Đang tải... (xem toàn văn)
Độc hoạt tang ký sinh là bài thuốc cổ phương đã được sử dụng nhiều trên lâm sàng và có nhiều nghiên cứu chứng minh tác dụng của nó trong điều trị các bệnh lý về xương khớp 15, 19, 20, 65. Dây đau xương là một vị thuốc nam đã được sử dụng rộng rãi trong dân gian để điều trị đau xương1khớp 5, 9, 12. Ở nhiều nước trên thế giới, đã có nghiên cứu về tác dụng của Dây đau xương như kháng viêm, giảm đau, chống loét dạ dày... 23, 25, 36, 41, 57. Chế phẩm viên nang Độc hoạt ký sinh thang LĐ là sự kết hợp bài thuốc Độc hoạt tang ký sinh và Dây đau xương dùng để hỗ trợ điều trị các bệnh lý xương khớp trên lâm sàng, nhưng chưa có nghiên cứu ghi nhận khả năng kháng viêm, giảm đau thật sự của chế phẩm này.
I MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT III DANH MỤC BẢNG V DANH MỤC BIỂU ĐỒ VI MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CƠ CHẾ VIÊM, ĐAU 1.1.1 Cơ chế viêm 1.1.2 Cơ chế đau 1.2 CHẾ PHẨM ĐỘC HOẠT KÝ SINH THANG LĐ 1.2.1 Thành phần 1.2.2 Tác dụng dược lý theo YHCT 1.2.3 Tác dụng dược lý theo Y học đại 1.2.4 Một số cơng trình nghiên cứu khả kháng viêm, giảm đau 12 1.3 MƠ HÌNH GÂY VIÊM, ĐAU THỰC NGHIỆM 14 1.3.1 Mơ hình gây viêm 14 1.3.2 Mơ hình gây đau 19 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU 23 2.1.1 Chế phẩm nghiên cứu 23 2.1.2 Thuốc đối chứng 23 2.1.3 Hóa chất 23 2.1.4 Thiết bị, dụng cụ 23 2.1.5 Động vật thí nghiệm 24 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.2.1 Độc tính cấp 24 2.2.2 Đánh giá khả kháng viêm cấp mơ hình gây phù chân chuột với carrageenan 26 2.2.3 Đánh giá khả kháng viêm mạn mơ hình cấy viên cotton 28 2.2.4 Đánh giá khả giảm đau mơ hình gây đau quặn với acid acetic 29 II 2.2.5 2.3 Đánh giá khả giảm đau mơ hình mâm móng 30 XỬ LÝ SỐ LIỆU THỰC NGHIỆM 31 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 32 3.1 KẾT QUẢ 32 3.1.1 Độc tính cấp 32 3.1.2 Khả kháng viêm mô hình gây phù chân chuột với carrageenan 33 3.1.3 Khả kháng viêm mơ hình cấy viên cotton 37 3.1.4 Khả giảm đau mơ hình gây đau quặn với acid acetic 41 3.1.5 Khả giảm đau mơ hình mâm nóng 44 3.2 BÀN LUẬN 46 3.2.1 Độc tính cấp ĐHLĐ 46 3.2.2 Khả kháng viêm ĐHLĐ 46 3.2.3 Khả giảm đau ĐHLĐ 49 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53 4.1 KẾT LUẬN 53 4.1.1 Khả kháng viêm ĐHLĐ 53 4.1.2 Khả giảm đau ĐHLĐ 53 4.2 KIẾN NGHỊ 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO A PHỤ LỤC K PHỤ LỤC MÔ HÌNH GÂY PHÙ CHÂN CHUỘT VỚI CARRAGEENAN K PHỤ LỤC MƠ HÌNH CẤY VIÊN COTTON P PHỤ LỤC MƠ HÌNH GÂY ĐAU QUẶN VỚI AICID ACETIC U PHỤ LỤC MƠ HÌNH MÂM NĨNG X III DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT COX Cyclooxygenase Dmax Liều cao cho uống kim không làm chết chuột ĐHTKS Độc hoạt tang ký sinh ĐHLĐ Chế phẩm Độc hoạt ký sinh thang LĐ ĐH 450 Độc hoạt ký sinh thang LĐ liều 450mg/kg ĐH 560 Độc hoạt ký sinh thang LĐ liều 560mg/kg ĐH 750 Độc hoạt ký sinh thang LĐ liều 750mg/kg LD0 Liều tối đa không gây chết LD100 Liều tối đa gây chết 100 % chuột m Trọng lượng Melo Meloxicam liều mg/kg n Số lượng chuột lơ thí nghiệm NSAID Thuốc kháng viêm khơng steroid PG Prostaglandin STT Số thứ tự T0 Thời gian phản ứng với nhiệt chuột trước thí nghiệm T30 Thời gian phản ứng với nhiệt chuột sau uống thuốc 30 phút T90 Thời gian phản ứng với nhiệt chuột sau uống thuốc 90 phút TNF Tumor necrosis factor: Yếu tố hoại tử khối u V0 Thể tích chân chuột trước thí nghiệm V3 Thể tích chân chuột sau gây viêm V5 Thể tích chân chuột sau gây viêm V24 Thể tích chân chuột sau gây viêm 24 YHCT Y học cổ truyền IV V DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Kết khảo sát độc tính cấp đường uống 32 Bảng 3.2 Thể tích chân chuột 33 Bảng 3.3 Độ phù chân chuột 34 Bảng 3.4 Mức độ giảm phù chân chuột so với lô chứng 36 Bảng 3.5 Trọng lượng chuột 37 Bảng 3.6 Tác dụng ĐHLĐ trọng lượng u hạt (sau sấy khô) 38 Bảng 3.7 Trọng lượng chuột trước sau thí nghiệm 40 Bảng 3.8 Số đau quặn sau tiêm acid acetic 41 Bảng 3.9 Tác dụng ĐHLĐ lên thời gian phản ứng với nhiệt 44 VI DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Tỷ lệ (%) độ phù chân chuột sau tiêm carrageenan 35 Biểu đồ 3.2 Trọng lượng u hạt sau sấy khô 39 Biểu đồ 3.3 Số đau quặn sau tiêm acid acetic 42 Biểu đồ 3.4 Thời gian phản ứng với nhiệt 45 MỞ ĐẦU Ở nước ta nay, bệnh xương khớp ngày chiếm tỉ lệ đáng kể tổng số bệnh Theo thống kê Bộ Y Tế cấu bệnh tật tử vong toàn quốc năm 2014, bệnh hệ xương khớp mô liên kết chiếm tỉ lệ mắc 3,85 %, tỉ lệ chết 0,24 %; bảng thống kê bệnh có tỉ lệ mắc cao nhất, bệnh khác cột sống đứng hàng thứ với tần suất 181 ca/100000 dân [4] Một nguyên tắc quan trọng điều trị bệnh lý xương khớp điều trị triệu chứng, giảm viêm, giảm đau cho bệnh nhân Những thuốc kháng viêm, giảm đau dùng phổ biến nay, đơn cử kháng viêm khơng steroid (NSAID) nhiều có tác dụng phụ khơng mong muốn nhiều quan, đặc biệt đường tiêu hóa, gan, thận da [3], [42] Ở bệnh nhân từ 60 tuổi trở lên, 1/10 bệnh nhân nhập viện tác dụng phụ không mong muốn thuốc, NSAID thuốc liên quan hàng đầu với trường hợp [61] Mặc dù loại thuốc kháng viêm giảm đau có sẵn đa dạng, tác dụng phụ chúng hiệu số thuốc số trường hợp đòi hỏi phải tìm kiếm loại thuốc kháng viêm, giảm đau liên tục Như vậy, đánh giá khả kháng viêm, giảm đau chế phẩm có nguồn gốc thực vật đóng vai trị quan trọng để tìm loại thuốc kháng viêm, giảm đau có hiệu độc hại [48] Theo tinh thần đó, thuốc Y học cổ truyền (YHCT) ứng dụng điều trị bệnh xương khớp ngày nhiều với mong muốn đem lại hiệu điều trị hạn chế tác dụng không mong muốn Độc hoạt tang ký sinh thuốc cổ phương sử dụng nhiều lâm sàng có nhiều nghiên cứu chứng minh tác dụng điều trị bệnh lý xương khớp [15], [19], [20], [65] Dây đau xương vị thuốc nam sử dụng rộng rãi dân gian để điều trị đau xương khớp [5], [9], [12] Ở nhiều nước giới, có nghiên cứu tác dụng Dây đau xương kháng viêm, giảm đau, chống loét dày… [23], [25], [36], [41], [57] Chế phẩm viên nang Độc hoạt ký sinh thang LĐ kết hợp thuốc Độc hoạt tang ký sinh Dây đau xương dùng để hỗ trợ điều trị bệnh lý xương khớp lâm sàng, chưa có nghiên cứu ghi nhận khả kháng viêm, giảm đau thật chế phẩm Nhằm cung cấp sở khoa học cho chế phẩm để tăng cường sử dụng chế phẩm nói riêng sử dụng nguồn thuốc nam nói chung điều trị bệnh lý xương khớp YHCT, tiến hành nghiên cứu, “Đánh giá khả kháng viêm, giảm đau chế phẩm Độc hoạt ký sinh thang LĐ chuột nhắt trắng”, trả lời cho câu hỏi “Chế phẩm Độc hoạt ký sinh thang LĐ có khả kháng viêm, giảm đau không?” MỤC TIÊU TỔNG QUÁT Đánh giá khả kháng viêm, giảm đau chế phẩm Độc hoạt ký sinh thang LĐ chuột nhắt trắng MỤC TIÊU CỤ THỂ Đánh giá khả kháng viêm chế phẩm Độc hoạt ký sinh thang LĐ chuột nhắt trắng mơ hình gây phù chân với carrageenan mơ hình tạo u hạt viên cotton tẩm carrageenan Đánh giá khả giảm đau chế phẩm Độc hoạt ký sinh thang LĐ chuột nhắt trắng mơ hình gây đau quặn với acid acetic mơ hình gây đau nhiệt (mâm nóng) CHƯƠNG 1.1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU CƠ CHẾ VIÊM, ĐAU 1.1.1 Cơ chế viêm Viêm phản ứng hệ miễn dịch nhiễm trùng, tổn thương liên quan đến bệnh viêm khớp, ung thư, xơ vữa động mạch, đột quỵ, động kinh, bệnh thối hóa thần kinh (ví dụ: Bệnh đa xơ cứng, bệnh Alzheimer, bệnh Parkinson)… [18] Các nguyên nhân gây viêm vi khuẩn, yếu tố vật lý, yếu tố hóa học, yếu tố sinh học; hoại tử tổ chức nghẽn mạch, xuất huyết, viêm tắc động mạch, miễn dịch… gây tổn thương tế bào làm cho tế bào mast phóng hạt, hoạt hóa hệ thống protein huyết tương có phóng thích thành phần từ tế bào bị tổn thương [9] Các tế bào tham gia trình viêm là: Tế bào mast phóng hạt; bạch cầu trung tính, bạch cầu đơn nhân giữ vai trị thực bào; bạch cầu toan giữ vai trò kiềm chế phản ứng viêm Ngồi cịn có, bạch cầu kiềm giữ vai trò tế bào mast, tiểu cầu giữ vai trò cầm máu Các tế bào tiểu cầu thực chức với hỗ trợ hệ thống protein huyết tương là: Hệ thống bổ thể hoạt hóa, hỗ trợ viêm miễn dịch, đồng thời giữ vai trò quan trọng phá hủy tế bào (vi khuẩn, virus…); hệ thống đông máu giữ vai trò bao vây vi khuẩn tác động qua lại với tiểu cầu chống chảy máu; hệ thống kinin giúp kiểm sốt tính thấm thành mạch Globulin miễn dịch thành phần thứ tư tham gia vào trình viêm [9] Dưới tác động nguyên nhân gây viêm, tế bào mast phóng thích chất có sẵn bao gồm histamin, chất hóa hướng động bạch cầu trung tính, chất hóa hướng động bạch cầu toan, đồng thời có phóng thích serotonin từ tiểu cầu Tế bào mast tổng hợp leucotrien prostaglandin (PG) tham gia vào q trình viêm Có loại PG (E, A, F, B) tùy theo cấu trúc, PG thuộc nhóm E E1 E2 gây tăng tính thấm thành mạch, co thắt trơn dãn tiểu tĩnh mạch sau mao mạch Tuy nhiên, có vài loại PG ức chế viêm, làm giảm phóng thích histamin từ tế bào mast giảm phóng thích enzym từ lysosom bạch cầu trung tính [9] Hai đồng phân cyclooxygenase (COX), COX-1 COX-2, xác định COX-1 cho chịu trách nhiệm sản xuất PG trung gian cho chức ‘vệ sinh’, cần thiết cho hoạt động sinh lý bình thường thể Trong đó, COX-2 cảm ứng biểu tế bào miễn dịch Acid arachidonic, acid béo đa không bão hòa, nhờ COX biến thành PG tiền viêm (chủ yếu PGE2 ) kích hoạt sản xuất chemokin, cytokin tiền viêm khác Do đó, chiến lược điều trị viêm có liên quan đến ức chế COX-2, điều bị thách thức phát COX-2 dẫn xuất chất chuyển hóa oxy hóa acid arachidonic ω-3 đại thực bào kích hoạt Như vậy, COX-2 có vai trị kép khởi đầu giải trình viêm cách tạo hóa chất trung gian tiền viêm kháng viêm có nguồn gốc từ acid arachidonic ω-6 ω-3 [18] 1.1.2 Cơ chế đau Bước tiến trình đau phức tạp kích thích tác nhân độc hại lên dây thần kinh đặc biệt có thụ thể cảm nhận đau Các thụ thể cảm nhận đau có mặt hầu hết quan mô thể, kích hoạt tác nhân học (sờ chạm áp lực), nhiệt (nóng lạnh), hóa chất (nội sinh ngoại sinh) Các tác nhân độc hại L Lô ĐH 450 STT V0 V3 V5 V24 0.61 1.05 0.97 0.67 0.4 0.72 0.69 0.44 0.52 0.81 0.77 0.56 0.57 1.04 0.97 0.64 0.55 0.98 0.89 0.6 0.47 0.81 0.7 0.51 0.45 0.86 0.73 0.48 0.42 0.64 0.63 0.45 Lô ĐH 560 Stt V0 V3 V5 V24 0.49 0.8 0.63 0.54 0.5 0.99 0.78 0.52 0.56 0.88 0.69 0.62 0.43 0.66 0.56 0.48 0.56 0.99 0.77 0.59 0.48 0.91 0.79 0.51 0.46 0.79 0.59 0.52 0.37 0.63 0.44 0.4 M Lô ĐH 750 STT V0 V3 V5 V24 0.49 0.87 0.62 0.52 0.56 0.96 0.7 0.59 0.56 1.02 0.72 0.63 0.5 0.93 0.66 0.54 0.41 0.73 0.53 0.45 0.4 0.61 0.52 0.42 0.6 0.91 0.8 0.62 0.47 0.78 0.62 0.52 Trọng lượng chuột (g) Lơ chứng STT m trước thí nghiệm m sau 24 20 20.5 20.6 21.2 21.3 21.7 22.5 22.9 21.6 22.1 23.9 24.5 21.6 22.9 22.2 22.7 N Lô Melo STT m trước thí nghiệm m sau 24 20.1 20.9 22.3 22.8 21.7 22.5 20.7 21.6 22.8 23.7 23.1 23.8 22.4 23.1 21.2 22.5 Lơ ĐH 450 STT m trước thí nghiệm m sau 24 20 20.5 23.4 24 20.2 20.9 22.3 22.8 21.8 23.2 20.7 21.3 22.5 23.1 21.6 22.8 O Lô ĐH 560 STT m trước thí nghiệm m sau 24 21.1 21.9 24 24.4 20.3 20.8 22.4 23.1 21.7 22.4 20.4 21.5 20.6 21.7 22.5 23.4 Lô ĐH 750 STT m trước thí nghiệm m sau 24 23.2 23.9 20.2 21.1 20.2 20.9 22.3 22.7 21.5 22.4 22.1 22.8 23.6 24 22.3 23 P Phụ lục Mơ hình cấy viên cotton Lô chứng STT m viên cotton m u hạt khô 10 23.4 10 23 10 26.6 10 24.2 10 24 10 21 10 21.1 10 22.4 STT m viên cotton m u hạt khô 10 15.2 10 15.1 10 16.9 10 17.5 10 17.8 10 14.9 10 16.8 10 15 Lô Melo Q Lô ĐH 450 STT m viên cotton m u hạt khô 10 15.6 10 20.5 10 18.2 10 18.1 10 18.2 10 24.5 10 20.7 10 18.1 Lô ĐH 560 STT m viên cotton m u hạt khô 10 17.8 10 17.7 10 15.7 10 14.7 10 19.6 10 17.8 10 15.6 10 19.4 R Lô ĐH 750 STT m viên cotton m u hạt khô 10 15.5 10 19.3 10 18.9 10 16.2 10 19.3 10 14.5 10 15 10 17.7 Trọng lượng chuột (g) ngày ngày Lô chứng STT m ngày m ngày 21.5 24.7 20.3 25.2 21.3 24.3 21.4 25 20.1 24.5 22.1 28.7 21.4 27.4 22.3 27.8 S Lô Melo STT m ngày m ngày 20.2 23.5 21.1 23.1 20 22.9 22.3 25.2 21.2 23.7 20.5 25.3 20.9 23.1 21.4 24.7 Lô ĐH 450 STT m ngày m ngày 22.5 25.2 21.8 25.3 21.2 23.7 21 25.4 20.6 24.4 21.3 23.9 21.8 23.8 22.3 25.6 T Lô ĐH 560 STT m ngày m ngày 20.6 23.4 22 25.1 22.3 25 22.9 26.6 21.1 24.8 20.7 23.2 20.4 22.3 20.4 23.5 Lô ĐH 750 STT m ngày m ngày 20.1 23.7 20.6 25.4 21.3 23.6 20.7 23.3 22 25.2 21.6 23.5 21.7 23.8 20.7 23.1 U Phụ lục Mơ hình gây đau quặn với aicid acetic Số đau quặn đau chuột Lô chứng STT 0-5 phút >5-10 >10-15 >15-20 Tổng 20 phút phút phút phút 21 15 10 53 23 19 17 67 25 18 10 62 19 15 12 52 10 18 19 14 61 26 22 17 72 25 20 19 73 11 22 17 14 64 17 15 11 49 10 12 18 16 12 58 >5-10 >10-15 >15-20 Tổng 20 phút phút phút phút Lô Melo STT 0-5 phút 15 2 18 23 11 19 12 26 V 19 11 10 22 9 21 10 12 27 >5-10 >10-15 >15-20 Tổng 20 phút phút phút phút Lô ĐH 450 STT 0-5 phút 17 15 10 51 20 18 13 56 21 17 12 57 11 25 19 11 66 19 17 14 58 6 19 16 12 53 23 20 15 67 10 22 16 10 58 9 18 17 14 58 10 19 16 52 >5-10 >10-15 >15-20 Tổng 20 phút phút phút phút Lô ĐH 560 STT 0-5 phút 12 13 32 11 26 3 14 32 W 4 17 11 40 5 15 11 34 13 32 10 26 8 16 12 40 10 21 10 13 10 30 >5-10 >10-15 >15-20 Tổng 20 phút phút phút phút Lô ĐH 750 STT 0-5 phút 11 22 12 27 10 22 15 32 11 23 12 20 17 15 39 10 24 10 23 10 12 27 X Phụ lục Mơ hình mâm nóng Thời gian phản ứng với nhiệt chuột Lô Melo STT T0 T30 T90 13.5 24.5 14.5 12.6 23.8 13.7 14.2 25.1 17.8 15.9 21.6 26 14.6 22.9 18.1 12.6 18.7 16.2 10.2 20.1 15.9 20.7 27.1 20.1 12 25.2 19.1 10 20.1 26.2 20.7 Y Lô ĐH 450 STT T0 T30 T90 15 13.3 13.4 11.1 12.3 15.8 14.7 16.2 16.1 21.5 20.9 19.1 11.2 12.1 10 12.1 13.7 13 18.5 18.7 17.9 12.3 14.4 13.9 19.4 19.5 19.6 10 14.1 14.9 13.5 Lô ĐH 560 STT T0 T30 T90 19 24.7 16.3 14.2 21 18.7 15.9 22.3 17.8 16.4 18.1 18.8 14.6 22.6 14.9 10.1 17.8 11.2 24.5 26.1 20.5 11.6 18.5 11.8 10.2 17 12.4 Z 10 19.2 18.6 18.7 Lô ĐH 750 STT T0 T30 T90 19 26 22.4 13.5 21.3 17.3 11.9 18.7 13.5 14.9 20.1 16.5 10.5 25.1 18.6 20.1 27.1 19.7 21.4 26.4 18.9 13.3 22.3 15.6 12 19.6 13.1 10 15.6 24.6 20.3 ... hoạt tang ký sinh ĐHLĐ Chế phẩm Độc hoạt ký sinh thang LĐ ĐH 450 Độc hoạt ký sinh thang LĐ liều 450mg/kg ĐH 560 Độc hoạt ký sinh thang LĐ liều 560mg/kg ĐH 750 Độc hoạt ký sinh thang LĐ liều 750mg/kg... YHCT Chế phẩm Độc hoạt ký sinh thang LĐ (ĐHLĐ) có thành phần gồm thuốc Độc hoạt tang ký sinh cổ phương Dây đau xương Bài thuốc Độc hoạt tang ký sinh Độc hoạt, Tang ký sinh khu phong, tán hàn,... khả kháng viêm, giảm đau chế phẩm Độc hoạt ký sinh thang LĐ chuột nhắt trắng MỤC TIÊU CỤ THỂ Đánh giá khả kháng viêm chế phẩm Độc hoạt ký sinh thang LĐ chuột nhắt trắng mơ hình gây phù chân với