Luận án tiến sĩ y học (HOÀN CHỈNH) nghiên cứu phân lập, nuôi cấy, bảo quản và bảo quản tế bào gốc trung mô từ tủy xương người

MỘT SỐ CƠNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Trần Thị Thanh Hương, Trần Vân Khánh, Nguyễn Thị Hà, Đỗ Dỗn Lợi, Tạ Thành Văn, (2010), “Phân lập, ni cấy tế bào gốc trung mô từ tủy xương người”, Tạp chí Nghiên cứu Y học, Tập 66 - số 1, 36 - 41 Trần Thị Thanh Hương, Trần Vân Khánh, Nguyễn Thị Hà, Đỗ Doãn Lợi, Tạ Thành Văn, (2010), “Nghiên cứu sử dụng 5-azacytidine để biệt hóa tế bào gốc trung mô theo hướng tim”, Tạp chí Nghiên cứu Y học, Tập 69 - số 4, Trần Thị Thanh Hương, Trần Vân Khánh, Nguyễn Thị Hà, Tạ Thành Văn, Đỗ Doãn Lợi, (2010), “Biểu marker bề mặt tế bào gốc trung mô nuôi cấy nguồn gốc tủy xương người”, Tạp chí Y học Việt Nam, Tập 372, Tháng - số 2, 143 – 148 Trần Thị Thanh Hương, Trần Vân Khánh, Nguyễn Thị Hà, Đỗ Doãn Lợi, Tạ Thành Văn, (2011), “Nghiên cứu biểu số gen đặc trưng cho tổ chức tim tế bào gốc trung mô nuôi cấy q trình biệt hóa theo hướng tế bào tim”, Tạp chí Nghiên cứu Y học, Tập 72 số 1, - Trần Thị Thanh Hương, Phạm Xuân Thắng, Trần Vân Khánh, Nguyễn Thị Hà, Tạ Thành Văn, (2011), “Nghiên cứu biến đổi hình thái cấu trúc tế bào gốc trung mô số điều kiện biệt hóa in vitro”, Tạp chí Y học Việt Nam, Tập 378, Tháng - số 1, - 13 Lời cám ơn Tôi xin chân thành cảm ơn Thủ trưởng Viện 69, Thủ trưởng Bộ Tư lệnh bảo vệ Lăng Chủ tịch Hồ Chí Minh; Ban giám hiệu, Phòng Đào tạo Sau Đại học – Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập hồn thành luận án Tơi xin trân trọng bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Tạ Thành Văn, người Thầy hướng dẫn, tạo điều kiện cho suốt trình thực luận án, đồng thời người Thầy định hướng truyền cho lòng say mê kinh nghiệm quý báu nghiên cứu khoa học PGS.TS Nguyễn Thị Hà, người Thầy bảo, hướng dẫn tơi suốt q trình học tập nghiên cứu chuyên ngành Hóa sinh Y học, người Thầy không gương lao động khoa học mà gương sống TS Trần Vân Khánh, Trung tâm Nghiên cứu b Gen – Protein, Trường Đại học Y Hà Nội, người giúp đỡ thực nhiều kỹ thuật nghiên cứu Tôi xin trân trọng chân thành cảm ơn Khoa Sinh hóa - Viện 69 - Bộ Tư lệnh bảo vệ Lăng Chủ tịch Hồ Chí Minh nhiệt tình giúp đỡ, ủng hộ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập PGS.TS Phạm Thiện Ngọc, Trưởng mơn Hóa sinh thầy mơn Hóa sinh, Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình thực luận án GS.TS Trịnh Bình, ngun Trưởng mơn Mơ phơi, Trường Đại học Y Hà Nội cho tơi nhiều góp ý sâu sắc cho luận án TS Lý Tuấn Khải, Trưởng Khoa Huyết học - Bệnh viện Quân đội 108, hỗ trợ cho việc thu thập mẫu bệnh phẩm nghiên cứu Các cán nhân viên Trung tâm Nghiên cứu Gen – Protein, môn Hóa sinh, mơn Y sinh học Di truyền, trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện cho học tập sử dụng trang thiết bị trung tâm, môn để nghiên cứu hồn thành đề tài Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn bố mẹ anh chị em gia đình, đặc biệt chồng chỗ dựa vững tơi, ln thương u, khuyến khích, động viên tạo điều kiện tốt tình cảm, tinh thần vật chất cho tơi để hồn thành tốt chương trình học tập thực thành công luận án Hà Nội, tháng năm LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận án CÁC CHỮ VIẾT TẮT cAMP cycle Adenosin mono phosphat DNA Deoxyribonucleic Acid EGC Embryonic Germ Cells – Tế bào mầm phôi ESC Embryonic Stem Cells –Tế bào gốc phôi FACS Fluorescence-activated cell sorting – (Chọn lựa tế bào huỳnh quang ) HSC Hematopoietic Stem Cells – Tế bào gốc tạo máu ICC Immunocytochemistry – Hóa miễn dịch tế bào ISCT International Society for Cellular Therapy – (Hiệp hội quốc tế liệu pháp tế bào) KHV Kính hiển vi MSC Mesenchymal Stem Cells - Tế bào gốc trung mô NMCT Nhồi máu tim RNA Ribonucleic Acid RT – PCR Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction (Phản ứng tổng hợp chuỗi ngược) DANH MỤC BẢNG, BIỂU ĐỒ, SƠ ĐỒ Bảng 1.1 Phân loại số marker bề mặt tế bào gốc trung mô 12 Bảng 1.2 Một số điều kiện nuôi cấy tế bào gốc trung mô 26 Bảng 1.3 Một số loại môi trường huyết sử dụng phổ biến nuôi cấy tế bào gốc trung mô 27 Bảng 1.4 Thống kê thử nghiệm lâm sàng tế bào gốc trung mô bệnh tim mạch 37 Bảng 2.1 Các cặp mồi kỹ thuật PCR 40 Bảng 3.1 Tỷ lệ áp dụng thành cơng qui trình phân lập, ni cấy qui trình bảo quản, phục hồi ni cấy tế bào gốc trung mô tủy xương người 57 Bảng 3.2 Kích thước đường kính ngang nhân tế bào nuôi cấy (n= 30) 62 Bảng 3.3 Biểu marker bề mặt tập hợp tế bào nuôi cấy, giai đoạn P1 71 Bảng 3.4 Mức độ biểu marker bề mặt CD13, CD73, CD90 tập hợp tế bào nuôi cấy, giai đoạn P1 kỹ thuật FACS 71 Bảng 3.5 Kết so sánh mức độ biểu gen MEF2C MSC khơng biệt hóa MSC biệt hóa theo phương pháp Tomita cs, sử dụng gen tham chiếu β-actin 86 Biểu đồ 2.1 Cường độ tín hiệu huỳnh quang phân tích biểu marker bề mặt MSC kỹ thuật FACS 49 Biểu đồ 3.1 Biểu đồ phân tích FACS biểu CD34 bề mặt tế bào nuôi cấy giai đoạn P0 P1 63 Biểu đồ 3.2 Biểu đồ phân tích FACS biểu CD34 bề mặt tế bào nuôi cấy giai đoạn P0 P1 65 Biểu đồ 3.3 Các biểu đồ phân tích FACS biểu CD13 bề mặt tế bào nuôi cấy giai đoạn P1 68 Biểu đồ 3.4 Biểu đồ phân tích FACS biểu CD73 bề mặt tế bào nuôi cấy giai đoạn P0 P1 69 Biểu đồ 3.5 Biểu đồ phân tích FACS biểu CD90 bề mặt tế bào nuôi cấy giai đoạn P0 P1 70 Sơ đồ 1.1 Phân loại tế bào gốc tương ứng theo giai đoạn hình thành phát triển người Sơ đồ 2.1 Thiết kế nghiên cứu 41 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, HÌNH ẢNH Hình 1.1 Sự khác biệt tế bào gốc tế bào tiền thân Hình 1.2 Khả biệt hóa tế bào gốc tạo máu tế bào gốc trung mô tủy xương Hình 1.3 Khả đa biệt hóa in vitro tạo số dòng tế bào chức tế bào gốc trung mô 11 Hình 1.4 Nhuộm von Kossa tế bào gốc trung mơ sau biệt hóa tạo nguyên bào xương (C) đối chứng không biệt hóa (D) 17 Hình 1.5 Nhuộm Oil Red O tế bào gốc trung mơ sau biệt hóa tạo tế bào mỡ (E) đối chứng khơng biệt hóa (F) 18 Hình 1.6 Nhuộm Collagen typ II tế bào gốc trung mô sau biệt hóa tạo tế bào sụn (G) đối chứng khơng biệt hóa (H) 19 Hình 1.7 Các giai đoạn mơ bệnh học bệnh nhồi máu tim 29 Hình 1.8 Minh họa số tác nhân cảm ứng thúc đẩy trình hình thành tim động vật có xương sống 30 Hình 1.9 Hình ảnh mơ tim kính hiển vi điện tử truyền qua 34 Hình 2.1 Mơ hình phân lớp tế bào đơn nhân tủy xương kỹ thuật ly tâm theo gradient tỷ trọng 42 Hình 2.2 Dụng cụ hạ nhiệt độ bảo quản tế bào nuôi cấy 45 Hình 2.3 Mơ hình ngun lý tạo dịng thiết bị đếm tế bào dịng chảy 47 Hình 2.4 Mơ hình khuyếch đại tín hiệu phát phức hệ Enzym - Strepavidin - Biotin nhuộm hóa miễn dịch tế bào 50 Hình 3.1 Hình ảnh tế bào bám dính phát triển bề mặt nhựa ni cấy, ngày thứ 15, giai đoạn P0, HE x 100 58 Hình 3.2 Hình ảnh tế bào bám dính phát triển bề mặt nhựa nuôi cấy, ngày thứ 20, giai đoạn P0, HE x 100 59 Hình 3.3 Hình thái mật độ tế bào sau cấy chuyển giai đoạn nhân nuôi, HE x200 60 Hình 3.4 Hình ảnh tế bào ni cấy dạng hình sao, hình sợi HE x100 61 Hình 3.5 Hình ảnh tế bào ni cấy dạng hình thoi HE x 100 61 Hình 3.6 Nhuộm kháng thể đơn dịng kháng CD34 lát cắt mẫu tế bào nuôi cấy giai đoạn P1, ICC x200 64 Hình 3.7 Nhuộm kháng thể đơn dòng kháng CD34 lát cắt mẫu tế bào nuôi cấy giai đoạn P3, ICC x 200 64 Hình 3.8 Nhuộm kháng thể đơn dịng kháng CD45 lát cắt mẫu tế bào nuôi cấy giai đoạn P1, ICC x200 66 Hình 3.9 Nhuộm kháng thể đơn dòng kháng CD45 lát cắt mẫu tế bào nuôi cấy giai đoạn P3, ICC x 200 67 Hình 3.10 Tế bào ni cấy biệt hóa theo hướng tạo tế bào mỡ, sau biệt hóa 10 ngày, nhuộm phương pháp Oil – Red – O x 100 72 Hình 3.11 Tế bào ni cấy biệt hóa theo hướng tạo tế bào mỡ, sau 10 ngày biệt hóa, nhuộm phương pháp Oil – Red – O x200 73 Hình 3.12 Tế bào gốc trung mơ phát triển sau bảo quản phục hồi nuôi cấy, HE x 100 74 Hình 3.13 Hình ảnh siêu cấu trúc phần tế bào gốc trung mô sau bảo quản phục hồi nuôi cấy, TEM x3 000 74 Hình 3.14 Tế bào gốc trung mơ khơng biệt hóa kính hiển vi đối pha x200 76 Hình 3.15 Tế bào gốc trung mơ biệt hóa 5- azacitidine tuần kính hiển vi đối pha x200 77 Hình 3.16 Hình ảnh siêu cấu trúc phần tế bào gốc trung mơ khơng biệt hóa TEM x2 500 78 Hình 3.17 Hình ảnh siêu cấu trúc phần tế bào gốc trung mô biệt hóa theo hướng tạo tế bào tim theo phương pháp Tomita cs 79 Hình 3.18 Hình ảnh siêu cấu trúc xơ trung gian tế bào gốc trung mơ biệt hóa sau tuần theo phương pháp Tomita cs 80 Hình 3.19 Nhuộm kháng thể kháng Desmin tế bào gốc trung mơ biệt hóa sau tuần theo phương pháp Tomita cs ICC x 400 81 Hình 3.20 Hình ảnh điện di sản phẩm RT-PCR biểu số gen đặc trưng tế bào tim tế bào gốc trung mơ biệt hóa sau tuần theo phương pháp Tomita cs 82 Hình 3.21 Hình ảnh điện di sản phẩm RT-PCR biểu gen MEF2C tế bào gốc trung mô biệt hóa sau - tuần theo phương pháp Tomita cs 83 Hình 3.22 Hình ảnh kết Real-time PCR gen MEF2C tế bào gốc trung mơ khơng định hướng biệt hóa sau biệt hóa ÷ tuần 84 Hình 3.23 Hình ảnh kết Real-time PCR gen β - actin tế bào gốc trung mơ khơng định hướng biệt hóa sau biệt hóa ÷ tuần 85 Hình 3.24 Hình ảnh điện di sản phẩm RT-PCR biểu gen đặc trưng biệt hóa tế bào tim MSC biệt hóa ngày theo phương pháp Shim cs 87 Hình 4.1 Sự khác biệt siêu cấu trúc tế bào gốc trung mơ khơng biệt hóa tế bào gốc trung mơ biệt hóa theo hướng tạo tế bào tim – azacitidin – TEM 106 MỘT SỐ CƠNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Trần Thị Thanh Hương, Trần Vân Khánh, Nguyễn Thị Hà, Đỗ Dỗn Lợi, Tạ Thành Văn, (2010), “Phân lập, ni cấy tế bào gốc trung mô từ tủy xương người”, Tạp chí Nghiên cứu Y học, Tập 66 - số 1, 36 - 41 Trần Thị Thanh Hương, Trần Vân Khánh, Nguyễn Thị Hà, Đỗ Doãn Lợi, Tạ Thành Văn, (2010), “Nghiên cứu sử dụng 5-azacytidine để biệt hóa tế bào gốc trung mô theo hướng tim”, Tạp chí Nghiên cứu Y học, Tập 69 số 4, Trần Thị Thanh Hương, Trần Vân Khánh, Nguyễn Thị Hà, Tạ Thành Văn, Đỗ Doãn Lợi, (2010), “Biểu marker bề mặt tế bào gốc trung mô nuôi cấy nguồn gốc tủy xương người”, Tạp chí Y học Việt Nam, Tập 372, Tháng - số 2, 143 – 148 Trần Thị Thanh Hương, Trần Vân Khánh, Nguyễn Thị Hà, Đỗ Doãn Lợi, Tạ Thành Văn, (2011), “Nghiên cứu biểu số gen đặc trưng cho tổ chức tim tế bào gốc trung mô nuôi cấy q trình biệt hóa theo hướng tế bào tim”, Tạp chí Nghiên cứu Y học, Tập 72 - số 1, - Trần Thị Thanh Hương, Phạm Xuân Thắng, Trần Vân Khánh, Nguyễn Thị Hà, Tạ Thành Văn, (2011), “Nghiên cứu biến đổi hình thái cấu trúc tế bào gốc trung mô số điều kiện biệt hóa in vitro”, Tạp chí Y học Việt Nam, Tập 378, Tháng - số 1, - 13 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Phạm Phan Địch, Trịnh Bình, (2002) Mơ liên kết thức - Mô sụnMô xương, Mô học, Nhà xuất Y học, 142 - 188 Phan Kim Ngọc, Phạm Văn Phúc, (2007) Nuôi cấy tế bào động vật, Công nghệ sinh học người động vật, Nhà xuất giáo dục, 127 – 207 Phan Kim Ngọc, Phạm Văn Phúc, (2007) Tế bào gốc, Công nghệ sinh học người động vật, Nhà xuất giáo dục, 367 – 417 Phạm Mạnh Hùng, Đỗ Thúy Cần, Nguyễn Thị Thu Hòa, Nguyễn Ngọc Quý, Nguyễn Quốc Anh, Đỗ Doãn Lợi, Nguyễn Lân Việt, (2010) Đánh giá chức thất trái bệnh nhân suy tim nặng sau nhồi máu tim cấp điều trị tế bào gốc tủy xương Tạp chí Tim mạch học Việt Nam, số 52 Huỳnh Duy Thao, Trần thị Thanh Thủy, Trần Công Toại, (2010) Nuôi cấy biệt hóa tế bào gốc trung mơ tủy xương người thành nguyên bào xương giá thể san hô in vitro Tạp chí nghiên cứu y học Nguyễn Lân Việt, Đỗ Doãn Lợi, Phạm Mạnh Hùng, Đỗ Thúy Cẩn, Nguyễn Quốc Anh, Nguyễn Thu Hà, (2010) Kết bước đầu nghiên cứu thử nghiệm tế bào gốc điều trị bệnh nhân suy tim nặng sau nhồi máu tim cấp, Tạp chí Tim mạch học Việt Nam, số 54 Tiếng Anh Abdi R., Fiorina P., Adra C.N., et al., (2008) Immunomodulation by mesenchymal stem cells: a potential therapeutic strategy for type diabetes Diabetes;57: 1759 - 67 Ankrum J., Karp J.M., (2010) Mesenchymal stem cell therapy: Two steps forward, one step back.Trends Mol Med.;16(5):203-9 Arminan A., Gandia C., Bartual C., et al., (2009) Cardiac differentiation is driven by NKX2.5 and GATA4 nuclear translocation in tissue specific mesenchymal Stem Cells Dev;18(6): 907-18 10.Asahara T., Isner J.M., (2004) Endothelial progenitor cells Stem cells handbook – Humana Press Inc, 221 – 238 11.Astori G., Soncin S., Cicero V.L., et al., (2010) Bone marrow derived stem cells in regenerative medicine as Advanced Therapy Medicinal Products, Am J Transl Res; 2(3):285-295 12.Balana B., Nicoletti C., Zahanich I., et al., (2006) 5-Azacytidine induces changes in electrophysiological properties of human mesenchymal stem cells Cell Res; 16: 949–960 13.Barron M., Gao M and Lough J., (2000) Requyrement for BMP and FGF signaling during cardiogenic induction in nonprecardiac mesoderm is specific, transient, and cooperative Dev Dyn 218, 383–393 14.Battula V.L., Treml S., Bareiss P.M., et al., (2009) Isolation of functionally distinct mesenchymal stem cells subsets using antibodies against CD56, CD271, and mesenchymal stem cell antigen-1 (MSCA-1) Haematologica 94: 173–184 15.Behfar A., Perez-Terzic C., Faustino R.S., et al., (2007) Cardiopoietic programming of embryonic stem cells for tumor-free heart repair J Exp Med ;204(2):405-420 16.Bernardo M.E., Locatelli F., Fibbe W.E., (2009) Mesenchymal Stromal Cells A Novel Treatment Modality for Tissue Repair, Hematopoietic Stem Cells VII: Ann N.Y Acad Sci 1176: 101–117 17.Betre H., Ong S.R., Guilak F., et al., (2006) Chondrocytic differentiation of human adipose-derived adult stem cells in elastin-like polypeptide Biomaterials; 27:91–99 18.Beyer Nardi N., da Silva Meirelles L., (2006) Mesenchymal stem cells: isolation, in vitro expansion and characterization Handb Exp Pharmacol, 174, 249-282 19 Bianco P., Riminucci M., Gronthos S., et al., (2001) Bone marrow stromal stem cells: nature, biology, and potential applications Stem Cells 19, 180–192 20.Birnbaum T, Roider J, Schankin CJ, et al., (2007) Malignant gliomas actively recruit bone marrow stromal cells by secreting angiogenic cytokines J Neurooncol ;83:241-247 21.Black B.L., (2007) Transcriptional pathways in second heart field development Semin Cell Dev Biol.;18(1):67-76 22.Blank U., Karlsson G., Karlsson S., (2008) Signaling pathways governing stem-cell fate Blood, 15– Volumm 111, Number 2, 492-503 23.Brand T (2003) Heart development: molecular insights into cardiac specification and early morphogenesis Dev Biol 258, 1–19 24.Bruder S.P., Jaiswal N., Haynesworth S.E., (1997) Growth kinetics, selfrenewal, and the osteogenic potential of purified human mesenchymal stem cells during extensive subcultivation and following cryopreservation J Cell Biochem 64, 278–294 25.Bruneau B.G., Nemer G., Schmitt J.P., et al., (2001) A murine model of Holt-Oram syndrome defines roles of the T-box transcription factor Tbx5 in cardiogenesis and disease Cell 106, 709–721 26.Buhring H.J., Battula V.L., Treml S., et al., (2007) Novel markers for the prospective isolation of human MSC Ann N.Y Acad Sci 1106: 262–271 27.Caplan A.I (2010) Mesenchymal Stem Cells: The Past, the Present, the Future Cartilage: 1; - 28.Caplan A.I., (1991) Mesenchymal stem cells J Orthop Res ;9:641-50 29.Chamberlain G., Fox J., Ashton B., et al., (2007) Concise review Mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing Stem Cells ; 25:2739_49 30.Chang S.A., Lee E.J., Kang H.J., et al., (2008) Impact of myocardial infarct proteins and oscillating pressure on the differentiaton of mesenchymal stem cells: effect of acute myocardial infarction on stem cell differentiation Stem Cells 26: 1901–1912, 31.Chen H.H , Decot.V , Ouyang J.P , et al., (2009) In vitro initial expansion of mesenchymal stem cells is influenced by the culture parameters used in the isolation process Bio-Medical Materials and Engineering, 19, 301–309 32.Chen S.L, Fang W.W., Ye F., et al., (2004) Effect on left ventricular function of intracoronary transplantation of autologous bone marrow mesenchymal stem cell in patients with acute myocardial infarction Am J Cardiol, 94, 92–95 33.Chiou S.H., Kao C.L., Peng C.H., et al., (2005) A novel in vitro retinal differentiation model bt co- cuturing adult human bonmarow stem cells with retinal pigmented epithelium cells, Biochemical and Biophysical Rerearch Communications 326; 578 – 585 34.Conget P.A., Minguell J.J., (1999) Phenotypical and functional properties of human bone marrow mesenchymal progenitor cells J Cell Physiol , 181, 67-73 35.Covas D.T., Piccinato C.E., Orellana M.D., et al., (2005) Mesenchymal stem cells can be obtained the human saphena vein, Experimental Cell Research 309; 340 – 344 36.Dennis J E., Caplan A.I., (2004) Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells, Stem cells handbook – Humana Press Inc,107 – 118 37.Docheva D., Popov C., Mutschler W., et al., (2007) Human mesenchymal stem cells in contact with their environment: surface characteristics and the integrin system, J Cell Mol Med Vol 11, No 1, pp 21-38 38.Dominici M., Le Blanc K., Mueller I., et al., (2006) Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells The International Society for Cellular Therapy positionstatement Cytotherapy, 8, 315–317 39.Dong S.W., Ying D.J, Jun Duan X., (2009) Bone regeneration using an acellular extracellular matrix and bone marrowmesenchymal stem cells expressing Cbfa1 Biosci Biotechnol Biochem 73 (10): 2226 – 2233 40.Dorheim M.A., Sullivan M., Dandapani V., (1993) Osteoblastic gene expression during adipogenesis in hematopoietic supporting murine bone marrow stromal cells J Cell Physiol ;154: 317–328 41.Forrester J.S., White A.J., Matsushita S., et al., (2009) New paradigms of myocardial regeneration post-infarction: tissue preservation, cell environment, and pluripotent cell sources JACC Cardiovasc Interv, 2(1),1-8 42.Forte G., Carotenuto F., Pagliari F., et al., (2008) Criticality of the Biological and Physical Stimuli Array Inducing Resident Cardiac Stem Cell Determination, Stem cells 26: 2093 – 2103 43.Forte G., Minieri M., Cossa P., (2006) Hepatocyte Growth Factor Effects on Mesenchymal Stem Cells: Proliferation, Migration, and Differentiation Stem Cells, 24; 23 – 33 44.Friedenstein A.J., Piatetzky-Shapiro I.I., Petrakova K.V., (1966) Osteogenesis in transplants of bone marrow cells J Embryol Exp Morphol, 16, 381-390 45 Fukuda K., (2003) Use of adult marrow mesenchymal stem cells for regeneration of cardiomyocytes Bone Marrow Transplant; 32 S25-S27 46 Gang E.J., Bosnakovski D., Figueiredo C.A., et al., (2007) SSEA-4 identifies mesenchymal stem cells from bone marrow Blood 109: 1743–1751 47.Gersh B.J., Simari R.D., Behfar A., et al., (2009) Cardiac Cell Repair Therapy: A Clinical Perspective, Mayo Clin Proc.;84(10):876-892 48.Gimble J M., Guilak F., Nuttall M.E., et al., (2008) In vitro Differentiation Potential of Mesenchymal Stem Cells Transfus Med Hemother ; 35:228-238 49.Gimble J.M., Dorheim M.A., Cheng Q., (1990) Adipogenesis in a murine bone marrow stromal cell line capable of supporting B lineage lymphocyte growth and proliferation: biochemical and molecular characterization Eur J Immunol ;20: 379–387 50.Gimble J.M., Nuttall M.E., (2004) Bone and fat: old questions, new insights Endocrine ;23:183–188 51.Gimble J.M., Robinson C.E., Wu X., et al., (1996) Peroxisome proliferator-activated receptorgamma activation by thiazolidinediones induces adipogenesis in bone marrow stromal cells Mol Pharmacol ;50:1087–1094 52.Gindraux F, Selmani Z, Obert L et al (2007) Human and rodent bone marrow mesenchymal stem cells that express primitive stem cell markers can be directly enriched by using the CD49a molecule Cell Tissue Res; 327:471– 483 53.Gnecchi M., He H., Liang O.D., et al., (2005) Paracrine action accounts for marked protection of ischemic heart by Akt-modified mesenchymal stem cells Nat Med 11: 367–368 54.Grayson L.W., Zhao F., Bunnel B., et al., (2007) Hypoxia enhances proliferation and tissue formation of human mesenchymal stem cells Biochem Biophys Res Commun.; 358:948- 953 55.Gupta R., Losordo D.W., (2010) Challenges in the transplatation of cardiovascular cell therapy, J Nucl Med; 51: 122S- 127S 56.Hahn J.Y., Cho H.J., Kang H.J., et al., (2008) Pre-treatment of mesenchymal stem cells with a combination of growth factors enhances gap junction formation, cytoprotective effect on cardiomyocytes, and therapeutic efficacy for myocardial infarction J Am Coll Cardiol 51: 933–943 57.Halvorsen Y.D., Bond A., Sen A., et al., (2001) Thiazolidinediones and glucocorticoids synergistically induce differentiation of human adipose tissue stromal cells: biochemical, cellular, and molecular analysis Metabolism ;50:407–413 58.Hamada H., et al., (2005) Mesenchymal stem cells (MSC) as therapeutic cytoreagents for gene therapy Cancer Sci 96, 149–156 59.Haynesworth S.E., Baber M.A., Caplan A.I., (1992) Cells surface antigens on human marow – derived mesenchymal cells are detected by monoclonal antibodies Bone 13: 81-88 60.Haynesworth S.E., Baber M.A., Caplan A.I., (1996) Cytokine expression by human marrow-derived mesenchymal progenitor cells invitro: effects of dexamethasone and IL-1 alpha J Cell Physiol , 166, 585-92 61.Haynesworth S.E., Goshima J., Goldberg V.M., et al., (1992) Characterization of Cells With Osteogenic Potential from Human Marrow Bone 13: 81-88 62.Honczarenko M., Le Y., Swierkowski M., et al., (2006) Human bone marrow stromal cells express a distinct set of biologically functional chemokine receptors Stem Cells , 24, 1030-1041 63.Horb M.E and Thomsen G.H (1999) Tbx5 is essential for heart development Development 126, 1739–1751 64.Huang J.I., Kazmi N., Durbhakula M.M., (2005): Chondrogenic potential of progenitor cells derived from human bone marrow and adipose tissue: a patient-matched comparison J Orthop Res ;23:1383–1389 65.Jackson K.A., Goodell M.A., (2004) Generation and Stem Cell repair of Cardiac tisue Stem cells handbook – Humana Press Inc, 259 – 276 66.Javazon E.H., Beggs K.J., Flake AW., (2004) Mesenchymal stem cells: Paradoxes of passaging Exp Hematol;32:414–425 67.Katritsis D.G., Sotiropoulou P.A., Karvouni E., et al (2005) Transcoronary transplantation of autologous mesenchymal stem cells and endothelial progenitors into infarcted human myocardium Catheter Cardiovasc Interv; 65: 321-329 68.Kim D.H., Yoo K.H., Choi K.S., Choi J., et al., (2005) Gene expression profile of cytokine and growth factor during differentiation of bone marrowderived mesenchymal stem cell Cytokine, 31, 119-126 69.Klyushnenkova E., Mosca J.D., Zernetkina V., et al., (2005) T cell responses to allogeneic human mesenchymal stem cells: immunogenicity, tolerance, andsuppression J Biomed Sci, 12, 47-57 70.Kode J.A., Mukherjee S., Joglekar M.V., et al., (2009) Mesenchymal stem cells: immunobiology and role in immunomodulation and tissue regeneration, Cytotherapy Vol 11, No 4, 377 - 391 71.Lama V.N., Smith L., Badri L., et al (2007) Evidence for tissue-resident mesenchymal stem cells in human adult lung from studies of transplanted allografts J Clin Invest , 117, 989-996 72.Le Blanc K., (2003) Immunomodulatory effects of fetal and adult mesenchymal stem cells Cytotherapy ;5:485 - 73.Le Blanc K., Rasmusson I., Sundberg B., et al., (2004) Treatment of severe acute graft-versus-host disease with third party haploidentical mesenchymal stem cells Lancet ;363:1439 - 41 74.Lee J., Terracciano C.M., (2010) Cell therapy for cardiac repair, British Medical Bulletin, 1- 16 75.Li Q., Xu X., Wang Z., et al., (2007) Investigation of canine mesenchymal stem cells differentiation to vascular endothelial cell in vitro Sheng Wu Yi Xue Gong Cheng Xue Za Zhi 24: 1348–1351 76.Lickert H., Kutsch S., Kanzler B., et al.,(2002) Formation of multiple hearts in mice following deletion of beta-catenin in the embryonic endoderm Dev Cell 3, 171–181 77.Lints T.J., Parsons L.M., Hartley L., et al., (1993) Nkx-2.5: a novel murine homeobox gene expressed in early heart progenitor cells and their myogenic descendants Development 119, 969 78.Mackay A.M., Beck S.C., Murphy J.M., (1998) Chondrogenic differentiation of cultured human mesenchymal stem cells from marrow Tissue Eng ;4:415–428 79.Makino S., Fukuda K., Miyoshi S., et al., (1999) Cardiomyocytes can be generated from marrow stromal cells in vitro J Clin Invest, 103, 697–705 80.Mathur A., Martin J.F., (2004) Stem cells and repair of the heart Lancet; 364(9429):183-192 81.Miraglia S., Godfrey W., Yin A.H., et al., (1997), A novel fivetransmembrane hematopoietic stem cell antigen: isolation, characterization, and molecular cloning Blood, 90:5013-5021 82.Motaln H., Schichor C., Lah T.T., (2010) Human Mesenchymal Stem Cells and Their Use in Cell-Based Therapies, Cancer 2010;000:000–000 VC 2010 American Cancer Society 83.Murry C.E., Keller G., (2008) Differentiation of embryonic stem cells to clinically relevant populations: lessons from embryonic development Cell.;132(4):661-680 84.Nakanishi C., Yamagishi M., Yamahara K., et al., (2008) Activation of cardiac progenitor cells through paracrine effects of mesenchymal stem cells Biochem Biophys Res Commun 374: 11–16 85.Nelson T.J., Martinez-Fernandez A., Yamada S., et al., (2009) Repair of acute myocardial infarction by human stemness factors induced pluripotent stem cells Circulation;120(5):408-416 86.Noort W.A., Kruisselbrink A.B., Anker P.S., et al., (2002), Mesenchymal stem cells promote engraftment of human umbilical cord blood-derived CD34(+) cells in NOD/SCID mice Exp Hematol ,30:870-878 87 Olson E N and Schneider M.D., (2003), Sizing up the heart: development redux in disease Genes Dev 17, 1937–1956 88 Orlic D., Kajstura J., Chimenti S., et al., (2001) Bone marrow cells regenerate infarcted myocardium Nature 410, 701–705 89.Pasha Z., Wang Y., Sheikh R., et al., (2008) Preconditioning enhances cell survival and differentiation of stem cells during transplantation in infarcted myocardium Cardiovasc Res 77: 134–142 90.Perin E.C., Dohmann H.F., Borojevic R., et al., (2003) Transendocardial, autologous bone marrow cell transplantation for severe, chronicischemic heart failure Circulation ;107:2294-302 91.Phinney DG, Kopen G, Isaacson RL, et al., (1999) Plastic adherent stromal cells from the bone marrow of commonly used strains of inbred mice: variations in yield, growth, and differentiation J Cell Biochem;72: 570–85 92.Pittenger M.F, Marshak D.R (2001) Mesenchymal stem cells of human adult bone marrow (Cold Spring Harbor, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press) 349–374 93.Pittenger M.F, Martin B.J., (2004) Mesenchymal stem cells and their potential as cardiac therapeutics Cirs Res, 95, – 20 94.Pittenger M.F., Mackay A.M., Beck S.C., (1999) Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells Science ;284:143–147 95.Ponting I., Zao Y., Anderson W.F., (2004) Hematopoietic Stem Cells: Identification, characterization, and assays, Stem cells handbook – Humana Press Inc,155-161 96.Potapova I.A., Doronin S.V., Kelly D.J., et al., (2008) Enhanced recovery of mechanical function in the canine heart by seeding an extracellular matrix patch with mesenchymal stem cells committed to a cardiac lineage Am J Physiol Heart Circ Physiol; 295(6): 2257–2263 97.Psaltis P.J, Zannettino A.C.W, Worthley S.G., (2008) Mesenchymal stromal cells: Potential for Cardiovascular Repair Stem cells, 26, 2201–2210 98.Qiu W., Andersen T.E., Bollerslev J., et al., (2007) Patients with high bone mass phenotype exhibit enhanced osteoblast differentiation and inhibition of adipogenesis of human mesenchymal stem cells J Bone Miner Res.;22:1720-1731 99.Quyrici N., Soligo D., Bossolasco P., et al., (2002) Isolation of bonemarrowmesenchymal stem cells by anti-nerve growth factor receptor antibodies Exp Hematol 30: 783–791 100 Reifers F.,Walsh E.C., Leger S., et al., (2000) Overlapping and distinct functions provided by FGF17, a new zebrafish member of the FGF8/17/18 subgroup of FGFs Development 127, 225–235 101 Rentsch B., Hofmann A., Breier A., et al., (2009) Embroidered and surface modified polycaprolactone-co-lactide scaffolds as bone substitute Ann Biomed Eng.;37:2118-2128 102 Ries C., Egea V., Karow M., et al., (2007) MMP-2, MT1-MMP, and TIMP-2 are essential for the invasive capacity of human mesenchymal stem cells: differential regulation by inflammatory cytokines Blood, 109, 40554063 103 Rojewski M.T., Webe B.M., Schrezenmeier H., (2008) Phenotypic Characterization of Mesenchymal Stem Cells from Various Tissues HemotherapyTransfus Med Hemother, 35, 168–184 104 Rose R.A., Jiang H., Wang X., et al., (2008) Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stromal Cells Express Cardiac-Specific Markers, Retain the Stromal Phenotype, and Do Not Become Functional cardiomyocytes In Vitro Stem cells, 26, 2884–2892 105 Sachinidis A., Sauer H., Wartenberg M., et al., (2004) Transcription factors, growth factors, and signal cascades capable of priming cardiogeniesis Stem cells handbook – Humana Press Inc, 239 – 250 106 Sawada R., Ito T., Tsuchiya T., (2006) Changes in expression of genes related to cell proliferation in human mesenchymal stem cells during in vitro culture in comparison with cancer cells J Artif Organs.;9:179-184 107 Schlange J., Andree B., Arnold H.H., et al., (2000) BMP2 is requyed for early heart developvement during a distinct time period Mech Dev.91: 259-270 108 Schneider V.A and Mercola M (2001) Wnt antagonism initiates cardiogenesis in Xenopus laevis Genes Dev 15, 304–315 109 Schuleri K.H., Boyle A.J., Hare J.M., (2007) Mesenchymal stem cells for cardiac regenerative therapy Handb Exp Pharmacol ;180:195-218 110 Schultheiss T.M., Burch J.B., Lassrar A.B., (1997) A role for bone morphogenetic proteins in induction of cardiac myogenesis Gens Dev.11: 451 – 462 111 Sen A., Lea-Currie Y.R., Sujkowska D., (2001) Adipogenic potential of human adipose derived stromal cells from multiple donors is heterogeneous J Cell Biochem;81:312–319 112 Shake J.G., Gruber P.J., Baumgartner W.A., et al., (2002) Mesenchymal stem cell implantation in a swine myocardial infarct model: engraftment and functional effects Ann Thorac Surg 73:1919–1925 113 Shi Q., Rafii S., Wu M.H., et al., (1998) Evidence for circulating bone marrow-derived endothelial cells Blood 92, 362–367 114 Shim W.S.N., Jiang S., Wong P., et al., (2004) Ex vivo differentiation of human adult bone marrow stem cells into cardiomyocyte-like cells Bioch Biophys Res Commun, 324, 481–488 115 Soncini M, Vertua E, Gibelli L, (2007) Isolation and characterization of mesenchymal cells from human fetal membranes J Tissue Eng Regen Med ;1:296–305 116 Song H., Song B.W., Cha M.J., et al., (2010) Modification of mesenchymal stem cells for cardiac regeneration Expert Opin Biol Ther (2010) 10(3) 117 Sotiropoulou P.A., Perez S.A., Salagianni M., et al., (2006) Characterization of the optimal culture conditions for clinical scale production of human mesenchymal stem cells, Stem Cells, 24 462–471 118 Sutherland D.R., Keating A., (1992), The CD34 antigen: structure, biology, and potential clinical applications J Hematother ,1:115-129 119 Svensson E.C., Tufts R.L., Polk C.E., et al., (1999) Molecular cloning of FOG-2: A modulator of transcription factor GATA4 in cardiomyocytes Proc Natl Acad Sci USA 96, 956 - 961 120 Terami H., Hidaka K., Shirai M., et al., (2007) Efficient capture of cardiogenesis-associated genes expressed in ES cells Biochem Biophys Res Commun 355: 47–53, 2007 121 Thomson J.A., Itskovitz-Eldor J., Shapiro S.S., et al., (1998) Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts Science ;282:1145–1147 122 Toma C., Pittenger M.F., Cahill K.S., et al., (2002) Human mesenchymal stem cells differentiate to a ardiomyocyte phenotype in the adult murine heart Circulation105: 93–98 123 Tomita S., Li R.K., Weisel R.D., et al., (1999) Autologous transplantation bone marrow cells improves damaged heart function Circulation 100:247–256 124 Valiunas V., Doronin S., Valiuniene L., et al., (2004) Human mesenchymal stem cells make cardiac connexins and form functional gap junctions J Physiol 555: 617–626 125 Ventura C., Maioli M., (2000) Opioid peptide gene expression primes cardiogenesis in embryonal pluripotent stem cells Circ Res 87: 189 – 194 126 Von Luttichau I., Notohamiprodjo M., Wechselberger A., et al., (2005) Human adult CD34-progenitor cells functionally express the chemokine receptors CCR1, CCR4, CCR7, CXCR5, and CCR10 but not CXCR4 Stem Cells Dev , 14, 329-336 127 Wang D., Chang P.S.,Wang Z., et al., (2001) Activation of cardiac gene expression by myocardin, a transcriptional cofactor for serum response factor Cell 10, 851–862 128 Wang G.F., Nikovits W.Jr., Schleinitz M., et al., (1998) A positive GATA element and a negative vitamin D receptor – like element control atrial chamber – specific expression of low myosin heavy chain gene during cardiac morphogenesis Mol Cell Biol 18; 6023 – 6034 129 Wang T., Xu Z., Jang W., Ma A., (2006) Cell- to- cell contact induce messenchymal stem cell to diferentiate into cardiomyocyte and smooth muscle cell International Jounal of Cardiology, 109, 74-81 130 Wei H.M., Wong P., Hsu L.F., et al., (2009) Human bone marrow – derivated adult stem cells for post – myocardial infarction cardiac repair: current status and future directions Singapore Med J 50(10): 935 131 Wiles M.V., Keler G., (1991) Multiple hematopoietic linages develop from embryonic stem (ES) cells in culture Development 111: 259 – 267 132 Wilmut I., Schnieke A.E., McWhir J., et al., (1997), Viable offspring derived from fetal and adult mammalian cells Nature 1997,385:810- 813 133 Xie X.J., Wang J.A., Cao J., et al., (2006) Differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells induced by myocardial medium under cypoxic conditions Acta Pharmacol Sin 27: 1153–1158 134 Xu W., Zang X., Qian H., et al., (2004) Mesenchymal Stem Cells from Adult Human Bone Marrow Differentiate into a Cardiomyocyte Phenotype In Vitro Exp Biol Med 229:623–631 135 Yamagishi H., Yamagishi C., Nakagawa O., et al (2001) The combinatorial activities of Nkx2.5 and dHAND are essential for cardiac ventricle formation Dev Biol 239: 190–203 136 Zeng J., Wang Y., Wei Y., et al., (2008) Coculture with cardiomyocytes induces mesenchymal stem cells to differentiate into cardiomyocyte-like cells and express heart development-associated genes Cell Res 18: 562 137 Zhang M., Mal N., Kiedrowski M., et al., (2007) SDF-1 expression by mesenchymal stem cells results in trophic support of cardiac myocytes after myocardial infarction FASEB J 21: 3197–3207 138 Zhao P., Ise H., Hongo M., et al., (2005) Human amniotic mesenchymal cells have some characteristics of cardiomyocytes Transplantation 79: 528– 535 ... tế bào gốc trung mô sau phân lập nuôi c? ?y từ t? ?y xương người 94 Bảo quản tế bào gốc trung mô sau phân lập ni c? ?y từ t? ?y xương người 102 Biệt hóa tế bào gốc trung mô nuôi c? ?y theo hướng dạng tế. .. BÀN LUẬN 88 Phân lập, nuôi c? ?y, nhận biết bảo quản tế bào gốc trung mô từ t? ?y xương người 89 Phân lập, nuôi c? ?y tế bào gốc trung mô từ t? ?y xương người 89 Định danh tế. .. Máu d? ?y rốn Trung mô d? ?y rốn Tế bào gốc thai Tế bào gốc máu d? ?y rốn Tế bào gốc trung mô d? ?y rốn Tế bào gốc dòng sinh dục (6 tuần) Tế bào gốc phôi Tế bào mầm sinh dục Tế bào máu Tế bào trung mơ