Nghiên cứu phân lập và khảo sát hoạt tính gây độc tế bào ung thư của hợp chất tetratriacontanyl hexadecanoate từ dịch chiết chloroform lá cây đu đủ đực

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM  VÕ THỊ KIỀU MY NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƢ CỦA HỢP CHẤT TETRATRIACONTANYL HEXADECANOATE TỪ DỊCH CHIẾT CHLOROFORM LÁ CÂY ĐU ĐỦ ĐỰC (CARICA PAPAYA L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC ĐÀ NẴNG, NĂM 2019 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM  KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƢ CỦA HỢP CHẤT TETRATRIACONTANYL HEXADECANOATE TỪ DỊCH CHIẾT CHLOROFORM LÁ CÂY ĐU ĐỦ ĐỰC (CARICA PAPAYA L.) Sinh viên thực : Võ Thị Kiều My Lớp : 15CHD2 Ngƣời hƣớng dẫn : ThS Đỗ Thị Thúy Vân ĐÀ NẴNG, NĂM 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố công trình khác Đà Nẵng, ngày tháng năm 2019 Tác giả Võ Thị Kiều My i LỜI CẢM ƠN Trƣớc tiên em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cô giáo Th.S Đỗ Thị Thúy Vân thuộc Khoa Hóa Trƣờng Đại học Sƣ Phạm – Đại học Đà Nẵng giao đề tài , trực tiếp bảo hƣớng dẫn tận tình ln sẵn sàng giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn thầy cô khoa , thầy cô công tác phịng thí nghiệm thuộc Khoa Hóa Trƣờng Đại học Sƣ Phạm – Đại học Đà Nẵng nhiệt tình giúp đỡ , tạo điều kiện thuận lợi cho em thời gian học tập thực đề tài Sau xin gửi lời cảm ơn đến bạn ln giúp đỡ em q trình làm đề tài Trong q trình làm khóa luận bƣớc đầu làm quen với việc nghiên cứu khoa học nên thân em mắc nhiều thiếu thiếu sót Vì em mong nhận đƣợc đóng góp ý kiến q thầy giáo bạn để khóa luận đƣợc hồn chỉnh Đà Nẵng, ngày tháng năm 2019 Tác giả Võ Thị Kiều My ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT, CÁC KÝ HIỆU v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn Bố cục luận văn CHƢƠNG : TỔNG QUAN VỀ CÂY ĐU ĐỦ 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY ĐU ĐỦ 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Nguồn gốc, phân bố 1.1.3 Đặc điểm hình thái 1.1.4 Thành phần hóa học 1.2 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LÁ ĐU ĐỦ 1.2.1 Tác dụng kháng sinh, kháng nấm 1.2.2 Tác dụng trị u bƣớu, ung thƣ 1.2.3 Tác dụng chống oxi hóa 11 1.2.4 Các tác dụng dƣợc lý khác 12 1.2.5 Công dụng dân gian 12 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ LÁ ĐU ĐỦ 12 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 12 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc 14 CHƢƠNG : NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 17 2.1 NGUYÊN LIỆU 17 2.1.1 Đối tƣợng thực nghiệm 17 2.1.2 Xử lý nguyên liệu 17 iii 2.2 THIẾT BỊ, DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT 17 2.2.1 Thiết bị, dụng cụ 17 2.2.2 Hóa chất 18 2.2 THỰC NGHIỆM 19 2.2.1 Định tính số hợp chất Đu đủ đực 19 2.2.2 Quy trình nghiên cứu 23 2.4.5 Thử hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ dịch chiết 25 2.4.6 Thử hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ chất tinh khiết 27 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC LỚP CHẤT TRONG LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC 29 3.2 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƢ DỊCH CHIẾT 30 3.3 XÁC ĐỊNH CÔNG THỨC CẤU TẠO CỦA HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG DỊCH CHIẾT LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC 32 3.3.1 Kết điều chế cao chiết 32 3.3.2 Quy trình tách chất 32 3.3.3 Kết phân lập xác định cấu trúc hợp chất hữu 33 3.3.4 Kết hoạt tính gây độc tế bào hợp chất C5A 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT, CÁC KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT H-NMR : Hydro Nuclear Magnetic Resonance 13 C-NMR : Carbon Nuclear Magnetic Resonance CTPT : Công thức phân tử Chiết R/L : Chiết Rắn/Lỏng PTN : Phòng thí nghiệm TB : Tế bào UV-Vis : Ultravilet-Visible Spectroscopy CÁC KÝ HIỆU BuOH : n-butanol CHCl3 : chloroform EtOAc : Ethyl acetate MeOH : Methanol C5A : Tên hợp chất phân lập v DANH MỤC BẢNG Số Tên bảng hiệu Trang bảng 1.1 1.2 Tác dụng chất chiết từ Đu đủ lên dòng tế bào ung thƣ khác điều kiện in vitro Hoạt tính chống ung thƣ phenolic, flavonoid, alkaloid Đu đủ 11 1.3 Thành phần hóa học Đu đủ 15 2.1 Danh mục hóa chất 18 3.1 Định tính lớp chất Đu đủ đực 29 3.2 3.3 3.4 Phần trăm tế bào sống sót hoạt tính gây độc tế bào phân đoạn n-hexane, chloroform, EtOAc BuOH Khối lƣợng cao chiết phân đoạn Phần trăm ức chế tế bào hoạt tính gây độc tế bào hợp chất C5A vi 30 32 39 DANH MỤC HÌNH Số Tên hình hiệu Trang hình 1.1 Cây Đu đủ 1.2 Một số công thức cấu tạo hợp chất Đu đủ 14 2.1 Lá Đu đủ đực 17 2.2 Bột Đu đủ đực 17 2.3 Sơ đồ nghiên cứu 23 3.1 Sơ đồ phân lập chất 33 3.2 Cấu trúc hóa học hợp chất C5A 34 3.3 Phổ ESI-MS hợp chất C5A 35 3.4 Phổ 1H-NMR hợp chất C5A 36 3.5a Phổ 13C-NMR hợp chất C5A 37 3.5b Phổ 13C-NMR hợp chất C5A 38 vii MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Việt Nam nằm vành đai nhiệt đới gió mùa nóng ẩm châu Á với 3/4 diện tích phần lục địa đồi núi, trải dài từ Bắc xuống Nam Những điều kiện tự nhiên nhƣ thực ƣu đãi cho hệ thống sinh thái rừng phong phú đa dạng Theo thống kê "Tiếp cận nguồn gen chia sẻ lợi ích" (của Tổ chức Bảo tồn Thiên nhiên Thế giới - IUCN), Việt Nam có tới gần 12.000 lồi thực vật bậc cao có mạch thuộc 2.256 chi, 305 họ (chiếm 4% tổng số loài, 15% tổng số chi, 57% tổng số họ thực vật tồn giới) Khơng có vai trị phổi xanh điều hịa khí hậu, hệ thực vật cịn mang đến tiềm to lớn nguồn tài nguyên dƣợc liệu Trong số đó, Đu đủ đƣợc đề cập luận văn - đƣợc trồng phổ biến nƣớc ta Cây Đu đủ có tên khoa học Carica Papaya L., thuộc họ Đu đủ (Caricaceae) Đu đủ dạng nhỏ nhỡ, cao từ - mét, thân thẳng đầy sẹo lá, không phân nhánh Lá to, mọc so le, tập trung Cuống dài, xẻ - thùy sâu, gốc hình tim, đầu nhọn, thùy lại chia tiếp thành nhiều thùy nhỏ khơng đều, gân hình chân vịt, hai mặt nhẵn [2], [5] Tùy theo khu vực hay địa phƣơng, Đu đủ đƣợc gọi với nhiều tên khác nhau, nhƣ thù đủ Huế; phiên mộc, cà lào, phiên qua, phan qua thụ (Campuchia), mắc (Lào), má hống (Thái) Đu đủ thƣờng đồng chu, nhƣng Đu đủ xếp thành loại phƣơng diện giới tính: đực, lƣỡng tính cái, vài Đu đủ trổ ba loại hoa nói Khuynh hƣớng thay đổi giới tính phần lớn thời tiết gây nhƣ khô hạn thay đổi nhiệt độ [5] Trong dân gian Đu đủ đƣợc sử dụng để sát khuẩn, kháng nấm, kháng viêm, chữa sốt rét, trừ giun sán,…Đã có nhiều cơng trình nghiên cứu hoạt tính sinh học Đu đủ Lá Đu đủ đƣợc chứng minh có khả chống oxy hóa mạnh [22] Hoạt tính chống oxy hóa hợp chất phenol gây Lá Đu đủ có hoạt tính kháng khuẩn tốt, có khả kháng nhiều loại vi khuẩn gram âm, gram dƣơng, loại nấm [1], [17] Ngồi ra, Đu đủ cịn có khả kháng viêm, giảm đau [10] CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC LỚP CHẤT TRONG LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC Kết định tính lớp chất có bột mẫu ngun liệu Đu đủ đực đƣợc thể Bảng 3.1 Bảng 3.1 Định tính lớp chất Đu đủ đực STT Lớp chất Ankaloid Flavonoid Thuốc thử Hiện tƣợng phản ứng Kết Mayer Kết tủa vàng nhạt ++ Wagner Kết tủa nâu nhạt + NaOH 10% Khơng có tƣợng - H2SO4 đặc Khơng có tƣợng - FeCl3 5% Dung dịch màu xanh đen + Kết luận sơ Có Khơng Coumarin NaOH 10% Dung dịch đục ++ Có Saponin Nƣớc cất Hiện tƣợng tạo bọt bền +++ Có - Không Thuốc thử Đƣờng khử Fehling A Không có tƣợng Fehling B Xuất màu vàng nâu, vành Dung dịch FeCl3 5% Steroid Axit hữu lắc thấy màu xanh + hạt nhỏ màu xanh thẫm Polyphenol Gelatin 1% màu xanh thẫm, Xuất kết tủa bơng trắng Có + Dung dịch chì Xuất kết tủa bơng acetat 10% trắng Libermann- Mặt phân cách có vịng Burchard tím đỏ, chất lỏng phía Salkowski có màu xanh + Xuất bọt khí + Phản ứng với Na2CO3 tinh 29 ++ + Có Có Thuốc thử Lớp chất STT Kết Hiện tƣợng phản ứng Kết luận sơ thể Để lại vết mờ tờ giấy Chất béo Không 10 Carotene H2SO4 đặc Polysaccari Thuốc thử d Lugol 11 12 Iridoid +++ Có Dung dịch màu xanh + Có Khơng có tƣợng - Khơng Khơng có tƣợng - Khơng lọc Thuốc thử Trim-Hill Ghi chú:(+++): Phản ứng rõ (++) : Phản ứng rõ (+): Có phản ứng (-) : Khơng có phản ứng Nhận xét: Dựa vào kết định tính đƣợc trình bày Bảng 3.1, bột mẫu nguyên liệu Đu đủ đực nghiên cứu gồm lớp chất sau: alkaloid, coumarin, saponin, polyphenol, steroid, acid hữu cơ, chất béo carotene 3.2 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƢ DỊCH CHIẾT Khảo sát hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ ngƣời (cung cấp ATCC) cao n-hexane, cao chloroform, cao EtOAc cao BuOH dòng tế bào ung thƣ phổi (A549), ung thƣ vú (MCF-7) ung thƣ gan (Hep3B) với nồng độ thử nghiệm 30μg/mL 100μg/mL Kết thử hoạt tính gây độc tế bào loại cao đƣợc trình bày Bảng 3.2 Bảng 3.2 Phần trăm tế bào sống sót hoạt tính gây độc tế bào phân đoạn n-hexane, chloroform, EtOAc BuOH Tế bào sống sót (CS %) Mẫu Nồng độ (µg/mL) Hep3B MCF-7 % TB Sai % TB Sai % TB Sai sống số sống số sống số 100,00 1,29 100,00 2,64 100,00 1,93 30 62,47 2,69 59,94 2,27 65,01 1,21 100 57,93 2,36 49,72 2,06 56,29 2,29 Control M/H A549 30 Tế bào sống sót (CS %) Mẫu Nồng độ (µg/mL) A549 Hep3B MCF-7 % TB Sai % TB Sai % TB Sai sống số sống số sống số 30 59,58 2,55 45,18 2,62 44,64 2,21 100 55,28 2,80 15,49 1,65 27,33 2,49 30 78,81 0,98 79,47 1,47 72,05 2,38 100 54,04 1,34 66,56 2,25 71,21 2,27 30 63,26 0,45 67,80 0,74 75,91 2,31 100 55,01 0,47 63,08 1,19 63,46 1,94 0,1 55,66 2,49 54,27 2,01 56,25 1,97 10 35,74 0,77 22,64 0,67 44,84 0,22 M/C M/ET M/B Camptothecin* ý hiệu: M/H: phân đoạn cao chiết n-hexane từ cao tổng methanol; M/C: phân đoạn cao chiết chloroform từ cao tổng methanol; M/ET: phân đoạn cao chiết EtOAc từ cao tổng methanol; M/B: phân đoạn cao chiết BuOH từ cao tổng methanol; Camptothecin*: chất chuẩn Nhận xét: Theo Bảng 3.2 cho thấy, phân đoạn từ dịch chiết n-hexane, chloroform, EtOAc, BuOH từ cao tổng MeOH biểu hoạt tính tiêu diệt ức chế tế bào dòng tế bào ung thƣ phát triển loại ung thƣ thử nghiệm nhƣ ung thƣ phổi (A549), ung thƣ gan (Hep3B) ung thƣ vú (MCF-7) nồng độ thử nghiệm 30μg/mL 100μg/mL Trong phân đoạn cao chiết chloroform từ cao tổng methanol thể hoạt tính gây độc tế bào tốt nhất, đặc biệt dòng tế bào ung thƣ gan (Hep3B) tế bào ung thƣ vú (MCF-7) với tỉ lệ phần trăm tế bào sống sót nồng độ thử nghiệm 30μg/mL 100μg/mL lần lƣợt 45,18 ± 2,62% 15,49 ± 1,65% (Hep3B); 44,64 ± 2,21% 27,33 ± 2,49% (MCF7) Ngoài phân đoạn M/H, M/ET M/B thể hoạt tính dịng tế bào nhƣng mức độ thấp so với phân đoạn M/C 31 3.3 XÁC ĐỊNH CÔNG THỨC CẤU TẠO CỦA HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG DỊCH CHIẾT LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC 3.3.1 Kết điều chế cao chiết Kết khối lƣợng cao chiết phân đoạn n-hexane, chloroform, ethyl acetate n-butanol thu đƣợc từ cao chiết tổng methanol đƣợc thể Bảng 3.3 Bảng 3.3 Khối lƣợng cao chiết phân đoạn Cao methanol n-hexane chloroform ethyl acetate n-butanol Khối 500 185 74 15 107 lƣợng (g) (g) (g) (g) (g) Nhận xét: Tổng khối lƣợng cao thu đƣợc phân đoạn so với khối lƣợng cao MeOH tổng 76,2% Đảm bảo trình thu nhận cao Dựa vào kết khảo sát hoạt tính sinh học đƣợc trình bày Bảng 3.2 nhƣ khối lƣợng cao thu đƣợc (Bảng 3.3) phân đoạn (n-hexane, chloroform, ethyl acetate n-butanol) cho thấy, phân đoạn chloroform có hoạt tính gây độc tế bào tốt khối lƣợng cao lớn (chiếm 14,8% so với khối lƣợng cao tổng MeOH) Vì vậy, cao chloroform đƣợc chọn để tiến hành phân lập chất xác định cấu trúc hợp chất hữu có Đu đủ đực 3.3.2 Quy trình tách chất Phần cao chloroform (CPL-C, 74g) tiến hành phân tách sắc ký cột silica gel, rửa giải gradient hệ dung môi n-hexane/acetone (50/1 – 1/1, v/v) thu đƣợc 12 phân đoạn ký hiệu từ CPL-C1 tới CPL-C12 Phân đoạn CPL-C5 (5g) đƣợc cho lên cột sắc ký silica gel pha thƣờng, rửa giải với hệ dung môi n-hexane/acetone (5/1, v/v) thu đƣợc phân đoạn nhỏ ký hiệu từ CPL-C5A đến CPL-C5D Tinh chế phân đoạn CPL-C5A (30 mg) dung môi acetone thu đƣợc chất C5A (12 mg) 32 Sơ đồ phân lập chất đƣợc trình bày Hình 3.1 CPL-C (74g) CPL – C12 CPL – C11 CPL – C10 CPL – C9 CPL – C8 CPL – C7 CPL – C6 CPL – C5 (5 g) CPL – C4 CPL – C3 CPL – C2 CPL -C1 n-hexane/acetone: 50/1 – 1/1 Silica gel pha thƣờng Rửa giải hệ dung môi n-hexane/acetone: 5/1 CPL – C5A (30 mg) CPL – C5B CPL – C5C CPL – C5D Tinh chế dung môi acetone C5A (12mg) TLC, ESI-MS, 1H-NMR, 13C-NMR Xác định cấu trúc Hình 3.1 Sơ đồ phân lập chất 3.3.3 Kết phân lập xác định cấu trúc hợp chất hữu 3.3.3.1 Kết phân lập Hợp chất C5A đƣợc tách từ phân đoạn chloroform dạng bột, màu trắng, tan chlorofom; Rf = 0,2 (Silica gel, H/A 40/1); vệt màu vàng với axit H2SO4 10% (115oC, phút) khối lƣợng cao thu đƣợc 12mg Phổ khối ESI-MS (m/z) 713,47 [M-H-H2O]- Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm): 0,88 (3H, t, J = 6,5 Hz, H-16); 0,88 (3H, t, J = 6,5 Hz, H-34′); 1,26 (m); 1,61 (2H, m, H-3); 2,28 (2H, t, J = 7,5 Hz, H-2); 4,05 (2H, t, J = 7,0 Hz, H-1′) Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm): 174,0 (C-1); 64,4 (C-1′); 14,1 (C16); 14,1 (C-34′); δC=34,4-22,7 33 3.3.3.2 Xác định cấu trúc hóa học chất C5A Hợp chất C5A đƣợc phân lập dƣới dạng chất rắn màu trắng, điểm nóng chảy 67-71oC Phổ khối ESI-MS (xem Hình 3.4) cho pic ion giả phân tử m/z 713,47 [MH-H2O]- Trên phổ 1H-NMR C5A (xem Hình 3.4) xuất tín hiệu nhóm oxymethylene H 4,05 (2H, t, J = 7,0 Hz, H-1′), nhóm methylene vị trí α, β nhóm carboxyl H 2,28 (2H, t, J = 7,5 Hz, H-2) 1,61 (2H, m, H-3) Ngồi ra, tín hiệu chập nhiều nhóm methylene H 1,26 (m) nhóm methyl cuối mạch H 0,88 (6H, t, J = 6,5 Hz, H-16, H-34′) đƣợc ghi nhận Trên phổ 13C-NMR (xem Hình 3.5a, 3.5b), tín hiệu đặc trƣng nhóm carboxyl δC 174,0 (C-1), nhóm oxymethene δC 64,4 (C-1′), nhóm methyl δC 14,1 (C-16, C-34′) nhiều nhóm methylene khoảng δC=22,7-34,4.Từ kiện phổ NMR, MS gợi ý hợp chất C5A ester no, đơn chức, khơng phân nhánh có cơng thức phân tử C50H100O2 (M = 732) Thêm vào đó, pic ion mảnh m/z 239,15 [C16H31O]+, 476,31 [C34H68]+ chứng tỏ hợp phần acid béo hexadecanoic acid (palmitic acid) Kết hợp liệu phổ tham khảo tài liệu [17], cho phép xác định hợp chất C5A tetratriacontanyl hexadecanoate (tetratriacontanyl palmitate) Hình 3.2 Cấu trúc hóa học hợp chất C5A 34 Hình 3.3 Phổ ESI-MS hợp chất C5A 35 Hình 3.4 Phổ 1H-NMR hợp chất C5A 36 Hình 3.5 a Phổ 13C-NMR hợp chất C5A 37 Hình 3.5 b Phổ 13C-NMR hợp chất C5A 38 3.3.4 Kết hoạt tính gây độc tế bào hợp chất C5A Kết hoạt tính gây độc tế bào hợp chất C5A dòng tế bào ung thƣ phổi (A549), ung thƣ vú (MCF-7) ung thƣ gan (Hep3B) đƣợc trình bày Bảng 3.4 Bảng 3.4 Phần trăm ức chế tế bào hoạt tính gây độc tế bào hợp chất C5A Nồng độ C5A A549 MCF-7 Hep3B 100 73,24 76,43 67,56 20 29,86 29,86 22,71 12,27 13,24 11,85 0,8 4,66 2,09 4,17 IC50 50,24± 3,65 46,64 ± 2,64 64,16 ± 5,29 (µg/mL) Nồng độ Ellipticine A549 MCF-7 Hep3B 10 91,77 105,02 94,47 77,52 84,93 70,02 0,4 49,07 51,41 48,99 0,08 24,68 21,54 22,46 IC50 0,43 ± 0,04 0,37 ± 0,03 0,50 ± 0,04 (µg/mL) Nhận xét: Theo Bảng 3.4 cho thấy, hợp chất C5A hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ dòng tế bào với IC50 từ 46,64-64,16µg/mL 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ● KẾT LUẬN Đã định tính sơ đƣợc lớp chất có mẫu bột nguyên liệu Đu đủ đực sử dụng nghiên cứu: alkaloid, coumarin, saponin, polyphenol, steroid, acid hữu cơ, chất béo carotene Cả dịch chiết n-hexane, chloroform, ethyl acetate, n-butanol từ cao tổng methanol có hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thƣ phổi (A549), ung thƣ gan (Hep3B) ung thƣ vú (MCF-7) nồng độ thử nghiệm 30μg/mL 100μg/mL Trong đó, phân đoạn M/C thể hoạt tính tốt so với phân đoạn lại M/H, M/ET M/B Ở phân đoạn M/C, phân lập đƣợc 01 hợp chất hữu có Đu đủ đực hệ dung môi n-hexane/acetone (5:1, v/v) xác định đƣợc hợp chất C5A có tên gọi tetratriacontanyl hexadecanoate (tetratriacontanyl palmitate) với CTPT C50H100O2 (M = 732) Tetratriacontanyl hexadecanoate chất lần phân lập đƣợc từ loài Carica papaya L Đã khảo sát hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ hợp chất C5A : Hợp chất C5A có hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ dòng tế bào khảo sát với nồng độ khác ● KIẾN NGHỊ - Tiếp tục phân lập hợp chất hữu phân đoạn khác nhƣ hệ dung môi khác, đặc biệt chất hữu có hoạt tính sinh học - Nên có thêm cơng trình nghiên cứu phận khác Đu đủ đực (hoa đu đủ đực - vốn có nhiều cơng dụng chữa bệnh dân gian) 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT [1] Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam, Lần xuất thứ tƣ (Bản bổ sung), NXB Y học, Hà Nội [2] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung (2006),Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam,NXBKhoa học kỹ thuật, tập 1, tr 824-827 [3] Hồ Thị Hà (2014), Nghi n c u hoạt t nh sinh h c c a số hợp chất chiết tách từ đu đ (Carica papaya Linn), Luận án tiến sĩ, Đại học Bách khoa Hà Nội [4] Trần Thanh Hà, Trịnh Thị Điệp (2012),“Hai cycloratane triterpene lần phân lập từ Đu đủ (carica papaya L.)”,Tạp ch hóa h c,50 (4A),tr.166-169 [5] Đỗ Tất Lợi (2004),Những thuốc vị thuốc Việt Nam,Xuất lần thứ XII, NXBY học, Hà Nội, tr.360-362 [6] Phạm Kim Mãn cộng sự(2001),“Nghiên cứu thuốc Panacrin ức chế u dùng điều trị ung thƣ” Tạp ch dược liệu, (2+3), tr 58-62 [7] Hà Thị Bích Ngọc, Trần Thị Huyền Nga, Nguyễn Văn Mùi (2007), “Điều tra hợp chất carotenoid số thực vật Việt Nam”,Tạp ch Khoa h c Đại h c Quốc gia Hà Nội, 23, tr 130-134 [8] Đỗ Thị Thảo (2006),Nghi n c u xác định khả phịng chống ung thư chất hóa h c c a số thuốc Việt Nam, Luận án tiến sĩ sinh học [9] Trần Thế Tục, Đoàn Thế Lƣ (2004),Cây Đu đ kỹ thuật trồng, NXB Lao động xã hội, Hà Nội TIẾNG ANH [10] Adeolu Alex, Adedapo and Vivian Eguonor, Orherhe (2013), “Antinociceptive and anti-inflammatory studies of the aqueous leaf extract of Carica papaya in laboratory animals”, Asian J.EXP.BIOL.SCI, Vol 4(1), pp 89-96 [11] Antonella Canini, Daniela Alesiani, Giuseppe D’Arcangelo, Pietro Tagliatesta (2007), “Gas chromatography-mass spectrometry analysis of phenolic compounds from carica papaya L leaf”, Journal of food composition and analysis, vol 20, pp 584-590 [12] Asmah Rahmat, Rozita Rosli, Wan Nor I`zzah Wan Mohd Zain, Susi Endrini and Huzaimah Abdullah Sani (2002),“Antiproliferative Activity of Pure Lycopene Compared to Both Extracted Lycopene and Juices from Watermelon (Citrullus 41 vulgaris) and Papaya (Caricapapaya) on Human Breast and Liver Cancer Cell Lines”,Journal of Medical Sciences, Vol 2, Issue 2, pp 55-58 [13] Bamidele V, Owoyele, Olubori M, Adebukola, Adeoye A, Funmilayo and Ayodele O, Soladoye (2008), “Anti - inflammatory activities of ethanolic extract of Carica papaya leave”,Inflammopharmacology, 16(2008), pp 168 – 173 [14] David S., Seigler, Guido F., Pauli, Adolf Nahrstedt, Rosemary Leen (2002), “Cyanogenic allosides and glucosides from passiflora edulis and carica papaya”, Phytochemistry, vol 60, pp 873-882 [15] Krishna K.L., Paridhavi M and Jagruti A Patel (2008), “Review on nutritional,medicinal and pharmacological properties of papaya (Carica papaya Linn.)”, Natural product radiance, vol 7(4), pp 364-373 [16] Maisarah A.M., Nurul Amira B., Asmah R and Fauziah O (2013), “Antioxidant analysis of different parts of Carica papaya”, International Food Research Journal, 20(3), pp 1043-1048 [17] Mithilesh Singh and J Singh (1984),Chemical examination of the Seeds of Cassia spectablis, Z Naturforsh, 39b, pp.1425-1426 [18] Rahman S., Imran M., Muhammad N., Hassan N., Chisthi A.K., Khan A.F., Sadozai K.S and Khan S.M (2011), “Antibacetial screening of leaves and stem of Carica papaya L.”, Journal of Medicinal Plants Research, Vol 5(20), pp 5167-5171 [19] Rumiyati, Sismindari dan Ariyani (2006),“Effect of protein fraction of Carica papaya L leaves on the expressions of p53 and Bcl - in breast cancer cells line”,Majalah Farmasi Indonesia, 17(4), pp 170 – 176 [20] Satrija F, Nansen P, Bjorn H, Murtini S, He S (1994), Effect of papaya latex against Ascaris suum in naturally infected pigs, J Helminthol Dec, 68(4):343-6 [21] Srikanth G.S., Manohar Babu S., Kavitha CH.N., Bhanoji Rao M.E., Vijaykumar N., Pradeep CH (2010), “Studies on in - vitro antioxidant activities of Carica papaya aqueous leaf extract”, Research journal of pharmaceutical, Biological and Chemical sciences, Vol 1, pp 59-65 [22] T.Oduola, T.O.Idowu, I.S.Bello, F.A.Adeniyi, E.O.Ogunyemi (2012), “Heamatological respone to intake of unpripe Carica papaya fruit extract and the isolation and characterization of Caricapinoside: A new antisickling agent from the 42 extract”,Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, Vol 5(3), pp 7781 WEBSITES [23] https://123doc.org//document/3424838-chat-beo-khong-no-va-vai-tro-trong- dinh-duong.htm, tr.9, mục 2.1.4 Vai trò dinh dƣỡng acid oleic [24] https://thucvatduocvn.blogspot.com/2016/02/bao-quan-duoc-lieu.html?m=1 43 ... KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƢ CỦA HỢP CHẤT TETRATRIACONTANYL HEXADECANOATE TỪ DỊCH CHIẾT CHLOROFORM LÁ CÂY ĐU ĐỦ ĐỰC (CARICA PAPAYA L.)... QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC LỚP CHẤT TRONG LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC 29 3.2 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƢ DỊCH CHIẾT 30 3.3 XÁC ĐỊNH CÔNG THỨC CẤU TẠO CỦA HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG DỊCH CHIẾT LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC ... học Đu đủ đực Vì vậy, để góp phần làm phong phú thêm sơ liệu Đu đủ nói chung Đu đủ đực nói riêng, học viên chọn đề tài ? ?Nghiên cứu phân lập khảo sát hoạt tính gây độc tế bào ung thư hợp chất tetratriacontanyl