Nghiên cứu độc tính bán trường diễn của thổ phục linh (Smilax Glabra Roxb, Liliaceae) trên thỏ potx

TCNCYH 24 (4) - 2003 Nghiên cứu độc tính bán trờng diễn của thổ phục linh (Smilax Glabra Roxb, Liliaceae) trên thỏ Đào Văn Phan 1 , Nguyễn Ngọc Xuân 2 , Nguyễn Thị Bích Thu 3 1 Đại học Y Hà Nội, Đại học Tây Nguyên 2 , 3 Viện Dợc liệu TW Hà Nội Trên thỏ, dạng bột đông khô của dịch chiết ethanol của thổ phục linh (Smilax glabra Roxb - SG) với liều 1, 25g và 2,5g/kg thân trọng gấp 5 - 10 lần liều tác dụng hạ đờng huyết) uống liên tục sau 15, 30 ngày đã không làm ảnh hởng đến cân nặng, các chỉ số huyết học cũng nh các chỉ số đánh giá chức năng gan thận. Tuy nhiên trên hình ảnh vi thể có biểu hiện thoái hóa mức độ nhẹ của tế bào gan ở cả 2 lô dùng thuốc. I. Đặt vấn đề Thổ phục linh (Smilax Glabra Roxb, Liliaceae - SG) đã đợc chứng minh là có tác dụng hạ đờng huyết trên chuột nhắt bình thờng và chuột nhắt gây đái tháo đờng thực nghiệm bằng streptozotocin [5], [3]. Sau khi sơ bộ tìm hiểu cơ chế tác dụng của thuốc [2] [4] và xác định đợc liều LD 50 [3] của SG trên chuột nhắt, để chuẩn bị cho việc thử thuốc trên lâm sàng, mục tiêu của nghiên cứu này là xác định độc tính bán trờng diễn của SG trên một số chỉ số sinh học của thỏ. II. Chất liệu, đối tợng và phơng pháp nghiên cứu. 1. Chất liệu và đối tợng nghiên cứu - Thân rễ của SG phơi khô đợc chiết trong ethanol, thu hồi dới dạng bột: 1mg bột tơng đơng 25mg dợc liệu khô đợc dùng trong nghiên cứu (chi tiết xin xem [1, 2]) Thỏ khoẻ mạnh, chủng New Zealand cả 2 giống cân nặng 2 - 2,5kg do Trung tâm nghiên cứu giống dê thỏ Sơn Tây cung cấp. Nghiên cứu đợc tiến hành tại bộ môn Dợc lý Trờng Đại học Y Hà Nội. 2. Phơng pháp nghiên cứu Để thử độc tính bán trờng diễn, dựa trên cơ sở liều có tác dụng hạ đờng huyết của SG đã đợc xác định là 0,25kg/kg thân trọng thỏ, chúng tôi dùng 2 lô thỏ, cho uống 2 liều khác nhau: liều gấp 5 lần (1,25g/kg) và liều gấp 10 lần (2,5g/kg). Thỏ đợc chia làm 3 lô, mỗi lô 10 con Lô 1. Lô chứng, uống NaCl 0,9% 5ml/kg cân nặng. Lô 2. Uống SG liều 1,25g/kg cân nặng Lô 3. Uống SG liều 2,5g/kg cân nặng. Thỏ đợc cho uống thuốc một lần vào buổi sáng (tất cả đều trong cùng một thể tích 5ml/kg cân nặng); uống liên tục trong 30 ngày và hàng ngày ghi nhận xét tình trạng hoạt động, ăn uống của từng thỏ. Vào trớc lúc thí nghiệm (N 0 ) và vào ngày thứ 15 (N 15 ), ngày thứ 30 (N 30 ) thỏ đợc theo dõi cân nặng, lấy máu để đánh giá chức năng gan (AST, ALT), thận (creatinin) bằng kỹ thuật enzym, dựa trên nguyên lý do sự thay đổi mật độ tạo thành NAD + (phản ứng giữa AST, ALT, creatinin với các kit tơng ứng) trên máy quang phổ Screenmaster của hãng Hospital Diagnostic, và chức năng tạo máu (hồng cầu, bạch cầu, công thức bạch cầu, Hb). Ngày kết thúc uống (N 30 ) các thỏ của mỗi lô đợc giết để quan sát hình ảnh đại thể của tất cả các phủ tạng, sau đó cắt sinh thiết gan thận (mỗi tạng cắt 3 lát ở 3 vị trí khác nhau) để kiểm tra hình ảnh vi thể tại Bộ môn Giải phẫu bệnh Trờng Đại học Y Hà Nội. 15 TCNCYH 24 (4) - 2003 III. Kết quả 1. ảnh hởng của SG tới cân nặng thỏ Bảng 1: Diễn biến trọng lợng của thỏ trong 15 và 30 ngày uống SG (n = 10/lô). Trọng lợng (kg) Lô Cha dùng thuốc 15 ngày sau dùng thuốc 30 ngày sau dùng thuốc NaCL 0,9% (1) 2,04 0,207 2,12 0,149 2,32 0,179 SG 1,25g/kg (2) 2,00 0,216 2,13 0,156 2,14 0,365 SG 2,5g/kg (3) 2,01 0,195 2,16 0,150 2,33 0,206 P (1) - (2) > 0,05 > 0,05 > 0,05 P (1) - (3) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Nhận xét: - SG với các liều 1,25g/kg, 2,5g/kg thân trọng uống liên tục trong 154 và 30 ngày, thỏ có xu hớng tăng cân ở tất cả các nhóm so với thời điểm cha uống thuốc; trọng lợng của các nhóm thỏ ở từng thời điểm nghiên cứu so với chứng không có sự khác biệt có ý nghĩa (p > 0,05). 2. Chức năng tạo máu 2.1. Số lợng hồng cầu và hàm lợng hemoglobin Bảng 2: ảnh hởng của SG trên số lợng hồng cầu và hàm lợng hemoglobin trên thỏ sau 15 và 30 ngày uống SG (n = 10/lô) Chỉ số NaCl 0,9% (a) SG 1,25g/kg (b) SG 2,5g/kg (c) P (a)- (b) P (a)- (c) N 0 4,89 0,35 5,00 0,49 5,11 0,44 > 0,05 N 15 5,05 0,33 5,01 0,29 5,14 0,26 > 0,05 Hồng cầu (x10 12 /l) N 30 5,07 0,24 4,67 0,42 5,01 0,28 > 0,05 P (N o )- (N 15 ) > 0,05 > 0,05 > 0,05 P (N o )- (N 30 ) > 0,05 > 0,05 > 0,05 N 0 11,41 1,03 11,0 1,08 10,0 1,35 > 0,05 N 15 10,98 1,10 11,52 0,88 10,81 0,88 > 0,05 Hemoglo bin (g/l) N 30 11,7 0,75 11,48 1,77 11,3 1,66 > 0,05 P (N o )- (N 15 ) > 0,05 > 0,05 > 0,05 P (N o )- (N 30 ) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Nhận xét: - SG với các liều 1,25g/kg, 2,5g/kg thân trọng uống liên tục 15 và 30 ngày, số lợng hồng cầu, và lợng hemoglobin của các nhóm thỏ ở từng thời điểm nghiên cứu so với chứng không có sự khác biệt có ý nghĩa (p > 0,05) 2.2. Số lợng bạch cầu và công thức bạch cầu 16 TCNCYH 24 (4) - 2003 Bảng 3: ảnh hởng của SG trên số lợng bạch cầu và công thức bạch cầu thỏ sau 15 và 30 ngày uống SG (n = 10/lô) Chỉ số NaCl 0,9% (a) SG 1,25g/kg (b) SG 2,5g/kg (c) P (a)- (b) P (a)- (c) N 0 8,07 0,73 7,99 0,73 7,92 0,65 > 0,05 N 15 5,13 0,68 7,89 0,67 7,86 0,72 > 0,05 Số lợng bạch cầu (x10 9 /l) N 30 7,98 0,31 7,6 0,42 7,53 0,2 > 0,05 P (N o )- (N 15 ) > 0,05 > 0,05 > 0,05 N 0 25,6 16,43 23,54 9,00 15,54 7,33 > 0,05 N 15 20,4 13,95 19,00 12,61 23,9 11,23 > 0,05 Bạch cầu trung tính (%) N 30 10,42 3,10 12,11 15,15 9,66 7,81 > 0,05 P (N o )- (N 15 ) > 0,05 > 0,05 > 0,05 P (N o )- (N 30 ) > 0,05 > 0,05 > 0,05 N 0 74,6 19,7 76,1 9,25 85,2 5,96 > 0,05 N 15 79,7 14,00 80,9 12,5 76,0 11,4 > 0,05 Bạch cầu lympho (%) N 30 89,4 3,05 87,6 15,1 90,3 7,81 > 0,05 P (N o )- (N 15 ) > 0,05 > 0,05 > 0,05 P (N o )- (N 30 ) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Nhận xét: - SG với các liều 1,25 g/kg, 2,5g/kg thân trọng uống liên tục 15 và 30 ngày, số lợng bạch cầu và công thức bạch cầu của các nhóm thỏ ở từng thời điểm nghiên cứu so với chứng không có sự khác biệt có ý nghĩa (p > 0,05). 3.3. Chức năng gan Để đánh giá ảnh hởng của SG tới nhu mô gan, chúng tôi đã định lợng enzym transaminase AST và ALT. Bảng 4: ảnh hởng của SG trên các enzym AST và ALT thỏ sau 15 và 30 ngày uống SG (n = 10/lô) Chỉ số NaCl 0,9% (a) SG 1,25g/kg (b) SG 2,5g/kg (c) P (a)- (b) P (a)- (c) N 0 46,55 25,48 49,9 18,63 43,86ữ 12,88 > 0,05 N 15 35,89 14,31 44,54 25,87 41,9 ữ11,09 > 0,05 AST (U/l) N 30 43,43 19,6 42,85 22,45 36,26ữ5,24 > 0,05 P (N o )- (N 15 ) > 0,05 > 0,05 > 0,05 P (N o )- (N 30 ) > 0,05 > 0,05 > 0,05 N 0 84,4 27,2 74,8 27,2 56,3 ữ 22,8 > 0,05 N 15 65,9 18,2 67,6 19,8 75,6 ữ 20,6 > 0,05 ALT (U/l) N 30 89,1 1,61 71,3 22,4 79,8 ữ 17,6 > 0,05 P (N o )- (N 15 ) > 0,05 > 0,05 > 0,05 P (N o )- (N 30 ) > 0,05 > 0,05 > 0,05 17 TCNCYH 24 (4) - 2003 Nhận xét: - SG với các liều 1,25g/kg, 2,5g/kg thân trọng uống liên tục 15 và 30 ngày, hàm lợng các men AST, ALT của các nhóm thỏ ở từng thời điểm nghiên cứu so với chứng không có sự khác biệt có ý nghĩa (p > 0,05) 4. Chức năng thận Để theo dõi ảnh hởng của SG đến chức năng lọc của cầu thận, chúng tôi đã định lợng creatinin huyết thanh thỏ. Bảng 5: ảnh hởng của SG trên nồng độ creatinin huyết thanh thỏ sau 15 và 30 ngày uống SG (n = 10/lô) Lô Cha dùng thuốc (a) 15 ngày sau dùng thuốc (b) 30 ngày sau dùng thuốc (c) P (a) - (b) P (a) - (c) NaCL 0,9% (1) 1,02 ữ 0,09 1,06 ữ 0,12 1,06 ữ 0,1 > 0,05 SG 1,25g/kg (2) 1,00 ữ 0,10 1,05 ữ 0,10 1,22 ữ 0,57 > 0,05 SG 2,5g/kg (3) 0,96 ữ 0,09 1,06 ữ 0,07 1,04 ữ 0,14 > 0,05 P (1) - (2) > 0,05 > 0,05 > 0,05 P (1) - (3) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Nhận xét: - SG với các liều 1,25g/kg, 2,5g/kg thân trọng uống liên tục 15 và 30 ngày, nồng độ creatinin huyết thanh của các nhóm thỏ ở từng thời điểm nghiên cứu so với chứng không có sự khác biệt có ý nghĩa (p > 0,05) 5. Những thay đổi về hình thái Sau 30 ngày uống thuốc, tất cả các thỏ thực nghiệm đều đợc mổ, khám nghiệm tử thi. Kết quả cho thấy: 5.1. Về mặt đại thể Trên tất cả các thỏ thực nghiệm, không thấy có các thay đổi bệnh lý nào về mặt hình thái đại thể của các cơ quan tim, phổi, gan, thận, lách, tuỵ và hệ thống tiêu hoá. 5.2. Về mặt vi thể Trên 3 tiêu bản ở 3 vị trí khác nhau cho mỗi gan và thận ở từng thỏ thí nghiệm, qua kính hiển vi quang học, sau 30 ngày uống thuốc liên tục, chúng tôi thu đợc một số kết quả sau: Bảng 6: Hình ảnh vi thể của gan và thận thỏ sau 30 ngày uống SG Lô Gan Thận NaCL 0,9% Mạch máu: Không có xung huyết và ứ máu Tế bào gan ở vùng trung tâm và các tiểu thùy gan có cấu trúc bình thờng Cầu thận bình thờng: ống lợn gần, quai Henlé, ống lợn xa, ống góp bình thờng. SG 1,25g/kg Hình ảnh thoái hoá hạt và hốc nhẹ ở một số tế bào gan. Xâm nhập viêm nhẹ ở một số khoảng cửa Cầu thận, ống lợn gần, quai Henlé ống lợn xa, ống góp bình thờng SG 2,5g/kg Hình ảnh thoái hoá hạt, thoái hoá hốc, mức độ nhẹ Cấu trúc cầu thận, ống lợn gần, quai Henlé, ống lợn xa, ống góp bình thờng III. Bàn luận Kết quả nghiên cứu thực nghiệm trên thỏ đã cho thấy dịch chiết ethanol của thổ phục linh dới dạng bột đông khô với liều gấp 5 lần liều gây hạ đờng huyết (1,25g/kg thân trọng), cho uống liên tục trong 30 ngày đã không gây thay đổi các chức năng sinh lý của thỏ: thỏ vẫn ăn uống hoạt động và tăng cân nh lô chứng, các chỉ số huyết học và sinh hoá về chức phận gan thận vẫn trong giới hạn 18 TCNCYH 24 (4) - 2003 bình thờng. Hình ảnh mô bệnh học về gan và thận không thấy khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng. Theo Đỗ Tất Lợi [1], kinh nghiệm dân gian thờng dùng Thổ phục linh dạng nớc sắc với liều 10 - 20g/ngày hoặc cao hơn (tức khoảng 0,4g/kg thân trọng/ngày). Trong các nghiên cứu trớc [2], [3] chúng tôi đã xác định đợc liều tác dụng và liều LD 50 trên chuột nhắt theo đờng tiêm màng bụng. Liều dùng theo đờng uống cho thỏ trong nghiên cứu này của chúng tôi tính ra dạng dợc liệu khô là gấp 80 lần liều dùng trên ngời. Nh vậy cho thấy SG có độ an toàn rất cao. Tuy nhiên, với liều gấp 10 lần liều gây hạ đờng huyết (2,5g/kg thân trọng) uống liên tục trong 30 ngày, kết quả cho thấy trong khi các thông số sinh lý và sinh hoá không thay đổi có ý nghĩa so với lô chứng và lô uống thuốc liều gấp 5 lần thì các hình ảnh mô bệnh học về gan đã có hiện tợng thoái hoá hạt và thoái hoá hốc ở mức nhẹ. Những hình ảnh này cũng đã gặp cả ở vài thỏ lô chứng. Những thơng tổn này cha đủ để gây ra những thay đổi về sinh hoá. Điều này gợi ý cho việc chỉ nên dùng thuốc ngắt quãng từng đợt 20 ngày, hoặc với liều thấp hơn. Trong quá trình dùng thuốc, nên theo dõi chức năng gan, thận và nên thận trọng khi dùng thuốc cho những bệnh nhân có tiền sử bệnh lý gan và thận. IV. Kết luận - Trên thỏ, SG dạng bột đông khô với liều uống gấp 5 lần liều gây hạ đờng huyết (1,25g/kg thân trọng) hoặc gấp 80 lần liều dùng trên ngời theo kinh nghiệm dân gian, uống liên tục trong 30 ngày đã không gây ra các thay đổi về chỉ số huyết học, chức phận gan thận và hình ảnh mô bệnh học gan thận. - Tuy nhiên liều gấp 2 lần liều trên, tức gấp 160 lần liều dùng cho ngời mới thấy một số thay đổi nhẹ về mô bệnh học gan thận trong khi các chỉ số sinh hoá và huyết học vẫn nằm trong giới hạn bình thờng. Tài liệu tham khảo 1. Đỗ Tất Lợi (1999), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam Nhà xuất bản Y học. 2. Đào Văn Phan, Nguyễn Ngọc Xuân, Nguyễn Duy Thuần (2000), Bớc đầu tìm hiểu cơ chế tác dụng hạ đờng huyết của thổ phục linh" (Smilax glabra), Tạp chí Nghiên cứu Y học, Đại học Y Hà Nội, Vol 11 No 1, 37 -42. 3. Nguyễn Ngọc Xuân, Đào Văn Phan, Nguyễn Duy Thuần (2000), Bớc đầu nghiên cứu tác dụng hạ đờng huyết của thổ phục linh (Similax glabra) trên chuột nhắt, Tạp chí Nghiên cứu Y học, Đại học Y Hà Nội, Vol 11, No, 3 - 6. 4. Nguyễn Ngọc Xuân, Đào Văn Phan, Nguyễn Duy Thuần (2003), Đánh giá tác dụng hạ đờng huyết của Thổ phục linh (Smilax glabra roxb, Liliaceae - SG) theo đờng uống trên chuột nhắt và ảnh hởng của nó trên test dung nạp glucose, Tạp chí Nghiên cứu Y học, Đại học Y Hà Nội. 5. Fukunaga, T., Toshihiro Miura (1997), Hypoglycemic effect of the Rhizomes of Smilax glabra in normal and Diabetic Mice - Biol. Pharm. Bull, 20 (1), 44 46. Summary Subchronic toxicity of smilax glabra roxb (sg) on rabbit The ethanol extract of SG has been given orally to rabit with the daily dose of 1,25 g and 2,5 g/kg body weight (equuivalent to 5 and 10 times of hypoglycemic dosis repectively) for 30 days consecutive, no changes have been noted in the animal activities, the blood cells and the biochemical functions of liver and kidney. But with the hight does (2,5g/kg) some small modifications in the microscopic examination of the liver have been observed. 19 . TCNCYH 24 (4) - 2003 Nghiên cứu độc tính bán trờng diễn của thổ phục linh (Smilax Glabra Roxb, Liliaceae) trên thỏ Đào Văn Phan 1 , Nguyễn Ngọc Xuân 2 , Nguyễn. LD 50 [3] của SG trên chuột nhắt, để chuẩn bị cho việc thử thuốc trên lâm sàng, mục tiêu của nghiên cứu này là xác định độc tính bán trờng diễn của SG trên một số chỉ số sinh học của thỏ. II dụng hạ đờng huyết của Thổ phục linh (Smilax glabra roxb, Liliaceae - SG) theo đờng uống trên chuột nhắt và ảnh hởng của nó trên test dung nạp glucose, Tạp chí Nghiên cứu Y học, Đại học Y