KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược học FULL (DL và DLS) xây dựng mô hình và bước đầu đánh giá tác dụng chống huyết khối của cao giàu saponin tam thất hoang trên chuột

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y – DƯỢC XÂY DỰNG MƠ HÌNH VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG HUYẾT KHỐI CỦA CAO GIÀU SAPONIN TAM THẤT HOANG (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng) TRÊN CHUỘT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội - 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y – DƯỢC XÂY DỰNG MƠ HÌNH VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG HUYẾT KHỐI CỦA CAO GIÀU SAPONIN TAM THẤT HOANG (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng) TRÊN CHUỘT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa : Người hướng dẫn : Hà Nội – 2018 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cám ơn đến toàn thể Ban chủ nhiệm Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, Bộ môn Dược lý – Dược lâm sàng, Bộ môn Y Dược học sở tạo điều kiện cho em làm khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy giáo khoa dìu dắt, giúp đỡ em hồn thành chương trình học tập suốt năm qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PSG.TS Dương Thị Ly Hương người ln tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện giúp đỡ em hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô Bộ môn Dược lí – Dược lâm sàng giúp đỡ em q trình thực khóa luận Em xin cảm ơn đề tài thuộc chương trình Tây Bắc: “Ứng dụng giải pháp khoa học công nghệ để phát triển nguồn nguyên liệu tạo sản phẩm từ hai loài thuốc Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng) vùng Tây Bắc”, mã số KHCN-TB.07C/13-18 tài trợ kinh phí để em thực nội dung nghiên cứu Cuối em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè người thân quan tâm, động viên giúp em hồn thành khóa luận Dù cố gắng, lần đầu làm nghiên cứu khó tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp thầy để khố luận thêm hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2018 Sinh viên DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu BĐT COX – DMSO Heparin TLPT thấp HKTMS IC50 κ - carrageenan LD50 TDD Giải nghĩa Bơm điện tử Cyclooxygenase Dimethyl sulfoxide Heparin trọng lượng phân tử thấp Huyết khối tĩnh mạch sâu Liều ức chế 50% đối tượng thử (Inhibitory Concentration 50%) Kappa – carrageenan Liều gây chết 50% đối tượng thử ( Lethal Dose 50%) Tiêm da DANH MỤC HÌNH STT Hình 1.1 Hình 1.2 Hình 1.3 Hình 1.4 Hình 2.1 Hình 2.2 Hình 3.1 Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 Hình 3.6 Hình 3.7 Tên hình Trang Q trình đơng máu Sơ đồ tóm tắt trình điều trị huyết khối tĩnh mạch Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) 14 Saponin dẫn chất acid oleanolic 16 Sơ đồ quy trình chiết xuất cao giàu hoạt chất từ tam thất hoang 19 Sơ đồ tiến hành mơ hình gây huyết khối đuôi chuột 22 Huyết khối đuôi chuột gây ĸ-carrageenan tiêm phúc mạc 23 Phần trăm huyết khối đuôi chuột sau 24 gây huyết khối (A), 24 48 gây huyết khối (B), 72 gây huyết khối (C) Phần trăm huyết khối 24 giờ, 48 giờ, 72 sau tiêm κ25 carrageenan 20mg/kg Ảnh hưởng đường tiêm κ-carrageenan đến hình thành 26 huyết khối Ảnh hưởng nhúng đuôi nước đá đến hình thành huyết 27 khối Ảnh hưởng aspirin heparin đến hình thành huyết khối 28 Ảnh hưởng tam thất hoang đến hình thành huyết khối 30 đuôi chuột DANH MỤC CÁC BẢNG STT Bảng 1.1 Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng Trang Các thuốc sử dụng dự phòng huyết khối Mức độ gây huyết khối đuôi chuột sau 24 giờ, 48 giờ, 72 23 Ảnh hưởng thời gian nhúng đuôi nước đá đến phần trăm 26 huyết khối Ảnh hưởng aspirin heparin đến hình thành huyết 28 khối Ảnh hưởng tam thất hoang đến hình thành huyết khối 29 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Huyết khối 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Cơ chế bệnh sinh huyết khối 1.2 Phòng điều trị huyết khối 1.2.1 Phòng điều trị huyết khối tĩnh mạch 1.2.2 Phòng điều trị huyết khối động mạch 12 1.3 Tam thất hoang 14 1.3.1 Đặc điểm thực vật 14 1.3.2 Phân bố 15 1.3.3 Thành phần hóa học 15 1.3.4 Tác dụng dược lý 16 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .18 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.2 Động vật nghiên cứu 18 2.3 Hóa chất 18 2.4 Thiết bị dụng cụ 19 2.5 Phương pháp nghiên cứu 20 2.5.1 Xây dựng mơ hình huyết khối chuột κ-carrageenan 20 2.5.2 Đánh giá tác dụng chống huyết khối tam thất hoang 21 2.6 Phương pháp phân tích số liệu 22 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23 3.1 Kết 23 3.1.1 Xây dựng mơ hình huyết khối chuột ĸ-carrageenan 23 3.1.2 Xác định thuốc chứng dương 27 3.1.3 Tác dụng chống huyết khối tam thất hoang 29 3.2 Bàn luận 30 3.2.1 Mơ hình gây huyết khối κ-carrageenan 30 3.2.2 Thuốc chứng dương 33 3.2.3 Tác dụng chống huyết khối tam thất hoang 35 3.2.4 Hạn chế nghiên cứu 37 KẾT LUẬN 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO ĐẶT VẤN ĐỀ Huyết khối nguyên nhân quan trọng dẫn đến tắc nghẽn mạch máu gây tử vong để lại di chứng nặng nề cho người bệnh [39] Huyết khối hình thành động mạch tĩnh mạch Huyết khối động mạch dẫn đến nhồi máu tim, tai biến mạch máu não đột quỵ Huyết khối tĩnh mạch thường gặp chi gây biến chứng thuyên tắc phổi dẫn đến tử vong đột ngột hội chứng hậu huyết khối với biểu loét, đau nhức giới hạn vận động chi Theo Global Burden of Disease Study năm 1997, có khoảng 6,3 triệu người toàn giới tử vong thiếu máu tim 4,4 triệu người tử vong đột quỵ [46] nguyên nhân hàng đầu gây gánh nặng bệnh tật Hoa Kỳ năm 2013 [42] Nhóm thuốc sử dụng chủ yếu thuốc chống đông thuốc ức chế kết tập tiểu cầu với thời gian liều dùng phải tuân thủ theo chế độ điều trị nghiêm ngặt có hiệu Tuy nhiên, thuốc thường kèm theo tác dụng không mong muốn như: clopidogrel aspirin dùng đơn hay kết hợp có liên quan đến tăng nguy loét dày tá tràng [7, 49], sử dụng heparin có nguy gây chảy máu [7, 48] …Để hạn chế nhược điểm nói Y – Dược học nước giới có xu hướng quay trở với liệu pháp thiên nhiên Tam thất hoang có tên khoa học Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng, họ Nhân sâm - Araliaceae, phân bố chủ yếu Hoàng Liên Sơn Các kết nghiên cứu phân tích tách chiết thành phần hóa học trước tam thất hoang phần thân rễ chứa nhiều saponin khung olean với hàm lượng tương đối cao, báo cáo tác dụng lồi cịn hạn chế, hầu hết nghiên cứu in vitro Nghiên cứu Lê Thị Tâm Nguyễn Thị Tuyết Trinh chứng minh phân đoạn n-butanol chứa nhiều saponin tam thất hoang có tác dụng chống kết tập tiểu cầu liều mg/mL [12] tác dụng chống đông liều – mg/mL [15] in vitro Mà hình thành huyết khối lại phụ thuộc vào q trình đơng máu hoạt hóa tiểu cầu, vậy, với tác dụng chống đông chống kết tập tiểu cầu in vitro phân đoạn n-butanol, liệu chúng có tác dụng chống huyết khối in vivo hay khơng? Để trả lời câu hỏi đó, chúng tơi tiến hành đề tài: “Xây dựng mơ hình bước đầu đánh giá tác dụng chống huyết khối cao giàu saponin tam thất hoang chuột thực nghiệm” với mục đích : Xây dựng mơ hình gây huyết khối đuôi chuột nhắt κ-carrageenan Bước đầu đánh giá tác dụng chống huyết khối cao giàu saponin tam thất hoang mơ hình xây dựng 1.1 Huyết khối 1.1.1 Định nghĩa CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN Huyết khối tình trạng bệnh lý phát động lan rộng bất hợp lý phản ứng đơng cầm máu thể, dẫn đến hình thành cục máu đơng lịng (tắc hồn tồn, bán tắc hay nghẽn mạch) Trong đó, tiểu cầu loạt protein đơng máu (các yếu tố đơng máu) góp phần hình thành cục máu đơng [44] 1.1.2 Phân loại Tuỳ theo loại huyết khối (tĩnh mạch, động mạch hay vi mạch) mà có khác thành phần huyết khối vai trò yếu tố khác hình thành huyết khối  Huyết khối động mạch Thành phần chủ yếu cục máu đông huyết khối động mạch tiểu cầu, sau fibrin thành phần khác [40] Sự tổn thương thành mạch tăng hoạt hoá tiểu cầu đóng vai trị chủ yếu tăng đơng, từ gây huyết khối động mạch Các yếu tố nguy thường gặp như: tăng huyết áp, đái tháo đường, rối loạn lipid, hút thuốc …  Huyết khối tĩnh mạch Thành phần huyết khối tĩnh mạch fibrin [40] Tăng đông giảm chất ức chế đông máu (như giảm antithrombin III, protein C, protein S ) tăng hoạt hố yếu tố đơng máu (như động mạch sau phẫu thuật, tai biến, sản khoa thối hóa yếu tố tổ chức ) ngun nhân gây huyết khối tĩnh mạch Tình trạng bất động, nhiễm trùng, có thai làm tăng khả bị huyết khối tĩnh mạch bệnh nhân  Huyết khối vi quản Thường gặp bệnh nhân có hội chứng đơng máu rải rác lòng mạch (DIC: Disseminated Intravasscular Coagulation), xuất huyết giảm tiểu cầu huyết khối (TTP: Thrombotic Thrombocytopenic Purpura) … Thường tình trạng tăng đơng gây nên đa yếu tố: thành mạch, tiểu cầu, hoạt hoá yếu tố đơng máu huyết tương Nhận xét: Hình 3.6 cho ta thấy lô aspirin heparin ức chế hình thành huyết khối κ-carrageenan gây so với nhóm chứng bệnh DMSO 0,1% với p