull, 36(3) 1180-1184 [46] Victor Njoku O and Chidi Obi (2009) “Phytochemical constituents of some selected medicinal plants”, Afican Journal of Pure and Applied chemistry, vol 3(11), pp 228-233 40 41 ... ? ?Nghiên cứu phân lập chất β- sitosterol glucosid từ phân đoạn dịch chiết chloroform của hoa Đu đu? ? đực thu hái tại Quảng Nam – Đà Nẵng? ?? làm đề tài luận văn Mục tiêu nghiên cứu Phân. .. vi nghiên cứu -Hoa Đu đủ đực thu hái Quảng Nam- Đà Nẵng -Phân đoạn dịch chiết từ loài hoa với dung môi chloroform -Hợp chất β- sitosterol glucoside phân lập từ dịch chiết nghiên cứu Phương pháp nghiên. .. chất β- sitosterol glucoside 29 3.6 Phổ 1H-NMR β- sitosterol glucoside 30 3.7 Phổ 13C-NMR β- sitosterol glucoside 31 3.8 Phổ HSQC β- sitosterol glucoside 32 3.9 Phổ HMBC β- sitosterol glucoside 33 MỞ