Glycerin cũng là chất lỏng trung tính, ưu điểm là lâu khô và làm sáng nhẹ, dưới tác dụng lâu dài của glycerin các mô trở nên trong suốt hơn.. 4 – Một số chất làm sáng tiêu[r]
(1)1 – Các dụng cụ cần cho thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
- Nguyên tắc hoạt động
1.1 – Kính hiển vi quang học
Sử dụng chùm sáng chiếu vào mẫu vật
Xuyên qua thấu kính
(2)1 – Các dụng cụ cần cho thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thơng thường thực hành HT – GP TV
- Cấu tạo: Gồm phần
1.1 – Kính hiển vi quang học
+ Phần học
Thân kính Ống kính (gắn thị
kính vật kính có độ phóng đại khác nhau)
Chân kính (giữ kính) Ốc điều chỉnh Mâm kính (Để
mẫu vật)
(3)1 – Các dụng cụ cần cho thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
- Cấu tạo: Gồm phần
1.1 – Kính hiển vi quang học
+ Phần quang học
Vật kính (gồm nhiều thấu kính, ghi rõ độ phóng đại, trị số mở, độ dài)
Thị kính (gồm thấu kính, bên ngịai ghi độ phóng đại)
Đèn gương lấy sáng
(4)1 – Các dụng cụ cần cho thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
- Cách sử dụng: Chuẩn bị
1.1 – Kính hiển vi quang học
+ Đặt kính mặt bàn bên tay trái, nghiêng kính 10 – 150 cần
+ Mở chắn sáng, xoay vật kính có độ phóng đại bé vào trục kính
+ Quay mặt lõm gương phía nguồn sáng để lấy sáng
(5)1 – Các dụng cụ cần cho thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
- Cách sử dụng: Quan sát
1.1 – Kính hiển vi quang học
+ Đặt tiêu lên mâm kính, di chuyển mẫu vào lỗ thủng mâm, kẹp chặt
+ Dùng vật kính độ phóng đại lớn để quan sát chi tiết
(6)1 – Các dụng cụ cần cho thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
- Lưu ý sử dụng:
1.1 – Kính hiển vi quang học
+ Dùng ốc vi cấp sau dùng ốc sơ cấp
+ Luyện thói quen nhìn mắt trái
+ Đặt mẫu di chuyển ngược chiều
(7)1 – Các dụng cụ cần cho thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
- Cách bảo quản:
1.1 – Kính hiển vi quang học
+ Lau sạch, đậy kín bao kính (nylon), để xa loại hóa chất
+ Hút ẩm, sấy kính thường xuyên
+ Không tháo rời phận, cẩn thận di chuyển
(8)1 – Các dụng cụ cần cho thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thơng thường thực hành HT – GP TV
- Kính lúp:
1.2 – Các dụng cụ khác
+Dụng cụ quang học cầm tay, dễ di chuyển, dễ sử dụng
+ Quan sát cách thay đổi khoảng cách mẫu vật kính
+ Độ phóng đại cố định (3 – 20 lần)
(9)1 – Các dụng cụ cần cho thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
- Máy cắt tiêu hiển vi: 1.2 – Các dụng cụ khác
+ Cắt tiêu có độ dày 3m
+ Mẫu phải xử lý paraphin trước sau cắt
(10)1 – Các dụng cụ cần cho thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
- Máy cắt lát mỏng cầm tay: 1.2 – Các dụng cụ khác
+ Cắt tiêu có độ dày 10m
+ Dùng để cắt lọai mô mềm
+ Mẫu phải kẹp miếng khoai lang (khoai tây ) cho vào trụ rỗng
(11)1 – Các dụng cụ cần cho thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thơng thường thực hành HT – GP TV
1.2 – Các dụng cụ khác
(12)2 – Một số kỹ thuật thông thường thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
2.1 – Làm vi phẫu (cắt mỏng) Cắt lớp
mỏng, độ dày vài lớp TB
Quan sát cấu trúc bên thể TV
Cắt tay Cắt máy
+ Cắt dao mỏng (dao lam) + Lát cắt dứt khoát
+ Lát cắt vng góc với mẫu vật
+ Kẹp mẫu vật vào miếng cà rốt, khoai lang hình trụ
+ Dùng máy cắt thành lát mỏng
(13)2 – Một số kỹ thuật thông thường thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thơng thường thực hành HT – GP TV
2.2 – Nhuộm mẫu Nhuộm
mẫu để quan sát chi
tiết kính hiển vi
Nhuộm đơn Nhuộm kép
+ Nhuộm dung dịch màu: Cacmin – acetic, sudan II
Nhuộm với Xanh methylen Đỏ Cacmin
Ngâm mẫu Javen Cloramin 5% (15 – 20 phút) để tẩy nội chất
Rửa nước cất acetic 1%, nhuộm Xanh methylen - 2ppm, 10’ – phút
(14)2 – Một số kỹ thuật thông thường thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
2.3 – Phương pháp làm tiêu hiển vi
- Làm tiêu tạm thời (vài đến vài ngày) Chuẩn bị lát cắt
Nhỏ glycerin nước cất vào lam kính Đặt mẫu vào, đậy lame nghiêng 450 tránh
tạo bọt khí
Lau khơ, dán mép kính paraphin 450
(15)2 – Một số kỹ thuật thông thường thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
2.3 – Phương pháp làm tiêu hiển vi - Làm tiêu cố định (vài chục năm) Tẩy màu lát cắt (javen/cloramin), tẩy tinh bột (cloral hydrat), rửa nước cất Nhuộm màu, khử nước cồn
Nhỏ Bôm Canada, đặt mẫu vào, đậy lamen, đặt nơi thống gío để Bơm khơ cứng, cố định tiêu
Cồn 500 /30 phút
Cồn 700 / 15 – 20 phút
Cồn 960 / 15 – 20 phút
Cồn 1000 / 10 phút
(16)2 – Một số kỹ thuật thông thường thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thơng thường thực hành HT – GP TV
2.4 – Phương pháp dầm (ngâm mủn) - Nguyên tắc:
Dùng acid
mạnh phá hủy chất gian bào Giải
phóng TB TV nguyên vẹn
Vật liệu mềm
Vật liệu cứng
Cắt nhỏ mẫu, ngâm cồn – acid acetic (3:1), 24h
Ngâm H2S04 oxi già, HNO310%, đun sôi
Rửa nước cất, đặt lên kính, đậy lame, gõ nhẹ tách TB Chẻ nhỏ
mẫu, ngâm HNO3 đậm đặc có pha Kali cronat (KClO3)
Đun nhẹ 24 – 48h (60 – 800C), để
nguội, lên kính nước cất
(17)2 – Một số kỹ thuật thông thường thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
2.5 – Phương pháp vẽ
-PP vẽ dùng để mơ tả hình quan sát từ kính hiển vi lên giấy:
+ Yêu cầu chung:
Hình vẽ to, rõ ràng, tỉ lệ phần xác
Nét vẽ gọn, sắc, đơn giản, dùng bút chì đen
Chú thích chung hình vẽ, thích riêng đường
kẻ song song Hình vẽ TB thực vật
Lục lạp Không bào
(18)2 – Một số kỹ thuật thông thường thực hành
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thơng thường thực hành HT – GP TV
2.5 – Phương pháp vẽ
-PP vẽ dùng để mô tả hình quan sát từ kính hiển vi lên giấy:
+ Quy tắc vẽ hình:
Dùng đường nét mơ tả hình dạng, vị trí, kích thước mẫu, theo quy tắc (trang 287)
Vẽ tổng quát
Tùy yêu cầu quan sát, chọn phần điển hình mẫu vật để vẽ (trang 287)
(19)3 – Một số hóa chất thuốc nhuộm thông thường
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thơng thường thực hành HT – GP TV
(20)4 – Một số chất làm sáng tiêu
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
– Nước:
Chất lỏng trung tính, khơng làm biến đổi hình dạng, độ lớn tế bào, cấu trúc màu mô
– Glycerin:
(21)4 – Một số chất làm sáng tiêu
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
– Cloral hydrat:
+ Sử dụng dạng dung dịch đậm đặc nước để làm sáng lát cắt dày
+ Trong cloral hydrat hạt tinh bột trương ra, dầu béo tinh dầu ban đầu tập hợp lại thành giọt lớn hơn, sau bị hồ tan
+ Đun đến sôi nhẹ để tăng cường tác dụng làm sáng rút ngắn thời gian
(22)4 – Một số chất làm sáng tiêu
Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV
– Kiềm:
+ Thường sử dụng dung dịch 3-5% 10-15%
+ Dung dịch NaOH chất làm sáng mạnh, mô thẫm sáng
+ Trong dung dịch kiềm thành tế bào giãn nở, thay đổi hình dạng, kích thước dễ bị vỡ bị tác động
+ Có thể dùng KOH NH4OH, NH4OH để hạn chế giãn nở thành tế bào