Tạo mẫu sinh phẩm đông khô và đánh giá tiêu chí của mẫu ngoại kiểm sử dụng trong chương trình ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm pcr hbv hcv

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN THỊ NGỌC HIẾU TẠO MẪU SINH PHẨM ĐÔNG KHÔ VÀ ĐÁNH GIÁ TIÊU CHÍ CỦA MẪU NGOẠI KIỂM SỬ DỤNG TRONG CHƯƠNG TRÌNH NGOẠI KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM PCR HBV - HCV LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ NGỌC HIẾU TẠO MẪU SINH PHẨM ĐÔNG KHÔ VÀ ĐÁNH GIÁ TIÊU CHÍ CỦA MẪU NGOẠI KIỂM SỬ DỤNG TRONG CHƯƠNG TRÌNH NGOẠI KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM PCR HBV - HCV Ngành: Kiểm nghiệm thuốc Độc chất Mã số: 8720210 Luận văn Thạc sĩ Dược học NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS TRẦN HỮU TÂM PGS.TS VĨNH ĐỊNH Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2018 MỤC LỤC KÝ HIỆU VÀ VIẾT TẮT v DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC BẢNG ix MỞ ĐẦU 1 Mục tiêu tổng quát Mục tiêu cụ thể CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan tình hình bệnh Viêm gan siêu vi 1.2 Viêm gan siêu vi B (HBV) 1.3 Viêm gan siêu vi C (HCV) 1.4 Đồng nhiễm HBV HCV 12 1.5 Xét nghiệm chẩn đoán viêm gan siêu vi 13 1.6 Kiểm soát chất lượng đảm bảo chất lượng phát chẩn đoán phương pháp sinh học phân tử 15 1.7 Ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm 18 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tượng 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 25 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 37 3.1 Tạo mẫu sinh phẩm đông khô 37 3.2 Kết kiểm tra độ đồng độ ổn định mẫu HBV HCV 39 3.3 Ứng dụng triển khai chương trình ngoại kiểm 54 CHƢƠNG BÀN LUẬN 58 4.1 Độ đồng 58 4.2 Độ ổn định 58 4.3 Biện luận kết 59 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHỤ LỤC KÝ HIỆU VÀ VIẾT TẮT STT Viết tắt Tên đầy đủ tiếng Anh ALT Alanin transaminase Anti-HBc Antibody to Hepatitis B virus Core Dịch nghĩa tiếng Việt Enzyme chuyển nhóm amin alanin Kháng thể lõi siêu vi viêm gan B Anti-Hbe Antibody to Hepatitis B virus Envelop Kháng thể vỏ siêu vi viêm gan B Anti-HBs Antibody to Hepatitis B virus surface Kháng thể bề mặt siêu vi viêm gan B Antibody to Hepatitis C virus Branched DNA College of American Pathologists Kháng thể viêm gan C AntiHCV bDNA CAP cccDNA DNA vịng kín đồng hóa trị cDNA Covalently-close circular DNA Complementary deoxyribonucleic acid 10 CLIA Clinical Laboratory Improvement Amendments Các sữa đổi cải tiến phòng xét nghiệm lâm sàng 11 12 13 Ct DNA EDTA Chu kỳ ngưỡng 14 ELISA Threshold cycle Deoxyribonucleic acid Ethylene-diamine-tetra acetic acid Enzyme-linked immunosorbent assay 15 EMQN European Molecular Genetics Quality Network Mạng lưới chất lượng di truyền phân tử Châu Âu 16 ER Endoplasmic reticulum Lưới nội sinh chất 17 18 HbeAg HbsAg 19 20 21 HBV HCV HCVAg Hepatitis B virus E antigen Hepatitis B virus surface antigen Hepatitis B virus Hepatitis C virus Hepatitis C virus Core antigen Kháng nguyên lõi Siêu vi viêm gan B Kháng nguyên bề mặt Siêu vi viêm gan B Siêu vi viêm gan B Siêu vi viêm gan C Kháng nguyên lõi viêm gan C Nhánh DNA Ban nghiên cứu bệnh học Hoa Kỳ DNA bổ sung Kỹ thuật miễn dịch gắn kết enzyme 22 HIV Human immunodeficiency virus Siêu vi gây suy giảm miễn dịch người 23 24 25 26 27 IC IgC IgG IgM ILAC Internal control Immunoglobulin C Immunoglobulin G Immunoglobulin M International Laboratory Accreditation Cooperation Mẫu chứng nội Globulin miễn dịch nhóm C Globulin miễn dịch nhóm G Globulin miễn dịch nhóm M Hiệp hội cơng nhận phịng thí nghiệm quốc tế 28 IUPAC International Union of Pure Hiệp hội hóa học quốc tế and Applied Chemistry 29 30 mRNA NRL 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 Messenger ribonucleic acid National Serology Reference Laboratory PXN Laboratory PCR Polymerase chain reaction RNA Ribonucleic acid rt-PCR Reverse transcription PCR TMA Transcription-mediated amplification tRNA Transportribonucleic acid TTKCXN Center for Standardization and Quality control in Medical laboratory of Hochiminh city UKNEQ United Kingdom National AS External Quality Assessment WHO World Health Organization (+) Positive (-) Negative RNA thơng tin Phịng xét nghiệm tham chiếu huyết quốc gia Phòng xét nghiệm Phản ứng khuếch đại chuỗi PCR phiên mã ngược Khuếch đại qua trung gian phiên mã RNA vận chuyển Trung tâm Kiểm chuẩn Xét nghiệm Chương trình ngoại kiểm tra chất lượng Vương Quốc Anh Tổ chức Y tế giới Dương tính Âm tính i DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Biểu tượng ngày Viêm gan Thế giới Hình 1.2 Bản đồ dịch tễ vùng phân bố HBV Hình 1.3 Mơ hình cấu tạo HBV Hình 1.4 Cấu trúc phân tử HBV Hình 1.5 Chu kỳ xâm nhiễm tái HBV Hình 1.6 Phân bố nhiễm HCV giới Hình 1.7 Cấu tạo HCV 10 Hình 1.8 Cấu trúc phân tử HCV 11 Hình 1.9 Chu trình xâm nhiễm tái HCV 12 Hình 1.10 Vịng trịn thẩm định phương pháp chẩn đoán PCR 16 Hình 2.1 Sơ đồ quy trình tổng quát sản xuất mẫu ngoại kiểm HBV-HCV 34 Hình 3.1 Lọ đông khô mẫu huyết HBV (+) 38 Hình 3.2 Lọ đơng khô mẫu huyết HCV (+) 38 Hình 3.3 Lọ đơng khơ mẫu huyết HCV (-), HBV (-) 38 Hình 3.4 Biểu đồ nồng độ mẫu HBV để đánh giá độ đồng 39 Hình 3.5 Biểu đồ nồng độ mẫu HCV để đánh giá độ đồng 40 Hình 3.6 Biểu đồ nồng độ mẫu HBV thời gian lưu trữ 30 ngày 25oC 41 Hình 3.7 Biểu đồ nồng độ mẫu HBV thời gian lưu trữ 30 ngày 4oC 43 Hình 3.8 Biểu đồ nồng độ mẫu HBV lưu trữ 30 ngày 4oC 25oC 44 Hình 3.9 Nồng độ mẫu HCV thời gian lưu trữ 30 ngày 25oC 46 Hình 3.10 Nồng độ mẫu HCV thời gian lưu trữ 30 ngày 4oC 48 Hình 3.11 Biểu đồ nồng độ mẫu HCV lưu trữ 30 ngày 4oC 25oC 50 .i Hình 3.12 Biểu đồ phịng xét nghiệm phân tích mẫu HBV 53 Hình 3.13.Biểu đồ đánh giá độ đồng mẫu HBV phòng xét nghiệm tham gia ngoại kiểm……… ………………….……………… …… ……………… 55 Hình 3.14 Biểu đồ đánh giá độ đồng mẫu HCV phòng xét nghiệm tham gia ngoại kiểm……………………………………………………………… 57 DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1.Kết đo nồng độ mẫu HBV để đánh giá độ đồng nhất……………… 39 Bảng 3.2.Kết đo nồng độ mẫu HCV để đánh giá độ đồng nhất……………… 39 Bảng 3.3 Nồng độ mẫu HBV thời gian lưu trữ 30 ngày 25oC…………… 41 Bảng 3.4 Nồng độ mẫu HBV thời gian lưu trữ 30 ngày 4oC……… 42 Bảng 3.5 Nồng độ mẫu HBV thời gian lưu trữ 30 ngày 4oC 25oC…… 43 Bảng 3.6 Nồng độ mẫu HBV thời gian lưu trữ tháng 25oC 4oC…… 45 Bảng 3.7 Nồng độ mẫu HCV thời gian lưu trữ 30 ngày 25oC…………… 46 Bảng 3.8 Nồng độ mẫu HCV thời gian lưu trữ 30 ngày 4oC…………… 47 Bảng 3.9 Nồng độ mẫu HCV thời gian lưu trữ 30 ngày 4oC 25oC…… 49 Bảng 3.10 Nồng độ mẫu HCV thời gian lưu trữ tháng 25oC 4oC…… 51 Bảng 3.11 Nồng độ mẫu HBV HCV qua trình vận chuyển ngày……… 52 Bảng 3.12 Nồng độ mẫu HBV HCV kiểm tra số PXN………… 52 Bảng 3.13 Kết đo nồng độ mẫu PB0301 phòng xét nghiệm tham gia ngoại kiểm ………………………… …………… ………………………… 54 Bảng 3.14 Kết đo nồng độ mẫu PB0302 phòng xét nghiệm tham gia ngoại kiểm…………………………………………… ………………………… 55 Bảng 3.15 Kết đo nồng độ mẫu PC0301 phòng xét nghiệm tham gia ngoại kiểm…………………………………………………… .56 Bảng 3.16 Kết đo nồng độ mẫu PC0302 phòng xét nghiệm tham gia ngoại kiểm……………………………………………… .57 Bảng 4.17 Kết độ ổn định mẫu HBV-HCV qua số thống kê…… 59 MỞ ĐẦU PCR kỹ thuật đại, có giá trị chẩn đoán cao cho kết nhanh xét nghiệm chẩn đoán bệnh nhiễm vi khuẩn, siêu vi Đặc biệt việc chẩn đoán điều trị bệnh viêm gan siêu vi loại B, C, phương pháp PCR ngày sử dụng phổ biến tính ý nghĩa hiệu chẩn đốn theo dõi điều trị thông qua giá trị hàm lượng khả tái siêu vi có mẫu bệnh phẩm Khả định lượng siêu vi xác phụ thuộc vào nhiều yếu tố, bao gồm: kỹ thuật lấy mẫu, bảo quản vận chuyển mẫu đến phịng xét nghiệm; kỹ thuật ly trích thực xét nghiệm; thiết bị hóa chất Do để đạt kết đáng tin cậy, phịng xét nghiệm phải tham gia chương trình ngoại kiểm để kiểm tra so sánh kết xét nghiệm với phòng xét nghiệm khác sử dụng kỹ thuật thiết bị Trên giới có số quan, tổ chức NRL (Úc), EuroGentest (Châu Âu), American Society for Microbiology (Mỹ) triển khai chương trình ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm chẩn đoán PCR Tuy nhiên việc tham gia chương trình cịn nhiều trở ngại chi phí cao khó khăn vận chuyển mẫu Chương trình ngoại kiểm triển khai Việt Nam vài năm gần cho lĩnh vực xét nghiệm Sinh hóa, Huyết học, Vi sinh… chưa áp dụng lĩnh vực Sinh học phân tử nói chung kỹ thuật PCR nói riêng chưa có tổ chức cơng ty cung cấp mẫu ngoại kiểm chương trình ngoại kiểm tra chất lượng lĩnh vực xét nghiệm chẩn đốn kỹ thuật PCR Do đó, đề tài “Tạo mẫu sinh phẩm đông khô đánh giá tiêu chí mẫu ngoại kiểm sử dụng chƣơng trình ngoại kiểm tra chất lƣợng xét nghiệm PCR HBV – HCV” nhằm phục vụ chương trình ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm PCR cho phòng Xét nghiệm Y khoa thực với: Mục tiêu tổng quát Tạo mẫu sinh phẩm đông khô đáp ứng yêu cầu mẫu ngoại kiểm dùng kiểm tra chất lượng xét nghiệm định lượng PCR HBV – HCV Bảng 3.16 Kết đo nồng độ mẫu PC0302 phòng xét nghiệm tham gia ngoại kiểm STT 10 11 12 13 14 15 PXN 10006 10016 10023 10026 10057 10061 10061 10062 10128 20082 40090 40094 40116 10063 80458 Định tính + + + + + + + + + + + + + + + Đánh giá Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Nồng độ ( IU/ml) 21000 47700 66500 12829 26000 64000 85000 26835 8900 21300 26000 17300 24400 14200 22254 Lg nồng độ 4.32 4.68 4.82 4.11 4.41 4.81 4.93 4.43 3.95 4.33 4.41 4.24 4.39 4.15 4.35 Đánh giá Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Độ đồng mẫu HCV 006 Lg Nồng độ 005 004 003 PC0301 002 PC0302 001 000 10 Phịng xét nghiệm 12 14 16 Hình 3.14 Biểu đồ đánh giá độ đồng mẫu HCV phòng xét nghiệm tham gia ngoại kiểm CHƢƠNG BÀN LUẬN 4.1 Độ đồng Sau sản xuất mẫu, kết kiểm tra độ đồng cho thấy hai mẫu HBV HCV đồng mặt ý nghĩa thống kê Đối với mẫu HBV, thống kê kiểm định F cho kết Fthực nghiệm = 1,02 < Flý thuyết = 3,18 phù hợp với giả thuyết đặt nên kết luận mẫu HBV đồng Và mẫu HCV có Fthực nghiệm = 1,18 < Flý thuyết = 3,18 phù hợp với giả thuyết đặt nên kết luận mẫu HCV đồng Từ đó, cho thấy phương pháp sản xuất mẫu HBV-HCV ban đầu đáng tin cậy áp dụng vào việc sản xuất mẫu ngoại kiểm HBV-HCV cho chương trình ngoại kiểm tra PCR 4.2 Độ ổn định Cả hai mẫu HBV HCV, theo dõi độ ổn định thời gian 30 ngày tháng cho kết ổn định, cụ thể bảng 3.17, cho thấy |tthực nghiệm| < tlý thuyết phương pháp kiểm định t Điều kết luận mẫu ổn định thời gian 30 ngày tháng nhiệt độ 25oC 4oC có ý nghĩa thống kê Mặc dù mẫu ổn định 25oCvà 4oC nhiệt độ 4oC cho thấy độ ổn định mẫu tốt 25oC Bảng 4.17.Kết độ ổn định mẫu HBV-HCV qua số thống kê Mẫu HBV HCV 25oC 4oC Thời gian bảo quản Thực nghiệm Lý thuyết Thực nghiệm Lý thuyết 30 ngày |t| = 1,94 t= 2,00 |t| = 0,015 t = 2,00 tháng |t| = 0,45 t = 2,36 |t| = 0,26 t = 2,57 30 ngày |t|= 0,59 t = 2,00 |t|= 0,50 t = 2,00 tháng |t| = 1,35 t = 2,31 |t| = 0,70 t = 2,36 Ngoài thời gian kiểm tra độ ổn định 30 ngày tháng, mẫu kiểm tra độ ổn định thời gian ngày vận chuyển Kết phân tích thống kê cho thấy mẫu ổn định trình vận chuyển Như vậy, điều kiện thời gian nhiệt độ bảo quản đặt ban đầu, mẫu HBV HCV đạt độ đồng độ ổn định Khi đánh giá thêm tiêu phân tích số phòng xét nghiệm, Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 59 kết phịng xét nghiệm có chênh lệch lớn Do đó, sản xuất mẫu ngoại kiểm HBV-HCV phương pháp đông khô để triển khai chương trình ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm PCR HBV-HCV Khi sản xuất mẫu ứng dụng để triển khai chương trình ngoại kiểm cho thấy kết phân tích phịng xét nghiệm tham gia đạt đồng 4.3 Biện luận kết Từ kết thực nghiệm cho thấy mẫu đông khô HBV HCV sau thời gian bảo quản điều kiện nhiệt độ 25oC, 4oC điều kiện vận chuyển đến phòng xét nghiệm thời gian ngày, mẫu HBV-HCV đạt tiêu độ đồng ổn định Tuy nhiên, nhiệt độ bảo quản nhiệt độ 4oC bảo quản mẫu tốt nhiệt độ 25oC Kết thống kê mẫu HBV HCV tương đồng chứng tỏ điều kiện môi trường bên ngồi tác động lên tính chất lý hóa sinh học mẫu khơng có khác biệt lớn hai mẫu Khi đánh giá thêm tiêu phân tích số phịng xét nghiệm, kết phịng xét nghiệm có chênh lệch lớn Nhưng kết nội phịng xét nghiệm khơng có khác biệt Điều chứng tỏ mẫu đồng ổn định, khác phương pháp thiết bị, thao tác người thực điều kiện bảo quản ảnh hưởng đến kết phân tích Khi sản xuất mẫu ứng dụng để triển khai chương trình ngoại kiểm cho thấy kết phân tích phịng xét nghiệm tham gia đạt đồng Tóm lại, mẫu HBV-HCV sản xuất phương pháp đông khô phục vụ cho chương trình ngoại kiểm tra PCR HBV-HCV ổn định tốt thời gian tháng lưu giữ nhiệt độ 4oC Áp dụng cho chương trình ngoại kiểm KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Qua kết thu nhận được, quy trình sản xuất đơng khơ mẫu huyết để chế tạo mẫu sử dụng chương trình ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm PCR HBVHCV chứng minh đáp ứng mặt kỹ thuật, tạo mẫu đáp ứng yêu cầu Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 60 độ đồng nhất, độ ổn định Tuổi thọ sản phẩm sau sản xuất trước mắt áp dụng cho chương trình ngoại kiểm tra Do đó, quy trình khả thi áp dụng vào công tác sản xuất mẫu ngoại kiểm sử dụng chương trình kiểm tra chất lượng xét nghiệm PCR HBV-HCV Đề nghị hướng nghiên cứu tiếp theo: thời gian khảo sát độ ổn định vòng 30 ngày tháng nên đề tài chưa bao quát độ ổn định mẫu hết hạn sử dụng Do đó, nghiên cứu nên theo dõi thêm hạn sử dụng tối ưu hóa mẫu kéo dài tuổi thọ mẫu chất lượng mẫu nâng lên giảm chi phí sản xuất, từ giảm giá thành mẫu Trong phạm vi đề tài, việc khảo sát phân tích phịng xét nghiệm mang tính tổng quát chung cho tất phương pháp thiết bị Do đó, có nghiên cứu khảo sát tìm phương pháp thống kê phân loại theo phương pháp thiết bị để thiết lập khoảng chấp nhận cho phép riêng cho nhóm phương pháp Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Phan Quận (2010), Các bệnh truyền nhiễm phổ biến NXB Đại học Huế, tr 108-118 [2] Trần Hữu Tâm (2012), Ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm NXB Y học,TP Hồ Chí Minh, tr 12 -23 Tiếng Anh [3] Norbert W Tietz, Carl A Burtis, Edward R Ashwood, David E Bruns (2006), Tietz textbook of clinical chemistry and molecular diagnostics Elsevier Saunders,St Louis, Mo [4] Clinical and Laboratory Standards Institute (2005), A Model for Managing Medical Device Alerts (Hazards and Recalls) for Healthcare Organizations; Approved Guideline CLSI document HS11-A Clinical and Laboratory Standards Institute, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA [5] Clinical and Laboratory Standards Institute (2005), Proficiency Testing (External Quality Assessment) for Molecular Methods; Approved Guideline CLSI document MM14-A Clinical and Laboratory Standards Institute, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA [6] Thomas A Jennings (2008), Lyophilization : introduction and basic principles Informa Healthcare USA, Inc,New York [7] NCCLS (1999), Using Proficiency Testing (PT) to Improve the Clinical Laboratory; Approved Guideline NCCLS Document GP27-A NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087-1898, USA [8] NCCLS (2000), Reference and Selected Procedures for the Quantitative Determination of Hemoglobin in Blood; Approved Standard - Third Edition Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh NCCLS document H15-A3.NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA [9] NCCLS (2001), Laboratory Automation: Systems Operational Requyrements, Characteristics, and Information Elements; Approved Standard NCCLS document AUTO4-A NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA [10] M Neumaier, A Braun, C Wagener (1998) "Fundamentals of quality assessment of molecular amplification methods in clinical diagnostics International Federation of Clinical Chemistry Scientific Division Committee on Molecular Biology Techniques" Clinical chemistry, 44 (1), pp 12-26 [11] H G Niesters (2001) "Standardization and quality control in molecular diagnostics" Expert review of molecular diagnostics, (2), 129-31 [12] Georg-Wilhelm Oetjen (1999), Freeze-drying Wiley-VCH, Weinheim ; Chichester [13] S C Ramsden, S Daly, W J Geilenkeuser, G Duncan, F Hermitte, E Marubini, M Neumaier, C Orlando, V Palicka, A Paradiso, M Pazzagli, S Pizzamiglio, P Verderio (2006) "EQUAL-quant: an international external quality assessment scheme for real-time PCR" Clinical chemistry, pp 52 (8), 1584-91 [14] J Schirm, A M van Loon, E Valentine-Thon, P E Klapper, J Reid, G M Cleator (2002) "External quality assessment program for qualitative and quantitative detection of hepatitis C virus RNA in diagnostic virology" Journal of clinical microbiology, pp 40 (8), 2973-80 [15] Michael Thompson, Stephen L R Ellison, Roger Wood (2006) "The International Harmonized Protocol for the proficiency testing of analytical chemistry laboratories (IUPAC Technical Report)" Pure and Applied Chemistry, pp 78, 145-196 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh [16] E Valentine-Thon, A M van Loon, J Schirm, J Reid, P E Klapper, G M Cleator (2001) "European proficiency testing program for molecular detection and quantitation of hepatitis B virus DNA" Journal of clinical microbiology, pp 39 (12), 4407-12 [17] L N Wang, J M Wu, W Deng, Z Y Shen, W X Chen, J M Li (2006) "Lyophilized standards for the calibration of real time PCR assay for hepatitis C virus RNA" Chinese medical journal, 119 (22), 1910-4 Internet [18] http://dels-old.nas.edu/ilar_n/ilarjournal/42_2/clones.shtml (ngày truy cập: 04 / 05/ 2017) [19] http://www.ibibiobase.com/projects/hepatitis/hepatitis-aB.htm (ngày truy cập: 06 / 05/ 2017) [20] http://www.stanford.edu/group/siêu vi/hepadna/index.html (ngày truy cập: 06 / 05/ 2017) [21] http://www.worldhepatitisalliance.org/worldhepatitisday2011.aspx (ngày truy cập: 07 / 05/ 2017) [22].Trần Thị Khánh Tường, Viêm gan siêu vi B, BM Nội ĐHYK Phạm Ngọc Thạch, http://hoiyhoctphcm.org.vn/index.php?mod=dt&act=ct&id_cate=&id=197 (ngày truy cập: 10 / 06 / 2017) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh PHỤ LỤC NHÃN MẪU ĐƠNG KHƠ PCR HBV-HCV Nhãn cho mẫu âm tính Nhãn cho mẫu dương tính HBV Nhãn cho mẫu dương tính HCV Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh PHỤ LỤC PL2-1 Bảng tính tốn thống kê độ đồng mẫu HBV phần mềm Excel Lần Mean Variance Observations Df F P(F