Khảo sát và định danh kháng thể bất thường ở những người cho máu tình nguyện khu vực đông nam bộ tại bệnh viện chợ rẫy

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - TRƯƠNG ANH DŨNG KHẢO SÁT VÀ ĐỊNH DANH KHÁNG THỂ BẤT THƯỜNG Ở NHỮNG NGƯỜI CHO MÁU TÌNH NGUYỆN KHU VỰC ĐƠNG NAM BỘ TẠI BỆNH VIỆN CHỢ RẪY LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Y HỌC Thành Phố Hồ Chí Minh – 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - TRƯƠNG ANH DŨNG KHẢO SÁT VÀ ĐỊNH DANH KHÁNG THỂ BẤT THƯỜNG Ở NHỮNG NGƯỜI CHO MÁU TÌNH NGUYỆN KHU VỰC ĐÔNG NAM BỘ TẠI BỆNH VIỆN CHỢ RẪY Chuyên ngành: XÉT NGHIỆM Y HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS.DS TRẦN VĂN BẢO PGS.TS.BS HÀ THỊ ANH Thành Phố Hồ Chí Minh – Năm 2017 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu hồn tồn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả TRƯƠNG ANH DŨNG ii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC BIỂU ĐỒ viii DANH MỤC HÌNH ix DANH MỤC SƠ ĐỒ x ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan hệ nhóm máu 1.1.1 Hệ nhóm máu ABO 1.1.2 Hệ thống nhóm máu Rhesus 1.1.3 Hệ thống nhóm Kell 1.1.4 Hệ thống nhóm Kidd 1.1.5 Hệ thống nhóm Duffy 1.1.6 Hệ thống nhóm MNSs 1.1.7 Hệ nhóm máu Lewis 1.1.8 Hệ nhóm máu P 1.1.9 Hệ nhóm máu Diego 10 1.1.10 Hệ Lutheran 10 1.2 Tổng quan kháng thể bất thường 11 1.2.1 Định nghĩa 11 1.2.2 Bản chất đặc tính huyết học 11 iii 1.3 Tổng quan miễn dịch hồng cầu 12 1.3.1 Kháng nguyên hồng cầu 12 1.3.2 Kháng thể 14 1.3.3 Phản ứng kháng nguyên - kháng thể 21 1.4 Tai biến truyền máu có liên quan đến kháng thể bất thường 24 1.5 Các phương pháp xác định kháng thể bất thường 25 1.5.1 Phương pháp phát 25 1.5.2 Phương pháp định danh 27 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 Đối tượng nghiên cứu 28 2.2 Các trang thiết bị, hóa chất, dụng cụ sử dụng nghiên cứu 28 2.3 Phương pháp nghiên cứu 29 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 29 2.3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 29 2.3.3 Cỡ mẫu 29 2.3.4 Kỹ thuật chọn mẫu 29 2.3.5 Tiêu chuẩn chọn mẫu 31 2.3.6 Phương pháp thu thập số liệu 31 2.3.7 Các bước tiến hành nghiên cứu 32 2.3.8 Kỹ thuật sàng lọc định danh kháng thể bất thường 32 2.4 Kiểm soát sai lệch 44 2.4.1 Kiểm soát sai lệch chọn lựa 44 2.4.2 Kiểm sốt sai lệch thơng tin 45 2.5 Phân tích số liệu 45 2.6 Vấn đề y đức tính ứng dụng 45 2.6.1 Vấn đề y đức 45 2.6.2 Tính ứng dụng nghiên cứu 46 iv CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 47 3.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 47 3.1.1 Phân loại người hiến máu theo giới tính 47 3.1.2 Phân loại người hiến máu theo tuổi 48 3.1.3 Phân loại người hiến máu theo nghề nghiệp 49 3.1.4 Phân loại người hiến máu theo địa phương cư trú 50 3.2 Kết sàng lọc kháng thể bất thường 51 3.2.1 Tỷ lệ KTBT người cho máu 51 3.2.2 Một số đặc điểm người có KTBT 52 3.3 Kết định danh kháng thể bất thường 53 3.3.1 Hệ Rhesus 56 3.3.2 Hệ Kell 57 3.3.3 Hệ Duffy 57 3.3.4 Hệ MNSs 57 3.3.5 Hệ Lewis 58 3.3.6 Hệ P 58 3.3.7 Hệ Lutheran 58 3.3.8 Tỷ lệ KTBT người cho máu 59 CHƯƠNG BÀN LUẬN 60 4.1 Đặc điểm chung người cho máu 60 4.2 Về phương pháp phát KTBT 61 4.3 Kết sàng lọc kháng thể bất thường 63 4.4 Kết định danh kháng thể bất thường 65 4.4.1 Kháng thể hệ Rhesus 65 4.4.2 Kháng thể hệ Kell 66 4.4.3 Kháng thể hệ Duffy 66 4.4.4 Kháng thể hệ MNSs 67 v 4.4.5 Kháng thể hệ Lewis 67 4.4.6 Kháng thể hệ P 68 4.4.7 Kháng thể hệ Lutheran 68 KẾT LUẬN 70 KIẾN NGHỊ 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ tiếng Việt HC Hồng cầu IgG Globulin miễn dịch G IgM Globulin miễn dịch M KN Kháng nguyên KNHC Kháng nguyên hồng cầu MDHC Miễn dịch hồng cầu KT Kháng thể KTBT Kháng thể bất thường TTTM Trung tâm truyền máu TP.HCM Thành Phố Hồ Chí Minh Từ tiếng Anh ME Mercapto Ethanol AHG Anti Human Globuline LISS Low Ironic Strength Solution EDTA Ethylene Diaminete Traacetate Acid vii DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Các nhóm máu hệ ABO Bảng 1.2 So sánh đặc điểm kháng thể tự nhiên kháng thể miễn dịch 18 Bảng 1.3 Các kháng thể miễn dịch gặp huyết học 20 Bảng 2.1 Danh sách tỉnh Đông Nam Bộ chọn vào nghiên cứu 30 Bảng 3.1 Người hiến máu theo giới tính 47 Bảng 3.2 Phân loại người hiến máu theo tuổi 48 Bảng 3.3 Phân loại người hiến máu theo nghề nghiệp 49 Bảng 3.4 Phân loại người hiến máu theo địa phương cư trú 50 Bảng 3.5 Tỷ lệ kháng thể bất thường 51 Bảng 3.6 Tỷ lệ KTBT Theo giới tính 52 Bảng 3.7 Tỷ lệ KTBT theo tuổi 52 Bảng 3.8 Tỷ lệ KTBT theo địa phương cư trú 53 Bảng 3.9 Kết định danh KTBT 54 Bảng 3.10 Tỷ lệ kháng thể hệ ABO phát phương pháp ống nghiệm 55 Bảng 3.11 Tỷ lệ kháng thể hệ ABO phát phương pháp microplate 55 Bảng 3.12 Tỷ lệ kháng thể hệ ABO phát phương pháp gelcard 56 Bảng 3.13 Tỷ lệ % loại kháng thể hệ Rh 56 Bảng 3.14 Tỷ lệ % loại kháng thể hệ nhóm Kell 57 Bảng 3.15 Tỷ lệ % loại kháng thể hệ Duffy 57 Bảng 3.16 Tỷ lệ % loại kháng thể hệ MNSs 57 Bảng 3.17 Tỷ lệ % loại kháng thể hệ Lewis 58 Bảng 3.18 Tỷ lệ % loại kháng thể hệ P 58 Bảng 3.19 Tỷ lệ % loại kháng thể hệ Lutheran 58 viii DANH MỤC BIỂU ĐỒ Trang Biểu đồ 3.1 Phân loại người hiến máu theo giới tính 47 Biểu đồ 3.2 Phân loại người hiến máu theo tuổi 48 Biểu đồ 3.3 Phân loại người hiến máu theo nghề nghiệp 49 Biểu đồ 3.4 Phân loại người hiến máu theo địa phương cư trú 50 Biểu đồ 3.5 Tỷ lệ kháng thể bất thường 51 Biểu đồ 3.6 Tỷ lệ kháng thể hệ ABO phát 59 66 Những kháng thể loại phát kỹ thuật dùng men, kỹ thuật kháng globuline người Ngoài nguồn gốc miễn dịch người ta gặp số kháng thể tự sinh kháng Rh, loại IgG bệnh nhân thiếu máu tan máu tự miễn Chúng phát hệ Rh gồm anti E (10,7% ) anti e (7,1%), loại kháng thể miễn dịch, chất IgG, kháng thể có ý nghĩa truyền máu, có khả gây tan máu muộn, giảm hiệu lực truyền máu Do truyền máu cần xác định nhóm Rh bệnh nhân cần truyền máu túi máu, cần lưu ý trường hợp phụ nữ Rh âm sinh Rh dương [7] 4.4.2 Kháng thể hệ Kell Phát anti K 10,7%, anti Kpb 10,7%, JSa 3,6%, JSb 10,7%, kháng thể miễn dịch chống K thường gặp, sau hệ ABO Rh Bản chất kháng thể IgG, kháng thể hệ Kell thường kết hợp với bổ thể nên gây tai biến truyền máu trầm trọng Kháng thể miễn dịch chống K có ý nghĩa truyền máu phản ứng mạnh với hồng cầu có kháng ngun K gây tan máu Ngồi kháng thể miễn dịch chống K nguyên nhân gây tan máu trẻ sơ sinh bất đồng mẹ 4.4.3 Kháng thể hệ Duffy Kháng thể ani Fya anti Fyb kháng thể miễn dịch thường IgG phát nghiệm pháp Coombs Trong việc phát hệ này, dùng kỹ thuật Coombs gián tiếp, khơng dùng enzym q trình xử lý hồng cầu, làm ức chế ngưng kết, enzyme phá hủy số kháng thể hệ Duffy [38] Kháng thể hệ Duffy xác định anti Fya anti Fyb chiếm tỷ lệ 3,6% 67 Cả hai kháng thể: anti Fya anti Fyb, anti Fya phổ biến hơn, kháng thể miễn dịch, chất IgG, lọt qua hàng rào thai, thường xuất sau truyền máu có thai nhiều lần Kháng thể hệ nhóm máu Duffy gây tan máu trẻ sơ sinh bất đồng nhóm máu mẹ hệ Duffy Kháng thể hệ Duffy thường gặp sau truyền máu không phù hợp hệ Duffy, chúng kháng thể có ý nghĩa lâm sàng, gây phản ứng tan máu muộn, thường nhẹ gây tai biến truyền máu nặng nề [7] 4.4.4 Kháng thể hệ MNSs Phát loại kháng thể: anti M (3,6%), anti N (3,6%) anti S (10,7%) Kháng thể anti M, anti N thường kháng thể loại IgM, ngưng kết lạnh, hoạt động tốt 4oC, số IgG, hoạt động tốt mơi trường albumin 37oC, có vai trò phản ứng tan máu muộn bệnh tán huyết trẻ sơ sinh Anti S Anti s thường kháng thể miễn dịch, chất IgG, sinh sau truyền máu có thai, kết hợp bổ thể gây tan máu muộn bệnh vàng da tan máu trẻ sơ sinh 4.4.5 Kháng thể hệ Lewis Xác định loại anti Lea (3,6%) Là kháng thể tự nhiên, chất IgM, hoạt động tốt nhiệt độ lạnh, có cịn hoạt động 370C, có khả kết định bổ thể Trong số trường hợp phát kỹ thuật kháng globuline người Phần lớn kháng thể kháng Lewis diện nồng độ thấp hoạt động tối ưu 40C khơng có vai trị quan trọng truyền máu Tuy nhiên có số kháng thể kháng Lea hoạt động 370C, trường hợp chúng gây số tai biến truyền máu, trầm trọng Dù trường hợp không phát dấu chứng lâm sàng 68 Hậu bất thuận hợp biểu hiện tượng hồng cầu bị tiêu hủy sớm việc truyền máu hoàn tồn khơng hiệu Trong thực hành truyền máu bệnh nhân có kháng thể kháng Lewis hoạt động 370C phải chọn túi máu Le (a-b-), để truyền Hệ thống Lewis có vai trị định việc loại bỏ ghép thận, đặc biệt mảnh ghép khơng hồn tồn thuận hợp, đời sống mảnh ghép bị rút ngắn rõ rệt Hiện nay, người ta tránh ghép quan Lewis dương cho người Lewis âm 4.4.6 Kháng thể hệ P Loại kháng thể phát anti P1 (3,6%) Kháng thể hoạt động nhiệt độ lạnh 40C - 220C Bản chất IgM Kháng thể chống gặp gây tai biến truyền máu phản ứng mạnh Kháng thể chống P1 gây phản ứng truyền máu gắn bổ thể Tuy nhiên nhiều trường hợp truyền máu P1 dương cho bệnh nhân có kháng thể chống P1 lạnh không phản ứng Kháng thể chống P, P1, Pk gặp có mặt gây tai biến truyền máu, cần phải ý, kháng thể gây tan máu trẻ sơ sinh Kháng thể chống P1 không gây tan máu trẻ sơ sinh bất đồng mẹ 4.4.7 Kháng thể hệ Lutheran Xác định loại kháng thể anti Lub chiếm 14,2% Có thể gây tai biến truyền máu Trong nghiên cứu chúng tơi khơng có xuất kháng thể hệ Kidd nghiên cứu khác 69 Tính đặc hiệu KTBT người cho máu, phát kháng thể thuộc hệ Rh, Kell, Duffy, Lewis, kháng thể có ý nghĩa lâm sàng Các nghiên cứu Đài Loan, Hàn Quốc, Mỹ ( với n > 10.000) cho thấy người cho máu có tỷ lệ định kháng thể có ý nghĩa truyền máu Tỷ lệ KTBT người cho máu thực nguy với bệnh nhân Đặc biệt bệnh nhân nhi sơ sinh máu bệnh nhân sơ sinh cô đặc, tỷ trọng máu cao người lớn Vì trẻ truyền huyết tương người có kháng thể bị nguy tan máu trường hợp bất đồng MDHC mẹ Nghiên cứu Shaoguan Trung Quốc, mục đích phân tích tần suất phân bố KTBT, sàng lọc 15033 kháng thể người hiến máu xét nghiệm tế bào, xét nghiệm polybrene globuline Các kết kháng thể bất thường tìm thấy 42 mẫu Tần số KTBT nữ cao nam giới (P