Nghiên cứu hóa học vàphân lập một vài hợp chất trong phân đoạn kém phân cực của thổ phục linh (smilax glabra roxb liliaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU HÓA HỌC VÀPHÂN LẬP MỘT VÀI HỢP CHẤT TRONG PHÂN ĐOẠN KÉM PHÂN CỰC CỦA THỔ PHỤC LINH (SMILAX GLABRA ROXB LILIACEAE) Chủ nhiệm đề tài: TS Phạm Đơng Phương Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU HĨA HỌC VÀPHÂN LẬP MỘT VÀI HỢP CHẤT TRONG PHÂN ĐOẠN KÉM PHÂN CỰC CỦA THỔ PHỤC LINH (SMILAX GLABRA ROXB LILIACEAE) Chủ nhiệm đề tài: TS Phạm Đông Phương Ký tên Thành phố Hồ Chí Minh – 2019 MỤC LỤC I ĐẶT VẤN ĐỀ……………………………………………………… II NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ……… .1 2.1 Ngun vật liệu, dung mơi hóa chất dụng cụ nghiên cứu…… 2.2 Phương pháp nghiên cứu……………………………………………… III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU…………………………………………………… 3.1 Kết thử tinh khiết………………………………………………… 3.2 Kết phân tích sơ thành phần hóa thực vật của Thổ phục linh… 3.3 Chiết xuất và phân tách phân đoạn…………………………………6 3.4 Phân lập phân đoạn cao ether dầu hỏa……………………… 3.5 Kiểm tra độ tinh khiết chất phân lập (SGH1 SGM2)………… 10 3.6 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập………………………………10 IV KẾT LUẬN …………… ………………………………………………… 13 V TÀI LIỆU THAM KHẢO…………………………………………… 14 I ĐẶT VẤN ĐỀ: Thổ phục linh (Smilax glabra Roxb) sử dụng rộng rãi với nhiều mục đích khác khơng Việt Nam mà cịn nhiều nước giới, khu vực châu Á để làm thuốc chữa giang mai, đau xương, lợi tiểu, giải độc thể, đặc biệt nhiều bệnh liên quan tới viêm như: viêm gan, viêm thận, viêm da, chàm [10], [13], [53] Mặc dù dùng rộng rãi nhiên Việt Nam, đến chưa có nhiều nghiên cứu về thành phần hóa học tác dụng dược lý của Thổ phục linh Để bổ sung sở khoa học, làm sáng tỏ tác dụng của Thổ phục linh, đề tài “Nghiên cứu hóa học phân lập vài hợp chất phân đoạn phân cực của Thổ phục linh Smilax glabra Roxb., Smilacaceae” tiến hành với nội dung sau: - Thu mẫu nghiên cứu thành phần hóa thực vật - Chiết xuất hoạt chất toàn phần EtOH - Phân tách cao cồn thành phân đoạn đơn giản - Phân lập vài hợp chất phân đoạn n-hexan II NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, dung mơi hóa chất dụng cụ nghiên cứu 2.1.1 Nguyên liệu 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Nguyên liệu Thân rễ Thổ phục linh (Smilax glabra Roxb.) thu hái Lâm Đồng từ tháng đến tháng 10 năm 2015 Nguyên liệu rửa sạch, thái lát, phơi sấy khô và xay thành bột, bảo quản nhiệt độ phịng 2.1.2 Ngun liệu, dung mơi, hóa chất, thiết bị nghiên cứu - Dung môi dùng cho chiết xuất: cồn 96% - Dung môi dùng lắc phân bố: petrolium ether, cloroform, ethyl acetat - Dung môi dùng khai triển sắc kí: n-hexan, petrolium ether, cloroform, dicloromethan, ethyl acetat, methanol - Các thuốc thử: Fehling, Mayer, Dragendoff, Bouchardat, Folin Ciocalteur, VS, FeCl3 - Ngồi cịn có hóa chất khác: HCl, H2SO4, KOH, Na2SO4,,HCOOH - Bản mỏng tráng sẵn silica gel F254 2.1.3 Dụng cụ trang thiết bị: - Cột sắc ký: cột cổ điển (6 × 80 cm), cột sephadex LH-20 (2 × 60 cm), cột Sunfire C18 (250 × 4,6 mm; µm) tiền cột Sunfire C18 (12,5 × 4,6 mm; µm) - SKLM dùng silica gel F254 tráng sẵn nền nhôm (Merck, Art 1.05554) - SKC dùng silica gel hạt vừa (Trung Quốc), cỡ hạt 40- 63µm và silica gel hạt mịn (Merck) cỡ hạt 15- 40µm) Máy cô quay Buchi R300 (Nhật Bản) Bể siêu âm Ultrasonic Bath (Đức) Tủ sấy Gallentkamp (Anh) Nồi cách thủy Memmert WB-14 (Đức) Cột sắc ký dụng cụ thí nghiệm thơng thường phịng thí nghiệm của Bộ mơn Dược liệu Phịng nghiên cứu hóa hợp chất tự nhiên thuộc Trung tâm Đào tạo nghiên cứu phát triển thuốc nguồn gốc tự nhiên – ĐH Y Dược Tp HCM - Máy đo khối phổ (Micromass Quattro microTM API – Waters) - Máy đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) BRUKER - AV - 500, Viện hóa học thuộc Viện Hàn lâm Khoa học công nghệ Việt nam - Hà nội - Cột sắc ký: cột cổ điển (6 × 80 cm), cột sephadex LH-20 (2 × 60 cm), cột Sunfire C18 (250 × 4,6 mm; µm) tiền cột Sunfire C18 (12,5 × 4,6 mm; µm) - Phần mềm EMPOWER truy xuất hình ảnh, số liệu cho định tính, định lượng máy HPLC 2.2 Phương pháp nghiên cứu Thu hái định danh mẫu: khảo sát đặc điểm hình thái, định danh mẫu, lưu mẫu Bộ môn Dược liệu – khoa Dược – Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 2.2.1 Xác định độ tinh khiết - Xác định độ ẩm: Thực hiện theo Dược điển Việt Nam IV, phụ lục 9.6, PL-182 - Xác định tro toàn phần tro không tan HCl: Thực hiện theo Dược điển Việt Nam IV, phụ lục 9.8 phụ lục 9.7., phương pháp 2.2.2 Phân tích sơ thành phần hóa thực vật: Theo phương pháp Ciuley cải tiến 2.2.3 Chiết xuất và phân tách phân đoạn - Chiết cồn etylic: Bột thân rễ Thổ phục linh chiết phương pháp chiết ngấm kiệt với cồn 96 %, bã chiết tiếp với cồn 50 % - Thu hồi cồn để cao lỏng phân bố lỏng – lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần, bao gồm: n-hexan, CHCl3, ethyl acetat, n-butanol, bay dung môi, thu cao tương ứng sử dụng cao CHCl3 để phân lập hợp chất 2.2.4 Phân lập, kết tinh kiểm tra độ tinh khiết sắc ký 2.2.4.1 SKC nhanh Điều kiện SK: - Cột sắc ký: x 50 cm - Pha tĩnh: silica gel hạt trung bình: (40-63 µm, Merck), khối lượng: 600 g - Mẫu: cao n-hexan - Dung môi khai triển: Như phần thực nghiệm - Thể tích lọ hứng: 100 ml - Hệ dung môi cho SKLM kiểm tra phân đoạn: Như phần thực nghiệm 2.2.4.2 Phân lập phân đoạn B (của cột VLC) SKC cổ điển Điều kiện SK: - Cột sắc ký: x 40 cm - Pha tĩnh: 150 g silica gel kích thước hạt hạt 0,040 – 0,063 mm (Merck) - Mẫu: Cao phân đoạn (phân đoạn B) - Dung môi khai triển: Như phần thực nghiệm - Thể tích hứng ống nghiệm: 20 ml - Hệ dung môi cho SKLM kiểm tra phân đoạn: Như phần thực nghiệm Kiểm tra gộp phân đoạn: hứng phân đoạn, kiểm tra SKLM, phát hiện đèn UV 254 nm, UV 365 nm và TT VS Các phân đoạn gần giống gộp chung lại, thu hồi dung môi áp suất giảm (cô quay chân không) 2.2.4.3 Phân lập phân đoạn C (của SKC cổ điển 1) sắc ký cột cổ điển Điều kiện sắc ký cột: - Cột sắc ký: 3,0 × 40 cm (đường kính × chiều dài), rửa sạch, sấy khơ - Pha tĩnh: silica gel hạt trung bình: (40-63 µm), khối lượng: 100 g - Mẫu: 850 mg cao phân đoạn (phân đoạn C) cột cổ điển - Dung môi khai triển: Như phần thực nghiệm - Thể tích hứng phân đoạn: 10 ml - Hệ dung môi kiểm tra SKLM: Như phần thực nghiệm 2.2.5 Kiểm tra độ tinh khiết SKLM Thực hiện mỏng silica gel tráng sẵn với hệ dung môi sau: n-hexan – CHCl3 (25:75); CHCl3 – EtOAc (9:1); n-hexan – EtOAc (8: 2) 2.2.6 Xác định cấu trúc chất phân lập Chất tinh khiết phân tích phương pháp phổ khối (MS), HPLC-PDA, NMR, so sánh đối chiếu với liệu về phổ NMR, MS của chất tương tự công bố tài liệu Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) đo máy BRUKER – AV – 500, Viện hóa học thuộc Viện hàn lâm Khoa học công nghệ Việt nam – Hà nội Mẫu hòa tan CD3OD CD3COCD3 với TMS chất chuẩn nội Phổ proton (1H-NMR) đo 500 MHz, phổ carbon (13C-NMR) đo 125 MHz Độ dịch chuyển hóa học tính theo thang ppm (δTMS = 0) với chuẩn tín hiệu của TMS Các số ghép (J) tính Hertz (Hz) III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết thử tinh khiết Bảng 3.1 Kết tro toàn phần, tro không tan acid Lần thử P mẫu (g) Độ ẩm (%) Tro tồn phần (%) Tro khơng tan acid (%) 1,00 8,38 5,15 0,93 1,00 8,53 5,21 1,00 1,00 9,58 5,08 0,87 8,83 5,14 0,93 Trung bình 3.2 Kết phân tích sơ thành phần hóa thực vật của Thổ phục linh (Bảng 3.2.): Bảng 0.2 Kết phân tích sơ thành phần hóa thực vật Nhóm hợp chất Thuốc thử Cách thực Dịch chiết - Kết ether cồn Kết luận nước Chất béo Nhỏ dd lên giấy - Carotenoid Carr – Price - H2SO4 - Tinh dầu Bốc tới cắn - Không Triterpenoid tự Liebermann – Burchard ++ Có Alkaloid - Khơng Anthraglycosid TT chung alkaloid Phát quang kiềm KOH 10% + Flavonoid Mg/HCl đđ + Glycosid tim TT vòng lacton - - TT đường 2-desoxy - - HCl - + KOH - + HCl / to - + Có + ++ Có ++ ++ Coumarin Anthocyanosid Proanthocyanidin Tanin dd FeCl3 dd gelatin muối - Khơng Khơng Khơng - Khơng +++ ++ Có Khơng Có Saponin TT Liebermann Có + + Lắc mạnh dd nước ++ +++ Acid hữu Na2CO3 ++ ++ Có Chất khử TT Fehling + + Có Polyuronid Pha lỗng với cồn 90% - Khơng Sơ kết luận: Thân rễ Thổ phục linh có chứa thành phần: triterpenoid tự do, flavonoid, anthocyanosid, proathocyanidin, tannin ,saponin, acid hữu cơ, chất khử 3.3 Chiết xuất và phân tách phân đoạn Thân rễ Thổ phục linh (8 kg) chiết ngấm kiệt cồn 96% (80 L) và sau là cồn 50% (40 L) Cơ thu hồi dung môi để cao lỏng (cao cồn 96 % 50 %) Kiểm tra cao SKLM nhận thấy cao có thành phần giống nên gộp chung Cao lỏng chiết phân bố lỏng – lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần, bao gồm: ether dầu hỏa, CHCl3, EtOAc phần cịn lại khơng tan vào dung mơi Cô thu hồi dung và thu cao tương ứng Kết chiết xuất phân lập trình bày sơ đồ Hình 3.1 Bảng 3.3 Bảng 0.3 Các cao phân đoạn Thổ phục linh Cao Khối lượng (g) Ether dầu hỏa Cao ether dầu hỏa 56,8 Chloroform Cao CF 16,8 EtOAc Tủa EA 28 Cao EA 710 Cao nước 166 Dịch chiết Phần lại, không tan dung môi Bột Thổ phục linh) EtOH 96%, 50% - chiết ngấm kiệt Bã Thổ phục linh Dịch chiết EtOH ) ) Thu hồi EtOH Cao EtOH lỏng Ether dầu hỏa Cao ether Cao lỏng CHCl3 Cao CHCl3 Cao lỏng EtOAc Cao EtOAc Cao nước Hình 3.1 Sơ đồ chiết phân tách phân đọan Thổ phục linh 3.4 Phân lập phân đoạn cao ether dầu hỏa 3.4.1 Phân lập phân đoạn cao ether dầu hỏa SKC nhanh (VLC) 3.4.1.1 Khảo sát hệ dung môi phân tích cao ether dầu hỏa Tiến hành thăm dị số hệ dung môi và chọn hệ n-hexan – EtOAc (4:6) n- hexan – methanol – a.formic (9:1:0,5) làm hệ dung mơi sắc kí phân tích cho cao nhexan 3.4.1.2 Phân lập chất cao n-hexan SKC chân không (VLC) Điều kiện sắc ký VLC: - Cột sắc ký: x 40 cm - Pha tĩnh: silica gel hạt trung bình (40-63 µm, Ấn Độ), khối lượng 600 g - Mẫu: 50 g - Dung môi khai triển: Khai triển hệ dung môi với dung môi ban đầu n-hexan tăng dần tỉ lệ methanol n-hexan – methanol (8:2) - Thể tích hứng phân đoạn: 100 ml - Kiểm tra phân đoạn SKLM với hệ dung môi: n-hexan – CHCl3 (4:6) nhexan – methanol – a.formic (7:3:0,1) - Phát hiện cách soi đèn UV 254 nm, UV 365 nm và phun TT VS Theo dõi sắc ký đồ gộp phân đoạn có sắc ký đồ giống nhau, thu hồi dung môi áp suất giảm để thu phân đoạn khác Kết quả: - Từ 50 g cao ether, qua sắc ký cột nhanh thu 13 phân đoạn khác - Kiểm tra phân đoạn SKLM cho thấy phân đoạn (gọi tắt là phân đoạn B) có thành phần giống nên gộp chung, thu hồi dung môi thu 3,2 g cao, phân lập tiếp SKC cổ điển - Các phân đoạn khác chưa nghiên cứu 3.4.2 Phân lập phân đoạn B VLC sắc ký cột cổ điển 3.4.2.1 Thăm dị hệ dung mơi sắc ký: SKLM cao phân đoạn B với số hệ dung môi, phát hiện UV 254/ 365 nm, thuốc thử VS và chọn hệ n-hexan – EtOAc (8:2) có khả tách tốt cho SKC 3.4.2.2 Tiến hành phân lập SKC cổ điển Phân đoạn B (3,2 g) sắc ký cột cổ điển với điều kiện: - Chuẩn bị mẫu: hòa tan 3,2 g phân đoạn B lượng tối thiểu CHCl3, lọc lấy dịch trộn với lượng tối thiểu silica gel cỡ hạt 40 – 63 µm để bột tơi xốp - Chuẩn bị cột: nạp 150g silica gel 40 – 63 µm dạng hỗn dịch dung môi nền n-hexan - Pha động: n-hexan – EtOAc (8:2) Thể tích hứng phân đoạn 20 ml Theo dõi thành phần của phân đoạn SKLM với dung môi khai triển n-hexan – EtOAc (4:6) n- hexan – methanol – a.formic (9:1:0,5), phát hiện UV 254/365 nm Gộp phân đoạn chứa vết có Rf tương tự Kết quả: Đã thu phân đoạn, đó: - Phân đoạn (phân đoạn C- 850 mg) có thành phần đơn giản phân lập tiếp SKC - Các phân đoạn khác có khối lượng nhỏ thành phần phức tạp nên chưa nghiên cứu tiếp 3.4.3 Phân lập phân đoạn C VLC sắc ký cột cổ điển 3.4.3.1 Khảo sát điều kiện sắc ký cột: - Cột sắc ký: 3,0 × 40 cm (đường kính × chiều dài), rửa sạch, sấy khơ - Pha tĩnh: silica gel hạt trung bình: (40-63 µm), khối lượng: 100 g - Mẫu: 850 mg cao phân đoạn (phân đoạn C) cột cổ điển - Dung môi khai triển: cloroform-EtOAc (95:5) - Thể tích hứng phân đoạn: 10 ml - Hệ dung môi kiểm tra SKLM: n-hexan – EtOAc (4:6) n- hexan – methanol – a.formic (9:1:0,5) 3.4.3.2 Tiến hành phân lập Tiến hành phân lập SKC với điều kiện sắc ký trên, sau sắc ký thu phân đoạn và thể hiện Bảng 3.4 Bảng 3.4 Các phân đoạn thu từ sắc ký cột cổ điển Phân đoạn Hệ dung môi Phân đoạn hứng Khối lượng (mg) Ghi 1-105 0,5 Dịch màu vàng nhạt CHCl3-EtOAc (95:5) CHCl3-EtOAc 106-132 1,4 Dịch màu vàng nhạt 132-360 320 Có kết tinh trắng 361-450 80 Có kết tinh trắng (90:10) Ghi chú: - Phân đoạn 3, xuất hiện kết tinh, lọc lấy tinh thể Kết tinh lại cách hòa tan methanol, để lạnh, lọc lấy tinh thể, rửa methanol lạnh, làm khô (150 mg) Kiểm tra SKLM cho thấy có vết mỏng, đặt tên SGH1 - Phân đoạn 4: xuất hiện kết tinh, lọc lấy tinh thể Kết tinh lại cách hòa tan methanol, để lạnh, lọc lấy tinh thể, rửa methanol lạnh, làm khô (36 mg) Kiểm tra SKLM cho thấy có vết mỏng, đặt tên SGH2 - Các phân đoạn cịn lại khơng tiếp tục nghiên cứu 3.5 Kiểm tra độ tinh khiết chất phân lập (SGH1 SGM2) Các hợp chất SGH1 SGM2 hòa CHCl3, chấm đậm mỏng có kích thước x 10 cm Triển khai SKLM với hệ dung mơi có độ phân cực khác nhau, bao gồm: - n-hexan – CHCl3 (25:75) CHCl3 – EtOAc (9:1) n-hexan – EtOAc (8: 2) Kết quả: Cả hai chất SGH1 SGH2 đều cho vết SKLM, phát hiện soi UV thuốc thử VS 3.6 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 3.6.1 Xác định cấu trúc hợp chất SGH1 - SGH1 kết tinh (trong methanol) dạng tinh thể không màu, cho màu tím khơng bền với thuốc thử VS sắc ký lớp mỏng - Trên phổ MS (APCI+), MO-1 cho phân mảnh có m/z 397,37 = [M-H2O+H]+, M=414,37, tương ứng với công thức C29H50O với =5 - Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) chất SGH1 có 28 tín hiệu carbon có tín hiệu 140,7 và 121,7 ppm là của carbon olefin, có tín hiệu carbon 71,8 ppm của carbon hydroxy, và có 26 tín hiệu carbon 12,0-56,7 ppm của hydrocarbon sp3 - Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) của chất SGH1 có tín hiệu 5,36 ppm của hydro olefin, tín hiệu 3,52 ppm của carbinol Ngoài ra, có tín hiệu vùng 0,68-1,99 của hydro sp3 - So sánh liệu phổ SGM1 với liệu phổ β-sitosterol thấy có phù hợp ( Bảng 3.5) Bảng 3.5 Dữ liệu phổ NMR chất SGH1 so sánh với β- sitosterol Vị trí carbon CHn SGM1 (CDCl3, 500 MHz) бC (ppm)  ppm (mult.) β- Sitosterol (CDCl3,13C-NMR (100 MHz) бC (ppm) бC (ppm) CH2 37,3 37,3 CH2 31,7 31,7 CH 71,8 CH2 42,3 42,3 C 140,8 140,7 CH 121,7 CH2 31,7 31,7 CH 31,9 31,9 CH 50,2 50,2 10 C 36,2 36,5 11 CH2 21,1 21,1 12 CH2 39,8 39,8 13 C 42,3 42,3 14 CH 56,8 56,8 15 CH2 24,3 24,3 16 CH2 28,3 28,3 17 CH 56,1 56,1 18 CH3 11,9 11,9 19 CH3 19,4 19,4 20 CH 36,5 36,5 21 CH3 18,8 18,8 22 CH2 34,0 34,0 23 CH3 26,1 26,1 24 CH 45,9 45,9 25 CH 29,2 28,9 26 CH3 19,8 19,8 27 CH3 19,1 18,9 28 CH2 23,1 23,1 29 CH3 12,0 12,0 3.52 (m) 5.36 (t) 71,8 121,7 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 12 3.6.2 Xác định cấu trúc hợp chất SGH2 SGH2 bột kết tinh thể hình kim nhỏ màu trắng, tan CHCl3, tan MeOH, EtOAc Trên mỏng silica gel F254; vết SGH2 không hiện vết UV 254/365, cho vết với thuốc thử VS So sánh liệu phổ 13C- NMR của SGH2 với liệu phổ của stigmasterol cho thấy có tương tự nên kết luận SGH2 stigmasterol Kết ghi nhận Bảng 3.6 Bảng 3.1 Bảng so sánh phổ 1H-NMR 13C-NMR SGH2 stigmasterol SGH2 (MeOH,500 MHz) Vị trí C δC δH ppm (J,Hz) Stigmasterol (CDCl3, 600 MHz) δC 37,2 37,6 31,9 32,1 71,6 42,2 140,8 121,6 121,8 31,9 31,8 31,9 31,8 50,2 50,2 10 36,5 36,6 11 21,2 21,5 12 39,7 39,9 13 42,2 42,4 14 56,9 56,8 15 24,3 24,4 16 29,3 29,3 17 56 56,2 18 40,4 40,6 19 21,2 3,50 (m, 1H, J = Hz) 72,1 δH ppm (J,Hz) 3,51 (tdd, 1H, J = 4,5; 4,2; 3,8 Hz) 42,4 5,34 (t, 1H, J = 2,5 Hz) 0,89 (d,3H, J = 6,5 Hz ) 141,1 21,7 5,31 (t, 1H, J = 6,1 Hz) 0,91 (d, 3H, J = 6,2 Hz) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 13 20 138,3 5,02 (m, 1H) 138,7 4,98 (m, 1H) 21 129,3 5,16 (m, 1H) 129,6 5,14 (m, 1H) 22 42,1 46,1 23 40,4 42,4 24 56,8 25 24,3 26 29,3 0,82 (s, 3H, J = 7,5 Hz) 29,3 0,82 (d, 3H, J = 6,6 Hz) 27 56 0,80 (d, 3H, J = 7,5 Hz) 56,2 0,80 (d, 3H, J = 6,6 Hz) 28 40,5 0,70 (s, 3H) 40,6 0,71 (s, 3H) 29 21,2 1,01 (s, 3H) 21,7 1,03 (s, 3H) 0,85 (t, 3H, J = 6,5 Hz) 56,8 0,83 (t, 3H, J = 7,1 Hz) 24,4 IV KẾT LUẬN đề tài đạt kết sau: - Xác định độ tinh khiết của dược liệu: độ ẩm 8,83%, tro tồn phần (5,14%), tro khơng tan acid (0,93%) - Sơ thành phần hóa học, xác định thân rễ Thổ phục linh có chứa triterpenoid tự do, flavonoid, saponin, acid hữu và chất khử - Từ kg bột thân rễ Thổ phục linh thu mẫu Lâm Đồng chiết xuất cồn 96%, cô thu hồi dung môi và phân tách thành cao có độ phân cực tăng dần, bao gồm cao: ether dầu hỏa, CHCl3, EtOAc, n-butanol và cao nước Từ cao ether dầu hỏa tiến hành phân lập VLC SKC cổ điển thu chất tinh khiết Bằng phương pháp phổ học, SGH1 SGH2 xác định β- sitosterol stigmasterol Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 14 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT [1] Bộ môn Dược liệu, Khoa Dược – ĐH Y Dược TP Hồ Chí Minh (2013), Phương pháp nghiên cứu dược liệu, tr 25 – 50 [2] Bộ Y tế, Dược điển Việt Nam, Nhà xuất y học, Chuyên luận dược liệu Thổ phục linh [3] Nguyễn Tiến Bân cộng (2003), Danh mục loài thực vật Việt Nam, NXB Nông Nghiệp, Tập 3, tr 465 – 468 [4] Đỗ Huy Bích và cộng (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, 3, tr 883-886 [5] Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr 999 [6] Trần Thị Thanh Hằng (2010), Nghiên cứu thành phần hoá học Thổ phục linh (Smilax glabra Roxb.), họ Smilacaceae Thái Nguyên, Luận văn Thạc sĩ hóa học, Trường Đại học sư phạm Thái Nguyên, Thái Nguyên [7] Phạm Hoàng Hộ (1993), Cây cỏ Việt Nam, NXB Trẻ TP HCM, 1993, Q3, Tập 3, tr 486 – 494 [8] Mai Hương (2013), Nghiên cứu họat tính sinh học thành phần hóa học rễ thổ phục linh (Smilax glabra Roxb.) Việt Nam, Luận văn thạc sĩ sinh học, Viện Hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam, Hà Nội [9] Nguyễn Thị Lan (2015), Nghiên cứu thành phần hoá học tác dụng ức chế enzym αglucosidase phân đoạn dịch chiết n-hexan từ rễ củ Thổ phục linh (Smilax glabra Wall Ex Roxb.), Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại học dược Hà Nội, Hà Nội [10] Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr 498-499 [11] Đào Văn Phan và cộng (2003), “Nghiên cứu độc tính bán trường diễn của Thổ Phục Linh (Smilax glabra Roxb., Liliaceae) thỏ”, Tạp chí nghiên cứu y học, 24(4), tr 15-19 [12] Đào Văn Phan và cộng (2004), “Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết của Thổ phục linh (Smilax glabra Roxb.) súc vật thử nghiệm”, Tạp chí nghiên cứu y học phụ bản, 32(6), tr 6975 [13] Ngô Vân Thu, Trần Hùng (2011), Dược liệu học, Nhà xuất Y học, tr 271-273 [14] Trịnh Thị Thanh Vân cộng (2015), “Nghiên cứu điều chế chế phẩm chống oxi hóa từ rễ thổ phục linh (Smilax glabra Roxb.) của Việt Nam, Vietnam journal of chemistry, 53(1) [15] Nguyễn Ngọc Xuân cộng (2003), “Ảnh hưởng của Thổ phục linh (Smilax glabra Roxb.) nồng độ glucose insulin máu chuột cống đái tháo đường di truyền chủng GK đảo tụy cô lập”, Tạp chí nghiên cứu y học, 26(6), tr 17-21 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 15 TÀI LIỆU TIẾNG NƯỚC NGOÀI [16] Armen takhtajan (2009), Flowering Plants second edition, Springer, p.xliv-xlv [17] Atolovich M.P.D Prenzler et al (2002), “Methods for testing antioxidant activity”, Analyst, 127, p.183-198 [18] B Lakshmi Narayannan et al (2012), “Anti-oxidant and anti-inflammatory activity of synthesized (substituted) chromen -2- one”, In ternational journal of pharmaceutical sciences and research, 127, p.183-198 [19] Chen Xinqi et Tetsuo Koyama (2000), Flora of China, 24, p 96–115 [20] Chuan-li Lu et al (2014), “Antioxidant and anti-inflammatory activities of PhenolicEnriched extracts of Smilax glabra”, Evidence-based complementary and alternative medicine [21] Daozong Xia et al (2013), “Protective effects of the flavonoid-rich fraction from rhizomes of Smilax glabra Roxb on carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in rats”, J Membrane Biol, 246, pp 479–485 [22] Denizot F, Lang R (1986), “Rapid colorimetric assay for cell gorwth and survival Modifiications to this tetrazolium dye procedure giving improved sensitivity and reliability”, J Immunol Methodes, 89, p.493-497 [23] Gunhyuk Park et al (2014), “Antioxidant effects of the sarsaparilla via scavenging of reactive oxygen species and induction of antioxidant enzymes in human dermal fibroblasts”, Environmental toxicology and pharmacology, 38, pp 305-315 [24] Hai-qiang Sang et al (2014), “The protective effect of Smilax glabra extract on advanced glycation end products-induced endothelial dysfunction in HUVECs via RAGE-ERK1/2-NF-κB pathway”, Journal of Ethnopharmacology, volume 155, 1, pp 785-795 [25] Jicheng Shu et al (2015), “Phenylpropanoids and neolignans from Smilax trinervula”, Fitoterapia, 104, pp 64–68 [26] Jing Xu et al (2004), “Antiinflammatory Constituents from the Roots of Smilax bockii warb.”, Arch Pharm Res, Vol 28, No 4, pp 395-399 [27] K.T Chu and T.B Ng (2006), “Smilaxin, a novel protein with immunostimulatory, antiproliferative, and HIV-1-reverse transcriptase inhibitory activities from fresh Smilax glabra rhizomes”, Biochemical and Biophysical Research Communications, pp 118-124 [28] Kamonmas Srikwan and Arunporn Itharat (2014), “Total flavonoid content and antiallergic activity of Smilax glabra root extracts”, 1st Joint ACS AGFD- ACS ICSCT Symposium Thailand, pp 134-137 [29] Linda S M Ooi et al (2004), “New Mannose-Binding Lectin Isolated from the Rhizome of Sarsaparilla Smilax glabra Roxb (Liliaceae)”, Jounal of agricultural and food chemistry, 52 (20), pp 6091–6095 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 16 [30] Linda S M Ooi et al (2008),“Antiviral and Anti-proliferative Glycoproteins from the Rhizome of Smilax glabra Roxb (Liliaceae)”, The American Journal of Chinese Medicine, volume 36, Issue 01, 185 [31] Li-Wen Tian et al (2017), “Steroidal Saponins from the Genus Smilax and Their Biological Activities”, Natural Products and Bioprospecting, Volume 7, Issue 4, p 283–298 [32] Lu Chuan-li et al (2014), “Polysaccharides from Smilax glabra inhibit the proinflammatory mediators via ERK1/2 and JNK pathways in LPS-induced RAW264.7 cells” , Carbohydrate PolymerS [33] M H Woo et from the subterranean Parts 55(8), pp 1129 – 1135 al (1992), “Five of Smilax sieboldii”, new spirostanol glycosides Journal of Natural Products, [34] M Statour et al (2006), “Bioactive Steroidal Saponins from Smilax medica”, Planta Medica, 72(7), pp 667 – 670 [35] Marcos Soto-Hernandez et al (2017), Phenolic Compounds in Genus Smilax (Sarsaparilla), Phenolic Compounds - Natural Sources, Importance and Applications [36] Qing-Feng Zhang et al (2009), “Antioxidant activity of Rhizoma Smilacis Glabrae extracts and its key constituent-astilbin”, Food Chemistry, 115, p 297–303 [37] Qizhen Du et al (2005), “Purification of astilbin and isoastilbin in the extract of Smilax glabra rhizome by high-speed counter-current chromatography”, Journal of Chromatography, pp 98-101 [38] R R Bernardo et al (1996), “Steroidal Saponins from Smilax officinalis”, Phytochemistry, 43(2), pp 465 – 469 [39] S Y Li et al (2002), “New Phenolic Constituents from Smilax bracteata”, Journal of Natural Products, 65, pp 262 – 266 [40] Sameera R Samarakoon et al (2012), “Effect of standardized decoction of Nigella sativa seed, Hemidesmus indicus root and Smilax glabra rhizome on the expression of p53 and p21 genes in human hepatoma cells (HepG2) and mouse liver with chemically-induced hepatocarcinogenesis”, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 11 (1), pp 51-61 [41] Shuo Xu et al (2013), “Chemical constituents from the rhizomes of Smilax glabra and their antimicrobial activity”, Molecules, 18, pp 5265-5287 [42] T Kulisic et al (2004), “Use of different methods for testing antioxidative activity of oregano essential oil”, Food chemistry, 85 (4), p 633-640 [43] T T V Trinh et al (2015), “Antioxidant Activity of Extracts and Astilbin from the Root of Smilax glabra of Vietnam”, Malaysian Journal of Chemistry, Vol 17, pp 12–19 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 17 [44] Tiantian She et al (2015), “Sarsaparilla (Smilax glabra rhizome) extract inhibits cancer cell growth by s phase arrest, apoptosis, and autophagy via redox-dependent erk1/2 pathway”, Cancer prevention research jounal, 8(5), pp 464-474 [45] Wen-Ai Xu et al (2013), “Study on the correlation between constituents detected in serum from Rhizoma Smilacis Glabrae and the reduction of uric acid levels in hyperuricemia”, Journal of Ethnopharmacology, 150, pp 747-754 [46] William Gaffield et al (1974), “Structural Relationships and Interconversions of Isomeric Astilbins”, J Org Chem., Vol.40, No 8, pp 1057 – 1061 [47] Willy Shah et al (2015), “Evaluation of acute toxicity effect of Smilax glabra extract on white albino rats”, Journal of Advanced Scientific Research, 6(2), pp 45-47 [48] Y Ju et Z J Jia (1992), “Steroidal saponins from the rhizomes of Smilax menispermoidea”, Phytochemistry, 31(4), pp 1349 – 1351 [49] Y Sashida et al (1992), “Steroidal saponins from Smilax riparia and S.china”, Phytochemistry, 31(7), pp 2439 – 2443 [50] Yijun Yi et al (1998), “A New Isoflavone from Smilax glabra”, Molecules, 3, pp 145–147 [51] YU Yun Lung, (2000), Isolation of Lectins from Smilax Glabra Rhizomes and Castanea Mollisima nuts, Luận văn thạc sĩ sinh học, Đại học Hồng Kông, Trung Quốc [52] Yueqin Cai et al (2015), “Medicinal effect and its JP2/RyR2-based mechanism of Smilax glabra flavonoids on angiotensin II-induced hypertrophy model of cardiomyocytes”, Journal of Ethnopharmacology [53] Zhang et al (2008), “Literature review of rhizoma Smilacis glabrae”, Hong Kong Pharmaceutical Jounal, vol 15, 2, pp 65-71 Trang web [54] https://en.wikipedia.org/wiki/Smilacaceae (tham khảo ngày 07/09/2017) ... ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU HÓA HỌC VÀPHÂN LẬP MỘT VÀI HỢP CHẤT TRONG PHÂN ĐOẠN KÉM PHÂN CỰC CỦA THỔ PHỤC LINH (SMILAX. .. nghiên cứu về thành phần hóa học tác dụng dược lý của Thổ phục linh Để bổ sung sở khoa học, làm sáng tỏ tác dụng của Thổ phục linh, đề tài ? ?Nghiên cứu hóa học phân lập vài hợp chất phân đoạn. .. cao cồn thành phân đoạn đơn giản - Phân lập vài hợp chất phân đoạn n-hexan II NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, dung mơi hóa chất dụng cụ nghiên cứu 2.1.1 Ngun