NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC, HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LOÀI THÔNG NÀNG (DACRYCARPUS IMBRICATUS) VÀ PƠ MU (FOKIENIA HODGINSII) TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ĐẶNG VIẾT HẬU NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC, HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LỒI THƠNG NÀNG (DACRYCARPUS IMBRICATUS) VÀ PƠ MU (FOKIENIA HODGINSII) Chuyên ngành: Hóa học hữu Mã số: 62.44.01.14 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HĨA HỌC HÀ NỘI - 2017 Cơng trình đƣợc hồn thành tại: Học viện Khoa học Cơng Nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công Nghệ Việt Nam Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS TRẦN VĂN LỘC PGS.TS TRỊNH THỊ THỦY Phản biện 1: …………………………………………………… Phản biện 2:……………………………………………………… Phản biện 3:……………………………………………………… Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án tiến sĩ, họp Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Vào hồi …….giờ…’, ngày….tháng…năm 2017 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc Gia Việt Nam MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Sự phát triển công nghiệp làm cho chất lượng sống người ngày nâng cao, mặt trái thảm họa mơi trường ngày nhiều Cùng với đó, việc lạm dụng hóa chất độc hại sản xuất nơng nghiệp, công nghiệp kháng thuốc, biến dị vi khuẩn, virus xem nguyên nhân gây chứng bệnh nguy hiểm cho người HIV/AIDS, tim mạch, ung thư, tiểu đường, viêm đường hô hấp cấp SARS, hay gần loại cúm virus … Trước thay đổi tiêu cực ấy, nhiệm vụ cấp thiết đặt cho nhà khoa học phải tìm loại thuốc chữa bệnh có tác dụng chọn lọc, hiệu cao, giá thành rẻ điều trị bệnh hiểm nghèo Trong trình nghiên cứu, nhà khoa học nhận theo tự nhiên xu hướng tất yếu để người tồn thích nghi tốt với tự nhiên Và đường hiệu nghiên cứu tìm chất có cấu trúc mới, có hoạt tính tiềm từ hợp chất thiên nhiên để phát triển thành thuốc chữa bệnh cho người, gia súc trồng Nguyên nhân trải qua hàng triệu năm tiến hóa, hợp chất thiên nhiên có khả tương thích dễ dàng, tương đối phù hợp với thể sống, độc đặc biệt thân thiện với môi trường Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa điển hình nên có thảm thực vật vơ đa dạng phong phú với khoảng 12.000 lồi, có 309 họ gồm 4.000 loài dùng để làm thuốc Đây nguồn tài nguyên thiên nhiên vô quý giá Mặc dù có nhiều loại thảo dược sử dụng để làm thuốc chữa bệnh cho người, gia súc trồng, nhiên hiệu kinh tế hạn chế việc khai thác sử dụng dựa vào kinh nghiệm dân gian Dựa sở khoa học chúng tơi chọn đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học lồi thơng nàng (Dacrycarpus imbricatus) Pơ mu (Fokienia hodginsii)” Mục tiêu nghiên cứu luận án - Nghiên cứu thành phần hóa học lồi thơng nàng (Dacrycarpus imbricatus (Blume) de Laub) lồi Pơ mu (Fokienia hodginsii (Dunn) A Henry et Thomas) - Thử nghiệm hoạt tính sinh học chất tách Các nội dung nghiên cứu luận án - Nghiên cứu phân lập chất từ cao chiết hai lồi thơng nàng lồi Pơ mu phương pháp sắc kí cột - Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập phương pháp phổ IR, MS, 1D-NMR, 2D-NMR - Thử nghiệm đánh giá hoạt tính sinh học số hợp chất phân lập Những đóng góp luận án Đây lần hai lồi kim thơng nàng (Dacrycarpus imbricatus) Pơ mu (Fokienia hodginsii) Việt Nam nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học ‫٭‬Từ lồi thơng nàng (Dacrycarpus imbricatus) - 13 hợp chất phân lập xác định cấu trúc hóa học, có 01 hợp chất cassipouryl hexadecanoat (79) 10 chất lần tìm thấy chi Dacrycarpus - Đây nghiên cứu hoạt tính gây độc dịng tế bào ung thư chất tách từ hai loài Trong đó, hợp chất 84 (acid lambetic) ức chế dịng tế bào ung thư biểu mô (KB) ung thư gan (HepG2) với giá trị IC50 tương ứng 165,93 µM 110,88 µM ‫ ٭‬Từ loài Pơ mu (Fokienia hodginsii): - Có hợp chất lần tìm thấy chi Fokienia số chất phân lập xác định cấu trúc hóa học từ loài Pơ mu - hợp chất thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào dịng tế bào ung thư biểu mô (KB) ung thư gan (HepG2), ung thư tủy xương cấp (OIC-AML), có hai hợp chất 92 (totarolone) 93 (3β-hydroxytotarol) có tác dụng làm chết tế bào ung thư tủy xương cấp theo chương trình (apoptosis) nồng độ 20 µg/ml Bố cục luận án Luận án gồm 132 trang với chương, bảng, 75 hình, 106 tài liệu tham khảo phụ lục gồm 81 trang hình phổ Luận án bố cục sau: Mở đầu: trang, Tổng quan: 25 trang, Thực nghiệm: 26 trang, Kết thảo luận: 65 trang, Kết luận kiến nghị: trang, Danh mục cơng trình liên quan đến luận án: trang, Tài liệu tham khảo: 12 trang NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN MỞ ĐẦU Đề cập tính cần thiết, ý nghĩa khoa học luận án CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN Trên sở nghiên cứu tài liệu, chương tổng quan họ, chi loài nghiên cứu: Tổng quan hóa học hoạt tính sinh học lớp chất diterpene flavonoid glucoside, hai nhóm chất phổ biến tìm thấy lồi thuộc chi 1.1 Đặc điểm thực vật tình hình nghiên cứu chi Dacrycarpus, họ Podocarpaceae 1.1.1 Đặc điểm thực vật chi Dacrycarpus 1.1.2 Sử dụng y học cổ truyền 1.1.3 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học chi Dacrycarpus 1.2 Đặc điểm thực vật tình hình nghiên cứu chi Fokienia A Henry & H.H Thomas, họ Hoàng đàn (Cupressaceae) 1.2.1 Họ Hoàng đàn (Cupressaceae) 1.2.2 Đặc điểm thực vật chi Fokienia A Henry & H.H Thomas 1.2.3 Đặc điểm thực vật, phân bố loài Fokienia hodginsii (Dunn) A Henry & H.H Thomas 1.2.4 Sử dụng ứng dụng y học cổ truyền 1.2.5 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học lồi Fokienia hodginsii 1.2.6 Vài nét hóa học hoạt tính sinh học hợp chất diterpene Tổng quan hóa học hoạt tính sinh học lớp chất diterpene, nhóm chất phổ biến tìm thấy lồi thuộc chi Fokienia CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM - Trình bày phương pháp nghiên cứu, cách phân lập liệt kê tính chất, số vật lý, số liệu phổ chất thu từ hai loài nghiên cứu - Các phương pháp xác định cấu trúc hóa học: Cấu trúc hợp chất xác định kết hợp phương pháp phổ đại phổ hồng ngoại (FT-IR), phổ khối (EI-, ESI-, HR-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều hai chiều (HSQC, HMBC…) Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học: Thử hoạt tính gây độc tế bào chất phân lập từ hai nghiên cứu - Sơ đồ chiết tách tinh chế hợp chất từ hai nghiên cứu Hình 2.1 Sơ đồ chiết phân lập chất từ vỏ thơng nàng Hình 2.2 Sơ đồ chiết phân lập chất từ gỗ thông nàng Hình 2.3 Sơ đồ chiết phân lập chất từ cành thông nàng ● Hợp chất 86 (β-sitosterol) tinh thể hình kim màu trắng, hàm lượng so với mẫu khô: 0,0037%, Rf = 0,34 (n-hexane:DCM = 1:3) ● Hợp chất 89 (catechin) màu đỏ tía, dạng keo, hàm lượng so với mẫu khô: 0,0018%, Rf = 0,2 (DCM:MeOH:H2O = 4:1:0,1), [α]25D = +14o (MeOH, c 0,1), cơng thức phân tử C15H14O6 (độ chưa bão hịa 9) Phổ 1H-NMR (CD3OD, 500MHz), δ (ppm), J (Hz): 6,86 (1H, d, J = Hz, H-2’); 6,78 (1H, dd, J = 2, 6,5 Hz, H-6’); 6,74 (1H, dd, J = 2, Hz, H-5’); 5,95 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-8); 5,88 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-6); 4,59 (1H, d, J = Hz, H-2); 4,01 (1H, ddd, J = 5,5, 5, 5,5 Hz, H-3); 2,86 (1H, dd, J = 5,5, 5,5 Hz, H4a); 2,53 (1H, dd, J = 8, Hz, H-4b) Phổ 13C-NMR (125MHz, CD3OD), δ (ppm): 157,8 (C-5); 157,5 (C-7); 156,9 (C-9); 146,2 (C-4’); 146,21 (C-3’); 132,2 (C-1); 120,0 (C-6’); 116,1 (C-2’); 115,2 (C5’); 100,8 (C-10); 96,3 (C-6); 95,5 (C-8); 82,8 (C-2); 68,8 (C-3); 28,46 (C-4) ● Hợp chất 87 (ponasterone A) chất bột màu trắng, hàm lượng so với mẫu khô: 0,0016%, Rf = 0,3 (DCM:MeOH = 4,5:0,5), tonc = 259-260oC cơng thức phân tử C27H44O6 (độ chưa bão hịa 6) HR-ESI-MS m/z = 487,3029 [M+Na]+ (tính tốn cho cơng thức C27H44O6Na 487,3036), m/z = 465,3209 [M+H]+ (tính tốn cho công thức C27H45O6 465,3216), công thức phân tử C27H44O6 Phổ 1H-NMR (500MHz, CD3OD), δ (ppm), J (Hz): 5,83 (1H, d, J = Hz, H-7); 3,97 (1H, d, J = Hz, H-3); 3,86 (1H, ddd, J = 4, 4,5, Hz, H-2ax); 3,36 (1H, H-22); 3,17 (1H, m, H-9); 2,38 (1H, m, H-5); 2,14 (1H, m, H-12ax); 2,02 (1H, H-17); 2,00 (1H, H-15α); 1,9 (1H, H-16α); 1,8 (1H, H-12eq); 1,78 (1H, H1eq); 1,78 (1H, H-11eq); 1,75 (1H, H-4eq); 1,75 (1H, H-24a); 1,72 (1H, H-20); 1,60 (1H, H-23a); 1,65 (1H, H-11ax); 1,65 (1H, H-4ax); 1,53 (1H, H-15β); 1,48 (1H, H-16β); 1,45 (1H, H-24b); 1,43 (1H, H-1ax); 1,30 (1H, H-23b); 1,20 (3H, s, H-27); 0,98 (3H, s, H-26); 0,97 (3H, s, H-19); 0,94 (3H, H-21); 0,91 (3H, s, H-18) Phổ 13C-NMR (125MHz, CD3OD), δ (ppm): 206,40 (C-6); 167,94 (C-8); 122,14 (C-7); 85,23 (C-14); 77,96 (C-20); 77,84 (C-22); 68,70 (C-2); 68,51 (C-3); 51,78 (C-5); 50,47 (C-17); 49,62 (C-13); 39,26 (C-10); 37,65 (C-23); 37,37 (C-1); 35,10 (C-9); 32,86 (C-4); 32,52 (C-12); 31,75 (C-15); 30,47 (C-24); 29,21 (C-25); 24,40 (C-19); 23,40 (C-27); 22,75 (C-26); 21,50 (C-11); 21,50 (C-16); 20,99 (C21); 18,32 (C-18) ● Hợp chất 88 (20-hydroxyecdysone) chất rắn, màu trắng hình kim, hàm lượng so với mẫu khô: 0,0021%, Rf = 0,3 (DCM:MeOH = 4:1), [α]25D = 58o (MeOH, c 0,1), tonc = 244-246oC HR-ESI-MS m/z = 503,2972 [M+Na]+ (tính tốn cho công thức C27H44O7Na 503,2985), m/z = 481,3151 [M+H]+ (tính tốn cho cơng thức C27H45O7 481,3165), cơng thức phân tử C27H44O7 (độ chưa bão hòa 6) Phổ 1H-NMR (500MHz, CD3OD), δ (ppm), J (Hz): 5,83 (1H, J = Hz, H7); 3,97 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-3); 3,86 (1H, ddd, J = 3,5, 5, 3,5 Hz, H-2ax); 3,36 (1H, H-22); 3,17 (1H, t, J = 9Hz, H-9); 2,38 (1H, dd, J = 9,5; Hz, H-5); 2,16 (1H, m, H-12 ax); 2,02 (1H, H-17); 2,00 (1H, H-15α); 1,98 (1H, H-16α); 1,8 (1H, H-12eq); 1,79 (1H, H-1eq); 1,78 (1H, H-11eq); 1,75 (1H, H-4eq); 1,75 (1H, H6 24a); 1,72 (1H, H-20); 1,67 (1H, H-23a); 1,65 (1H, H-11ax); 1,65 (1H, H-4ax); 1,59 (1H, H-15β); 1,48 (1H, H-16β); 1,45 (1H, H-24b); 1,43 (1H, H-1ax); 1,31 (1H, H-23b); 1,22 (3H, s, H-27); 1,22 (3H, s, H-26); 1,21 (3H, s, H-19); 0,98 (3H, H-21); 0,91 (3H, s, H-18) Phổ 13C-NMR (125MHz, CD3OD), δ (ppm): 206,36 (C-6); 167,93 (C-8); 122,12 (C-7); 85,20 (C-14); 78,39 (C-20); 77,88 (C-22); 71,27 (C-25); 68,68 (C-2); 68,49 (C-3); 51,75 (C-5); 50,51 (C-17); 49,50 (C-13); 42,36 (C-24); 39,25 (C-10); 37,36 (C-1); 35,07 (C-9); 32,82 (C-4); 32,50 (C-12); 31,77 (C15); 29,68 (C-26); 28,99 (C-27); 27,32 (C-23); 24,40 (C-19); 21,49 (C-16); 21,06 (C-21); 18,04 (C-18) ● Hợp chất 84 (acid lambertic) chất bột màu trắng, hàm lượng so với mẫu khô: 0,0016%, Rf = 0,5 (n-hexane:EtOAc = 4:1), [α]25D = +58o (MeOH, c 0,1), tonc = 129-130oC, công thức phân tử C20H28O3 (độ chưa bão hòa 7) Phổ 1H-NMR (500MHz, CD3OD), δ (ppm), J (Hz): 6,98 (1H, d, J = 8,3 Hz, H-12); 6,52 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-11); 3,12-3,14 (1H, m, H-15); 2,94 (1H, dd, J = 14,1, 6,3 Hz, H-7α); 2,74-2,76 (1H, m, H-7β); 2,26-2,28 (1H, m, H-6α); 2,01(1H, dd, J = 13, Hz; H-1α); 1,86 (1H, d, J = 13,4 Hz; H-3α); 1,71-1,73 (1H, m, H-2α); 1,67-1,69 (1H, m, H-1β); 1,62-1,64 (1H, m, H-2β); 1,42 (1H, d, J = 13,4 Hz; H-5); 1,38 (1H, d, J = 13,4 Hz; H-6β); 1,34 (3H, d, J = Hz, H16); 1,33 (3H, d, J = Hz, H-17); 1,18 (3H, s, H-20); 1,06 (3H, s, H-18); 1,00 (1H, dd, J = 13, 4,3 Hz; H-3β) Phổ 13C-NMR (125MHz, CD3OD), δ (ppm): 181,64 (C-19); 153,38 (C12); 147,37 (C-9); 133,61 (C-8); 127,30 (C-14); 127,17 (C-13); 112,58 (C-11); 54,41 (C-5); 44,87 (C-4); 40,91 (C-6); 39,45 (C-10); 38,83 (C-1); 32,49 (C-3); 29,29 (C-15); 27,73 (C-18); 23,69 (C-20); 23,16 (C-16); 23,12 (C-17); 22,63 (C-7); 21,20 (C-2) ● Hợp chất 79 (cassipouryl hexadecanoat, chất mới) dạng dầu, không màu, hàm lượng 0,0059 % (so với khối lượng mẫu khô), Rf = 0,5 (nhexane:EtOAc = 5:0,2), công thức phân tử C36H68O2 (độ chưa bão hòa 3) Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3), δ (ppm), J (Hz): 5,33 (1H, t, J = 7,0 Hz, H-14); 4,58 (2H, d, J = 7,0 Hz; H-15); 2,29 (2H, t, J = 7,5 Hz, H-2’); 2,00 (1H, m, H-12a); 1,69 (3H, br s, H-20); 1,60 (2H, m, H-11); 1,58-1,60 (2H, m, H-3’); 1,52 (1H, m, H-5); 1,38 (1H, m, H-6); 1,36 (2H, m, H-9); 1,30 (2H, m, H-8); 1,28 (2H, m, H-7); 1,25 (2H, m, H-3); 1,25 (2H, m, H-4); 1,25 (1H, m, H-10a); 1,25 (26H, m, H-4’- H-13’); 1,25 (2H, s, H-14’); 1,25 (2H, br s, H15’); 1,14 (2H, m, H-2); 1,08 (1H, m, H-10b); 1,08 (1H, m, H-12b); 0,87 (3H, t, J = Hz; H-16’); 0,86 (3H, s, H-16); 0,85 (3H, s, H-17); 0,845 (3H, d, J = 7; H-18); 0,838 (3H, d, J = Hz; H-19) Phổ 13C-NMR (125MHz, CDCl3), δ (ppm): 173,93 (C-1’); 142,58 (C-13); 118,21 (C-14); 61,19 (C-15); 39,86 (C-12); 39,38 (C-2); 37,44 (C-10); 37,37 (C-4); 37,30 (C-8); 36,64 (C-1); 34,42 (C-2’); 32,80 (C-6); 32,68 (C-9); 31,93 (C-14’); 29,70-29,16 (C4’-C13’); 27,98 (C-5); 25,04 (C-11); 24,80 (C-7); 24,80 (C-3’); 24,47 (C-3); 22,69 (C-16); 22,62 (C-17); 22,71 (C-15’); 19,74 (C-18); 19,71 (C-19); 16,36 (C-20); 14,10 (C-16’) ● Hợp chất 85, (+)-spathulenol: dạng dầu, hàm lượng so với mẫu khô 0,0011%, Rf = 0,25 (n-hexane:EtOAc = 5:0,5), [α]25D = 5° (CHCl3, c 0,1) ESI-MS m/z: 221,3 [M+H]+, công thức phân tử C15H24O (độ chưa bão hòa 4) Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm), J (Hz): 4,69 (1H, s, H-14a); 4,66 (1H, s, H-14b); 2,42 (1H, dd, J = 13,0, 6,0 Hz, H-4a); 2,20 (1H, m, H-6); 2,06 (1H, d, J = 13,0 Hz, H-4b); 1,77 (1H, m, H-8a); 1,55 (1H, m, H-8b); 1,32 (1H, d, J = 10,5 Hz, H-10); 1,28 (3H, s, H-15); 1,06 (3H, s, H-12); 1,03 (3H, s, H-13); 0,71 (1H, ddd, J = 11,0, 9,5, 6,0 Hz, H-2); 0,47 (1H, dd, J = 11,0, 9,5 Hz, H-1) Phổ 13C-NMR (125MHz, CDCl3), δ (ppm): 153,46 (C-5); 106,26 (C-14); 80,99 (C-9); 54,35 (C-10); 53,41 (C-6); 41,75 (C-8); 38,87 (C-4); 29,92 (C-1); 28,66 (C-12); 27,50 (C-2); 26,72 (C-7); 26,08 (C-15); 24,79 (C-3); 20,27 (C11); 16,34 (C-13) ● Hợp chất 78, cassipourol: dạng dầu, không màu, hàm lượng so với mẫu khô 0,0013 %, Rf = 0,5 (n-hexane:DCM = 3:1,5), [α]25D = + 10,9° (CHCl3, c 0,1), công thức phân tử C20H38O (độ chưa bão hòa 2) Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3), δ (ppm), J (Hz): 5,41 (1H, qt, J = 1,5, 7,0 Hz, H-14); 4,15 (2H, d, J = 7,0 Hz; H-15); 1,99 (1H, m, H-12a); 1,67 (3H, br s, H20); 1,52 (1H, m, H-5); 1,51 (2H, m, H-11); 1,40 (1H, m, H-9); 1,38 (1H, m, H10a), 1,38 (1H, m, H-6); 1,34 (2H, m, H-8); 1,29 (1H, m, H-10b); 1,28 (1H, m, H2α); 1,28 (2H, m, H-7); 1,26 (2H, m, H-3); 1,25 (2H, m, H-4); 1,09 (1H, m, H-12b); 1,04 (1H, m, H-2β); 0,86 (3H, s, H-16); 0,853 (3H, d, J = 7, H-18); 0,85 (3H, s, H17); 0,846 (3H, d, J = Hz, H-19) Phổ 13C-NMR (125MHz, CDCl3), δ (ppm): 140,30 (C-13); 123,11(C-14); 59,43 (C-15); 39,87 (C-12); 39,38 (C-2); 37,44 (C-10); 37,37 (C-8); 37,37 (C-4); 36,67 (C-1); 32,70 (C-9); 32,70 (C-6); 27,98 (C-5); 25,14 (C-11); 24,79 (C-3); 24,47 (C-7); 22,71 (C-16); 22,62 (C-17); 19,75 (C-18); 19,71 (C-19); 16,17 (C-20) ● DIH03 hỗn hợp hai acid trans-communic (hợp chất 81) (hợp chất 82) acid cis–communic với tỉ lệ 78:22, hàm lượng (chất 81+82) so với mẫu khô: 0,0038 %, cơng thức phân tử C20H30O2 (độ chưa bão hịa 6) Phổ 1H-NMR hợp chất 81 (500MHz, CDCl3), δ (ppm), J (Hz): 6,32 (1H, dd, J = 17,0, 10,5 Hz, H-14); 5,41 (1H, t, J = 6,0 Hz, H-12); 5,04 (1H, d, J = 17,0 Hz, H-15a); 4,88 (1H, d, J = 10,5 Hz, H-15b); 4,84 (1H, s, H-17a); 4,47 (1H, s, H-17b), 1,75 (3H, s, H-16); 1,25 (3H, s, H-18); 0,65 (3H, s, H-20) Phổ 13C-NMR hợp chất 81 (125MHz, CDCl3), δ (ppm): 183,90 (C-19); 147,93 (C-8); 141,61 (C-12); 133,90 (C-14); 133,45 (C-13); 109,91 (C-15); 107,66 (C-17); 56,43 (C-5); 56,29 (C-9); 44,21 (C-4); 40,37 (C-10); 39,27 (C6); 38,49 (C-1); 37,93 (C-3); 29;04 (C-18); 25,84 (C-7); 23,31 (C-11); 19,93 29,42 (C-18); 27,11 (C-14); 26,33 (C-6); 20,86 (C-2); 14,14 (C-20) ● Hợp chất 93 (3β-hydroxytotarol): dạng dầu, không màu, hàm lượng so với mẫu khô: 0,0011%, Rf = 0,55 (n-hexane:EtOAc = 4:1), [α]25D = +29o (MeOH, c 0,1) công thức phân tử C20H30O2 (độ chưa bão hòa 6) Phổ 1H-NMR (500MHz, CD3OD),δ (ppm), J (Hz): 6,92 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-11); 6,53 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-12); 4,1 (1H, d, J = Hz, H-3); 3,24 (1H, dd, J = 5, Hz, H-15); 2,97 (1H, dd, J = 6; Hz, H-7α); 2,71 (1H, dd, J = 4, 7,5 Hz, H-7β); 2,30 (1H, m, H-1α); 2,03 (1H, s, H-6α); 1,96 (2H, m, H-2); 1,82 (1H, m, H-6β); 1,42 (1H, m, H-1β); 1,35 (3H, H-17); 1,32 (3H, H-16); 1,29 (1H, m, H-5); 1,17 (3H, s, H-18); 1,07 (3H, s, H-19); 0,88 (3H, s, H-20) Phổ 13C-NMR (125MHz, CD3OD), δ (ppm): 155,32 (C-13); 142,29 (C-9); 134,89 (C-8); 132,07 (C-14); 123,78 (C-11); 115,26 (C-12); 79,58 (C-3); 50,93 (C-5); 39,87 (C-4); 39,27 (C-1); 38,56 (C-10); 30,29 (C-7); 28,96 (C-2); 28,76 (C-19); 25,61 (C-20); 20,56 (C-16&C-17); 20,43 (C-6); 16,08 (C-18) ● Hợp chất 80 (acid 12,13-dihydroxylabda-8(17),14-dien-19-oic) chất rắn tinh thể màu trắng hình kim, hàm lượng so với mẫu khô: 0,0022% với Rf = 0,5 (n-hexane:EtOAc = 4:1), cơng thức phân tử C20H32O4 (độ chưa bão hịa 5) ● Hợp chất 94 (9S)-drummondol: dạng dầu, không màu, hàm lượng so với mẫu khô: 0,0012 %, Rf = 0,5 (n-hexane:EtOAc = 4:1), công thức phân tử C13H20O4 (độ chưa bão hòa 4) Phổ 1H-NMR (500MHz, CD3OD) δ (ppm), J (Hz): 6,19 (1H, dd, J = 16,5, 5,5 Hz, H-8); 6,05 (1H, d, J = 16,5 Hz, H-7); 4,40 (1H, dq, J = 5,2, 6,5 Hz, H9); 3,93 (1H, dd, J = 8, 2,5 Hz, H-11α); 3,67 (1H, d, J = Hz, H-11β); 2,68 (1H, dd, J = 18, 2,5 Hz; H-2α); 2,37 (1H, dd, J = 18, 2,5 Hz, H-2β); 2,80 (1H, d, J = 17,5 Hz, H-4α); 2,45 (1H, dd, J = 17,5, 2,5 Hz; H-4β); 1,30 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-10); 1,20 (3H, s, H-13); 0,98 (3H, s, H-12) Phổ 13C-NMR (125MHz, CD3OD), δ (ppm): 211,23 (C-3); 140,68 (C-8); 125,66 (C-7); 87,45 (C-5); 82,34 (C-6); 78,39 (C-11); 68,87 (C-9); 53,94 (C-4); 53,23 (C-2); 48,49 (C-1); 23,97 (C-10); 19,17 (C-13); 15,65 (C-12) ● Hợp chất 95 (vomifoliol): dạng dầu, không màu, hàm lượng so với mẫu khô: 0022 %, Rf = 0,5 (n-hexane:EtOAc = 4:1), cơng thức phân tử C13H20O3(độ chưa bão hịa 4) Phổ 1H-NMR (500MHz, CD3OD), δ (ppm), J (Hz): 5,90 (1H, d, J = Hz, H-4); 5,83 (1H, d, J = 15,5 Hz, H-8); 5,79 (1H, d, J = 15,5 Hz, H-7); 4,34 (1H, dq, J = 6,5, Hz, H-9); 2,54 (1H, d, J = 17 Hz, H-2α); 2,18 (1H, d, J = 17 Hz, H2β); 1,95 (3H, d, J = Hz, H-13); 1,26 (3H, d, J = Hz, H-10); 1,06 (3H, s, H12); 1,03 (3H, s, H-11) Phổ 13C-NMR (125MHz, CD3OD), δ (ppm): 201,34 (C-3); 167,53 (C-5); 136,91 (C-8); 130,08 (C-7); 127,10 (C-4); 79,97 (C-6); 68,72 (C-9); 50,72 (C2); 42,43 (C-1); 24,48 (C-11); 23,81 (C-10); 23,47 (C-12); 19,59 (C-13) 12 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phân tích, xác định cấu trúc chất phân lập từ loài Dacrycarpus imbricatus Từ Thông nàng (Dacrycarpus imbricatus) 13 hợp chất phân lập xác định cấu trúc, bao gồm: chất khung steroid 86, chất 87 chất 88, flavonoid 89 chất đường saccaroza (GB2), secquiterpene chất 85, diterpene, chất thuộc khung labdane 80; 81 82, chất thuộc khung abietane chất 83, chất 84 diterpene vòng no chất 78, chất 79 Các chất phân lập từ lồi Thơng nàng ● Hợp chất 79: Cassipouryl hexadecanoate (chất mới) Phổ IR chất 79 có đỉnh hấp thụ υ 1738 cm-1 đặc trưng cho dao động hóa trị nhóm >C=O carbonyl đỉnh hấp thụ υ 2925 cm-1 2854 cm-1 đặc trưng cho dao động hóa trị liên kết Csp3-H (C-H alkan) So sánh liệu phổ 13C-NMR với chất 78 cho thấy chất 79 tín hiệu cassipourol giống chất 78, phổ chất 79 cịn có thêm tín hiệu 13 sau: Một nhóm ester (C 173,9), 14 nhóm methylene (C 29,2 29,7) nhóm methyl (C 14,1) (Bảng 3.1) Công thức phân tử hợp chất 79 xác định C36H68O2 dựa pic ion giả phân tử m/z 555,5126 [M+Na]+ (tính tốn lý thuyết cho cơng thức C36H68NaO2, 555,5117) phổ HR-ESI-MS Mảnh ion m/z 318,2965 (tính tốn lý thuyết cho cơng thức C20H39NaO, 318,2899) Kết hợp với liệu phổ 13C-NMR DEPT gợi ý cho thấy chất dẫn xuất cassipourol gắn với acid béo mạch dài, acid hexadecanoic Phổ 1H-NMR chất 79 bên cạnh 20 tín hiệu carbon cassipourol (78, 5×CH3, 9×CH2, 4×CH, 2×Cq), cịn có cụm tín hiệu sau: triplet nhóm methyl δH 0,87 (3H, t, J = Hz; H-16’), singlet tù δH 1,25 (br s, H-15’) triplet δH 2,29 (t, J = 7,5 Hz; H-2’) Trong phổ HSQC singlet δH 1,25 tương tác với tín hiệu carbon methylene (tại δC 29 ppm), triplet δH 2,29 (J = 7,5 Hz, H-2′) tương tác với nguyên tử carbon methylene (-CH2COOR) vùng trường cao δC 34,42 Ngoài ra, 20 tín hiệu carbon cịn lại cassipourol xác định dựa phổ DEPT, HSQC, HMBC (Bảng 3.1) Trong chuyển dịch hóa học δC 61,19 khẳng định tín hiệu cộng hưởng C-15, gắn với H-15 δH 4,58 (2H, d, J = Hz; H-15) 18 H 14 16 10 1' O 11 17 O 13 15 19 2' 3' 4' HMBC (H/C ) and NOESY ( ) (CH2)11CH3 Hình 3.4 Tương tác phổ HMBC NOESY hợp chất 79 Phổ HMBC chất 79 có tương tác H-14 (δH 5,33)/C-12 (δC 39,86), C-15 (δC 61,19); H-15 (δH 4,58)/C-14 (δC 118,21), C-13 (δC 142,58), C-1'(C=O) (δC 173,93); H-2' (δH 2,29)/C-1' (δC 173,93), C-3' (δC 24,8), C-4' (δC 27,9) H3' (δH 1,58-1,6)/C-2' (δC 34,42), C-4' (δC 29,7) (Bảng 3.1) Cấu hình trung tâm bất đối C-5* C-6* ba nhóm methyl C-16, C-17 C-18 cho giống chất 78 tín hiệu carbon có độ chuyển dịch hóa học phù hợp Điều khẳng định thêm tương tác qua không gian Me-16 (δH 0,86) với H-6 (δH 1,38) Me-17 (δH 0,85), Me-18 (δH 0,845) với nhóm methylene H-7 (δH 1,28) phổ NOESY Cấu hình trans liên kết đơi C-13 C-14 khẳng định tương tác Me-20 (δH 1,69) với nhóm oxymethylene H-15 (δH 4,58), ngồi không thấy tương tác Me-20 với H-14 (Hình 3.9) Kết hợp liệu phổ với mối tương quan tìm thấy phổ 2D-NMR (HSQC, HMBC, COSY NOESY) cho phép xác định cấu trúc chất 79 cassipouryl hexadecanoat Đây dẫn xuất ester cassipourol 14 Bảng 3.1 Số liệu phổ 1H- 13C-NMR hợp chất 78 chất 79 (CDCl3) C 78 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 C-1’ 2’ 3’ 4’-13’ H 1,28 m, 1,04 m 1,26 m 1,25 m 1,52 m 1,38 m 1,28 m 1,34 m 1,40 m 1,38 m, 1,29 m 1,51 m 1,99 m 1,09 m 5,41qt (1,5, 7,0) 4,15 d (7,0) 0,86 s 0,85 s 0,853b d (7) 0,846 d (7) 1,67 brs - 14’ 15’ 16’ - 79 C H 36,67 39,38 1,14 m, 2H 24,79 1,25 m 37,37 1,25 m 27,98 1,52 m 32,70 1,38 m 24,47 1,28 m 37,37 1,30* m 32,70 1,36 m 37,44 1,25 m, 1,08 m 25,14 1,60 m 39,87 2,00 m, 1,08 m 140,30 123,11 5,33 t (7,0) 59,43 4,58 d (7,0) b 22,71 0,86 s* b 22,62 0,85 s* c 19,75 0,845 d (7) c 19,71 0,838 d (7) 16,17 1,69 br s 2,29 t (7,5) 1,58-1,60 m 1,25 m, 26 H - 1,25 s 1,25* br s 0,87 t (7,5) a C 36,64 39,38 24,47 37,37d* 27,98 32,80 24,80 37,30d* 32,68 37,44 25,04 39,86 142,58 118,21 61,19 22,69e 22,62e 19,74f 19,71f 16,36 173,93 34,42 24,80 29,7029,16 31,93 22,71 14,10 HMBC (HC) C-3; C-4; C-16; C-17 C-2 C-5; C-18 C-3; C-4; C-7; C-18 C-6; C-8, C-7; C-19 C-8 C-8; C-9; C-19 C-10; C-12 C-20; C-11; C-10; C-14; C-13 C-20; C-12; C-15 (w) C-14; C-13; C-1’ (C=O) C-1; C-2; C-17 C-1; C-2; C-16; C-5 C-8; C-9 C-12; C-14 C-1’, C-3’, C-4’ C-2’, C-4’ * * * * C-H gán sở liệu phổ HSQC, HMBC so sánh với tài liệu [44]; b-h Giá trị có chữ tương ứng trao đổi lẫn cột * Tín hiệu bị che lấp acid hexadecanoic (C1'-C16 ') 15 Hình 3.5 Phổ HR-ESI-MS hợp chất 79 Hình 3.6 Phổ 1H-NMR hợp chất 79 (CDCl3, 500MHz) 16 Hình 3.7 Phổ 13C-NMR hợp chất 79 (CDCl3, 125 MHz) Hình 3.8 Phổ HSQC hợp chất 79 17 Hình 3.9 Phổ HMBC hợp chất 79 Hình 3.10 Phổ COSY hợp chất 79 18 Hình 3.11 Phổ NOESY hợp chất 79 3.2 Phân tích, xác định cấu trúc chất phân lập từ loài Fokienia hodginsii Từ Pơ mu (Fokienia hodginsii) hợp chất phân lập xác định cấu trúc, bao gồm: khung steroid 86, diterpene, chất thuộc khung abietane chất 92, chất 93, chất thuộc khung labdane chất 80, chất 81, chất khung nor-labdane chất 90, chất 91, megastigmen chất 94 chất 95 Các chất phân lập từ cành loài Pơ mu ● Hợp chất 92: Totarolone Hợp chất 92 tách từ dịch chiết n-hexane cành loài Pơ mu 19 thu tỉnh Tây Nguyên phân đoạn 10 sắc ký cột silica gel lặp lại với hệ dung mơi thích hợp Trên phổ IR, đỉnh hấp thụ rộng tù, với cường độ trung bình υ 3439 cm-1, chứng tỏ hợp chất có chứa nhóm -OH, đỉnh hấp thụ υ 2955 cm-1; 2937 cm-1 2870 cm-1 đặc trưng cho dao động hóa trị liên kết Csp3-H (C-H alkan), đỉnh hấp thụ υ 1691 cm-1 đặc trưng cho dao động hóa trị liên kết >C=O carbonyl Phổ 1H-NMR hợp chất 92 có hai doublet δH 6,95 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-11), 6,58 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-12), có số tương tác cho thấy có hai proton thơm vị trí ortho Ba nhóm methyl δH 1,29 (3H, s, H20), 1,17 (3H, s, H-19), 1,14 (3H, s, H-18) proton aliphatic khoảng từ δH 1,73-3,03 ppm Hai tín hiệu methyl doublet δH 1,34, 1,33 (mỗi nhóm 3H, J = 6,5 Hz) proton methine δH 3,27 (1H, br s, H-15), xác nhận có mặt nhóm isopropyl gắn vào vịng benzene Phổ 13C-NMR DEPT cho tín hiệu 20 nguyên tử carbon bao gồm nhóm ketone, 5×CH 3, 4×CH2, 4×CH 6×Cq Sự có mặt vịng thơm xác nhận hai tín hiệu methine δC 124,81 (C-11), 115,58 (C-12); carbon bậc bốn liên kết với nguyên tử oxy δC 155,12 (C-13) ba carbon bậc bốn khác δC 140,11 (C-9); 134,93 (C-8); 132,05 (C-14) Phổ HMBC có tương tác H-16, H-17 C-14; H-11 C-13 cho biết nhóm isopropyl gắn C-14 nhóm hydroxyl C-13 Từ số liệu phổ phân tích kết luận cơng thức phân tử chất 92 C20H28O2 cấu trúc 92 xác định 13-hydroxy-8,11,13-totaratrien-3-one (3-oxototarol, 3-ketototarol) Hợp chất cho thấy hoạt tính mạnh chống lại số vi khuẩn Gram dương Gram âm số nấm gây bệnh người [87-91] Hình 3.58 Phổ 1H-NMR hợp chất 92 (500MHz, CD3OD) 20 Hình 3.59 Phổ 13C-NMR hợp chất 92 (125 MHz, CD3OD) 3.3 Kết thử nghiệm hoạt tính sinh học Một số chất tách từ hai lồi Thơng nàng Pơ mu đại diện cho khung cấu trúc đủ lượng chọn để tiến hành thử hoạt tính gây độc tế bào ba dòng tế bào ung thư người: ung thư biểu mô (KB), ung thư gan (HepG2) ung thư bạch cầu cấp tính (OCI-AML) 3.3.1 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào hai dịng tế bào ung thư biểu mơ (KB) tế bào ung thư gan (HepG2) Các chất 80, 81; 83-84 90-93 chọn thử hoạt tính gây độc tế bào hai dòng tế bào ung thư biểu mô (KB) tế bào ung thư gan (HepG2) Kết (Bảng 3.9) Các hợp chất phân lập từ Thông nàng (83-84) Pơ mu 80-81 90-93 có khả gây độc tế bào ung thư mức độ trung bình yếu hai dịng tế bào ung thư biểu mơ ung thư gan với giá trị IC 50 từ 165,93-324,19 M từ 110,88-378,24 M (Bảng 3.9) Bảng 3.9 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào KB HepG2 STT 2 Ký hiệu Chất số Tên chất mẫu Các chất từ Thông nàng Acid pimaric DIH40 83 Acid lambetic GE10.1 84 Các chất từ Pơ mu Acid 12,13-dihydroxy FHE7.1 80 labda-8(17),14-dien-19-oic Acid trans–communic FHH7.1 81 Acid 15-nor-labda-8(17), FHH12.1 90 21 Giátrị IC50 (M) KB HepG2 283,98 165,93 190,18 110,88 >380,42 >380,42 403,60 >420,45 >423,21 >420,45 12E-diene-14-carboxal dehyde-19-oic Acid 13-oxo-15,16-dinor- >440,77 >440,77 FHH16.2 91 labda-8(17),11E-diene-19-oic Totarolone 324,19 378,24 FHH 10.2 92 3β-hydroxytotarol 232,17 266,45 FHH16.3 93 Ellipticine* 0,93±0,06 1,26±0,05 * Ellipticine: Chất so sánh M 3.3.2 Kết thử hoạt tính chống tăng sinh tế bào ung thư tủy xương cấp tính dịng OCI-AML Các chất: cassipourol (78), chất cassipouryl hexadecanoat (79), acid 12,13-dihydroxylabda-8(17)14-dien-19-oic (80), acid trans-communic (81) acid pimaric (83), acid lambertic (84), ponasterone A (87), 20-hydroxyecdysone (88), acid 15-nor-labda-8(17),12E-diene-14-carboxaldehyde-19-oic (90), totarolone (92) 3β-hydroxytotarol (93) (9S)-drummondol (94) thử nghiệm hoạt tính chống tăng sinh tế bào bạch cầu tủy xương cấp tính dòng OCI-AML Kết thử nghiệm cho thấy: Tất chất tách từ Pơ mu 90-94 có khả làm suy giảm số lượng tế bào ung thư dòng thử nghiệm (Biểu đồ 3.1A) nồng độ khác từ 10-20 µg/ml Đáng ý chất 92 (totarolone, FHH 10.2) chất 93 (3β-hydroxytotarol, FHH 16.3) có khả làm chết tế bào ung thư theo chương trình (apoptosis) sau 24 (Biểu đồ 3.1B) Điều thú vị chất 92 (totarolone) 93 (3β-hydroxytotarol) có khả làm giảm số lượng tế bào bạch cầu tủy xương cấp tính theo cách ức chế trình sinh tổng hợp DNA trình phân bào (pha G2/M) chu kỳ tế bào Trong diterpene 80, 81 82 từ thơng nàng có hoạt tính yếu Hai chất casipourol (78), chất cassipouryl hexadecanoat (79) hai ecdysteroid ponasterone A (87) 20-hydroxyecdysone (88) thể hoạt tính yếu nồng độ 80 µg/ml 100 µg/ml sau 24 thử nghiệm Điều thú chất có hoạt tính tốt (80, 81, 92 93) thuộc nhóm chất diterpenoid Vì dạng cấu trúc có liên quan cấu trúc-hoạt tính cần nghiên cứu sâu chế nghiên cứu 22 Biểu đồ 3.1 Số lượng tế bào OCI-AML chết theo chương trình (apoptosis) sau 24 thử nghiệm nồng độ 20 g/ml (*p < 0.05, **p < 0.01, *** p < 0.001) FHH7.1: acid trans-communic (81); FHH16.2: acid 13-oxo-15,16-dinor-labda8(17),11E-diene-19-oic (91); FHH10.2: totarolone (92); FHH16.3: 3βhydroxytotarol (93) A B C FIGURE Biểu đồ 3.2 Số lượng tế bào OCI-AML pha chu kì tế bào xử lí nồng độ 20 g/ml; (*p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001) FHH7.1: acid trans–communic (81); FHH16.2: acid 13-oxo-15,16-dinorlabda-8(17),11E-diene-19-oic (91); FHH10.2: totarolone (92); FHH16.3: 3βhydroxytotarol (93) 23 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ I Kết luận Hai lồi Thơng nàng (Dacrycarpus imbricatus) Pơ mu (Fokienia hodginsii) lần đầu nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Việt Nam Bằng phương pháp sắc ký cột lặp lại phân lập 22 hợp chất từ hai loài nghiên cứu Kết hợp phương pháp phổ IR, MS, NMR xác định cấu trúc chất phân lập là: Từ vỏ thân, gỗ cành Thông nàng (Dacrycarpus imbricatus) thu hái Lâm Đồng phân lập, xác định 13 hợp chất bao gồm: - 07 diterpene: cassipourol (78), cassipouryl hexadecanoat (79), acid 12,13dihydroxylabda-8(17),14-dien-19-oic (80), acid trans-communic (81), acid ciscommunic (82), acid pimaric (83), acid lambetic (84) - 01 secquiterpene: (+)-spathulenol (85) - 02 ecdysteroid: ponasterone A (87), 20-hydroxyecdysone (88) - 01 flavonoid: catechin (89) - 01 steroid: β-sitosterol (86) - 01 đường saccaroza Trong có hợp chất cassipouryl hexadecanoat (79) Từ cành Pơ mu (Fokienia hodginsii) thu hái Lâm Đồng phân lập xác định hợp chất bao gồm: - 06 diterpene: acid 12,13-dihydroxylabda-8(17)14-dien-19-oic (80), acid trans-communic (81), acid 15-nor-labda-8(17),12E-diene-14-carboxaldehyde19-oic (90), acid 13-oxo-15,16-dinor-labda-8(17),11E-diene-19-oic (91), totarolone (92), 3β-hydroxytotarol (93) - 01 steroid: β-sitosterol (86) - 02 megastigmen: vomifoliol (94), (9S)-drummondol (95) Các hợp chất 83-84 phân lập từ lồi Thơng nàng chất 80-82 9093 từ Pơ mu có khả gây độc tế bào ung thư mức độ trung bình hai dịng tế bào ung thư biểu mơ (KB) ung thư gan (HepG2) với giá trị IC50 từ 165,93-324,19 M từ 110,88- 378,24 M Các chất diterpenoid: acid 12,13-dihydroxylabda-8(17)14-dien-19-oic (80), acid trans-communic (81); acid pimaric (83), acid lambertic (84), acid 15nor-labda-8(17),12E-diene-14-carboxaldehyde-19-oic (90), totarolone (92) 3β-hydroxy totarol (93) có hoạt tính chống tăng sinh tế bào bạch cầu tủy xương cấp tính dịng OCI-AML tốt nồng độ 20 g/ml Hai chất 92 (totarolone) chất 93 (3β-hydroxytotarol) có tác dụng làm chết tế bào ung thư tủy xương cấp dịng OCI-AML theo chương trình (apoptosis) 24 Kết luận chung: Các kết luận án thực mục tiêu đề nghiên cứu thành phần hóa học hai lồi kim là: Thông nàng (Dacrycarpus imbricatus) Pơ mu (Fokienia hodginsii) thu Tây Nguyên Đã thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào, chống tăng sinh tế bào số chất tách Trong số 22 hợp chất tách có: chất mới, 10 chất lần tìm thấy từ chi Dacrycarpus, chất lần tìm thấy từ chi Fokienia Trong có nhiều chất có hoạt tính tốt II Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu sâu hoạt tính chống ung thư số hợp chất có hoạt tính sinh học từ hai lồi nghiên cứu từ tìm mối liên quan cấu trúc hóa học hoạt tính sinh học Tìm phương pháp chuyển hóa hai hợp chất 92 93 tạo dẫn xuất có hoạt tính tốt - Nghiên cứu sâu hoạt tính chế tác dụng chất có hoạt tính từ lồi Pơ mu để định hướng cho nghiên cứu 25 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Đặng Viết Hậu, Nguyễn Thanh Tâm, Đào Đức Thiện, Trần Đức Quân, Trần Văn Lộc, Trần Văn Sung, Trịnh Thị Thủy, Các hợp chất megastigmen từ lồi Pơ mu thu Tây Ngun, Tạp chí Hóa học, 2016, 54 (6e2), 44-47 Trinh Thi Thuy, Nguyen Thanh Tam, Nguyen Thi Hoang Anh, Dang Viet Hau, Dinh Thi Phong, Le Quoc Thang, Sabrina Adorisio,Tran Van Sung, Domenico V Delfino, 20-Hydroxyecdysone from Dacrycarpus imbricatus bark inhibits the proliferation of acute myeloid leukemia cells, Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 2017, 10 (2), 157–159 Nguyen Thanh Tam, Dang Viet Hau, Nguyen Thi Hoang Anh, Tran Thi Thanh Thuy, Nguyen Hoang Sa, Tran Duc Quan, Dao Duc Thien, Le Thi Hong Nhung,Tran Van Sung, Sabrina Adorisioe, Domenico V Delfino, Trinh Thi Thuy Anti-proliferative effects of diterpenes from the twig and leaves of Dacrycarpus imbricatus from Viet Nam, 2017, Bản thảo gửi đăng tạp chí quốc tế Natural Products Reseach (SCI-E) Dang Viet Hau, Nguyen Thanh Tam, Nguyen Thi Hoang Anh, Tran Duc Quan, Dao Duc Thien, Le Thi Hong Nhung, Bui Xuan Tinh, Nguyen Le Tuan, Tran Van Loc, Tran Van Sung, Trinh Thi Thuy, Terpenoids from Dacrycarpus imbricatus, Vietnam Journal of Chemistry, 2017, 55 (6) (đang chờ in) Dang Viet Hau, Nguyen Thanh Tam, Tran Duc Quan, Dao Duc Thien, Bui Xuan Tinh, Le Thi Hong Nhung, Tran Van Loc, Tran Van Sung, Trinh Thi Thuy, Diterpenoids from Fokienia hodginsii, Vietnam Journal of Chemistry, nhận đăng 2017, 2017, 55 (5), 557-560 26