Khảo sát tác động bảo vệ thận của sâm việt nam (panax vietnamensis ha et grushv , araliaceae) phòng ngừa tình trạng tổn thương thận do cyclosporin a

BỘ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN LÊ THANH TUYỀN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG BẢO VỆ THẬN CỦA SÂM VIỆT NAM (Panax vietnamensis Ha et Grushv., Araliaceae) PHÒNG NGỪA TÌNH TRẠNG TỔN THƯƠNG THẬN DO CYCLOSPORIN A LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – 2017 BỘ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN LÊ THANH TUYỀN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG BẢO VỆ THẬN CỦA SÂM VIỆT NAM (Panax vietnamensis Ha et Grushv., Araliaceae) PHỊNG NGỪA TÌNH TRẠNG TỔN THƯƠNG THẬN DO CYCLOSPORIN A Chuyên ngành: Dược lý – Dược lâm sàng Mã số: 60720405 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thầy hướng dẫn: PGS.TS ĐỖ THỊ HỒNG TƯƠI Thành phố Hồ Chí Minh – 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu trình bày luận văn trung thực chưa công bố công trình nghiên cứu khoa học khác Tác giả luận văn Nguyễn Lê Thanh Tuyền LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Cô PGS TS Đỗ Thị Hồng Tươi, người Thầy hướng dẫn em từ bước đường nghiên cứu khoa học, truyền cho em niềm đam mê để theo đuổi lĩnh vực Dược lý đầy khó khăn Em xin cảm ơn lời hướng dẫn, bảo Cô để định hướng cho em thực đề tài nói riêng học tập, cơng việc nói chung Em xin chân thành cảm ơn Cô ThS DS Huỳnh Thị Kim Loan, anh chị phòng Arbovirus, khoa Vi sinh – Miễn dịch, viện Pasteur TP HCM, đặc biệt anh Quân, chị Tâm tạo điều kiện thuận lợi, tận tình hướng dẫn, hỗ trợ em trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn nhóm nhiên cứu GS.TS Nguyễn Minh Đức, PGS TS Lê Minh Trí, TS Trương Cơng Trị hỗ trợ, cung cấp mẫu thử cho đề tài Em xin trân trọng cảm ơn quý thầy cô Bộ môn Dược lý, Bộ mơn Dược lâm sàng tồn thể q thầy Khoa Dược – ĐH Y Dược Tp HCM tận tình giảng dạy, truyền đạt kiến thức quý báu cho em suốt khóa học vừa qua Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Hội đồng dành thời gian để xem góp ý giúp luận văn hoàn thiện Tuyền xin chân thành cảm ơn bạn, anh chị khóa, anh chị đồng nghiệp, em sinh viên, đặc biệt Uyên, Tuyết, Linh, Tuyên, Thắng, Giang, Hải, Hân, Chi, Vinh, Thảo, Trang, chị Liên, anh Long, chị Vân ln đồng hành, nhiệt tình giúp đỡ, hỗ trợ Tuyền thời gian học tập thực đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đặc biệt đến Ba Mẹ, người yêu thương, tin tưởng, sát cánh con, chăm sóc, lo lắng cho để vững bước đường nghiên cứu khoa học Chị cảm ơn em gái ủng hộ động lực để chị thực đam mê ước mơ Em xin chân thành cảm ơn Nguyễn Lê Thanh Tuyền KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG BẢO VỆ THẬN CỦA SÂM VIỆT NAM (Panax vietnamensis Ha et Grushv., Araliaceae) PHỊNG NGỪA TÌNH TRẠNG TỔN THƯƠNG THẬN DO CYCLOSPORIN A Nguyễn Lê Thanh Tuyền Thầy hướng dẫn: PGS TS Đỗ Thị Hồng Tươi Mở đầu: Cyclosporin A (CsA) thuốc ức chế miễn dịch quan trọng sử dụng để ngăn ngừa tình trạng thải ghép điều trị bệnh tự miễn Tuy nhiên, ứng dụng lâm sàng CsA bị hạn chế số tác dụng phụ nghiêm trọng, đặc biệt độc tính thận Mục tiêu đề tài nhằm khảo sát tác động bảo vệ thận phịng ngừa tình trạng tổn thương thận CsA Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis) Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Tế bào LLC-PK1 nuôi cấy môi trường EMEM, bổ sung 10% FCS, mM L-glutamin, 100 IU/ml penicillin 100 µg/ml streptomycin Tế bào xử lý với CsA nồng độ 5, 10, 15, 20, 25, 50 µM 24, 48, 72 giờ, mật độ 1,5; 3,0; 4,5 x 104 tế bào/cm2, đánh giá ức chế tăng trưởng tế bào (test MTT), hoại tử (test LDH), stress oxy hóa qua lượng glutathion nội bào, hoạt hóa apoptosis (nhuộm AO/EB, định lượng ADN phân mảnh) để chọn mơ hình in vitro phù hợp Khảo sát tác dụng bảo vệ tế bào LLC-PK1 mẫu thử từ Sâm Việt Nam chưa/đã chế biến: cao toàn phần (SVN, SCB), saponin toàn phần (SaTP, SaCB), majonosid R2 (MR2), ocotillol (OCO) nồng độ tương ứng với cao toàn phần 100 200 µg/ml Khảo sát tác động bảo vệ thận SVN, SCB phịng ngừa tổn thương CsA (Sandimmun® tiêm phúc mô liều 100 mg/kg, lần/ngày ngày) gây chuột nhắt thông qua thông số sinh hóa tình trạng stress oxy hóa mơ thận Kết quả: Xử lý tế bào LLC-PK1 48 với CsA 15 µM, mật độ 3,0 x 104 tế bào/cm2 gây mơ hình in vitro mơ tình trạng tổn thương tế bào thận CsA CsA 15 µM làm giảm 36,3% tỷ lệ sống tế bào, ức chế tăng trưởng giảm bổ sung mẫu thử SVN, SCB, SaTP, SaCB, MR2 với tỷ lệ phòng ngừa từ 18 52% Tác dụng gây hoại tử tế bào CsA 15 µM giảm khoảng 48 - 84% bổ sung mẫu thử SCB, SaCB nồng độ; SVN, SaTP nồng độ 200 µg/ml CsA làm giảm 37,5% lượng GSH tế bào LLC-PK1 Cả nồng độ thử nghiệm mẫu thử SVN, SCB, SaCB nồng độ 100 µg/ml mẫu thử SaTP làm tăng lượng GSH với hiệu từ 54 - 217% Trên mơ hình in vivo, CsA làm tăng nồng độ ure creatinin máu 70% 93%, làm giảm 29% lượng GSH, tăng 33% lượng MDA so với lô sinh lý SVN SCB làm giảm tích lũy ure creatinin máu, làm tăng GSH, có SCB làm giảm lượng MDA so với lô chứng bệnh Kết luận: Các mẫu thử cao chiết toàn phần saponin toàn phần từ Sâm Việt Nam chưa/đã chế biến có tác dụng bảo vệ thận phịng ngừa tình trạng tổn thương CsA Từ khóa: Sâm Việt Nam, Sâm Việt Nam chế biến, bảo vệ thận, cyclosporin A STUDY ON RENOPROTECTIVE OF VIETNAMESE GINSENG (Panax vietnamensis Ha et Grushv., Araliaceae) TO PREVENT CYCLOSPORIN A – INDUCED NEPHROTOXICITY Nguyen Le Thanh Tuyen Supervisor: Assoc Prof Dr Do Thi Hong Tuoi Introduction: Cyclosporine A (CsA) is an important immunosuppressive agent that is used to prevent rejection in transplantation or to treat autoimmune diseases However, its clinical application has been limited by severe adverse side effects, particularly nephrotoxicity The aim of this study was to investigate the protective effects of Vietnamese ginseng (VG) (Panax vietnamensis) on cyclosporine A-induced nephrotoxicity Materials and Methods: LLC-PK1 cells were cultured in EMEM supplemented with 10% FCS, mM Lglutamine, 100 IU/ml penicillin and 100 µg/ml streptomycin Cells were treated with CsA at concentrations 5, 10, 15, 20, 25, 50 µM for 24, 48, 72 hours at densities 1,5; 3,0; 4,5 x 104 cells/cm2, evaluated cell poliferation (MTT test), necrosis (LDH test), oxydant stress (cellular glutathone content) and apoptosis activation (AO/EB staining, DNA fragment assay) to choose suitable in vitro model For in vitro test, raw and processed VG total extracts (RVG, PVG), crude saponin fractions (RVS, PVS), majonoside R2, and its ocotillol aglycon were used to evaluate protective effect on injury of LLC-PK1 cell induced by CsA The treatment doses of VG total extracts were 100 and 200 µg/ml, and those of crude saponin fractions (RVS, PVS), majonoside R2, and its ocotillol aglycon were equivalent to total extracts The in vivo test was carry out using raw and processed VG total extracts (RVG, PVG) to prevent the toxicity of CsA (Sandimmun® 100 mg/kg IP, once a day in three days) Serum bio-markers and oxidative stress status on kidney tissue were examined Results: At density of 3,0 x 104 cells/cm2, cells treated with 15 µM CsA for 48 hours reduced 36.3% of the cell viability Co-treatment of VG samples with CsA could reversed the loss of cell viability in range of 18-52% Both PVG and PVS at dose 100 and 200 µg/ml could significantly decrease the cytotoxicity of CsA (48-84%) while the effect of RVG and RVS showed at dose of 200 µg/ml CsA could deplete 37.5% GSH content in LLC-PK1 PVG, PVS at dose 100 and 200 µg/ml and RVG, RVS at dose of 200 µg/ml enhance GSH levels with efficiency of 54-217% On in vivo model, compared to control group, CsA increased BUN and serum creatinine at rate of 70% and 93%, decreased tissue contents of GSH and MDA by 29% and 33%, successively RVG and PVG decreased the accumulation of BUN and serum creatinine, increased tissue GSH However, only PVG could decrease the presence of MDA compared to CsA treated alone group Conclusion: All the total extract and crude saponin fraction of raw and processed Vietnamese Ginseng showed the nephroprotective effect against the injury induced by CsA Keywords: Vietnamese ginseng, processed Vietnamese ginseng, nephroprotective, cyclosporin A i MỤC LỤC MỤC LỤC i TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ THẬN 1.1.1 Cấu tạo 1.1.2 Chức 1.1.3 Độc tính thận 1.2 MỘT SỐ MƠ HÌNH NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH TRÊN THẬN 1.2.1 Mơ hình in vivo 1.2.2 Mơ hình in vitro 1.3 CYCLOSPORIN A 1.3.1 Dược lực học 1.3.2 Dược động học 1.3.3 Chỉ định 10 1.3.4 Độc tính 11 1.3.5 Mơ hình nghiên cứu độc tính thận cyclosporin A 11 1.4 SÂM VIỆT NAM 12 1.4.1 Nguồn gốc lịch sử phát triển 12 1.4.2 Phân bố, sinh thái 12 1.4.3 Mô tả 13 1.4.4 Thành phần hóa học 14 1.4.5 Tác dụng dược lý 15 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 Nguyễn Lê Thanh Tuyền ii 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 17 2.1.1 Dòng tế bào 17 2.1.2 Động vật thử nghiệm 17 2.1.3 Mẫu thử 17 2.1.4 Hóa chất 18 2.1.5 Thiết bị, dụng cụ thử nghiệm 19 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.2.1 Xây dựng mơ hình in vitro mơ tình trạng tổn thương tế bào thận cyclosporin A gây dòng tế bào LLC-PK1 20 2.2.1.1 Cấy chuyển tế bào LLC-PK1 20 2.2.1.2 Đếm tế bào dung dịch trypan blue 20 2.2.1.3 Bố trí thí nghiệm 21 2.2.1.4 Xử lý tế bào 22 2.2.1.5 Đánh giá tỷ lệ tế bào sống phương pháp MTT 22 2.2.1.6 Đánh giá tình trạng tăng sinh gốc tự 23 2.2.1.7 Định lượng protein phương pháp Bradford 23 2.2.1.8 Đánh giá tình trạng hoại tử tế bào 24 2.2.1.9 Đánh giá tình trạng hoạt hóa q trình apoptosis 24 2.2.2 Khảo sát tác động bảo vệ tế bào thận LLC-PK1 Sâm Việt Nam phòng ngừa tổn thương CsA gây 25 2.2.3 Khảo sát tác động bảo vệ thận Sâm Việt Nam phòng ngừa tổn thương thận CsA gây chuột nhắt 27 2.2.4 Phân tích kết xử lý số liệu thống kê 29 Chương KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 30 3.1 XÂY DỰNG MƠ HÌNH IN VITRO MƠ PHỎNG TÌNH TRẠNG TỔN THƯƠNG TẾ BÀO THẬN DO CYCLOSPORIN A GÂY RA TRÊN DÒNG TẾ BÀO LLC-PK1 30 3.1.1 Đánh giá ảnh hưởng mật độ tế bào, thời gian xử lý, dạng thuốc nồng độ CsA lên tỷ lệ sống tế bào LLC-PK1 30 Nguyễn Lê Thanh Tuyền Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-2  Thời gian (phút) CH3CN H2O – 11 21 21 11 – 25 21 → 32 79 → 68 25 – 35 32 → 40 68 → 60 35 – 40 40 – 95 60 - 40 – 60 95 60 – 61 95 → 21 → 79 61 – 71 21 79 Mẫu thử: Hòa tan 5,53 mg cao toàn phần Sâm Việt Nam vào methanol 70% để thu ml dung dịch thử, dung dịch thử sau ly tâm 16.000 vịng/phút lọc qua màng lọc PTFE 0,45 µm trước tiêm vào HPLC  Mẫu chuẩn: Pha hỗn hợp chuẩn ginsenosid Rg1, -Rb1, -Rd, M-R2 vào methanol 70% để dung dịch chuẩn có nồng độ 0,4 mg/mL; 0,15 mg/mL; 0,15 mg/mL; 0,5 mg/mL Hàm lượng saponin cao toàn phần Sâm Việt Nam: Rg1: 7,21% M-R2: 10,06% Rb1: 2,96% Rd: 3,01% Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-3 Phụ lục Bảng kết khảo sát tác động CsA dạng nguyên liệu sau 24 tiếp xúc lên tỷ lệ sống tế bào LLC-PK1 nuôi cấy mật độ khác 24 Mật độ tế bào Nồng độ CsA 1,5 x 104 tế bào/cm2 µM 0,972 1,292 1,309 1,142 0,934 1,057 µM 1,242 1,386 1,712 1,310 0,963 1,145 10 µM 1,314 1,612 1,666 1,570 1,407 1,292 15 µM 1,122 1,344 1,761 1,341 1,289 1,073 20 µM 1,219 1,438 1,233 1,087 1,406 1,092 25 µM 1,381 1,292 1,456 1,290 1,057 1,403 50 µM 1,099 1,335 1,327 1,296 1,092 1,401 µM 0,871 0,794 0,863 1,027 1,129 1,145 µM 1,197 1,394 1,401 0,749 1,273 1,296 10 µM 1,306 1,446 1,353 0,819 1,305 1,209 15 µM 1,312 1,171 1,170 0,959 1,398 1,293 20 µM 0,989 1,265 1,073 1,362 1,099 1,235 25 µM 1,040 1,223 1,201 0,940 1,298 1,025 50 µM 1,123 0,913 1,259 0,973 1,296 1,286 µM 1,308 1,257 1,135 1,185 1,457 1,323 µM 0,969 1,562 0,991 0,997 1,298 1,201 10 µM 1,645 1,491 1,374 1,589 1,320 1,407 15 µM 1,570 1,611 1,705 1,087 1,297 1,395 20 µM 1,298 1,487 1,439 1,028 1,328 1,302 25 µM 1,388 1,529 1,650 1,306 1,506 1,495 50 µM 0,893 1,395 1,100 0,992 1,137 1,205 3,0 x 10 tế bào/cm2 4,5 x 104 tế bào/cm2 OD 570nm Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-4 Phụ lục Bảng kết khảo sát tác động CsA dạng nguyên liệu sau 48 tiếp xúc lên tỷ lệ sống tế bào LLC-PK1 nuôi cấy mật độ khác 48 Mật độ tế bào Nồng độ CsA 1,5 x 104 tế bào/cm2 µM 0,608 0,614 0,535 0,634 0,597 0,603 µM 0,609 0,593 0,661 0,604 0,632 0,600 10 µM 0,573 0,544 0,570 0,581 0,572 0,559 15 µM 0,497 0,578 0,583 0,581 0,584 0,550 20 µM 0,499 0,542 0,505 0,528 0,510 0,486 25 µM 0,461 0,521 0,504 0,492 0,485 0,511 50 µM 0,488 0,568 0,570 0,502 0,549 0,531 µM 0,755 0,755 0,720 0,803 0,750 0,762 µM 0,617 0,633 0,611 0,641 0,594 0,649 10 µM 0,483 0,519 0,54 0,554 0,607 0,522 15 µM 0,395 0,396 0,433 0,394 0,458 0,412 20 µM 0,552 0,428 0,496 0,447 0,421 0,404 25 µM 0,546 0,454 0,489 0,420 0,463 0,449 50 µM 0,587 0,510 0,551 0,510 0,525 0,498 µM 0,922 0,768 0,801 0,866 0,803 0,847 µM 0,638 0,662 0,686 0,539 0,637 0,625 10 µM 0,538 0,544 0,550 0,512 0,501 0,572 15 µM 0,414 0,429 0,444 0,425 0,510 0,413 20 µM 0,429 0,442 0,463 0,397 0,492 0,438 25 µM 0,502 0,479 0,499 0,489 0,488 0,476 50 µM 0,542 0,545 0,532 0,562 0,503 0,511 3,0 x 10 tế bào/cm2 4,5 x 104 tế bào/cm2 OD 570nm Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-5 Phụ lục Bảng kết khảo sát tác động CsA dạng nguyên liệu sau 72 tiếp xúc lên tỷ lệ sống tế bào LLC-PK1 nuôi cấy mật độ khác 72 Mật độ tế bào Nồng độ CsA 1,5 x 104 tế bào/cm2 µM 0,599 0,581 0,543 0,539 0,602 0,593 µM 0,601 0,584 0,514 0,549 0,599 0,558 10 µM 0,513 0,596 0,502 0,549 0,573 0,532 15 µM 0,472 0,457 0,496 0,518 0,527 0,438 20 µM 0,506 0,497 0,475 0,428 0,511 0,450 25 µM 0,523 0,481 0,46 0,451 0,502 0,465 50 µM 0,488 0,519 0,448 0,46 0,492 0,463 µM 0,638 0,622 0,648 0,641 0,622 0,649 µM 0,495 0,498 0,476 0,503 0,483 0,521 10 µM 0,392 0,411 0,395 0,414 0,484 0,477 15 µM 0,375 0,369 0,431 0,417 0,400 0,383 20 µM 0,426 0,402 0,377 0,401 0,390 0,359 25 µM 0,413 0,417 0,398 0,421 0,385 0,420 50 µM 0,395 0,452 0,452 0,477 0,428 0,419 µM 0,578 0,584 0,598 0,606 0,634 0,659 µM 0,509 0,494 0,490 0,509 0,527 0,515 10 µM 0,443 0,555 0,436 0,451 0,420 0,575 15 µM 0,392 0,378 0,401 0,411 0,418 0,429 20 µM 0,378 0,451 0,433 0,391 0,387 0,402 25 µM 0,413 0,398 0,442 0,426 0,437 0,415 50 µM 0,429 0,414 0,405 0,415 0,459 0,444 3,0 x 10 tế bào/cm2 4,5 x 104 tế bào/cm2 OD 570nm Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-6 Phụ lục Bảng kết khảo sát tác động CsA dạng viên nang mềm Sandimmun Neoral® sau 24 tiếp xúc lên tỷ lệ sống tế bào LLC-PK1 nuôi cấy mật độ khác 24 Mật độ tế bào Nồng độ CsA µM 0,471 0,477 0,443 0,419 0,462 0,445 µM 0,478 0,459 0,429 0,454 0,437 0,471 10 µM 0,422 0,442 0,439 0,431 0,428 0,444 15 µM 0,457 0,457 0,483 0,440 0,481 0,437 20 µM 0,440 0,485 0,437 0,440 0,422 0,479 25 µM 0,417 0,539 0,434 0,441 0,482 0,437 50 µM 0,369 0,409 0,412 0,410 0,397 0,415 µM 0,518 0,48 0,487 0,442 0,505 0,437 µM 0,446 0,406 0,412 0,459 0,427 0,459 10 µM 0,371 0,436 0,423 0,418 0,394 0,430 15 µM 0,363 0,405 0,415 0,423 0,376 0,429 20 µM 0,385 0,400 0,39 0,399 0,411 0,378 25 µM 0,378 0,387 0,401 0,398 0,382 0,399 50 µM 0,375 0,412 0,428 0,401 0,427 0,386 µM 0,502 0,512 0,496 0,480 0,522 0,488 µM 0,364 0,361 0,371 0,410 0,405 0,368 10 µM 0,313 0,308 0,303 0,314 0,320 0,301 15 µM 0,309 0,289 0,297 0,318 0,287 0,319 20 µM 0,309 0,282 0,292 0,351 0,344 0,281 25 µM 0,312 0,288 0,277 0,297 0,303 0,289 50 µM 0,323 0,292 0,302 0,303 0,316 0,300 1,5 x 10 tế bào/cm2 3,0 x 104 tế bào/cm2 4,5 x 10 tế bào/cm2 OD 570nm Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-7 Phụ lục Bảng kết khảo sát tác động CsA dạng viên nang mềm Sandimmun Neoral® sau 48 tiếp xúc lên tỷ lệ sống tế bào LLC-PK1 nuôi cấy mật độ khác 48 Mật độ tế bào Nồng độ CsA 1,5 x 104 tế bào/cm2 3,0 x 104 tế bào/cm2 µM 0,951 1,121 0,946 0,928 0,952 1,022 µM 1,050 0,940 0,865 0,953 0,962 0,940 10 µM 0,856 0,860 0,639 0,709 0,753 0,811 15 µM 0,812 0,646 0,656 0,659 0,628 0,725 20 µM 0,678 0,597 0,658 0,807 0,673 0,712 25 µM 0,565 0,610 0,605 0,610 0,557 0,658 50 µM 0,565 0,673 0,516 0,612 0,574 0,626 µM 0,857 1,068 0,950 0,959 0,886 1,043 µM 0,803 0,676 0,900 0,758 0,722 0,873 10 µM 0,565 0,571 0,568 0,594 0,612 0,559 15 µM 0,510 0,518 0,550 0,495 0,549 0,479 20 µM 0,487 0,499 0,483 0,490 0,475 0,513 25 µM 0,482 0,484 0,492 0,483 0,478 0,493 50 µM 0,483 0,496 0,454 0,476 0,445 0,489 µM 0,906 0,766 0,904 0,772 0,852 0,807 µM 0,629 0,628 0,637 0,625 0,678 0,582 10 µM 0,542 0,548 0,499 0,530 0,481 0,537 15 µM 0,495 0,493 0,478 0,458 0,479 0,462 20 µM 0,458 0,450 0,464 0,512 0,501 0,436 25 µM 0,442 0,452 0,423 0,464 0,479 0,402 50 µM 0,468 0,434 0,460 0,421 0,433 0,461 4,5 x 10 tế bào/cm2 OD 570nm Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-8 Phụ lục Bảng kết khảo sát tác động CsA dạng viên nang mềm Sandimmun Neoral® sau 72 tiếp xúc lên tỷ lệ sống tế bào LLC-PK1 nuôi cấy mật độ khác 72 Mật độ tế bào Nồng độ CsA 1,5 x 104 tế bào/cm2 3,0 x 104 tế bào/cm2 µM 0,727 0,648 0,688 0,712 0,648 0,736 µM 0,722 0,505 0,637 0,649 0,610 0,643 10 µM 0,6 0,569 0,613 0,636 0,584 0,626 15 µM 0,542 0,549 0,521 0,534 0,548 0,525 20 µM 0,583 0,576 0,466 0,495 0,493 0,539 25 µM 0,551 0,465 0,444 0,466 0,512 0,451 50 µM 0,506 0,514 0,545 0,55 0,487 0,574 µM 0,686 0,672 0,747 0,613 0,663 0,681 µM 0,719 0,706 0,792 0,747 0,738 0,745 10 µM 0,579 0,596 0,646 0,675 0,613 0,637 15 µM 0,557 0,519 0,49 0,526 0,504 0,541 20 µM 0,445 0,412 0,497 0,43 0,459 0,435 25 µM 0,412 0,448 0,39 0,385 0,422 0,4 50 µM 0,391 0,384 0,36 0,385 0,402 0,379 µM 0,759 0,672 0,755 0,717 0,738 0,722 µM 0,717 0,679 0,77 0,749 0,704 0,753 10 µM 0,581 0,633 0,665 0,588 0,654 0,592 15 µM 0,516 0,592 0,531 0,458 0,508 0,541 20 µM 0,422 0,494 0,505 0,431 0,491 0,437 25 µM 0,407 0,506 0,425 0,421 0,423 0,449 50 µM 0,364 0,366 0,341 0,359 0,372 0,347 4,5 x 10 tế bào/cm2 OD 570nm Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-9 Phụ lục Bảng kết đánh giá tình trạng tổn thương thận gây CsA tác dụng phịng ngừa silymarin Đánh giá tình trạng ức chế tăng trưởng tế bào LLC-PK1 Mẫu OD 570nm Sinh lý (CsA µM) 0,648 0,607 0,627 0,640 0,647 0,702 Bệnh lý (CsA 15 µM) 0,375 0,369 0,431 0,417 0,378 0,395 Chứng dương silymarin 0,549 0,495 0,518 0,496 0,586 0,538 Đánh giá tình trạng hoại tử tế bào LLC-PK1 Mẫu Hoạt tính LDH (mU/ml) Sinh lý (CsA µM) 49,6 62,5 58,3 56,7 66,1 54,9 Bệnh lý (CsA 15 µM) 69,6 88,2 74,5 81,7 70,9 82,2 Chứng dương silymarin 62,3 73,9 68,2 76,7 66,5 54,4 Đánh giá tình trạng tăng sinh gốc tự Mẫu Hàm lượng GSH (µM/mg protein) Sinh lý (CsA µM) 80,7 68,3 73,1 77,9 62,7 71,0 Bệnh lý (CsA 15 µM) 48,3 55,2 49,1 47,7 60,5 44,4 Chứng dương silymarin 56,3 72,1 64,7 59,2 60,0 62,8 Đánh giá tình trạng hoạt hóa q trình apoptosis tế bào LLC-PK1 Mẫu % ADN phân mảnh Sinh lý (CsA µM) 23,0 19,8 23,5 22,6 24,7 21,5 Bệnh lý (CsA 15 µM) 37,8 36,7 37,4 29,3 33,7 38,5 Chứng dương silymarin 25,9 34,1 38,7 32,6 27,6 36,5 Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-10 Phụ lục Bảng kết khảo sát tác dụng bảo vệ tế bào thận LLC-PK1 phòng ngừa ức chế tăng trưởng CsA gây mẫu thử từ Sâm Việt Nam Mẫu thử OD 570nm Sinh lý 0,671 0,623 0,605 0,610 0,619 0,614 NĐ1 0,477 0,475 0,498 0,507 0,490 0,473 NĐ2 0,456 0,456 0,485 0,483 0,470 0,469 NĐ1 0,529 0,488 0,480 0,478 0,578 0,492 NĐ2 0,461 0,542 0,556 0,584 0,478 0,467 NĐ1 0,438 0,402 0,410 0,404 0,411 0,425 NĐ2 0,447 0,444 0,445 0,400 0,463 0,492 NĐ1 0,448 0,445 0,502 0,549 0,524 0,495 NĐ2 0,484 0,514 0,500 0,539 0,514 0,501 NĐ1 0,473 0,422 0,461 0,404 0,420 0,451 NĐ2 0,513 0,421 0,402 0,493 0,451 0,423 NĐ1 0,419 0,392 0,390 0,375 0,400 0,419 NĐ2 0,475 0,400 0,407 0,382 0,398 0,429 Bệnh lý 0,407 0,383 0,393 0,389 0,413 0,397 Silymarin 0,554 0,497 0,592 0,459 0,504 0,591 SVN SCB SaTP SaCB MR2 OCO Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-11 Phụ lục 10 Bảng kết khảo sát tác dụng bảo vệ tế bào thận LLC-PK1 phịng ngừa tình trạng hoại tử CsA gây Sâm Việt Nam Mẫu thử Hoạt tính LDH (mU/ml) Sinh lý 74,0 56,6 65,0 68,2 60,8 56,8 NĐ1 84,0 66,6 82,0 68,3 72,1 88,9 NĐ2 89,7 69,2 73,4 72,1 64,8 83,0 NĐ1 70,8 69,8 70,8 79,1 67,5 77,3 NĐ2 76,4 62,5 69,8 63,5 64,9 70,2 NĐ1 89,6 88,2 95,0 76,8 68,6 79,2 NĐ2 70,4 92,7 86,0 72,5 69,8 73,5 NĐ1 69,2 80,3 65,6 79,0 73,6 85,0 NĐ2 90,7 75,0 63,5 81,6 76,4 70,0 NĐ1 104,3 91,8 90,7 103,3 88,6 79,2 NĐ2 84,4 87,6 88,6 103,3 88,6 79,2 NĐ1 126,8 97,0 110,6 91,8 100,3 99,8 NĐ2 104,3 93,8 90,7 109,7 90,7 69,2 Bệnh lý 98,8 77,0 100,6 93,3 89,3 81,8 Silymarin 80,6 88,3 78,6 69,2 80,3 76,2 SVN SCB SaTP SaCB MR2 OCO Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-12 Phụ lục 11 Bảng kết khảo sát tác dụng bảo vệ tế bào thận LLC-PK1 phịng ngừa tình trạng tăng sinh gốc tự do CsA gây Sâm Việt Nam Mẫu thử Hàm lượng GSH (µM/mg protein) Sinh lý 102,0 95,7 77,0 83,0 103,4 76,4 NĐ1 98,2 80,8 111,5 87,3 79,9 92,5 NĐ2 78,5 78,0 82,7 68,3 87,0 75,9 NĐ1 128,9 134,1 122,3 104,9 148,7 133,8 NĐ2 119,4 87,1 131,9 120,6 96,7 102,6 NĐ1 67,6 86,4 77,5 68,2 84,2 79,0 NĐ2 73,2 59,2 62,0 82,5 87,4 60,7 NĐ1 87,1 67,6 70,7 77,0 72,8 66,8 NĐ2 60,8 78,5 73,2 67,1 82,7 83,0 NĐ1 70,7 69,5 75,0 59,4 46,6 55,7 NĐ2 56,6 64,3 48,2 53,9 53,0 47,7 NĐ1 46,8 38,1 51,7 41,6 54,2 45,1 NĐ2 46,0 40,3 50,3 54,8 42,1 49,5 Bệnh lý 58,8 42,4 45,7 60,8 61,2 67,1 Silymarin 64,6 72,3 63,0 86,3 80,1 66,9 SVN SCB SaTP SaCB MR2 OCO Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-13 Phụ lục 12 Bảng kết nồng độ ure máu chuột sau 14 ngày thử nghiệm Nồng độ Ure/máu (mmol/l) STT/Lô Sinh lý Chứng bệnh NAC SVN SCB 6,0 20,0 10,8 15,5 9,9 9,3 16,2 10,8 8,4 6,5 9,0 13,5 7,0 9,3 6,0 9,6 15,0 10,5 16,9 7,9 7,4 11,8 13,0 10,5 6,0 8,1 8,9 16,0 7,0 9,5 8,8 10,5 5,4 12,0 9,0 10,0 18,9 10,1 9,2 14,0 5,1 15,9 11,5 8,8 7,0 10 10,9 12,6 8,6 10,0 10,3 Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-14 Phụ lục 13 Bảng kết nồng độ creatinin máu chuột sau 14 ngày thử nghiệm Nồng độ Creatinin/máu (µmol/l) STT/Lơ Sinh lý Chứng bệnh NAC SVN SCB 45,5 79,6 44,7 80,3 60,7 45,8 42,0 69,3 35,3 55,9 44,2 123,3 63,0 72,4 47,7 44,4 55,2 75,0 53,0 45,8 42,1 56,3 50,6 62,5 45,0 48,9 100,5 70,1 45,2 49,3 43,5 100,3 60,8 52,2 42,3 55,4 91,0 36,5 99,5 42,5 38,5 81,0 66,3 75,2 45,9 10 40,4 137,2 45,0 47,3 44,1 Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-15 Phụ lục 14 Bảng kết hàm lượng GSH mô thận chuột Hàm lượng GSH (µmol/ml dịch đồng thể) STT/Lơ Sinh lý Chứng bệnh NAC SVN SCB 165,5 136,8 160,2 188,1 188,9 173,6 129,5 166,3 166,7 188,1 168,2 108,9 161,3 215,0 203,8 187,8 142,9 206,4 176,3 179,7 228,4 131,1 200,8 166,7 179,0 179,3 117,7 174,7 174,7 164,4 205,4 124,9 170,1 220,3 225,7 187,0 149,1 173,6 225,3 169,0 161,3 149,8 148,4 161,0 174,4 10 163,6 97,4 157,9 190,1 237,9 Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL-16 Phụ lục 15 Bảng kết hàm lượng MDA mô thận chuột Hàm lượng MDA (nmol/ml dịch đồng thể) STT/Lô Sinh lý Chứng bệnh NAC SVN SCB 5,52 9,23 6,59 7,62 7,25 6,76 6,71 7,67 6,76 6,18 4,14 7,14 7,92 7,66 6,00 5,55 6,97 6,01 7,88 7,58 6,28 6,31 7,29 8,08 7,62 5,20 8,55 5,95 5,98 7,12 5,92 8,20 7,50 7,35 6,21 6,43 7,49 6,11 7,45 5,91 4,71 7,67 6,79 8,05 5,15 10 6,43 7,52 6,29 6,34 7,34 Nguyễn Lê Thanh Tuyền Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... MINH NGUYỄN LÊ THANH TUYỀN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG BẢO VỆ THẬN C? ?A SÂM VIỆT NAM (Panax vietnamensis Ha et Grushv. , Araliaceae) PHÒNG NG? ?A TÌNH TRẠNG TỔN THƯƠNG THẬN DO CYCLOSPORIN A Chuyên ngành: Dược... phịng ng? ?a tình trạng tổn thương CsA Từ kh? ?a: Sâm Việt Nam, Sâm Việt Nam chế biến, bảo vệ thận, cyclosporin A STUDY ON RENOPROTECTIVE OF VIETNAMESE GINSENG (Panax vietnamensis Ha et Grushv. , Araliaceae). .. Việt Nam cần thiết để đ? ?a Sâm Việt Nam sánh ngang với loại Sâm nêu Từ tình hình thực tế trên, đề tài thực ? ?Khảo sát tác động bảo vệ thận Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv. , Araliaceae)