Nghiên cứu đặc tính điện hóa của atorvastatin, fenofibrate và ứng dụng trong phân tích bằng phương pháp von ampe

TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - ĐẶNG MINH HƢƠNG GIANG NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH ĐIỆN HĨA CỦA ATORVASTATIN, FENOFIBRAT VÀ ỨNG DỤNG TRONG PHÂN TÍCH LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – Năm 2016 TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - ĐẶNG MINH HƢƠNG GIANG NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH ĐIỆN HĨA CỦA ATORVASTATIN, FENOFIBRAT VÀ ỨNG DỤNG TRONG PHÂN TÍCH Chun ngành: Hóa mơi trƣờng Mã số: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Giaoo viên hƣớng dẫn: TS Nguyễn Thị Kim Thƣờng Hà Nội – Năm 2016 LỜI CẢM ƠN Tôi xin trân trọng cảm ơn TS Nguyễn Thị Kim Thường giao đề tài tận tình hướng dẫn tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn thầy, cô thuộc Bộ mơn Hóa Phân tích Khoa Hóa học trường Đại học Khoa học Tự nhiên – ĐHQG HN truyền đạt cho kiến thức vô quý báu suốt trình học tập nghiên cứu khoa Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc với bố, mẹ, gia đình bạn động viên, giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn đề tài QG 15.14 Đại học Quốc gia Hà nội hỗ trợ kinh phí cho thực nghiên cứu Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Học viên I MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CHẤT NGHIÊN CỨU ATORVASTATIN 1.1.1 Cấu tạo atorvastatin 1.1.2 Dƣợc lực học động học Atorvastatin Dược lực học Dược động học 1.2 GIỚI THIỆU VỀ CHẤT NGHIÊN CỨU FENOFIBRAT .4 1.2.1 Cấu tạo fenofibrat 1.2.2 Dƣợc lực học động lực học Fenofibrat Dược lực học Dược động học 1.3 CÁC PHƢƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ATORVASTATIN, FENOFIBRAT 1.3.1 Các phƣơng pháp xác định atorvastin Phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử Phương pháp von-ampe 1.3.2 Các phƣơng pháp xác định fenofibrat Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Phương pháp cực phổ von-ampe hòa tan 1.4 GIỚI THIỆU PHƢƠNG PHÁP VON-AMPE HÒA TAN HẤP PHỤ 1.4.1 Nguyên tắc phƣơng pháp von-ampe hoà tan hấp phụ (AdSV) 1.4.2 Các thuật ghi đƣờng von-ampe h a tan hấp phụ 11 Kỹ thuật von-ampe xung vi phân (DP) 11 II Kỹ thuật sóng vng 12 CHƢƠNG II: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .13 2.1 Nội dung nghiên cứu 13 2.2 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất 13 2.2.1 Thiết bị 13 2.2.2 Dụng cụ 14 2.2.3 Hóa chất .14 2.2.4 Chuẩn bị dung dịch 15 Pha dung dịch .15 Pha dung dịch gốc atorvastatin fenofibrat 15 2.3 Xử lý mẫu 15 2.3.1 Quy trình tiến hành phân tích mẫu thuốc atovastatin 15 2.3.2 Quy trình xử lý mẫu huyết tương xác định atorvastatin 16 2.3.3 Quy trình tiến hành phân tích mẫu thuốc hỗn hợp atorvastatin fenofibrat 16 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 3.1 NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG ATORVASTATIN TRONG MẪU THUỐC BẰNG PHƢƠNG PHÁP VON-AMPE 18 3.1.1 Khảo sát điều kiện xác định atorvastatin 18 Nghiên cứu đặc tính điện hóa atorvastatin 18 Khảo sát ảnh hưởng pH 19 Khảo sát ảnh hưởng hấp phụ 20 Khảo sát ảnh hưởng thời gian hấp phụ 22 Khảo sát thời gian cân 23 Khảo sát ảnh hưởng tốc độ quét 25 3.1.2 Khảo sát khoảng tuyến tính đánh giá phƣơng pháp 27 Khoảng tuyến tính .27 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) 28 Độ lặp lại 28 3.1.3 Áp dụng thực tế phân tích hàm lƣợng atorvastatin mẫu thuốc thị trƣờng 29 III Phân tích mẫu thuốc Lipivastatin 20mg cơng ty cổ phần hóa-dược phẩm Mekopha 29 Phân tích mẫu thuốc Avastor (10mg) cơng ty cổ phần Dược phẩm Boston Việt Nam 30 3.1.4 Nghiên cứu quy trình định lƣợng atorvastatin mẫu huyết tƣơng .32 Khảo sát thành phần hỗn hợp dung dịch rửa tạp 32 Khảo sát hành phần hỗn hợp dung dịch rửa giải 33 3.1.5 Xác định hiệu suất thu hồi atorvastatin mẫu huyết tƣơng 34 3.2 NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG HỖN HỢP ATORVASTATIN VÀ FENOFIBRAT BẰNG PHƢƠNG PHÁP VON-AMPE HÒA TAN HẤP PHỤ .36 3.2.1 Khảo sát điều kiện thích hợp 36 Nghiên cứu đặc tính điện hóa hỗn hợp atorvastatin fenofibrat 36 Khảo sát ảnh hưởng pH 39 Khảo sát ảnh hưởng hấp phụ 41 Khảo sát ảnh hưởng thời gian hấp phụ 42 Khảo sát ảnh hưởng tốc độ quét 44 3.2.2 Khảo sát khoảng tuyến tính đánh giá phƣơng pháp 46 Khảo sát khoảng tuyến tính xây dựng đường chuẩn 46 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp 51 Đánh giá độ lặp lại phép đo 51 3.2.3 Áp dụng thực tế phân tích số hỗn hợp thuốc thị trƣờng 52 Phân tích hàm lượng atorvastatin mẫu thuốc 52 Áp dụng thực tế phân tích hàm lượng fenofibrat mẫu thuốc 54 Phân tích đồng thời hàm lượng atovastatin fenofibrat mẫu thuốc .56 KẾT LUẬN 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 IV DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Tiếng anh Tiếng việt Viết tắt Anodic Stripping Voltammetry Von-ampe hòa tan a-nốt ASV Von-ampe hòa tan hấp phụ AdSV Asorptive Stripping Voltammetry Atorvastatin Ator Cathodic Stripping Von-ampe hòa tan ca-tốt CSV Von-ampe vòng CV Von-ampe hòa tan xung vi phân DPV Voltammetry Cyclic Voltammetry Differential pulse stripping Voltammetry Fenofibrat Feno Hanging Mercury Dropping Điện cực giọt thủy ngân treo Electrode HMDE High Perfomance Liquid Phương pháp sắc ký lỏng hiệu Chromatography cao 10 Limit of Detection Giới hạn phát 11 Limit of quantityication Giới hạn định lượng LOQ 12 Mercury Film Electrode Điện cực màng thủy ngân MFE Von-ampe hịa tan sóng vng SqW Điện cực giọt thủy ngân tĩnh SMDE Von-ampe hoà tan SV 13 14 15 Square-Wave Stripping Voltammetry Static Mercury Dropping Electrode Stripping Voltammetry V HPLC GPPH (LOD) DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Thiết bị phân tích điện hóa Metrohm-Autolab .14 Hình 3.1: Đường von-ampe vịng atorvastatin 10-7mol.L-1 .18 Hình 3.2: Sự phụ thuộc cường độ dịng píc vào pH 20 Hình 3.3: Sự phụ thuộc cường độ dòng vào hấp phụ 21 Hình 3.4: Đường von-ampe hịa tan phụ thuộc vào hấp phụ 21 Hình 3.5: Đường von-ampe hòa tan phụ thuộc vào thời gian hấp phụ nồng độ chất phân tích 5.10-7M .22 Hình 3.6: Đường von-ampe hòa tan phụ thuộc vào thời gian hấp phụ nồng độ chất phân tích 10-8M 22 Hình 3.7 Ảnh hưởng thời gian hấp phụ .23 Hình 3.8: Sự phụ thuộc cường độ dịng píc vào thời gian cân 24 Hình 3.9: Đường von-ampe hòa tan phụ thuộc vào thời gian cân 24 Hình 3.10: Sự phụ thuộc cường độ dịng píc vào tốc độ qt 26 Hình 3.11 Đường von-ampe hịa tan phụ thuộc vào tốc độ quét 26 Hình 3.12: Đường von-ampe hòa tan atorvastatin từ 10-8M đến 10-7M .27 Hình 3.13 Đường chuẩn atorvastatin từ 10-8M đến 10-7M .28 Hình 3.14: Đường chuẩn atorvastatin từ 10-7M đến 10-6 M 28 Hình 3.15: Đường von-ampe hịa tan mẫu thuốc mekopha 29 Hình 3.16 Đường von-ampe hịa tan đo mẫu (10mg) công ty dược phẩm Boston phương pháp thêm chuẩn .31 Hình 3.17 Đường von-ampe hịa tan phụ thuộc vào thành phần dung dịch rửa tạp 32 Hình 3.18 Đường von-ampe phụ thuộc vào thành phần dung dịch rửa giải 34 Hình 3.19 Đường von–ampe hịa tan atovastatin mẫu huyết tương 35 Hình 3.20: Đường CV atorvastatin fenofibrat 36 Hình 3.21: Đường von-ampe vịng atorvastati fenofibrat phụ thuộc vào tốc độ quét .38 Hình 3.22: Phản ứng điện hóa atorvastatin 38 Hình 3.23: Phản ứng điện hóa fenofibrat 39 Hình 3.24: Sựphụ thuộc cường độ dịng píc vào pH 40 Hình 3.25: Đường von-ampe hòa tan thay đổi pH từ 5,0 đến 9,0 40 Hình 3.26: Sự phụ thuộc cường độ dịng píc vào hấp phụ 41 VI Hình 3.27: Đường von-ampe hịa tan phụ thuộc vào hấp phụ 42 Hình 3.28: Sự phụ thuộc cường độ dịng píc vào thời gian hấp phụ nồng độ chất phân tích 5.10-7M 43 Hình 3.29: Đường von-ampe hòa tan phụ thuộc vào thời gian hấp phụ nồng độ chất phân tích 5.10-7M 44 Hình 3.30 Đường von-ampe hòa tan phụ thuộc vào tốc độ quét 45 Hình 3.31: Đường von-ampe hòa tan hỗn hợp fenofibrat atorvastatin .47 ( fenofibrat : atorvastatin = 1: 3) 47 Hình 3.32.Đường chuẩn biểu diễn phụ thuộc –log C fenofibrat vào cường độ dòng I .48 Hình 3.33 Đường chuẩn biểu diễn phụ thuộc –log C atorvastatin vào cường độ dòng I 48 Hình 3.34: Đường von-ampe hịa tan thay đổi nồng độ hỗn hợp fenofibrat atorvastatin 49 Hình 3.35 Đường chuẩn fenofibrat khoảng nồng độ từ 10-8M đến 107M .49 Hình 3.36 Đường chuẩn atorvastatin khoảng nồng độ từ 10-8M đến 107M 50 Hình 3.37 Đường von-ampe hịa tan đo mẫu (10mg) công ty dược phẩm SHYT phương pháp thêm chuẩn 53 Hình 3.38 Đường von-ampe hịa tan thuốc Lipistad 300mg .55 Hình 3.39: Đường von-ampe hòa tan hỗn hợp Atovastatin 10mg Fenofibrat 300mg 57 VII DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hưởng pH đến cường độ dịng píc .19 Bảng 3.2 Ảnh hưởng hấp phụ đến cường độ dịng píc 20 Bảng 3.3: Sự ảnh hưởng tốc độ quét tới cường dộ dịng píc 25 Bảng 3.4 Cường độ dịng píc đo mẫu thuốc LIPIVASTIN phương pháp thêm chuẩn 29 Bảng 3.5 Cường độ dòng píc đo mẫu thuốc Avastor phương pháp thêm chuẩn 30 Bảng 3.6 Sự phụ thuộc cường dộ dịng píc vào thành phần dung dịch rửa tạp 32 Bảng 3.7 Sự phụ thuộc cường dộ dịng píc vào thành phần dung dịch giải 33 Bảng 3.9 Cường độ dịng píc đo Atorvastatin mẫu huyết tương phương pháp thêm chuẩn 40 Bảng 3.10 Cường độ dịng píc thay đổi tốc độ quét từ 25mV/s đến 200mV/s .37 Bảng 3.11 Ảnh hưởng pH đến cường độ dịng píc .39 Bảng 3.12 Ảnh hưởng hấp phụ đến cường độ dịng píc 41 Bảng 3.13 Ảnh hưởng thời gian hấp phụ tới cường độ dịng píc nồng độ chất phân tích 5.10-7M 43 Bảng 3.14 Sự ảnh hưởng tốc độ qt tới cường dộ dịng píc 45 Bảng 3.15 Ảnh hưởng nồng độ chất phân tích đến cường độ dịng píc 47 Bảng 3.16 Ảnh hưởng nồng độ chất phân tích đến cường độ dịng píc 48 Bảng 3.18 Độ lặp lại hỗn hợp Ato Feno .52 Bảng 3.19 Cường độ dịng píc đo mẫu thuốc Avastor phương pháp thêm chuẩn 53 Bảng 3.20 Cường độ dịng píc đo mẫu thuốc phương pháp thêm chuẩn 55 Bảng 3.21 Cường độ dịng píc đo hỗn hợp mẫu thuốc Ato Feno phương pháp thêm chuẩn 56 VIII Kết trình bày bảng 3.18 sau : Bảng 3.18 Cường độ dịng píc đo mẫu thuốc phương pháp thêm chuẩn STT Nồng độ fenofibrat mẫu thuốc Cx C Cx 1,0 1,0 Cx Cx+4.10-7 Cx+8.10-7 5,02 8,5 9,8 Thể tích dung dịch chuẩn hỗn hợp -5 10 M thêm vào(ml) Nồng độ hỗn hợp bình(M) Cường độ píc I(nA) -2.00n I (A) -4.00n -6.00n -8.00n -10.0n -900m -1.00 -1.10 -1.20 -1.30 -1.40 U (V) Hình 3.38 Đường von-ampe hịa tan thuốc Lipistad 300mg Bằng phương pháp thêm chuẩn, tính nồng độ fenofibrat dung dịch đo : Cx = 48,59 10-8(M) Áp dụng công thức mục 2.3.3 55 Hàm lượng fenofibrat rong viên thuốc có khối lượng 0,3969 g : So với hàm lượng fenofibrat (300 mg) ghi nhãn thuốc phương pháp Von-ampe hòa tan hấp phụ xác định 281 mg thấp 19 mg Tương tự, tiến hành xác định hàm lượng fenofibrat mẫu thuốc sau Kết trình bày bảng 3.19 Bảng 3.19 Kết định lượng fenofibrat viên nang (300mg) sản xuất Công ty Cổ phần Dược phấm Standa Mẫu Ifeno(nA) Nồng độ M3 M1 M2 5,02 5,60 5,10 48,59 10-8 55,07.10-8 34,50.10-8 Hàm lượng feno (mg/viên) 281 319 215 Hàm lượng Số liệu thống kê (%) 94 X=300 SD=38,0 106 RSD=0,12% 107 m=300±0,05 (mức tin cậy 95%) Phân tích đồng thời hàm lượng atovastatin fenofibrat mẫu thuốc Tiến hành định lượng hỗn hợp thuốc atorvastatin 10 mg fenofibrat 300mg Tiến hành cân đo mẫu theo quy trình phân tích xây dựng mục 2.3.3 Kết đo trình bày bảng 3.20 sau: Bảng 3.20 Cường độ dịng píc đo hỗn hợp mẫu thuốc atorvastatin fenofibrat phương pháp thêm chuẩn STT Nồng độ hỗn hợp ato feno mẫu thuốc Thể tích dung dịch chuẩn10-5M thêm vào(ml) Nồng độ hỗn hợp ato feno bình (M) Cường độ píc I(nA) Cx Cx 0,50 Cx Cx+2.10-7 Ato Feno Ato 8,14 6,9 15,21 56 Feno 11,43 I (A) -5.00n -10.0n -15.0n -900m -1.00 -1.10 -1.20 -1.30 -1.40 U (V) Hình 3.39: Đường von-ampe hịa tan hỗn hợp Atovastatin 10mg Fenofibrat 300mg (đường 1) mẫu; đường 2) thêm chuẩn) Dựa vào kết đo cường độ dịng có thêm chuẩn hỗn hợp xác định nồng độ fenofibrat mẫu là:3,4.10-7 M Hàm lượng fenofibrat viên thuốc có khối lượng 0,3969 g Nồng độ atovastatin mẫu là: 2,3.10-7 Hàm lượng Atovastatintrong viên thuốc có khối lượng 0,1574 g là: 57 Tương tự, tiến hành xác định hàm atovastatin fenofibrat mẫu thuốc sau Kết thu bảng Bảng 3.21 Kết định lượng fenofibrat 300 mg atorvastatin 10 mg mẫu thuốc Mẫu I(nA) feno ator Nồng độ feno Nồng độ ato Hàm lượng feno Hàm lượng ato Sự sai khác so với hàm lượng Sự sai khác so với hàm lượng (mg/viên) (mg/viên) ghi nhãn fenofibrat ghi nhãn atovastatin (%) (%) M1 6,9 8,14 3,4.10-7 2,3.10-7 315 11,54 +5 15,4 M2 5,3 5,86 3,02.10-7 1,97.10-7 190 9,88 -5 -1,2 M3 8,02 8,96 2,97.10-7 2,18.10-7 275 10,94 -8,3 9,4 M4 5,9 8,9 2,14.10-7 2,3910-7 324 11,96 +8 19,6 M5 3.84 8,2 2,0.10-7 1,9.10-7 201 9,53 +0,5 -4,7 Các kết phân tích có RSD nhỏ (