Khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng đến quy trình sản xuất enzyme penicilin g acylase cố định

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỞNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TRẦN NGỌC THỦY THƯƠNG KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG TRONG QUY TRÌNH SẢN XUẤT ENZYME PENICILLIN G ACYLASE CỐ ĐỊNH CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, 03/2011 ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỞNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TRẦN NGỌC THỦY THƯƠNG KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG TRONG QUY TRÌNH SẢN XUẤT ENZYME PENICILLIN G ACYLASE CỐ ĐỊNH CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SĨ GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN: PGS TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG TP HỒ CHÍ MINH, 03/2011 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Cán chấm nhận xét : (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Cán chấm nhận xét : (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Luận văn thạc sĩ bảo vệ HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA, ngày tháng năm TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHIÃ VIỆT NAM Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc -oOo Tp HCM, ngày 04 tháng 03 năm 2011 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: TRẦN NGỌC THỦY THƯƠNG Ngày tháng năm sinh: 21 – 04 – 1982 Phái: Nữ Nơi sinh: Bình Thuận Chun ngành: Cơng nghệ sinh học MSHV: 09310584 1- TÊN ĐỀ TÀI: Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng quy trình sản xuất enzyme penicillin G acylase cố định 2- NHIỆM VỤ LUẬN VĂN: - Khảo sát quy trình lên men Alcaligenes faecalis - Khảo sát quy trình thu nhận enzyme nội bào penicillin G acylase - Khảo sát quy trình cố định enzyme chất mang - Khảo sát hoạt tính enzyme cố định khả tái sử dụng 3- NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 07 – 2010 4- NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 12 – 2010 5- HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG Nội dung đề cương Luận văn thạc sĩ Hội Đồng Chuyên Ngành thông qua CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Họ tên chữ ký) CHỦ NHIỆM BỘ MÔN KHOA QL CHUYÊN NGÀNH QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH (Họ tên chữ ký) (Họ tên chữ ký) LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin gởi lời cảm ơn đến thầy cô môn Công nghệ sinh học trường Đại học Bách Khoa Tp.HCM truyền đạt cho kiến thức Tôi xin gởi lời cảm ơn tới người thân gia đình hỗ trợ mặc tinh thần tài Đặc biệt với biết ơn sâu sắc, xin cảm ơn PGS.TS Nguyễn Đức Lượng, người thầy hướng dẫn theo suốt thời gian làm luận văn Ngồi ra, tơi gởi lời cảm ơn đến bạn học viên Cao học K2009 đồng hành chặng đường vừa qua TP HCM, ngày 04 tháng 03 năm 2011 TRẦN NGỌC THỦY THƯƠNG i TÓM TẮT LUẬN VĂN - Đề tài luận văn: “Khảo sát số yếu tố quy trình sản xuất enzyme penicillin G acylase cố định” - Học viên thực hiện: Trần Ngọc Thủy Thương - Cán hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng - Thời gian thực hiện: Từ tháng 7/2010 đến tháng 12/2010 Nội dung đề tài: - Khảo sát quy trình lên men Alcaligenes faecalis - Khảo sát quy trình thu nhận enzyme nội bào penicillin G acylase - Khảo sát quy trình cố định enzyme chất mang - Khảo sát hoạt tính enzyme cố định khả tái sử dụng Kết đề tài: Enzyme Penicillin G Acylase enzyme nội bào tạo từ chủng Alcaligenes faecalis, tham gia vào phản ứng thủy phân Penicillin G tạo sản phẩm 6- aminopenicillic acid (6-APA), sản phẩm dùng để tạo hợp chất kháng sinh Ampicillin Amoxyllin Đối với chủng Alcaligenes faecalis, với điều kiện nuôi cấy thể tích 400 ml, 140 rpm nhiệt độ thường, sau thời gian 100 thu nhận sinh khối tế bào Sau đó, tiến hành phá vỡ tế bào sóng siêu âm điều kiện thể tích mẫu phá vỡ tế bào 100 ml, thời gian phá vỡ 20 phút, nhiệt độ 5oC, thời gian làm việc chế độ xung 10 s mở: 1s tắt biên độ sóng 30% Sau phá vỡ tế bào, tiến hành tủa phân đoạn muối trung tính Ammonium Sulfate với mức độ tủa phân đoạn – 30% cho hàm lượng tổng protein 610.685 mg, tổng đơn vị hoạt độ 333.300 IU Khi cố định enzyme Penicillin G Acylase chitosan có hoạt hóa glutaraldehyde 5% hiệu suất cố định 82% Enzyme cố định có khả tái sử dụng lần Với kết cho thấy, việc sử dụng enzyme penicillin G acylase cố định đem lại hiệu sản xuất 6-APA mặt công nghệ lẫn kinh tế ii MỤC LỤC Lời cảm ơn i Tóm tắt luận văn ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH ix PHẦN MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẶC ĐIỂM CHỦNG ALCALIGENES FAECALIS 1.2 ĐẶC ĐIỂM ENZYME PENICILLIN G ACYLASE TỪ ALCALIGENES FAECALIS 1.3 KỸ THUẬT THU NHẬN ENZYME TỪ VI SINH VẬT 1.3.1 Nguyên lý sinh tổng hợp enzyme từ vi sinh vật 1.3.2 Nguyên lý trao đổi chất vi sinh vật sinh tổng hợp enzyme 1.3.3 Nguyên lý điều khiển trình kỹ thuật sản xuất enzyme từ vi sinh vật 1.3.4 Một số kỹ thuật chung nuôi cấy vi sinh vật thu nhận enzyme 1.3.4.1 Kỹ thuật tạo giống vi sinh vật có khả sinh tổng hợp enzyme suất cao 1.3.4.2 Lựa chọn phương pháp nuôi cấy iii 1.3.4.3 Thiết kế thiết bị nuôi cấy 1.3.4.4 Kỹ thuật lên men 10 1.3.4.5 Tách, tinh chế thu nhận enzyme 10 1.4 KỸ THUẬT CỐ ĐỊNH ENZYME 10 1.4.1 Định nghĩa enzyme cố định 10 1.4.2 Ý nghĩa enzyme cố định 11 1.4.3 Kỹ thuật cố định enzyme 11 1.4.3.1 Yêu cầu chất mang lý tưởng 11 1.4.3.2 Hoạt hóa chất mang 11 1.4.3.3 Phương pháp cố định enzyme sử dụng 12 1.4.3.4 Ứng dụng enzyme cố định 12 1.5 ĐẶC ĐIỂM CHẤT MANG GLUTARALDEHYDE – CHITOSAN 12 1.5.1 Chitosan 13 1.5.2 Glutaraldehyde – chitosan 14 1.5.3 Glutaraldehyde – chitosan – enzyme 15 1.6 CÁC NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT CỐ ĐỊNH ENZYME PENICILLIN G ACYLASE TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC 16 1.6.1 Nghiên cứu nước 16 1.6.2 Nghiên cứu nước 16 CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 VI SINH VẬT 19 2.2 THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 19 2.3 ĐỊA ĐIỂM THỰC HIỆN LUẬN VĂN 19 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.4.1 Khảo sát đặc điểm giống 20 2.4.2 Phương pháp lên men 22 2.4.3 Phương pháp tách chiết enzyme 24 iv 2.4.4 Phương pháp định lượng protein tổng phương pháp Bradford 25 2.4.5 Phương pháp xác định hoạt độ enzyme penicillin G acylase 26 2.4.5.1 Phương pháp định lượng phenylacetic acid NaOH 0.1M 27 2.4.5.2 Phương pháp định tính 6-aminopenicillic acid (6-APA) p-Dimethylamino Benzaldehyde (pDAB) 28 2.4.6 Phương pháp tinh enzyme phương pháp tủa phân đoạn sử dụng muối ammonium sulfate 29 2.4.7 Phương pháp cố định enzyme hạt Chitosan 31 2.4.8 Phương pháp xác định hoạt độ enzyme cố định hiệu suất cố định 32 2.4.9 Phương pháp xác định khả tái sử dụng enzyme cố định 33 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 34 3.1 KHẢO SÁT SỰ SINH TRƯỞNG CHỦNG VI KHUẨN ALCALIGENES FAECALIS 35 3.1.1 Các điều kiện nuôi cấy ảnh hưởng sinh trưởng vi khuẩn 36 3.1.1.1 Nhiệt độ 37 3.1.1.2 Chế độ lắc 37 3.1.2 Quá trình sinh trưởng phát triển chủng A faecalis 38 3.2 XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN TƯƠNG QUAN GIỮA OD VÀ HÀM LƯỢNG ALBUMIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP BRADFORD 39 3.3 KHẢO SÁT QUÁ TRÌNH PHÁ VỠ TẾ BÀO ALCALIGENES FAECALIS 40 3.4 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH ENZYME 42 3.4.1 Khảo sát hàm lượng chất Penicillin G Potassium ảnh hưởng lên hoạt tính enzyme 42 v 3.4.2 Khảo sát thời gian phản ứng thủy phân 44 3.5 KHẢO SÁT QUÁ TRÌNH TỦA PHÂN ĐOẠN BẰNG MUỐI AMMONIUM SULFATE 45 3.5.1 Khảo sát hàm lượng protein thu phần lắng sau ly tâm 45 3.5.2 Khảo sát hàm lượng protein thu theo phương pháp Bradford 47 3.5.3 Khảo sát hoạt tính enzyme mức tủa khác 47 3.6 CỐ ĐỊNH ENZYME 49 3.6.1 Khảo sát hàm lượng chitosan tạo hạt hoạt hóa glutaraldehyde 49 3.6.2 Khảo sát hiệu suất cố định enzyme 50 3.7 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TÁI SỬ DỤNG 51 3.8 KHẢO SÁT PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH ENZYME BẰNG PHƯƠNG PHÁP SO MÀU 53 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC 60 vi 13 Ishimura F Seijo H (1991), Immobilization of Penicillin Acylase Using Porous Polyacrylonitrile Fibers Journal of fermentation and bioengineering, Vol 71, No 2, 140-143 14 Khang Y.H et al (1998), Effect of oxygen on beta-lactam antibiotic production by immobilized cephalosproiom acremonium, Chemical Engineering 15 Janssen M.H.A (2006), Properties of Immobilised Penicillin G Acylase in βLactam Antibiotic Synthesis 16 Mateo C., Palomo J.M., et al (2007), Improvement of enzyme activity, stability and selectivity via immobilization techniques, Enzyme and Microbial Technology, 40, 1451–1463 17 Scopes R K (1994), Protein Purification: Principles and Practice, SpringerVerlag New York 18 Shaji J., Jain V and Lodha S (2010), Chitosan: A Novel Pharmaceutical Excipient, International Journal of Pharmaceutical and Applied Sciences 19 Verhaert R.M.D., Riemens A.M., et al (1997), Molecular cloning and analysis of the gene encoding the thermostable penicillin G acylase from Alcaligenes faecalis, Applied and environmental microbiology, p 3412–3418 20 Yatsimirskaya N.T et al (1995), Spectrophotometric determination of 6Aminopenicillanic and 7-Aminocephalosporanic acids as the Schiff bases with para-dimethylaminobenzaldedyde in the presence of Sodium Dodecyl Sulfate Micelles, Analytical biochemistry, 229, 249-255 Tài liệu Internet 21 http://www.biocyc.org 22 http://www.inst.bact.wisc.edu 23 http://www.legal.khaitri.vn 24 http://www.microbewiki.kenyon.edu 58 25 http://www.brenda-enzymes.org 26 http://www.chinhphu.vn 27 http://www.dasregistry.org 28 http://www.ebi.ac.uk 29 http://www.freepatentsonline.com 30 http://www.genome.jp 31 http://www.ibt.ac.vn 32 http://www.pdbj.org 33 http://www.rug.nl 34 http://www.sctbinhduong.gov.vn 59 PHỤ LỤC 60 PHỤ LỤC XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN OD VÀ MẬT ĐỘ TẾ BÀO Bảng 1: Tương quan OD660nm mật độ tế bào OD660nm 0.124 0.223 0.363 0.420 0.525 210 x 106 390 x 106 790 x 106 910 x 106 1.640 x 106 CFU/ml Log(CFU/ml) 8.322 8.591 8.898 8.959 9.215 Đường Chuẩn Log(CFU/ml) 9.4 y = 2.169x + 8.078 R² = 0.992 9.2 8.8 8.6 8.4 8.2 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 OD 660nm Linear (Đường Chuẩn) Hình 1: Đồ thị đường chuẩn tương quan OD660nm Log (CFU/ml) Phương trình đường chuẩn: y = 2.169x + 8.078, R2 = 0.992 61 PHỤ LỤC XÂY DỰNG ĐƯỜNG CONG SINH TRƯỞNG CỦA ALCALIGEN FAECALIS Bảng 1: Mật độ tế bào theo thời gian Alcaligenes faecalis Thời gian (Giờ) OD660nm Log(CFU/ml) Thời gian (Giờ) OD660nm Log(CFU/ml) 0.25 8.620 135 2.82 14.186 15 0.32 8.774 150 2.89 14.346 30 0.83 9.879 165 2.88 14.331 45 1.25 10.787 180 2.86 14.275 60 1.78 11.934 195 2.81 14.164 75 2.09 12.620 210 2.80 14.143 90 2.34 13.156 225 2.72 13.973 105 2.65 13.817 240 2.71 13.954 120 2.72 13.978 264 2.65 13.824 62 PHỤ LỤC XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN PROTEIN (ALBUMIN) Bảng 2: Nồng độ protein OD595 phương pháp Bradford Ống nghiệm Thuốc thử Bradford, ml 5 5 5 Nồng độ Albumin, mg/ml 0.1 0.25 0.5 0.75 OD595 lần 0.089 0.208 0.231 0.255 0.282 0.301 OD595 lần 0.088 0.209 0.227 0.258 0.280 0.300 OD595 lần 0.092 0.209 0.245 0.257 0.281 0.298 OD trung bình 0.090 0.209 0.234 0.257 0.281 0.300 ∆OD595 0.119 0.145 0.167 63 0.191 0.210 PHỤ LỤC KHẢO SÁT CHẾ ĐỘ PHÁ VỠ TẾ BÀO BẰNG SÓNG SIÊU ÂM Bảng 3: Hàm lượng protein phá vỡ tế bào lần Phá vỡ tế bào Lần Lần Thể tích protein thu sau tủa bão hòa 100 %, ml 19 3.8 Tỷ lệ % thể tích thu được, % 83.33 16.66 Tỷ lệ % protein tổng mẫu, % 64 77.028 22.97 PHỤ LỤC PHƯƠNG PHÁP TỦA PHÂN ĐOẠN Bảng 4: Hàm lượng protein thu Ammonium sulfate Thể tích mẫu 100 ml - 30 % 30 - 100 % Mẫu 1, ml 6.9 4.17 Mẫu 2, ml 7.3 3.7 Mẫu 3, ml 7.2 3.9 Trung bình 7.16 3.94 Thể tích mẫu 100 ml - 60 % 60 - 100 % Mẫu 1, ml 10.1 1.05 Mẫu 2, ml 10.0 1.1 Mẫu 3, ml 10.0 1.1 Trung bình 10.03 1.09 Mẫu 100 ml - 30 % 30 - 60 % 60 - 100 % Mẫu 1, ml 7.1 2.98 1.09 Mẫu 2, ml 6.8 3.2 1.2 Mẫu 3, ml 7.2 2.6 1.2 Trung bình 7.03 2.92 1.16 65 Bảng 5: Phần trăm thể tích thu tủa phân đoạn mức bão hòa khác Phần lắng tủa, % Độ bão hòa - 30 Độ bão hòa 30 - 100 Mẫu 1, % 62.67 37.33 Mẫu 2, % 66.67 33.33 Mẫu 3, % 65.67 34.33 Phần lắng tủa, % Độ bão hòa - 60 Độ bão hòa 60 - 100 Mẫu 1, % 89.53 10.47 Mẫu 2, % 88.25 11.33 Mẫu 3, % 89.03 10.81 Bảng 6: Phần trăm thể tích thu tủa phân đoạn mức – 30 %; 30 – 60 %; 60 – 100 % Phần lắng tủa, % - 30 30 - 60 60 - 100 Mẫu 1, % 62.67 26.86 10.47 Mẫu 2, % 59.65 29.31 11.04 Mẫu 3, % 63.86 24.28 11.86 66 PHỤ LỤC KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG PROTEIN TỒNG SỐ THEO BRADFORD Bảng 7: Hàm lượng protein thu theo Bradford Độ bão hòa, PHÁ VỠ TẾ BÀO PHÁ VỠ TẾ BÀO LẦN LẦN - 30 30 - 60 60 - 100 - 100 0.294 0.400 0.167 0.192 Độ pha loãng 160 160 80 80 OD595 0.312 0.287 0.208 0.214 % Nồng độ protein, ml/ml 67 PHỤ LỤC PHƯƠNG PHÁP PHÁ VỠ TẾ BÀO VÀ HOẠT TÍNH ENZYME Bảng 8: Số liệu lần phá vỡ tế bào Phá vỡ tế bào (100 ml) Lần Lần Lượng kết tủa bão hòa 100 %, ml 11.169 2.85 Hàm lượng protein tổng, mg 2377.313 85.893 Hàm lượng protein tổng, mg/ml 212.849 30.138 Bảng 9: Số liệu hàm lượng PAA tạo theo hàm lượng chất Phá vỡ tế bào lần 1: - 30 % Hàm lượng PGK, % (w/v) 1.33 2.00 2.67 4.00 8.00 Thể tích PGK, ml 2 2 Thể tích enzyme phản ứng 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 Thời gian phản ứng, phút 3 3 Thể tích NaOH 0.1 M, ml 0.40 0.50 0.65 0.75 1.05 Hàm lượng PAA tạo ra, µmol 40 50 65 75 105 68 61 64 66 70 73 74 91.50 64.00 39.60 23.33 14.60 5.29 320 198 116.667 73 26.4286 49 98.00 490 457.5 28 84.00 69 Bảng 11: Số liệu xác định hoạt tính enzyme PGA 0.74 0.73 0.70 0.66 0.64 0.61 0.49 0.28 14.00 5.00 3.00 1.67 1.00 0.67 0.50 0.33 phản ứng, ml 420 Thể tích enzyme ml Thể tích PGK, ứng, phút (0.1 M), ml % (w/v) 0.00 Thời gian phản Thể tích NaOH Hàm lượng PGK, Đơn vị hoạt Lượng µmol PAA Hàm lượng PAA tính, sinh /1 phút, sinh theo thời IU gian, µmol µmol Bảng 10: Hàm lượng sản phẩm tạo theo thời gian thủy phân PGK enzyme Phá vỡ tế bào lần 1: - 30 % 4 4 4 4 2 2 2 2 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 Phá vỡ tế bào Lần Lần Mức tủa phân đoạn, % - 30 Hàm lượng enzyme dịch, ml/ml 0,35 0,3 0,167 0,19 Thể tích, ml 20 10 15 Lượng kết tủa sau phá vỡ tế bào, ml 1,169 2,85 188,55 85,89 Hàm lượng protein tổng, mg 30 - 60 60 - 100 - 100 1601,69 587,08 Thể tích enzyme phản ứng 0,5 0,5 0,5 0,5 Thể tích PGK % (w/v), ml 2 2 ∆ Thể tích NaOH (0.1M), ml 0,7 0,2 0,08 0,11 Thời gian, phút 3 3 Lượng µmol PAA tạo phút, µmol 23,33 6,67 2,67 3,67 Đơn vị hoạt độ/ml, IU 116,67 33,33 13,33 18,33 Tổng hoạt tính UI 2333,3 333,33 93,333 275 Hoạt tính riêng (UI/mg) 1,457 0,568 0,495 3,202 70 PHỤ LỤC CỐ ĐỊNH ENZYME VÀ KHẢ NĂNG TÁI SỬ DỤNG Bảng 12: Số liệu khả tái sử dung enzyme cố định Glutaraldehyde-chitosan Phá vỡ tế bào lần Hàm lượng tủa phân đoạn, % - 30 Số lần tái sử dụng Lần Lần Lần Lần Lần Lần Hàm lượng PGK, % (w/v) 2.67 2.67 2.67 2.67 2.67 2.67 Thể tích PGK, ml 2 2 2 Thời gian phản ứng, phút 3 3 3 Thể tích NaOH (0.1 M), ml 1.60 1.58 1.56 1.56 1.55 1.54 Lượng µmol PAA tạo /1 phút, µmol 5.33 5.27 5.20 5.20 5.17 5.13 Tỷ lệ lần tái sử dụng 1.00 0.99 0.98 0.98 0.97 0.96 71 LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên học viên: TRẦN NGỌC THỦY THƯƠNG Giới tính: Nữ Ngày tháng năm sinh: 21 – 04 – 1982 Nơi sinh: Bình Thuận Địa liên lạc: 818/75 Xơ Viết Nghệ Tĩnh, Phường 25, Quận Bình Thạnh, Tp HCM QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO: - Năm 2002 – 2006: Đại học Văn Lang - Năm 2009 – 2011: Cao học trường Đại học Bách Khoa TP HCM 72 ... TÀI: Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng quy trình sản xuất enzyme penicillin G acylase cố định 2- NHIỆM VỤ LUẬN VĂN: - Khảo sát quy trình lên men Alcaligenes faecalis - Khảo sát quy trình thu nhận enzyme. .. QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỞNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TRẦN NGỌC THỦY THƯƠNG KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG TRONG QUY TRÌNH SẢN XUẤT ENZYME PENICILLIN G ACYLASE CỐ ĐỊNH CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ... xét đến để thực quy mô công nghiệp Nhằm giải vấn đề này, tiến hành thực đề tài ? ?Khảo sát số yếu tố quy trình sản xuất enzyme penicillin G acylase cố định” MỤC TIÊU Khảo sát tổng quát quy sản xuất