Nghiên cứu thăm dò hoạt tính kháng viêm khớp của cây ngải mọi (globa pendula roxb) mã số mhn 2019 01

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI  - BÙI THỊ HẢI HÒA ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU THĂM DỊ HOẠT TÍNH VIÊM KHỚP CỦA CÂY NGẢI MỌI (Globa pendula Roxb.) Hà Nội – 2020 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các lồi thực vật có tác dụng chống bệnh viêm khớp Error! Bookmark not defined Bảng 1.2 Danh sách loài Globba loài tương tự Error! Bookmark not defined Bảng 1.3 Các loài Globba với tên thường gọi, công dụng cách sử dụng Error! Bookmark not defined Bảng 1.4 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học hợp chất tách chiết từ số thực vật họ Zingiberaceae Error! Bookmark not defined Bảng 2.1 Danh mục thiết bị Error! Bookmark not defined Bảng 2 Danh mục dụng cụ Error! Bookmark not defined Bảng Bảng xác định độ ẩm trung bình ngải Error! Bookmark not defined Bảng 3.2 Hàm lượng tro toàn phần ngải Error! Bookmark not defined Bảng 3.3 Kết khảo sát lựa chọn dung môi thu hồi cao chiết tổng từ Ngải Error! Bookmark not defined Bảng 3.4 Kết khảo sát nồng độ dung môi thu hồi cao chiết tồng từ Ngải Error! Bookmark not defined Bảng 3.5 Kết khảo sát tỷ lệ nguyên liệu: dung môi thu hồi cao chiết tồng từ Ngải Error! Bookmark not defined Bảng 3.6 Kết khảo sát tỷ lệ nguyên liệu: dung môi thu hồi cao chiết tồng từ Ngải mọ Error! Bookmark not defined Bảng 3.7 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu suất thu hồi cao chiết tồng từ Ngải Error! Bookmark not defined Bảng 3.8 Độc tính cấp dẫn xuất cao chiết ngải chuột nhắt trắng qua đường tiêu hóa Error! Bookmark not defined Bảng 3.9 Độc tính bán cấp tính dẫn xuất cao chiết ngải chuột nhắt trắng qua đuờng tiêu hóa Error! Bookmark not defined Bảng 3.10 Ảnh hướng của cao chiết ngải tới trọng lượng chuột nhắt trắng Error! Bookmark not defined Bảng 3.11 Ảnh hưởng lên trọng lượng gan, lách, thận chuột sau dùng cao chiết Ngải Error! Bookmark not defined Bảng 3.12 Tác dụng chống viêm cấp tính Cao chiết ngải mơ hình gây phù chân chuột Error! Bookmark not defined DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cây Ngải (Globba Pendula Roxb.) Error! Bookmark not defined Hình 1.2 Sơ đồ phương pháp thu nhận hoạt chất từ thực vật Error! Bookmark not defined Hình 2.1 Sơ đồ thu hồi cao chiết tổng cao chiết phân đoạn từ Ngải thu hồi cao chiết tồng từ Ngải Error! Bookmark not defined MỞ ĐẦU Tính cấp thiết Viêm khớp rối loạn hệ thống xương sau tác động học sinh học làm ổn định khớp nối bình thường sụn khớp Viêm khớp ảnh hưởng đến người lứa tuổi chủ yếu độ tuổi 25-50 tuổi chiếm tỷ lệ cao độ tuổi 40-50 Có khoảng 100 loại viêm khớp phổ biến bao gồm viêm xương khớp, viêm khớp dạng thấp, viêm cột sống dính khớp, viêm lupus ban đỏ hệ thống viêm khớp vị thành niên Các khớp thường bị ảnh hưởng viêm khớp khớp chịu trọng lượng bàn chân, đầu gối, hông, cột sống khớp khác, hậu cuối viêm khớp cứng khớp khả vận động Cùng với khớp chịu trọng lượng, viêm khớp ảnh hưởng đến xương quanh khớp, màng hoạt dịch khớp yếu tố mô liên kết hỗ trợ liền kề Thống kê năm gần Trung tâm Kiểm soát bệnh tật Mỹ cho thấy, bệnh viêm khớp nguyên nhân hàng đầu gây tàn phế cho người, vấn đề lưng cột sống Việt Nam nhiều nước giới, viêm khớp bệnh lý thường gặp Bệnh xảy tất lứa tuổi, đó, thường bị bệnh nhiều 30-50 tuổi (chiếm 73 – 85%) Mặc dù thuốc điều trị viêm khớp có sẵn thị trường nhiên phần lớn gây tác dụng phụ, đặc biệt nghiêm trọng sử dụng mãn tính Liệu pháp thảo dược khoa học bất thành văn sử dụng liệu pháp điều trị bệnh hữu khu vực nông thôn nước khu vực châu Á, liệu pháp có thành cơng định điều trị viêm khớp Trong nhiều kỷ liên tục, quốc gia nào, từ Đơng sang Tây, có niềm tự hào riêng kinh nghiệm áp dụng dược liệu thiên nhiên Cây thuốc, dù rễ, thân, lá, hoa hay phận dùng làm thuốc người áp dụng Đặc biệt loại gần gũi với đời sống ngày Đất nước Việt Nam có thảm thực vật phong phú, đa dạng bao gồm nhiều thuốc quý với đầy đủ chủng loại số lượng lớn Một số Ngải (Globba Pendula Roxb.) Cây Ngải thường sử dụng để sắc nước để uống, dùng phận nấu thành cao lỏng để trị thấp khớp dùng trường hợp giải độc rượu nấu nước cho phụ nữ sinh uống Mặc dù vậy, chưa có đề tài nghiên cứu nói nghiên cứu cụ thể khả kháng bệnh viêm khớp loài Vì mục tiêu chiết xuất tạo cao chiết từ Ngải đánh giá độ an tồn cao chiết Ngải để thăm dị hoạt tính kháng viêm khớp, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu thăm dị hoạt tính kháng viêm khớp Ngải (Globa pendula Roxb.)” Mục tiêu nội dung nghiên cứu a Mục tiêu nghiên cứu Chiết xuất tạo cao chiết tổng cao chiết phân đoạn từ Ngải (Globba Pendula Roxb.) đánh giá hoạt tính kháng bệnh viêm khớp cao chiết; b Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu xác định thành phần hợp chất kháng bệnh viêm khớp Ngải (Globba Pendula Roxb.); Nghiên cứu điều chế loại cao chiết tổng số cao chiết phân đoạn Ngải (Globba Pendula Roxb.); Nghiên cứu xác định độc tính cao chiết Ngải (Globba Pendula Roxb.); - Đánh giá hoạt tính kháng bệnh viêm khớp cao chiết Ngải (Globba Pendula Roxb.) Đóng góp mặt kinh tế - xã hội, giáo dục đào tạo, an ninh - quốc phòng - Đối với lĩnh vực giáo dục đào tạo: Góp phần nâng cao chất lượng đào tạo nâng cao chất lượng nhân lực khoa học công nghệ - Đối với lĩnh vực khoa học cơng nghệ có liên quan: Kết đề tài bước đầu sở phục vụ cho việc nghiên cứu chế tạo sản phẩm y dược hỗ trợ sức khỏe người Đối với phát triển kinh tế - xã hội, an ninh – quốc phịng: Đề tài thành cơng góp phần tạo sản phẩm chức có khả hỗ trợ sức khỏe người Khả ứng dụng kết nghiên cứu đề tài Đề tài thành công góp phần tạo sản phẩm chức có khả hỗ trợ sức khỏe người Khả phát triển đề tài Đề tài tiếp tục nghiên cứu theo hướng tối ưu qui trình thu hồi cao chiết toàn phần cao chiết phân đoạn Ngải mọi, tinh xác định thành phần hóa học bản, đánh giá hoạt tính gây độc tế bào, hoạt tính kháng sinh, hoạt tính kháng viêm…của cao chiết Ngải để ứng dụng cao chiết điều trị bệnh nhân viêm khớp CHƢƠNG I TỔNG QUAN I.1 Tổng quan thuốc có khả chữa bệnh viêm khớp Trong thực tế, có nhiều lồi thảo dược nghiên cứu hoạt tính kháng bệnh viêm khớp Cây đậu dầu (Pongamia pinnata L Pierre) (HọFabaceae) cố định đạm, có kích thước trung bình, sống lâu năm vùng duyên hải Đông Nam Á Úc Hạt, rễ, hoa, vỏ sử dụng cho mục đích làm thuốc Hạt chứa chất hóa thực vật sterol dẫn xuất nó, thân chứa dẫn xuất flavone chalcone pongone, galbone, pongalabol, pongagallon A & B23 Ở dạng thuốc thô, sử dụng điều trị khối u, bệnh da, vết thương lở loét Về mặt dược lý, nghiên cứu khả chống lở loét, chống tiêu chảy, chống oxy hóa, chống plasmodium, chống hạ đường huyết, chống vi rút, chống vi khuẩn chống viêm Hoạt tính chống viêm khớp đậu dầu chứng minh mơ hình động vật thực nghiệm phù chân carrageenan gây phù chân formaldehyde Cây nam sâm (Boerhaavia diffusa L.) thuộc họ Nyctaginaceae leo, phân bố Úc, Trung Quốc, Ai Cập Pakistan, Sudan, Srilanka, Nam Phi, Hoa Kỳ quốc gia khác Trung Đông Lá, hạt rễ sử dụng cho mục đích làm thuốc CÁc hợp chất hóa học có mặt Boerhaavia diffusa L bao gồm glycoside, alkaloids, steroid, triterpenoids flavonoid Loài sử dụng điều trị chứng khó tiêu, vàng da, đau bụng căng thẳng, hạt sử dụng thuốc bổ, thuốc chữa bệnh đau thắt lưng, bệnh ghẻ Chiết xuất alcohol Boerhaavia diffusa L có tác dụng kháng khuẩn, chống hạ đường huyết, chống căng thẳng, chống viêm khớp Cây chiêu liêu Terminalia chebula Retz.) thuộc họ Combretaceae thân gỗ nhỡ cao tới gần 30m, đường kính thân tới 1m, phân bố nhiều quốc gia giới, bao gồm Ấn Độ, Pakistan, Nepal Nam Trung Quốc Quả sử dụng cho mục đích làm thuốc Thành phần hóa học T chebula bao gồm tannin, alkaloids, flavonoid, terpenoids, steroid, carbohydrate, protein saponin Cây sử dụng điều trị viêm xoang, dị ứng, táo bón, cholesterol cao, thấp khớp Cây bơ (Persea americana Mill.) thuộc họ Lauracea loại cận nhiệt đới phân bố rộng rãi vùng Bắc, Trung Nam Mỹ Đơng Đơng Nam Á Có gần 40 hợp chất hóa học tìm thấy bơ số hợp chất alkanol, glycoside terpinoid, furan, flavonoid, coumarin dẫn xuất Chiết xuất từ nước bơ chứng minh có hoạt tính chống tăng huyết áp, giảm đau chống viêm, chống oxy hóa hạ đường huyết Zingiberaceae gọi gừng họ thân thảo có tinh dầu bao gồm 1.300 loài 52 chi với thân rễ củ, phân bố từ châu Á nhiệt đới, châu Phi châu Mỹ Trong số đó, phân bố gừng chủ yếu tìm thấy châu Á nhiệt đới với khoảng 1000 loài Theo truyền thống, gừng người giới sử dụng cho nhiều mục đích khác thực phẩm, thuốc cổ truyền, gia vị, gia vị, thuốc nhuộm hương vị Các nghiên cứu thực vật học thuốc khu vực hồ Buyan-Tambledan, Bedugul, Bali tiết lộ Zingiberaceae họ lớn người dân địa phương sử dụng làm thuốc truyền thống, số thuốc chống độc nọc bọ cạp, chống viêm, thấp khớp , bệnh da, sốt, yếu tim thuốc giảm đau Ở Ayurveda (một hệ thống y học cổ truyền có nguồn gốc lịch sử Ấn Độ), gừng sử dụng cho nhiều loại điều trị, thuốc chống viêm, thuốc chữa bệnh kích thích tim, viêm khớp dạng thấp, viêm, viêm họng, viêm họng, ho, hen suyễn, viêm họng, viêm họng chứng khó tiêu, đau dày, béo phì, tiểu đường, đau thận, bệnh lao sốt liên tục Các nghiên cứu hợp chất hóa thực vật dược phẩm thực vật chứng minh nhiều lồi họ Zingiberaceae có chứa chất chuyển hóa thứ cấp khác có tiềm lớn lĩnh vực dược phẩm, chất chống viêm, chống oxy hóa, chống đột biến, chống đái tháo đường, kháng khuẩn, chống viêm gan, chống co giật, giảm đau, thuốc tiêu chảy, rối loạn da liễu, thấp khớp thuốc trừ sâu Một số Cây Ngải cịn gọi Riềng rừng (Globba Pendula Roxb.), loài địa Việt Nam Bảng 1.1 Các loài thực vật có tác dụng chống bệnh viêm khớp Bộ phận có Loài thực vật Họ tác dụng chống viêm khớp Abutilon indicum L Tài liệu tham khảo Malvaceae Lá Mimosaceae Cành Euphorbiaceae Toàn thân Malvaceae Lá Liliaceae Rễ Alangiaceae Rễ 10 Lamiaceae Lá Bacopa monnieri (L.) Penn Scrophulariaceae Lá Brassica alba (L.) Rabenh Brassicaceae Hạt Capparidaceae Lá Clusiaceae Hạt Caesalpini Eae Quả Peucedanum graveolens Benth Apiaceae Hạt, rễ Pongamia glabra Vent Fabaceae Rễ 16 Salvadora indica Royle Salvadoraceae Quả, hoa Acacia leucophloeaWilld Acalypha indica L Adansonia digitata L Allium cepa L Alangium salviifolium (Linn.f.) Wang Anisomeles malabarica R Br Cadaba indica Lam Calophyllum inophyllum L Cassia fistula L 10 11,12 Hình 3.4 Tác động chế phẩm cao ngải đến sản xuất TNF-alpha huyết chuột 2817.34 2789.2 3000 2500 2543.49 1930.64 2000 1500 1000 500 Đối chứng Dexamethasone Ngải 250mg/kg Ngải 500 mg/kg Hình 3.5 Tác động chế phẩm cao ngải đến sản xuất PGE huyết chuột Kết hình cho thấy: - Hàm lượng IL-6 huyết nhóm chuột uống cao chiết ngải liều 500mg/kg giảm mạnh (105,56pg/ml) thấp nhóm sử dụng dexamethasone (161,22 pg/ml) - Hàm lượng IL-10 huyết nhóm chuột uống cao chiết ngải liều 250mg/ml, 500mg/kg giảm tỷ lệ ngược với liều sử dụng, tương ứng 364 pg/ml 423,01 pg/ml thấp nhóm sử dụng dexamethasone (508,41 pg/ml) - Hàm lượng yếu tố hoại tử mơ TNF-alpha giảm đáng kể nhóm sử dụng cao chiết ngải so với nhóm đối chứng, cụ thể: hàm lượng TNF-alpha tương ứng với nhóm chuột uống cao chiết ngải liều 250mg/ml, 500mg/kg 1004,72 pg/ml, 1096,90 pg/ml - Hàm lượng PGE-2 nhóm chuột sử dụng cao chiết ngải 2789,2 pg/ml, 2543,49 pg/ml, thấp hơ đáng kể so với nhóm đối chứng (2817,34 pg/ml) 51 Với kết thấy, cao chiết ngải làm giảm có ý nghĩa mức độ giảm viêm khớp dạng thấp chuột liều 500 ml/ml Kết đánh giá ảnh hƣởng cao chiết ngải đến tỷ lệ sống số chức tế bào đại thực bào Đại thực bào tế bào có thẩm quyền miễn dịch, có liên quan chặt chẽ đến q trình viêm Trong nghiên cứu này, nghiên cứu ảnh hưởng cao chiết ngải đến tỷ lệ sống chức sản sinh số cytokin đại thực bào để làm sở cho nghiên cứu sử dụng cao chiết điều trị viêm khớp Khả tác động mẫu nghiên cứu đến sản sinh PGE2 IL-6 thể hình 3.6-3.8 Hàm lượng IL-6 (pg/ml) 250 227.79 212.16 159.76 200 132.93 150 100 50 Đối chứng Chế phẩm 4mg/ml Chế phẩm 20mg/ml Chế phẩm 100mg/ml Hình 3.6 Tác động cao ngải đến sản sinh IL-6 tế bào đại thực bào RAW 247.7 52 Hàm lượng PGE (số lần) 14.48 16 14 12 8.56 10 6.52 4.11 Đối chứng LPS Đối chứng LPS (-) (+) Chế phẩm 4mg/ml Chế phẩm 20mg/ml Chế phẩm 100mg/ml Hình 3.7 Tác động cao ngải đến sản sinh PGE tế bào đại thực bào RAW 247.7 Tỷ lệ tế bào sống (%) 120 106.93 102.6 100 80 50.63 60 40 20 Chế phẩm 4mg/ml Chế phẩm 20mg/ml Chế phẩm 100mg/ml Hình 3.8 Tác động cao ngải đến tỷ lệ tế bào sống Kết hình cho thấy: - LPS kích thích sản sinh PGE2 IL6 tế bào đại thực bào RAW 264.7 - Cao ngải tác động làm giảm đáng kể sản sinh PGE2 IL6 nồng độ 100g/ml giảm nhẹ sản sinh PGE2 nồng độ 4g/ml Tuy 53 nhiên, nồng độ 100g/ml, cao ngải gây ảnh hưởng lớn đến tỷ lệ sống tế bào Hoạt tính độc tế bào Khả gây độc tế bào cao chiết ngải tế bào ung thư nguyên bào sợi bình thường đánh giá phương pháp MTT, thuốc chống ung thư camptothecin sử dụng làm chất chuẩn Kết thí nghiệm trình bày hình 3.9 100 100 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 48.13 49.66 39.04 43.84 41.51 35.03 31.87 25.34 Hep3B MCF7 Đối chứng Cao chiết ngải 50 mg/ml Cao chiết ngải 100 mg/ml Camptothecin 10mg/ml Camptothecin 40 mg/ml Hình 3.9 Kết sàng lọc độc tính cao chiết ngải Kết hình 3.9 cho thấy, cao chiết ngải có hoạt tính gây độc tế bào hai dòng tế bào Hep3B MCF7, tỷ lệ tế bào sống sót ≤50% hai nồng độ thử nghiệm Tiếp tục xác định giá trị IC50 thu kết bảng 3.8 IC50 xây dựng nồng độ thử nghiệm, giá trị xác định theo phương pháp hồi quy tuyến tính phần mềm graphpad prism 5.0 Bảng 3.8 Giá trị IC50 mẫu có hoạt tính Mẫu Giá trị IC50 (g/ml) Hep3B MCF7 54 Cao ngải 35,24 28,15 Camptothecin 0,59 6,46 Kết cho thấy cao chiết ngải thể hoạt tính ức chế phát triển dòng tế bào ung thư thử nghiệm Hep3B MCF7 với giá trị IC50 tương ứng 35,24 28,15g/ml Kết khảo sát mức độ kháng khuẩn loại cao chiết xuất từ ngải Các cao chiết xuất từ ngải khảo sát hoạt tính kháng khuẩn phương pháp khuếch tán đĩa thạch đánh giá thơng qua đường kính vịng vơ khuẩn, đường kính lớn thể khả kháng khuẩn cao Kết nghiên cứu bảng 3.9 cho thấy, ethanol 30% sử dụng làm đối chứng âm khơng xuất vịng kháng khuẩn Cao chiết tổng số hoạt chất tách chiết từ ngải kháng vi khuẩn nấm men C albicans mức độ khác khơng có hoạt tính kháng nấm mốc A.niger A.flavus Đối với cao chiết phân đoạn cao chiết chứa hoạt chất 2ʹhydroxy-4,4ʹ,6ʹ-trimethoxy-chalcone globbanol A có tác dụng kháng lồi vi khuẩn nấm mốc tương tự cao chiết tổng số, hoạt chất 2ʹhydroxy-4,4ʹ,6ʹ-trimethoxy-chalcone cho mức độ kháng khuẩn cao cao chiết tổng số cao cao chiết phân đoạn có chứa globbanol A Các cao chiết chứa crotepoxide boesenboxide không kháng vi khuẩn nấm mốc Bảng 3.9 Kết khảo sát mức độ kháng khuẩn kháng nấm loại cao chiết từ ngải Chủng vi sinh vật Loại cao chiết (đường kính kháng khuẩn mm) Cao Cao Cao Cao Cao chiết chiết chiết chiết chiết tổng số chứa chứa chứa chứa 55 hoạt hoạt hoạt hoạt chất số chất số chất số chất số V cholera 15 18 - - 12 S typhimurium 10 16 - - S enteritidis 12 17 - - E coli (ETEC) 15 18 - - 11 E coli (EHEC) 16 18 - - 11 S aureus 10 15 - - E faecalis 11 15 - - P aeruginosa 12 - - A niger - - - - - A flavus - - - - - C albicans 10 - - (Ghi chú: hoạt chất 1: 2ʹ-hydroxy-4,4ʹ,6ʹ-trimethoxy-chalcone, hoạt chất 2: crotepoxide, hoạt chất 3: boesenboxide, hoạt chất 4: globbanol A) Kết xác định MIC loại cao chiết xuất từ ngải vi sinh vật kiểm định thể hình bảng Độ pha loãng tối thiểu cao chiết tổng số nằm khoảng 8-128, tương ứng với nồng độ từ 52,55-3,28 mg/ml Trong vi khuẩn V.cholera, E.coli (ETEC) E.coli (EHEC) nhạy cảm cao chiết tổng số, độ pha loãng cao chiết để ức chế chủng vi khuẩn 128 lần (3,28 mg/ml) Các chủng S.typhimurium, A.enteritidis, S.aureus bị ức chế độ pha loãng cao chiết tổng 64 lần (6,57 mg/ml) Nấm men C.albicans ức chế độ pha loãng lần (52,55 mg/ml) 2ʹ-hydroxy-4,4ʹ,6ʹ-trimethoxy-chalcone có tính kháng khuẩn cao so với hoạt chất tách chiết từ ngải cao gấp 2-4 lần so với cao chiết tổng số Ngoại trừ hai loài nấm mốc A.niger A.flavus khơng mẫn cảm với 2ʹ-hydroxy-4,4ʹ,6ʹ-trimethoxy-chalcone cịn chủng vi khuẩn chủng 56 nấm men C.albicans bị ức chế hoàn toàn phát triển vi khuẩn kiểm định độ pha loãng từ 32-256 lần, chủng vi khuẩn thuộc lồi Vibrio cholera, Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis, Escherichia coli (ETEC), Escherichia coli (EHEC), Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis bị ức chế độ pha loãng 256 lần, tương ứng với nồng độ hoạt chất 0,04 mg/ml, Pseudomonas aeruginosa bị ức chế độ pha loãng 128 lần, tương ứng với nồng độ hoạt chất 0,08 mg/ml, C.albicans bị ức chế độ pha loãng 32 lần, tương ứng với nồng độ hoạt chất 0,32mg/ml Đối với globbanol A, hoạt chất nhạy 05 chủng thuộc loài vi khuẩn Vibrio cholera, Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis, Escherichia coli (ETEC), Escherichia coli (EHEC), giá trị MIC 0,09 mg/ml Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis bị ức chế nồng độ hoạt chất 0,7 mg/ml, Pseudomonas aeruginosa bị ức chế nồng độ hoạt chất 0,14 Cao chiết tổng số 256 256 256 256 256 256 300 256 mg/ml, C.albicans bị ức chế nồng độ hoạt chất 0,35 mg/ml Cao chiết chứa hoạt chất số Cao chiết chứa hoạt chất số 250 128 0 0 0 0 0 0 32 0 32 16 32 0 0 0 0 0 0 0 16 50 64 128 64 128 128 128 128 128 64 100 64 128 150 128 200 Hình 3.10 Kết xác định độ pha loãng tối thiểu ức chế vi snh vật kiểm định loại cao chiết từ ngải (Ghi chú: hoạt chất 1: 2ʹ-hydroxy-4,4ʹ,6ʹ-trimethoxy-chalcone, hoạt chất 2: crotepoxide, hoạt chất 3: boesenboxide, hoạt chất 4: globbanol A) 57 Nhìn chung, chế kháng khuẩn loài thực vật ức chế tổng hợp thành tế bào (Cowan, 1999; Marcucci cộng sự, 2001), cản trở tính thấm màng tế bào gia tăng tính thấm thành phần tế bào dẫn đến tổn thương tế bào chết (Kim cộng sự, 1995) Lin Tang (2007) báo cáo hợp chất phenolic flavonoid thực vật có hoạt tính tiêu diệt vi sinh vật Cây ngải sử dụng nghiên cứu biết có chứa nhiều hàm lượng phenolic flavonoid khác (Wu cộng sự, 2010) Từ kết nghiên cứu này, gợi ý chất chiết xuất từ ngải trở thành nguồn để sản xuất kháng sinh Bảng 3.10 Kết xác định hàm lƣợng chất ức chế tối thiểu loại cao chiết từ ngải Hàm lượng ức chế vi sinh vật (mg/ml) Chủng vi khuẩn V cholera S typhimurium S enteritidis E coli (ETEC) E coli (EHEC) Cao Cao chiết chiết chứa hoạt tổng số chất số 3,28 0,04 6,57 0,04 6,57 0,04 3,28 0,04 3,28 0,04 58 Cao Cao Cao chiết chiết chiết chứa chứa chứa hoạt hoạt hoạt chất số chất số chất số 0 0 0 0 0 0,09 0,09 0,09 0,09 0,09 S aureus 0 0 0 0 0 0 0 52,55 0,32 0 6,57 0,04 6,57 0,04 13,14 0,08 A niger A flavus E faecalis P aeruginosa C albicans 0,70 0,70 1,40 0,35 Bên cạnh thí nghiệm xác định nồng độ ức chế tối thiểu vi sinh vật (MIC) tiến hành xác định nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) nhằm đánh giá hiệu tiêu diệt hoàn toàn vi sinh vật kiểm định cao chiết từ ngải Kết nghiên cứu trình bày hình bảng 128 128 128 128 128 128 140 128 Cao chiết tổng số Cao chiết chứa hoạt chất số Cao chiết chứa hoạt chất số Cao chiết chứa hoạt chất số Cao chiết chứa hoạt chất số 120 64 64 80 64 100 0 0 0 0 0 0 0 20 0 0 0 0 0 0 4 0 32 32 32 32 32 32 32 32 40 32 32 60 Hình 3.10 Kết xác định độ pha loãng tối thiểu tiêu diệt vi sinh vật kiểm định loại cao chiết từ ngải (Ghi chú: hoạt chất 1: 2ʹ-hydroxy-4,4ʹ,6ʹ-trimethoxy-chalcone, hoạt chất 2: crotepoxide, hoạt chất 3: boesenboxide, hoạt chất 4: globbanol A) 59 So với giá trị MIC, MBC loại cao chiết giảm 2-4 lần MBC cao chiết tổng số 6,75 mg/ml (tương đương với độ pha loãng 64 lần) chủng vi khuẩn thuộc loài Vibrio cholera, Escherichia coli (ETEC), Escherichia coli (EHEC); 13,14 mg/ml (tương đương với độ pha loãng 32 lần) 04 chủng vi khuẩn thuộc loài Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis; 52,55 mg/ml (tương đương với độ pha loãng lần) chủng vi khuẩn thuộc loài Pseudomonas aeruginosa 105,11 mg/ml (tương đương với độ pha loãng lần) chủng nấm men thuộc loài C.albicans MBC 2ʹ-hydroxy-4,4ʹ,6ʹ-trimethoxy-chalcone 0,08 mg/ml (tương đương với độ pha loãng 128 lần) chủng vi khuẩn kiểm định thuộc loài Vibrio cholera, Escherichia coli (ETEC), Escherichia coli (EHEC), Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis ; 0,33 mg/ml (tương đương với độ pha loãng 32 lần) chủng vi khuẩn thuộc loài Pseudomonas aeruginosa 2,63 mg/ml (tương đương với độ pha loãng lần) chủng nấm men thuộc loài C.albicans Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu globbanol A chia thành nhóm tương đương nhau, nhóm gồm 05 chủng thuộc loài vi khuẩn Vibrio cholera, Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis, Escherichia coli (ETEC), Escherichia coli (EHEC có giá trị MBC 0,35 mg/ml (tương đương với độ pha loãng 32 lần); nhóm chủng vi sinh vật thuộc loài Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa C.albicans có MBC 5,6 mg/ml (tương đương với độ pha loãng lần) Bảng 3.11 Kết xác định hàm lƣợng diệt khuẩn tối thiểu (MBC) loại cao chiết từ ngải Chủng vi sinh vật Hàm lượng ức chế vi sinh vật 60 V cholera Cao Cao chiết chiết chứa hoạt tổng số chất số Cao Cao Cao chiết chiết chiết chứa chứa chứa hoạt hoạt hoạt chất số chất số chất số - - - - - - - - - - - - - - - - 6,57 0,08 13,14 0,08 13,14 0,08 6,57 0,08 6,57 0,08 13,14 0,08 13,14 0,08 52,55 0,32 A niger - - - - - A flavus - - - - - 105,11 2,63 - - S typhimurium S enteritidis E coli (ETEC) E coli (EHEC) S aureus E faecalis P aeruginosa C albicans 61 0,35 0,35 0,35 0,35 0,35 5,60 5,60 5,60 5,60 VI KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ I Kết luận - Đã xây dựng quy trình điều chế cao chiết ngải tổng số tách chiết cao chiết phân đồn, đó, cao chiết phân đoạn gồm có hợp chất: 2’-hydroxy-4,4’,6’-trimethoxy-chalcone, crotepoxide, boesenboxide globanol A - Đã khảo sát mức độ kháng viêm loại cao chiết ngải tổng số, cao chiết tổng số, boesenboxide 2’-hydroxy-4,4’,6’-trimethoxy-chalcone có hoạt tính ức chế viêm; crotepoxide globanol A khơng có tác dụng ức chế viêm carrageenan formalin - Cao chiết ngải tổng số có tác dụng giảm mức độ viêm khớp mơ hình sử dụng kháng thể kháng collagen Đồng thời gây giảm hàm lượng cytokin gây viêm IL6, IL10, TNF- Anpha, PGE2 - Cao chiết ngải tổng số an toàn động vật thí nghiệm, đồng thời an tồn tế bào đại thực bào liều 20mg/ml - Cao chiết tổng số gây độc tế bào ung thư Hep 3B MCF - Cao chiết ngải có tác dụng kháng số vi khuẩn kiểm định II Kiến nghị Do thời gian nghiên cứu có hạn nên đề tài có kết ban đầu nghiên cứu thu hồi đánh giá hoạt tính cao chiết Ngải Nhóm nghiên cứu đề nghị tiếp tục tối ưu qui trình thu hồi cao chiết toàn phần cao chiết phân đoạn Ngải để ứng dụng cao chiết điều trị bệnh nhân viêm khớp 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO A TIẾNG VIỆT V Văn Chi, Trần Hợp, Cây cỏ có ích Việt Nam NXB Giáo dục, tập I, tr 619, 1999 V Văn Chi, Từ điển thuốc Việt Nam NXB Y học, tập II, tr 440 - 441, 2012 Trương Thị Đẹp, Thực vật dược NXB Giáo dục, tr 282 - 283, 2009 Phạm Hoàng Hộ, Cây cỏ Việt Nam NXB Trẻ, Tập II, tr 506 - 509, 2006 Viện Dược liệu, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam NXB Khoa học Kĩ thuật, tập I, tr 541 - 542, 2003 B TIẾNG ANH Yesilada E, Ustun O, Sezik E, Takaishi Y, Ono Y and Honda G, Inhibitory effect of Turkish folk remedies oninflammatory cytokines: interleukin-1-alpha, interleukin-1-beta and tumour necrosis factor-alpha, J Ethnopharmacol, 1997, 58(1), 59-73.2 Corley DA, Kerlikowske K, Verma R and Buffler P, Protective association of aspirin/NSAIDS and esophagealcancer: a systematic review and metaanalysis Gastroenterology, 2003, 124, 47-56 Tamokou JDD, Mbaveng AT, Kuete V (2017) Antimicrobial activities of African medicinal spices and vegetables In: Kuete V (Ed.) Medicinal spices and vegetables from Africa London, UK, Academic Press pp 207 – 237 doi: 10.1016/b978-0-12- 809286-6.00008-x 63 Ujang Z, Nordin NI, Subramaniam T (2015) Ginger species and their traditional uses in modern applications Journal of Industrial Technology 23 (1): 59 – 70 Oktavia GAE, Drama IDP, Sujarwo W (2017) Ethnobotanical study of medicinal plants in the area around Buyan-Tamblingan Buletin Kebun Raya 20 (1): – 16 Kumar KMP, Asish GR, Sabu M, Balachandra I (2013) Significance of gingers (Zingiberaceae) in Indian System of Medicine - Ayurveda: An overview Ancient Science of Life 32 (4): 253 – 261 doi: 10.4103/02577941.131989 Barbosa GB, Jayasinghe NS, Natera SHA et al (2017) From common to rare Zingiberaceae plants - A metabolomics study using GC-MS Phytochemistry 140: 141 – 150 doi: 10.1016/j.phytochem.2017.05.002 Asif M (2015) Chemistry and antioxidant activity of plants containing some phenolic compounds Chemistry International (1): 35 – 52 Verma RS, Joshi N, Padalia RC et al (2018) Chemical composition and antibacterial, antifungal, allelopathic and acetylcholinesterase inhibitory activities of Cassumunar-ginger Journal of Science of Food and Agriculture 98 (1): 321 – 327 doi: 10.1002/jsfa.8474 Williams KJ, Kress WJ, Monas PS (2004) The Phylogeny, evolution, and classification of the genus Globba and tribe Globbeae (Zingiberaceae): Appendages matter American Journal of Botany 91(1): 100 – 114 doi: 10.3732/ajb.91.1.100 Raj G, George V, Dan M, Sethuraman MG (2010) Essential oil composition of Globba schomburgkii Hook f and Globba ophioglossa Wight, Journal of Essential Oil Research 22 (3): 220 – 222 doi: 10.1080/10412905.2010.9700307 64 10 The International Plant Name Index (2018) Zingiberaceae Globba candida Gagnep http://www.ipni.org/ipni/idPlantNameSearch.do?id=872531-1 Accessed date: Agustus 2018 65 ... chiết từ Ngải đánh giá độ an toàn cao chiết Ngải để thăm dò hoạt tính kháng viêm khớp, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu thăm dị hoạt tính kháng viêm khớp Ngải (Globa pendula. .. loại viêm khớp phổ biến bao gồm viêm xương khớp, viêm khớp dạng thấp, viêm cột sống dính khớp, viêm lupus ban đỏ hệ thống viêm khớp vị thành niên Các khớp thường bị ảnh hưởng viêm khớp khớp chịu... dung nghiên cứu a Mục tiêu nghiên cứu Chiết xuất tạo cao chiết tổng cao chiết phân đoạn từ Ngải (Globba Pendula Roxb.) đánh giá hoạt tính kháng bệnh viêm khớp cao chiết; b Nội dung nghiên cứu Nghiên