ky thuat lam tieu ban

Glycerin cũng là chất lỏng trung tính, ưu điểm là lâu khô và làm sáng nhẹ, dưới tác dụng lâu dài của glycerin các mô trở nên trong suốt hơn.. 4 – Một số chất làm sáng tiêu[r]

(1)

1 – Các dụng cụ cần cho thực hành

Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thông thường thực hành HT – GP TV

- Nguyên tắc hoạt động

1.1 – Kính hiển vi quang học

Sử dụng chùm sáng chiếu vào mẫu vật

Xuyên qua thấu kính

(2)

Chương - Dụng cụ, hóa chất số kỹ thuật thơng thường thực hành HT – GP TV

- Cấu tạo: Gồm phần

+ Phần học

Thân kính Ống kính (gắn thị

kính vật kính có độ phóng đại khác nhau)

Chân kính (giữ kính) Ốc điều chỉnh Mâm kính (Để

mẫu vật)

(3)

- Cấu tạo: Gồm phần

+ Phần quang học

Vật kính (gồm nhiều thấu kính, ghi rõ độ phóng đại, trị số mở, độ dài)

Thị kính (gồm thấu kính, bên ngịai ghi độ phóng đại)

Đèn gương lấy sáng

(4)

- Cách sử dụng: Chuẩn bị

+ Đặt kính mặt bàn bên tay trái, nghiêng kính 10 – 150 cần

+ Mở chắn sáng, xoay vật kính có độ phóng đại bé vào trục kính

+ Quay mặt lõm gương phía nguồn sáng để lấy sáng

(5)

- Cách sử dụng: Quan sát

+ Đặt tiêu lên mâm kính, di chuyển mẫu vào lỗ thủng mâm, kẹp chặt

+ Dùng vật kính độ phóng đại lớn để quan sát chi tiết

(6)

- Lưu ý sử dụng:

+ Dùng ốc vi cấp sau dùng ốc sơ cấp

+ Luyện thói quen nhìn mắt trái

+ Đặt mẫu di chuyển ngược chiều

(7)

- Cách bảo quản:

+ Lau sạch, đậy kín bao kính (nylon), để xa loại hóa chất

+ Hút ẩm, sấy kính thường xuyên

+ Không tháo rời phận, cẩn thận di chuyển

(8)

- Kính lúp:

1.2 – Các dụng cụ khác

+Dụng cụ quang học cầm tay, dễ di chuyển, dễ sử dụng

+ Quan sát cách thay đổi khoảng cách mẫu vật kính

+ Độ phóng đại cố định (3 – 20 lần)

(9)

- Máy cắt tiêu hiển vi: 1.2 – Các dụng cụ khác

+ Cắt tiêu có độ dày 3m

+ Mẫu phải xử lý paraphin trước sau cắt

(10)

- Máy cắt lát mỏng cầm tay: 1.2 – Các dụng cụ khác

+ Cắt tiêu có độ dày 10m

+ Dùng để cắt lọai mô mềm

+ Mẫu phải kẹp miếng khoai lang (khoai tây ) cho vào trụ rỗng

(11)

1.2 – Các dụng cụ khác

(12)

2 – Một số kỹ thuật thông thường thực hành

2.1 – Làm vi phẫu (cắt mỏng) Cắt lớp

mỏng, độ dày vài lớp TB

Quan sát cấu trúc bên thể TV

Cắt tay Cắt máy

+ Cắt dao mỏng (dao lam) + Lát cắt dứt khoát

+ Lát cắt vng góc với mẫu vật

+ Kẹp mẫu vật vào miếng cà rốt, khoai lang hình trụ

+ Dùng máy cắt thành lát mỏng

(13)

2.2 – Nhuộm mẫu Nhuộm

mẫu để quan sát chi

tiết kính hiển vi

Nhuộm đơn Nhuộm kép

+ Nhuộm dung dịch màu: Cacmin – acetic, sudan II

Nhuộm với Xanh methylen Đỏ Cacmin

Ngâm mẫu Javen Cloramin 5% (15 – 20 phút) để tẩy nội chất

Rửa nước cất acetic 1%, nhuộm Xanh methylen - 2ppm, 10’ – phút

(14)

2.3 – Phương pháp làm tiêu hiển vi

- Làm tiêu tạm thời (vài đến vài ngày) Chuẩn bị lát cắt

Nhỏ glycerin nước cất vào lam kính Đặt mẫu vào, đậy lame nghiêng 450 tránh

tạo bọt khí

Lau khơ, dán mép kính paraphin 450

(15)

2.3 – Phương pháp làm tiêu hiển vi - Làm tiêu cố định (vài chục năm) Tẩy màu lát cắt (javen/cloramin), tẩy tinh bột (cloral hydrat), rửa nước cất Nhuộm màu, khử nước cồn

Nhỏ Bôm Canada, đặt mẫu vào, đậy lamen, đặt nơi thống gío để Bơm khơ cứng, cố định tiêu

Cồn 500 /30 phút

Cồn 700 / 15 – 20 phút

Cồn 960 / 15 – 20 phút

Cồn 1000 / 10 phút

(16)

2.4 – Phương pháp dầm (ngâm mủn) - Nguyên tắc:

Dùng acid

mạnh phá hủy chất gian bào Giải

phóng TB TV nguyên vẹn

Vật liệu mềm

Vật liệu cứng

Cắt nhỏ mẫu, ngâm cồn – acid acetic (3:1), 24h

Ngâm H2S04 oxi già, HNO310%, đun sôi

Rửa nước cất, đặt lên kính, đậy lame, gõ nhẹ tách TB Chẻ nhỏ

mẫu, ngâm HNO3 đậm đặc có pha Kali cronat (KClO3)

Đun nhẹ 24 – 48h (60 – 800C), để

nguội, lên kính nước cất

(17)

2.5 – Phương pháp vẽ

-PP vẽ dùng để mơ tả hình quan sát từ kính hiển vi lên giấy:

+ Yêu cầu chung:

Hình vẽ to, rõ ràng, tỉ lệ phần xác

Nét vẽ gọn, sắc, đơn giản, dùng bút chì đen

Chú thích chung hình vẽ, thích riêng đường

kẻ song song Hình vẽ TB thực vật

Lục lạp Không bào

(18)

2.5 – Phương pháp vẽ

-PP vẽ dùng để mô tả hình quan sát từ kính hiển vi lên giấy:

+ Quy tắc vẽ hình:

Dùng đường nét mơ tả hình dạng, vị trí, kích thước mẫu, theo quy tắc (trang 287)

Vẽ tổng quát

Tùy yêu cầu quan sát, chọn phần điển hình mẫu vật để vẽ (trang 287)

(19)

3 – Một số hóa chất thuốc nhuộm thông thường

(20)

4 – Một số chất làm sáng tiêu

– Nước:

Chất lỏng trung tính, khơng làm biến đổi hình dạng, độ lớn tế bào, cấu trúc màu mô

– Glycerin:

(21)

– Cloral hydrat:

+ Sử dụng dạng dung dịch đậm đặc nước để làm sáng lát cắt dày

+ Trong cloral hydrat hạt tinh bột trương ra, dầu béo tinh dầu ban đầu tập hợp lại thành giọt lớn hơn, sau bị hồ tan

+ Đun đến sôi nhẹ để tăng cường tác dụng làm sáng rút ngắn thời gian

(22)

– Kiềm:

+ Thường sử dụng dung dịch 3-5% 10-15%

+ Dung dịch NaOH chất làm sáng mạnh, mô thẫm sáng

+ Trong dung dịch kiềm thành tế bào giãn nở, thay đổi hình dạng, kích thước dễ bị vỡ bị tác động

+ Có thể dùng KOH NH4OH, NH4OH để hạn chế giãn nở thành tế bào