Báo cáo thực tập tốt nghiệp: Một số kỹ thuật xét nghiệm chẩn đoán các bệnh

Báo cáo thực tập tốt nghiệp: Một số kỹ thuật xét nghiệm chẩn đoán các bệnh được nghiên cứu với các nội dung: Tổng quan tài liệu, vật liệu và phương pháp, kết quả và biện luận, kết luận. Để hiểu rõ hơn mời các bạn tham khảo tài liệu.

BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH………………………………………………………………… CHỮ VIẾT TẮT………………………………………………………………………6 LỜI MỞ ÐẦU…………………………………………………………………………7 CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU…………………………………………… 1.1.Giới thiệu khoa xét nghiệm di truyền y học bệnh viện Từ Dũ………………….8 1.2.Tổng quan phương pháp………………………………………………… 11 1.2.1.Karyotype……………………………………………………………………….11 1.2.2.Sinh học phân tử……………………………………………………………… 14 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP………………………………… 22 2.1 Karyotype.……………………………………………………………………… 22 2.1.1.Vật liệu ………………………………………………………………………….22 2.1.2 Dụng cụ thiết bị…………………………………………………………… 22 2.1.3.Hóa chất…………………………………………………………………………22 2.1.4.Quy trình……………………………………………………………………… 22 2.2.Sinh học phân tử…………………………………………………………………27 2.2.1.QF-PCR……………………………………………………………………… 28 2.2.2.FISH……………………………………………………………………………31 2.2.3.Real time PCR…………………………………………………………………33 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN………………………………………37 3.1 Karyotype……………………………………………………………………… 37 3.2.Sinh học phân tử………………………………………………………………… 38 3.2.1 QF PCR……………………………………………………………………… 38 3.2.2 FISH……………………………………………………………………………41 3.2.3.Realtime PCR chẩn đoán HPV………………………………………………….42 CHƢƠNG KẾT LUẬN………………………………………………………… 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………………………………… 45 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ DANH MỤC HÌNH Hình Các giai đoạn phản ứng PCR……………………………………17 Hình Đường cong khuếch đại Tín hiệu huỳnh quang trình bày trừ đường nền…………………………………………………………………………… 20 Hình FISH chẩn đoán nhanh hội chứng Down, Patau, Edward, Turner, Kleinerfelter chẩn đoán trước sinh Thai nhi mắc hội chúng Patau (trisomy 13)…………………………………………………………………………………… 23 Hình Lấy máu ngoại vi người lớn………………………………………….24 Hình Lấy máu ngoại vi trẻ…………………………………………………24 Hình Cấy máu……………………………………………………………… 25 Hình Dung dịch Demecolcine……………………………………………… 26 Hình Ly tâm 1800 rpm phút………………………………………….26 Hình Nhỏ KCl vào mẫu ống ly tâm………………………………… 26 Hình 10 Nhỏ axit acetic vào mẫu ly tâm………………………………27 Hình 11 Sau cho dung dịch carnoy vào lần 2………………………………27 Hình 12 Dung dịch có màu trắng nhỏ dung dịch Carnoy lần 3…………….27 Hình 13 Nhỏ lame (kiểu nhỏ ngang)………………………………………… 28 Hình 14 Nhỏ lame cao (kiểu nhỏ cao)………………………………………….28 Hình 15 Nhuộm lame Giemsa: buffer…………………………………….28 Hình 16 Quan sát NST kính hiển vi………………………………………29 Hình 17 Ống type đánh số theo mã số ống chứa dịch ối…………….31 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hình 18 Mẫu lắc ủ 990C 800rpm 10 phút………………………….31 Hình 19 Màng lọc cuả ống type có màng lọc………………………………….31 Hình 20 Nhỏ dung dịch wash buffer type 6………………………………… 31 Hình 21 Máy PCR……………………………………………………… …….32 Hình 22 Điện di mao quản sản phẩm………………………………………… 33 Hình 23 Cho vào máy lai PCR…………………………………………………35 Hình 24 Gỡ keo sau lai…………………………………………………………35 Hình 25 Đánh mã số cho mẫu………………………………………………… 36 Hình 26 Bật tia UV tủ cấy an tồn sinh học cấp 2……………………….37 Hình 27 Máy trích ly DNA tự động…………………………………………….38 Hình 28 Nhỏ mẫu vào Plate………………………………………………… 38 Hình 29 Plate đựng mẫu dung dịch AW1………………………………… 38 Hình 30 Kết NST hình vi tính chưa xếp…………………….39 Hình 31 Kết NST hình vi tính sau xếp………………….39 Hình 32 Kết NST in giấy…………………………………………… 40 Hình 33 Kết Trisomy XXX……………………………………………… 41 Hình 34 Kết bị hội chứng Turner………………………………………… 41 Hình 35 Kết bị hội chứng Klinefelte…………………………………… 41 Hình 36 Kết Trisomy 21( hội chứng down)…………………… ……….42 Hình 37 Kết Trisomy 13 (hội chứng Patau)…………………………… 42 Hình 38 Kết Trisomy 18 (hội chứng Edward)………………………… 42 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hình 39 Kết FISH NST 21 NST 13 bình thường……………….………43 Hình 40 Kết FISH NST 21 hội chứng down….………………………….43 Hình 41 Kết FISH NST XX NST 18 bình thường…….……………… 43 Hình 42 Kết FISH NST XY NST 18 bình thường………….………… 43 Hình 43 Kết âm tính………………………………………………….…….45 Hình 44 Kết dương tính………………………………………… 45 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ CHỮ VIẾT TẮT CHỮ VIẾT TẮT NỘI DUNG NST Nhiễm sắc thể GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ LỜI MỞ ÐẦU Trong phát triển quốc gia nay, ngành Y nắm vai trị vơ quan trọng Khơng đóng góp to lớn cho kinh tế mà ngành Y cịn góp phần củng cố mặt đời sống nhân sinh cho quốc gia Với quốc gia khỏe mạnh thể chất người lao động, quốc gia có chỗ dựa vững để phát triển mạnh mẽ kinh tế Cùng với tiến triển khoa học, bệnh di truyền ngày người ý Theo thống kê nhi khoa, gần 20 năm nay, tỉ lệ trẻ em chết bệnh di truyền giảm mạnh, cị tỉ lệ trẻ phát bệnh tỷ lệ tử vong dị tật bẩm sinh bệnh di truyền tăng cao Trong trình phát triển tự nhiên nhân loại, ảnh hưởng nhân tố, làm cho chất di truyền thể biến đổi Trong biến đổi có loại biến đổi số kết cấu nhiễm sắc thể nhân tế bào gọi dị dạng nhiễm sắc thể, loại khác đột biến gen Vì tất bệnh nhiễm sắc thể gen nhân tế bào biến dạng gây cản trở cho thay thế, gây thiếu hụt dung mơi có liên quan dẫn đến thể di truyền sang đời sau, tạo nên hỗn hợp sinh lý nhân thể, sinh hóa, gây cản trở q trình thay thế, loại bệnh uy hiếp sức khỏe người Vì việc xét nghiệm sớm trước sinh việc quan trọng nhằm ngăn chặn việc sinh bị tật gây nên gánh nặng cho gia đình xã hội Với nội dụng thực tập tốt nghiệp: “một số kỹ thuật xét nghiệm chẩn đoán bệnh” khoa xét nghiệm di truyền y học bệnh viện Từ Dũ TpHCM Chúng em hiểu rõ kỹ thuật xét nghiệm số bệnh quan trọng trải nghiệm thực tế nâng cao tay nghề biết khác lý thuyết thực tế GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Giới thiệu khoa xét nghiệm di truyền y học bệnh viện Từ Dũ Bệnh viện Từ Dũ bệnh viện đầu ngành sản phụ khoa nước, đồng thời trung tâm sản phụ khoa lớn khu vực phía Nam tọa lạc 284 Cống Quỳnh, phường Phạm Ngũ Lão, quận 1, Tp.HCM Trong khoa xét nghiệm di truyền y học tự hào đơn vị đầu nước di truyền người chẩn đoán trước sinh Di truyền sinh học phân tử chuyên khoa mũi nhọn bệnh viện Từ Dũ, lĩnh vực tiên phong xu hướng phát triển y học giới Khoa có đội ngũ cán y tế trẻ giỏi, có đầy đủ thiết bị xét nghiệm sàng lọc chẩn đoán gen đại Khoa xét nghiệm di truyền y học thành lập ngày 8/10/2010 từ tiền thân buồng di truyền thuộc khoa giải phẫu bệnh - tế bào - di truyền, gồm phận chính: -Xét nghiệm sàng lọc: sàng lọc trước sinh (double test combined test, triple test) sàng lọc sơ sinh (thiếu G6PD, suy giáp bẩm sinh, tăng sản tuyến thượng thận bẩm sinh) -Xét nghiệm gen nhiễm sắc thể: karryotube, QF-PCR, FISH, đột biến gen Thalassemia, loạn dưỡng Duchenne, Digeorge, AZF, SRY, Hemophilia, nhận dạng gen người, đột biến gen sẩy thai, HPV, Rubella PCR, CMV PCR, Toxoplasma PCR nhiều bệnh khác (nguồn: http://tudu.com.vn/vn/gioi-thieu/cac-chuyen-khoa/khoa-canlam-sang/khoa-xet-nghiem-di-truyen-y-hoc/) Sơ đồ quy trình xét nghiệm khoa - Sơ đồ quy trình xét nghiệm karyotube +Lấy mẫu: Tiếp nhận bệnh nhân, ghi thông tin, lấy mẫu nhận mẫu lừ nơi gửi đến, ký nhận +Kiểm tra: Kiểm tra mẫu máu lấy có đạt yêu cầu thực xét nghiệm không GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BỆNH VIỆN TỪ DŨ BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP +Nhập liệu: Nhập thông tin bệnh nhân bệnh phẩm, ghi nhận chất lượng mẫu +Thực xét nghiệm: Thực xét nghiệm theo quy trình kỹ thuật xét nghiệm nhiễm sắc thể đồ máu gồm bước nuôi cấy 72 giờ, thu hoạch chuẩn bị lam ngày, đọc phân tích Lấy mẫu Khơng đạt Kiểm tra Đạt Nhập liệu Thực xét nghiệm Ra kết Không đạt Kiểm tra kết Đạt Nhập kết Tư vấn Trả nơi giới thiệu điều trị chuyên khoa Lưu hồ sơ Kết thúc +Ra kết xét nghiệm +Kiểm tra kết quả, khơng đạt lấy mẫu lại GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ +Nhập kết xét nghiệm in phiếu trả kết qua phần mềm nhiễm sắc thể đồ máu cho bệnh nhân +Tư vấn mặt di truyền cho bệnh nhân: Tranh ảnh, tài liệu tư vấn +Chuyển bệnh nhân lại nơi định xét nghiệm nơi có điều trị chuyên khoa phù hợp +Lưu hồ sơ -Sơ đồ quy trình xét nghiệm sinh học phân tử Nhận mẫu Kiểm tra thơng tin Nhập liệu Ly trích DNA PCR Chạy điện di Ra kết phân tích Trả kết bệnh nhân +Nhận mẫu: Nhận mẫu dịch ối, mẫu máu, gai từ khoa khác bệnh viện +Kiểm tra thông tin: Thông tin ống chứa mẫu với thông tin giấy, không khớp báo lại GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 10 BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ -Điện di: Chuẩn bị ống tube, hút 600 µl Hi-Di-Formamide cộng với 12 µl 560 sizer orange Hút 12 µl hỗn hợp vào giếng thêm 0,9 µl mẫu đưa vào máy chạy điện di mao quản theo chu trình điện di phân tích đoạn với: Điện bơm mẫu: 2,5V; Thời gian bơm mẫu: 20 giây, điện điện di: 15V; thời gian điện di: 30 phút Dữ liệu sau điện di mao quản xuất dạng tập tin fsa phân tích kết trisomy phần mềm GeneMarker 1.85 Tất tiêu chuẩn phân tích, đánh giá theo Hướng dẫn thực hành chẩn đoán lệch bội QF-PCR (2007) Hiệp hội Di truyền Lâm sàng Vương quốc Anh, kết trả cho bệnh nhân 2.2.2.FISH Hình 22 Điện di mao quản sản phẩm PCR Khi xét nghiệm kỹ thuật QF-PCR không cho kết kết không rõ ràng tiến hành thêm kỹ thuật FISH Nguyên tắc: Sử dụng đoạn dò đánh dấu chất phát huỳnh quang bắt cặp chuyên biệt với vùng NST đặc hiệu Dưới kính hiển vi huỳnh quang, vị trí đoạn dò huỳnh quang gắn với NST phát Dựa vào số lượng tín hiệu màu GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 31 BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ huỳnh quang để xác định số lượng NST: tế bào 2n cho tín hiệu, tế bào bất thường cho nhiều tín hiệu 2.2.2.1.Vật liệu: Dịch ối từ thai phụ 2.2.2.2.Dụng cụ thiết bị: Kính hiển vi, lam kính, Lamelle, máy ủ nhiệt, máy ly tâm, máy ổn nhiệt có lắc, pipetman, đầu cơn, máy sấy lame, máy lai FISH 2.2.2.3.Hóa chất: Trypsin-EDTA 1X (GIBCO), Dung dịch KCl 0,075M, Dung dịch carnoy, Sử dụng kit FISH thương mại VYSIS (Mỹ), DAPI, NP40 0,3%, NP40 0,1%, SSC 2X, Pepsine, PBS, FA, Ethanol, prenatal X, Y and 18 enumeration Probe prenatal 13 and 21 enumeration Probe, Keo, Antifate 2.3.2.2.Cách tiến hành: -Ly tâm dịch ối 1800 rpm phút -Thu hoạch gồm bước: Hút bỏ dịch, lấy cặn, nhỏ 2ml trypsine ủ 370 C 10 phút, ly tâm 1800 vòng/12 phút  hút bỏ dịch lấy cặn, bổ sung thêm 8-10ml KCl 7,5%, ủ 370 C/40 phút  ly tâm hút bỏ dịch bước sau làm tương tự cách thu hoạch máu kyraotube khác ủ 370 C 40 phút ly tâm 1800 rpm 12 phút -Nhỏ lam: Hút mẫu nhỏ lên lam kính kẻ vịng trịn để sẵn máy sấy lam 55 C, để khô -Chuẩn bị lai: Nhúng lam vào dung dịch SSC 2X 370 C/ 60 phút  nhúng qua pepsine 370 C/ 11 phút  cho qua dung dịch PBS nhiệt độ phòng phút  nhúng vào dung dịch FA 0,95% nhiệt độ phòng/5 phút  cho vào PBS nhiệt độ phịng phút đem phơi khơ  nhúng qua cồn 70 / phút  cho vào cồn 100 /2 phút  phơi khô GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 32 BỆNH VIỆN TỪ DŨ BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP -Lai: Tiến hành nhỏ probe NST 13, 18, 21, X, Y vào lai, đậy lamelle tránh bọt khí  hàn lamelle parafin  cho vào máy lai tự động cài đặt sẳn chương trình 750 C/2 phút, 370 C 24 -Xử lý mẫu sau lai: Gỡ bỏ keo cách rửa với SSC 2X nhiệt độ phòng tiếp đến ngâm ngâm NP40 0,3% 73 C/ phút ngâm NP40 0,1% /1 phút nhiệt độ phịng Vớt lam kính, nhỏ DAPI lên lam kính, sau nhỏ antifate để bảo vệ tế bào khỏi tia huỳnh quang, đậy lamelle đem đọc phân tích kính hiển vi Hình 23 Cho vào máy lai PCR Hình 24.Gỡ keo sau lai 2.2.3.Real time PCR 2.2.3.1.Vật liệu: Phết cổ tử cung từ bệnh nhân 2.2.3.2.Dụng cụ thiết bị: Plate, máy ly trích tự động DNA, pipetman, đầu côn, tube, Máy định lượng DNA Biophotometer Plus (Eppendorf), máy ly tâm, tủ cấy an tồn sinh học cấp 2.2.3.3.Hóa chất: Buffer AW1, Buffer AW2, Buffer AE, Proteinase K, Buffer AL, Isopropanol, mag attract suspension 2.2.3.4.Cách tiến hành: GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 33 BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Quy trình thực hiện: Thu nhận dịch nhày cổ tử cung nhập thông tin bệnh nhân Ly trích DNA sử dụng kít real time PCR hãng SACACE BIOTECHOLOGIES sử dụng máy ly trích DNA tự động Chạy real time PCR sử dụng máy hãng Bioroad Phân tích Kết trả kết -Thu nhận dịch nhầy cổ tử cung nhập thông tin bệnh nhân Bước ta chủ yếu nhận dịch phết bệnh nhân từ phòng soi cổ tử cung khoa khám phụ khoa Sau nhận ta đánh mã số cho mẫu, sau ta đánh máy lưu thong tin bệnh nhân Hình 25 Đánh mã số cho mẫu GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 34 BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ -Đưa mẫu vào tủ cấy cấp 2, bật tia uv 15 phút Hình 26 Bật tia UV tủ cấy an toàn sinh học cấp - Sau xong 30 phút ta tiến hành thu dịch phết cổ tử cung cách đổ lọ sinh thiết tube 1.5ml (nếu dịch nhầy khô ta tiến hành đổ nước muối sinh lý vô trùng vào lắc thu dịch) -Sau thu dịch xong ta tiến hành ly tâm mẫu 14000v/p vòng phút để dịch nhầy lắng xuống đáy tube -Trong ly tâm ta chuẩn bị pha dung dịch mastermix gồm có: buffer Al, Isopropanol, Magaffract susperision -Tiến hành cho hóa chất mẫu vào giếng gồm có 12 cột  12, hàng A  H + Hàng A cho vào giếng 65µl lysate bao gồm 2µl protease K + 20µl mẫu + 43µl mastermix ( hạt từ để bắt dính DNA) + Hàng B C cho vào giếng 100µl dung dịch buffer AW1.dung dịch để kết tủa protein tạp chất + Hàng D E, giếng 100µl dung dịch buffer AW2( ethanol) +Hàng F 30µl dung dịch AE.( nước tinh khiết có NaCL hàm lượng thấp) Sau ta bỏ vào máy ly trích DNA tự động máy tự tách DNA làm theo chu trình cài đặt sẵn Thu DNA giếng hàng F GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 35 BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hình 27 Máy trích ly DNA tự động Hình 28 Bỏ mẫu vào Plate Hình 29 Plate đựng mẫu dung dịch AW1 -Sau ly trích DNA ta lấy 5µl mấu DNA tách đem bỏ vào tube thể tích 0.2ml có sẵn đoạn mồi, dung dịch đệm mẫu dò cho trưng type hpv sau dem chạy máy real time PCR BIO-RAD có gắn hệ thống máy tính có gắn sẵn phần mềm phân tích kết Mỗi lần phóng đại xong ta có tín hiệu xuất máy, dựa vào ta kết luận gửi trả kết cho bệnh nhân GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 36 BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1 Karyotype Hình 30 Kết NST hình vi tính chưa xếp Hình 31 Kết NST hình vi tính sau xếp Ta thấy có đủ 23 cặp NST có 22 cặp NST cặp NST XY phù hợp với NST người bình thường Kết luận bình thường, giới tính nam GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 37 BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hình 32 Kết NST in giấy Nhìn hình ta thấy có 22 cặp NST cặp NST giới tính XX phù hợp với NST bình thường người Kết luận bình thường, giới tính nữ 3.2.Sinh học phân tử: 3.2.1 QF PCR -Kết liên quan đến NST giới tính Nhìn hình 33 ta thấy locus SRY khơng có NST Y => khơng phải trai Và locus Amelogenin diện NST X Tuy nhiên, có số trường hợp đồng hợp tử alen NST X dẫn đến kết luận Lúc kit Devyser cịn có thêm marker NST giới tính X khác X1, X2, X3, X9 Trong hình ta thấy vị trí X1, X2, có NST X tỉ lệ (1:1:1), cịn X3, X9 có NST tỉ lệ (1:2) (2:1) Từ suy người dư 1NST giới tính X hay gọi bệnh siêu nữ GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 38 BỆNH VIỆN TỪ DŨ BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP Hình 33 Kết Trisomy XXX Một số loại bệnh liên quan đến NST giới tính: Hình 34 Kết bị hội chứng Turner GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Hình 35 Kết bị hội chứng Klinefelter Trang 39 BỆNH VIỆN TỪ DŨ BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP -Kết liên quan đến NST 13, 18, 21 Hình 36 Kết Trisomy 21( hội chứng down) Trong hình 36, ta thấy NST 13 18 có alleles Riêng NST 21A, 21B, 21C, 21D, 21H có alleles tỉ lệ lần lược (1:2) (2:1) (1:2) (1:2) (1:2) Từ ta biết người bị hội chứng dư NST số 21 (hội chứng down) Một số loại bệnh liên quan đến NST số 13 18: Hình 37 Kết Trisomy 13 (hội chứng Patau) GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Hình 38 Kết Trisomy 18 (hội chứng Edward) Trang 40 BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ 3.2.2 FISH Hình 39 Kết FISH NST 21 NST 13 bình thường Hình 40 Kết FISH NST 21 hội chứng down Dựa vào hình 39 40, ta thấy tia huỳnh quang NST 21 bắt màu đỏ NST 13 bắt màu xanh da trời- blue (khi lai DNA với probe NST 13, 21) Hình 39 có NST 21 NST 13 phù hợp với NST người bình thường Kết luận bình thường Hình 40 có NST 13 NST 21 khơng phù hợp với NST người bình thường Kết luận bị hội chứng down Hình 41 Kết FISH NST XX NST 18 bình thường GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Hình 42 Kết FISH NST XY NST 18 bình thường Trang 41 BỆNH VIỆN TỪ DŨ BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP Dựa vào hình 41 42, tác dụng tia huỳnh quang NST X bắt màu xanh lục, NST Y bắt màu đỏ, NST 18 bắt màu xanh da trời- blue (khi lai DNA với probe NST X, Y, 18) Hình 41 có NST X, NST 18 phù hợp với NST người bình thường Kết luận bình thường, giới tính nữ Hình 42 ta thấy có cặp NST XY, NST 18 phù hợp với NST người bình thường Kết luận bình thường, giới tính nam 3.2.3.Realtime PCR chẩn đoán HPV Ở ta xét nghiệm tube HPV băng phương pháp real time pcr típ xét nghiệm : -Tube HPV A9 gồm nhóm 16, 31, 33, 35, 52 58 kí hiệu bắt màu xanh -Tube HPV A5-A6 gồm nhóm 51, 59 kí hiệu màu đỏ -Tube HPV A7 gồm nhóm 18, 39, 45, 59 Và kí hiệu màu cam -Mẫu chứng nội ( bệnh nhân ) màu xanh dương Điều kiện để mẫu cho kết dương tính phải có đường cong cao chứng nội ( trừ tube A5-A6 thấp chứng nội ) xuất chu kì sớm ( tối đa khơng q 25 chu kì ) Hình 44 Kết dương tính Hình 43 Kết âm tính GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 42 BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Ở ta thấy hình âm tính ta thấy đường cong chứng nội bệnh nhân nên ta thấy bệnh nhân không bị bệnh Và xuất sớm chu kì 20 q trình PCR Ở kết dương tính ta thấy mẫu bị nhiễm tất loại tube HPV Các tube xuất sớm chu ki thứ 14 15 cao chứng nội tube A7, A9 thấp chứng nội tube A5-A6 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 43 BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ CHƢƠNG KẾT LUẬN Sau thời gian thực tập khoa xét nghiệm di truyền y học bệnh viện Từ Dũ TpHCM, chúng em mở rộng hiểu biết thêm tầm quan trọng kinh nghiệm quý báu quy trình xét nghiệm phát bệnh, thao tác phải tỉ mĩ, gọn gàng, quan trọng không để nhầm mẫu Với cách tổ chức, quản lý chặt chẽ, trang thiết bị sở vật chất đảm bảo, bác sĩ thạc sĩ, cử nhân sinh học, xét nghiệm tài giỏi y đức đáp ứng nhu cầu ngày cao nhân dân Qua trình thực tập khoa, chúng em tạo đầy đủ điều kiện học tập với nội dung đăng ký đồng thời giúp em củng cố kiến thức học nắm cách vận dụng lý thuyết vào thực tế Qua chúng em hiểu thêm trách nhiệm người bác sĩ phải làm cơng tác chăm sóc sức khỏe cho nhân dân.Được giúp đỡ cán bác sĩ, thạc sĩ, cử nhân sinh học xét nghiệm khoa xét nghiệm di truyền y học quý Thầy Cô khoa công nghệ sinh học kỹ thuật mơi trường, chngs em hồn thành báo cáo thực tập khoa xét nghiệm di truyền y học bệnh viện Từ Dũ TpHCM GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 44 BỆNH VIỆN TỪ DŨ BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt [1] Hồ Huỳnh Thùy Dương (1998), Sinh học phân tử, NXB Giáo Dục [2] Trần Thị Thanh Hương, Hoàng Thu Lan Hoàng Thị Ngọc Lan, Nguyễn,Thị Quỳnh Thơ, Nguyễn Danh Cường (2007), Chẩn đoán trước sinh hội chứng down, hội chứng turner kỹ thuật lai chỗ huỳnh quang kết hợp phân tích nhiễm sắc thể tế bào ối, Bộ môn Y Sinh học – Di truyền - Trường Đại học Y Hà Nội ,Bệnh viện Phụ sản Trung Ương [3] Nguyễn Anh Trí, Trần Cơng Hồng, Kỹ thuật FISH ứng dụng kỹ thuật FISH chẩn đoán theo dõi điều trị bệnh huyết học Tài liệu tiếng anh [1] Haissam Rahil1, Je´rome Solassol, Christophe Philippe, et al Rapid detection of common autosomal aneuploidies by quantitative fluorescent PCR on uncultured amniocytes Eur J Hum Genet 2002, Aug,10 (8), pp.46246-6 PMID: 12111640 [PubMed - indexed for MEDLINE] [2] Marina D.M Limaa, b, Paulo Henrique Braz-Silvaa, c, Sônia M Pereirad, Catalina Rierae, Ariane C Coelhof, Marina Gallottinia 2014, “Oral and cervical HPV infection in HIV-positive and HIV-negative women attending a sexual health clinic in São Paulo, Brazil”) [3] Winfried Schmidt, Jutta Jenderny, Kurt Hecher, et al Rapid prenatal diagnosis of aneuploidy for chromosomes 21, 18, 13, and X by quantitative fluorescence polymerase chain reaction Fetal Diagn Ther 2006, 21 (4), pp.32631 PMID: 16757905 [PubMed - indexed for MEDLINE] GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN LẠI ĐÌNH BIÊN Trang 45 ... nghiệp: ? ?một số kỹ thuật xét nghiệm chẩn đoán bệnh? ?? khoa xét nghiệm di truyền y học bệnh viện Từ Dũ TpHCM Chúng em hiểu rõ kỹ thuật xét nghiệm số bệnh quan trọng trải nghiệm thực tế nâng cao tay... BỆNH VIỆN TỪ DŨ BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP +Nhập liệu: Nhập thông tin bệnh nhân bệnh phẩm, ghi nhận chất lượng mẫu +Thực xét nghiệm: Thực xét nghiệm theo quy trình kỹ thuật xét nghiệm nhiễm sắc... nhân sinh học xét nghiệm khoa xét nghiệm di truyền y học quý Thầy Cô khoa công nghệ sinh học kỹ thuật môi trường, chngs em hoàn thành báo cáo thực tập khoa xét nghiệm di truyền y học bệnh viện Từ