Nghiên cứu kỹ thuật tái sinh phôi soma cây tiêu

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHIÃ VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc -oOo Tp HCM, ngày tháng năm 2007 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: BÙI TUẤN TÚ Giới tính : Nam Ngày, tháng, năm sinh : 17/05/1981 Nơi sinh : QUẢNG NAM Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Khoá (Năm trúng tuyển) : 2005 1- TÊN ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT TÁI SINH PHÔI SOMA CÂY TIÊU (Piper Nigrum L.) 2- NHIỆM VỤ LUẬN VĂN Nghiên cứu phát sinh tế bào soma tiêu Nghiên cứu tăng sinh tế bào soma môi trường nuôi cấy bán rắn môi trường lỏng Nghiên cứu tái sinh tế bào soma Nghiên cứu tái sinh tạo phôi soma Nghiên cứu nhân chồi tạo rễ tiêu 3- NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : 11/2006 4- NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ : 11/2007 5- HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Ghi đầy đủ học hàm, học vị ): PGS TS TRẦN VĂN MINH Nội dung đề cương Luận văn thạc sĩ Hội Đồng Chuyên Ngành thông qua CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Họ tên chữ ký) CHỦ NHIỆM BỘ MÔN QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH (Họ tên chữ ký) PGS TS Trần Văn Minh i LỜI CẢM ƠN Luận văn hoàn thành theo chương trình đào tạo thạc só chuyên ngành Công nghệ sinh học hệ qui, ĐH Kỹ Thuật - Đại Học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh Để hoàn thành tốt khoá luận tốt nghiệp cao học xin chân thành cảm ơn: Ban giám hiệu trường ĐH Kỹ Thuật - Đại Học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh Phòng đào tạo Sau Đại Học, thuộc ĐH Kỹ Thuật - Đại Học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh Bộ môn CNSH, q thầy cô tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện suốt trình học tập Ban lãnh đạo Viện Sinh Học Nhiệt Đới Thuộc Viện Khoa Học Và Công Nghệ Việt Nam Ban phụ trách phòng thí nghiệm trọng điểm quốc gia công nghệ tế bào thực vật thuộc viện sinh học nhiệt đới Chân thành cảm ơn PGS TS Trần Văn Minh cô Bùi Thị Tường Thu tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi trực tiếp hướng dẫn cho suốt trình thực khoá luận tốt nghiệp Chân thành cảm ơn toàn thể cán bộ, nhân viên phòng thí nghiệm trọng điểm quốc gia công nghệ tế bào thực vật thuộc viện sinh học nhiệt đới giúp đỡ tạo điều kiện cho nghiên cứu hoàn thành khoá luận tốt nghiệp Xin chân thành bày tỏ lòng trân trọng biết ơn ii Tóm tắt luận văn thạc só Đề tài: Nghiên cứu kỹ thuật tái sinh phôi soma tiêu – Piper Nigrum L invitro tiến hành phòng thí nghiệm trọng điểm quốc gia công nghệ tế bào thực vật Viện sinh học nhiệt đới từ thời gian tháng 11 năm 2006 đến tháng 10 năm 2007 Các thí nghiệm bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, lặp lại lần Kết cho thấy: - Nuôi cấy phát sinh tế bào soma: môi trường khoáng SH có bổ sung 3%(w/v) 2,4-D 1mgl-1 tạo tế bào soma với khối lượng cao đồng thời tế bào có khả tái sinh cao - Để trì tế bào soma môi trường lỏng môi trường bán rắn, với mốc khối lượng tế bào soma ban đầu 300mg; 500mg; 1000mg, Sau tuần theo dõi ứng với môi trường bán rắn, thí nghiệm có khối lượng tế bào soma ban đầu 1000mg đạt hệ số tăng sinh khối lượng cao Đối với môi trường lỏng thí nghiệm có khối lượng tế bào soma ban đầu 300mg đạt hệ số tăng sinh khối lượng cao sau tuần - Trong thí nghiệm tái sinh tế bào soma thành hoàn chỉnh ta sử dụng môi trường có khoáng MS có bổ sung Succrose 3%(w/v), CW 10%(v/v) chất kích thích điều hoà sinh trưởng thực vật bao gồm IBA 0.1 mgl-1 , KIN mgl-1 nồng độ BA bổ sung 5mgl-1 có tỷ lệ tái sinh chồi tiêu cao - Thí nghiệm tái sinh tạo phôi soma từ tế bào soma, sử dụng môi trường có thành phần khoáng MS bổ sung Sucrose 3% (w/v), CW 20%(v/v), chất điều hoà sinh trưởng thực vật bao gồm BA 0.2 mgl-1 TDZ có nồng độ 0.5mgl-1 đạt tỷ lệ tạo phôi soma cao - Thí nghiệm nhân chồi phôi, sử dụng môi trường có khoáng MS bổ sung Succrose 3% (w/v), BA có 0.1 mgl-1 cho khả nhân chồi cao iii - Trong thí nghiệm tạo rễ cho tiêu việc sử dụng môi trường có khoáng MS có bổ sung 3% (w/v) đường 0.1 mgl-1 NAA tạo rễ cho tiêu tốt SUMMARY The thesis, Study the technique to regenerate somatic embryos in Black pepper ( Piper Nigrum L.) invitro is implemented at the Institue of Tropical Biology from Nov 2006 to Oct 2007 Experiments is set up in CRD test with three replications, the results show that: Induction of somatic cells: Basic SH mineral medium is provided with 3% (w/v) Succrose and 1mg/l 2,4-D gave t the highest possible capacity of induction somatic cells To maintain the somatic cells on the agar medium, the innital weight of somatic cells is 500mg/50ml gave the maximum of increasing biomass index And to maintain the somatic cells on the liquid medium, the initial weight of somatic cells is 300mg/ 50ml gave the maximum of increasing biomass index The regeneration of somatic cells, we used the medium with the basal MS minerals medium with 3% (w/v) Succrose, 10 % (v/v) CW, 0.1 mg/l IBA, 3mg/l Kin and mg/l BA will give the best ratio of somatic cells regeneration The embryogenesis of somatic cells is implemented in the basic MS mineral medium, provided with 3% (w/v) Succrose, 20% (v/v) CW, 0.2 mg/l BA and 0.5 mg/l TDZ gave the best ratio of somatic embryos ( global embryos) regeneration capacity To multiply the number of black pepper buds from one bud, we used the basic MS mineral medium with 3% (w/v) Succrose and 0.1 mg/l BA And to obtain the strong buds you must increase the concentration of BA up to 0.5 mg/l iv Finally, to create the root of the black pepper plants, we used the basic MS mineral medium with 3% (w/v) sucrose and 0.1 mgl/l NAA v MỤC LỤC CHƯƠNG1 Error! Bookmark not defined ĐẶT VẤN ĐỀ Error! Bookmark not defined 1.1 Đặt vấn đề Error! Bookmark not defined 1.2 Muïc tiêu mục đích đề tài Error! Bookmark not defined 1.2.1 Mục đích đề tài Error! Bookmark not defined 1.2.2 Muïc tiêu nghiên cứu Error! Bookmark not defined 1.3 Giới hạn đề tài Error! Bookmark not defined 1.4 Noäi dung đề tài Error! Bookmark not defined CHƯƠNG Error! Bookmark not defined TOÅNG QUAN VỀ CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU Error! Bookmark not defined 2.1 Tổng quan nuôi cấy mô tế bào thực vật Error! Bookmark not defined 2.1.1 Giới thieäu Error! Bookmark not defined 2.1.2 Tầm quan trọng phương pháp nuôi cấy mô – tế bào thực vật Error! Bookmark not defined 2.1.2.1 Về mặt lý luận sinh học Error! Bookmark not defined 2.1.2.2 Về mặt thực tiễn sản xuất Error! Bookmark not defined 2.2 Nuôi cấy mô tiêu Error! Bookmark not defined 2.2.1 Phân loại học thực vật tiêu Error! Bookmark not defined 2.2.2 Đặc điểm thực vật học tiêu Error! Bookmark not defined 2.2.2.1 Bộ rễ tiêu: Error! Bookmark not defined 2.2.2.2 Thân tiêu Error! Bookmark not defined 2.2.2.3 Cành tiêu có loại Error! Bookmark not defined 2.2.2.4 Laù tieâu: Error! Bookmark not defined 2.2.2.5 Hoa hạt tiêu: Error! Bookmark not defined 2.2.3 Đặc điểm phân bố Error! Bookmark not defined 2.2.4 Giá trị kinh tế Error! Bookmark not defined 2.2.5 Nhân giống Error! Bookmark not defined 2.2.5.1 Các phương pháp nhân giống truyền thống Error! Bookmark not defined 2.2.5.2 Kỹ thuật giâm cành tiêu Error! Bookmark not defined 2.3 Toång quan pp vi nhân giống qua nuôi cấy phát sinh phoâi soma .Error! Bookmark not defined 2.3.1 Phoâi soma Error! Bookmark not defined 2.3.2 Sự hình thành phôi soma Error! Bookmark not defined 2.3.3 Kỹ thuật nuôi cấy phôi: Error! Bookmark not defined 2.3.3.1 Khử trùng mẫu: Error! Bookmark not defined 2.3.3.2 Tách mẫu Error! Bookmark not defined 2.3.4 Môi trường nuôi cấy phôi Error! Bookmark not defined 2.3.4.1 Các chất vô Error! Bookmark not defined vi 2.3.4.2 Nguoàn cacbon Error! Bookmark not defined 2.3.4.3 Nguoàn nitrogen Error! Bookmark not defined 2.3.4.4 Các chất hữu khác dịch chiết Error! Bookmark not defined 2.3.4.5 Chất sinh trưởng Error! Bookmark not defined 2.3.4.6 Agar Error! Bookmark not defined 2.3.4.7 Than hoạt tính: Error! Bookmark not defined 2.3.4.8 pH Error! Bookmark not defined 2.3.5 Điều kiện nuôi cấy phôi Error! Bookmark not defined 2.3.5.1 Aùnh saùng Error! Bookmark not defined 2.3.5.2 Nhiệt độ: Error! Bookmark not defined 2.3.6 Duy trì trình phát sinh phôi đồng nhất:Error! Bookmark not defined 2.3.7 Tách tế bào phôi Error! Bookmark not defined 2.3.8 Kiểm tra trao đổi khí: Error! Bookmark not defined 2.3.9 Kiểm tra sinh trưởng phôi liên tục áp suất thẩm thấu:Error! Bookmark not defined 2.3.10 Hệ thống nhân sinh khối tế bào soma Error! Bookmark not defined 2.3.10.1 Nhân sinh khối tế bào phôi: Error! Bookmark not defined 2.3.10.2 Đặc tính công nghệ nhân sinh khối phôi soma Error! Bookmark not defined 2.3.11 Tái sinh hoàn chỉnh từ phôi soma Error! Bookmark not defined 2.3.11.1 Auxin Error! Bookmark not defined 2.3.11.2 Làm khô: Error! Bookmark not defined 2.3.12 Chất kích thích sinh trưởng sử dụng nuôi cấy mô tế bào thực vậtError! Bookmark not defined 2.3.13 Auxin Error! Bookmark not defined 2.3.14 Cytokinin Error! Bookmark not defined 2.4 Các nghiên cứu nước Error! Bookmark not defined 2.4.1 Các nghiên cứu nước: Error! Bookmark not defined 2.4.2 Các nghiên cứu nước: Error! Bookmark not defined CHƯƠNG Error! Bookmark not defined KẾT QUẢ THẢO LUẬN Error! Bookmark not defined 4.1 Thí nghiệm Nghiên cứu phát sinh tế bào soma từ đọt thân tiêuError! Bookmark not defined 4.2 Thí nghiệm Nghiên cứu nuôi cấy tăng sinh tế bào soma môi trường bán rắn: Error! Bookmark not defined 4.3 Thí nghiệm 3: Nghiên cứu nuôi cấy tăng sinh tế bào soma môi trường lỏng Error! Bookmark not defined 4.4 Thí nghiệm 4: Nghiên cứu trình sinh trưởng phát triển tế bào soma môi trường lỏng Error! Bookmark not defined 4.5 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu trình phát sinh hình thái phôi soma: Error! Bookmark not defined vii 4.6 Thí nghiệm 6: Tái sinh tế bào soma Error! Bookmark not defined 4.7 Thí nghiệm 7: Tái sinh tạo thành phôi soma từ tế bào somaError! Bookmark not defined 4.8 Thí nghiệm Nhân chồi phôi Error! Bookmark not defined 4.9 Thí nghiệm 9: Khả tạo rễ tiêu in vitroError! Bookmark not defined CHƯƠNG Error! Bookmark not defined KẾT LUẬN ĐỀ NGHỊ Error! Bookmark not defined 5.1 Kết luận Error! Bookmark not defined 5.2 Đề nghị: Error! Bookmark not defined viii Taøi liệu tham khảo ix LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên: Bùi Tuấn Tú Ngày tháng năm sinh : 17/ 05/ 1981 Nơi sinh: Quảng Nam Địa liên lạc: số 345 Phan Chu Trinh, TP Tam Kỳ, Tỉnh Quảng Nam Điện thoại: 0510851464 ĐT DD: 0985 007 464 Email: buituantu@yahoo.com QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO Thời gian Tên trường 2000 – 2004 Đại học Văn Lang TP HCM 2005 – 2007 Đại học Kỹ thuật – Đại học QG TP HCM Công trình nghiên cứu: x Chuyên ngành CNSH Hệ đào tạo CQ CNSH CQ Bằng cấp Kỹ sư Thạc só - 78 - 4.8 Thí nghiệm Nhân chồi phôi Sau tái sinh tiêu trực tiếp từ tế bào soma hay thông qua tái sinh thông qua đường phôi soma Ta tiến hành nhân chồi phôi để thu số lượng chồi cao hơn.Trong thí nghiệm ta sử dụng môi trường khoáng MS có bổ sung BA có nồng độ từ 0.1 – 1mg/l Sau 30 ngày nuôi cấy, tiến hành kiểm tra khả phát sinh chồi nghiệm thức, ta có kết sau: Nghiệm STT thức Số lượng chồi trung bình/ Thành phần môi trường từ chồi ban đầu 8.1 TP8 + BA 0.1mg/l 8.33a 8.2 TP8 + BA 0.3mgl- 6.67b 8.3 TP8 + BA 0.5mgl- 6.33b 8.4 TP8 + BA 1mgl- 5.67c CV% 13.52% LSD 0.05 TP8 = Khoaùng MS + Succrose 3% (w/v) + CW 20% (v/v) Ghi chú: CV (Coefficient of Variation): Hệ số biến ñoäng (%) LSD =Least Significant Difference HV Bùi Tuấn Tú Luận văn Thạc sĩ - 79 - (1) :những giá trị cột có ký tự giống khác ý nghóa mức xác suất p=0.05 trắc nghiệm LSD Từ số liệu với quan sát hình thái tiêu ta có số nhận xét sau Trong thí nghiệm ứng vơi nghiệm thức 8.1 khả nhân chồi phôi cao – ứng với số lượng chồi tạo thành từ chồi ban đầu Bên cạnh đó, mặt hình thái chồi tiêu tạo thí nghiệm ứng với nghiệm thức 8.3 có cứng cáp mặt hình thái (lá tiêu xanh đậm thân tiêu mọc thẳng) Còn nghiệm thức khác, mặt hình thái tiêu trắng thân tiêu mọc cách vô tổ chức (có thân mọc trườn mặt thạch) Từ nhận xét trên, ta đề giải pháp để nhân chồi tiêu với số lượng lớn thân tiêu khoẻ Đó kết hợp hai trình tức ban đầu ta nhân chồi môi trường nhân chồi phôi ứng với môi trường nhân chồi nghiệm thức 8.1, sau ta lại chuyển chồi non sang môi trường giúp khoẻ ứng với môi trường nghiệm thức 8.3 HV Bùi Tuấn Tú Luận văn Thạc sĩ - 80 - Hình 9.1 Các chồi tiêu tạo thành nghiệm thức 9.1 Hình 9.2 Các chồi tiêu tạo thành nghiệm thức 9.3 HV Bùi Tuấn Tú Luận văn Thạc sĩ - 81 - 4.9 Thí nghiệm 9: Khả tạo rễ tiêu in vitro Để tăng khả sống sót giai đoạn hoá, tiêu phải có khả tự thu nhận lấy chất dinh dưỡng môi trường nuôi cấy bầu đất thông qua rễ Do thí nghiệm tiến hành để khảo sát khả tạo rễ tiêu tác động chất kích thích sinh trưởng IBA, NAA Qua 30 ngày nuôi cấy, ta thu nhận kết sau: Thành phần môi Số lượng rễ Chiều dài trung bình trường trung bình (cm) 10.1 TP10 (đối chứng) 0c 10.2 TP10 + 0.1 mg/l IBA 1.33b 6.4 10.3 TP10 + 0.1 mg/l NAA 8.33 a 2.5 22.36% 9.13% Nghiệm thức CV% TP10 = Khoáng MS + 30gl-1 Succrose Ghi chú: CV (Coefficient of Variation): Hệ số biến động (%) LSD =Least Significant Difference (1) :những giá trị cột có ký tự giống khác ý nghóa mức xác suất p=0.05 trắc nghiệm LSD Từ bảng kết ta nhận thấy môi trường khoáng MS có bổ sung NAA với nồng độ 0.1 mg/l ứng với nghiệm thức cho khả tạo rễ tiêu mạnh với số lượng rễ trung bình 8.33 cm chiều dài trung bình rễ 2.5 cm nghiệm thức lại ứng với môi trường có bổ sung IBA có nồng HV Bùi Tuấn Tú Luận văn Thạc sĩ - 82 - độ 0.1mg/l hệ rễ phát triển có số lượng chiều dài rễ cao nghiệm thức đối chứng (không có bổ sung auxin) không tạo rễ cho tiêu Ngoài ra, hệ rễ tạo thành môi trường có chứa NAA, có chứa nhiều rễ xung quanh thân (hình 10.3), điều giúp cho việc hấp thu chất dinh dưỡng tốt giúp đứng vững gieo vườn ươm Hình10.1 Phát sinh rễ môi trường đối chứng HV Bùi Tuấn Tú Luận văn Thạc sĩ - 83 - Hình 10.2 Phát sinh rễ tiêu môi trường có chứa IBA 0.1mg/l HV Bùi Tuấn Tú Luận văn Thạc sĩ - 84 - Hình 10.3 Phát sinh rễ tiêu môi trường có chứa NAA 0.1mg/l CHƯƠNG KẾT LUẬN ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Qua công trình xây dựng qui trình nuôi cấy tái sinh thành tiêu từ tế bào soma tái sinh thành phôi soma từ tế bào soma tiêu (Piper Nigrum L.) in vitro phục vụ cho công tác nhân giống tiêu Các phần việc công trình bao gồm: nuôi cấy phát sinh tế bào soma trì tế bào soma; phát sinh dịch huyền phù trì dịch huyền phù; nuôi cấy tái sinh tế bào soma thành hoàn chỉnh; nuôi tái sinh tạo phôi soma từ tế bào soma; nhân chồi phôi; tạo rễ - Trong thí nghiệm nuôi cấy phát sinh tế bào soma: sử dụng môi trường nuôi cấy là: khoáng cớ SH có bổ sung đường Succrose 3% - 4.5% (w/v) sử dụng chất điều hoà sinh trưởng thực vật 2,4-D có nồng độ từ 0.5– 2mg/l, ứng với nồng độ đường 3%(w/v) nồng độ 2,4-D 1mg/l tạo tế bào soma tốt - Trong thí nghiệm để trì tế bào soma môi trường lỏng môi trường bán rắn, khảo sát nuôi tế bào soma môi trường có thành phần là: Khoáng SH, Succrose 3%, 2,4-D 1mg/l , mốc khối lượng tế bào soma ban đầu 300mg; 500mg; 1000mg, Sau tuần theo dõi ứng với môi trường bán rắn, thí nghiệm có khối lượng tế bào soma ban đầu 1000mg đạt hệ số tăng sinh khối lượng cao Đối với môi trường lỏng thí nghiệm có khối lượng tế bào soma ban đầu 300mg đạt hệ số tăng sinh khối lượng cao sau tuần Bên cạnh theo dõi tăng sinh khối lượng HV Bùi Tuấn Tú Luận văn Thạc sĩ - 85 - tế bào soma môi trường lỏng, theo dõi trình sinh trưởng phát triển tế bào soma, có số nhận xét rằng: “Chu kỳ phát triển tế bào soma tiêu phát triển thông qua pha, bao gồm tiền pha, pha tăng trưởng, pha cân pha suy vong – chu kỳ sinh trưởng thời điểm kết thúc pha tăng trưởng sau 14 ngày Như để trì tế bào soma tốt phải cấy chuyền liên tục thời gian chuyền vào khoảng 10 – 14 ngày - Trong thí nghiệm tái sinh tế bào soma thành hoàn chỉnh ta sử dụng môi trường có khoáng MS có bổ sung Succrose 3%(w/v), CW 10%(v/v) chất kích thích điều hoà sinh trưởng thực vật bao gồm IBA 0.1 mg/l , KIN mg/l nồng độ BA từ – 7mg/l, ứng với nghiệm thức có thành phần môi trường có bổ sung BA nồng độ 5mg/l có tỷ lệ tái sinh chồi tiêu cao - Thí nghiệm tái sinh tạo phôi soma từ tế bào soma, sử dụng môi trường có thành phần khoáng MS bổ sung Sucrose 3% (w/v), CW 20%(v/v), chất điều hoà sinh trưởng thực vật bao gồm BA 0.2 mg/l TDZ từ – mg/l , ứng với nghiệm thức có bổ sung TDZ 0.5mg/l đạt tỷ lệ tạo phôi soma cao - Thí nghiệm nhân chồi phôi, sử dụng môi trường có khoáng MS bổ sung Succrose 3% (w/v), BA có nồng đô từ 0.1 – mg/l , ứng với nghiệm thức có bổ sung BA với nồng độ 0.1 mg/l cho khả nhân chồi cao nhất, bên cạnh nghiệm thức có bổ sung BA 0.5mg/l khả tạo chồi phôi thấp chồi tiêu tạo nghiệm thức lại cứng cáp khoẻ xanh Do nên kết hợp HV Bùi Tuấn Tú Luận văn Thạc sĩ - 86 - việc sử dụng nồng độ BA để vừa tạo số chồi tiêu cao lại khoẻ cách: thời gian đầu tiến hành nhân chồi môi trường có bổ sung BA 0.1 mg/l lại dưỡng chồi môi trường có BA 0.5mg/l - Trong thí nghiệm tạo rễ cho tiêu sử dụng môi trường có thành phần khoáng MS bổ sung Succrose 3% (w/v) nghiệm thức bố trí khác biệt dựa việc sử dụng chất điều hoà sinh trưởng thực vật khác nhau: nghiệm thức thứ không bổ sung PGR, nghiệm thức thứ bổ sung thêm IAB có nồng độ 0.1mg/l, nghiệm thức thứ bổ sung NAA có nồng độ 0.1 mg/l Kết sau 45 ngày theo dõi nhận thấy nghiệm thức có bổ sung NAA 0.1mg/l cho kết tốt 5.2 Đề nghị: - Nghiên cứu làm tăng khả tạo phôi soma từ tế bào soma - Nghiên cứu để tái sinh phôi soma thành tiêu hoàn chỉnh - Tiến hành nghiên cứu qui trình kiểm tra test ELISA nguyên liệu đầu vào đầu để đảm bảo tốt cho việc tạo tiêu bệnh HV Bùi Tuấn Tú Luận văn Thạc sĩ PHỤ LỤC Thí nghiệm 1: Nghiên cứu phát sinh tế bào soma Data file: TN1 Title: TTBS Function: ANOVA-1 Data case no to 18 One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to 19 Variable (KL) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 5811790.432 1162358.086 57.739 0.0000 Within 12 241575.197 20131.266 Total 17 6053365.629 Coefficient of Variation = 8.16% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 2.00 3217.470 1608.735 12.35 100.33 3.00 6135.140 2045.047 50.91 81.92 4.00 6359.710 1589.927 25.93 70.94 3.00 2665.630 888.543 10.31 81.92 3.00 4648.870 1549.623 338.86 81.92 3.00 8281.580 2760.527 46.68 81.92 -Total 18.00 31308.400 1739.356 596.72 140.65 Within 141.88 Bartlett's test Chi-square = 25.175 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 Thí nghiệm 6: Nghiên cứu tái sinh tế bào soma Data file: FS Title: FS Function: ANOVA-1 Data case no to 15 One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to 16 Variable (FS) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 3036.933 759.233 307.797 0.0000 Within 10 24.667 2.467 Total 14 3061.600 Coefficient of Variation = 9.46% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 0.91 3.00 2.000 0.667 1.15 0.91 3.00 55.000 18.333 2.52 0.91 3.00 91.000 30.333 1.53 0.91 3.00 101.000 33.667 1.53 0.91 -Total 15.00 249.000 16.600 14.79 3.82 Within 1.57 Bartlett's test Chi-square = 24.170 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 WARNING: One or more factor levels have a variance of zero This will cause a large Chi-Square value Thí nghiệm 7: Nghiên cứu tái sinh phôi soma từ tế bào soma Data file: FS Title: FS Function: ANOVA-1 Data case no to 15 One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to 15 Variable (FS) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 1185.733 296.433 123.514 0.0000 Within 10 24.000 2.400 Total 14 1209.733 Coefficient of Variation = 12.04% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 0.89 3.00 22.000 7.333 2.08 0.89 3.00 73.000 24.333 2.08 0.89 3.00 35.000 11.667 1.53 0.89 3.00 63.000 21.000 1.00 0.89 -Total 15.00 193.000 12.867 9.30 2.40 Within 1.55 Bartlett's test Chi-square = 24.021 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 WARNING: One or more factor levels have a variance of zero This will cause a large Chi-Square value Thí nghiệm 8: Nhân chồi phôi Data file: TN8 Title: nhanchoi Function: ANOVA-1 Data case no to 12 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to 12 Variable (SLC) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 11.583 3.861 4.633 0.0368 Within 6.667 0.833 Total 11 18.250 Coefficient of Variation = 13.52% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 25.000 8.333 1.53 0.53 3.00 20.000 6.667 0.58 0.53 3.00 19.000 6.333 0.58 0.53 3.00 17.000 5.667 0.58 0.53 -Total 12.00 81.000 6.750 1.29 0.37 Within 0.91 Bartlett's test Chi-square = 2.846 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.431 Thí nghiệm 9: Nghiên cứu tạo rễ Data file: TN9 Title: rare Function: ANOVA-1 Data case no to One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to Variable (SLR) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 130.667 65.333 117.600 0.0000 Within 3.333 0.556 Total 134.000 Coefficient of Variation = 22.36% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 0.43 3.00 4.000 1.333 0.58 0.43 3.00 26.000 8.667 1.15 0.43 -Total 9.00 30.000 3.333 4.09 1.36 Within 0.75 Bartlett's test Chi-square = 21.049 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 WARNING: One or more factor levels have a variance of zero This will cause a large Chi-Square value Data file: CDR Title: cdr Function: ANOVA-1 Data case no to One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (cdr) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 62.420 31.210 425.591 0.0000 Within 0.440 0.073 Total 62.860 Coefficient of Variation = 9.13% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 0.16 3.00 19.200 6.400 0.36 0.16 3.00 7.500 2.500 0.30 0.16 -Total 9.00 26.700 2.967 2.80 0.93 Within 0.27 Bartlett's test Chi-square = 17.060 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 WARNING: One or more factor levels have a variance of zero This will cause a large Chi-Square value ... tăng sinh tế bào soma môi trường bán rắn môi trường lỏng o Nghiên cứu trình sinh trưởng phát triển tế bào soma o Nghiên cứu trình phát sinh hình thái từ tế bào soma đến phôi soma o Nghiên cứu. .. thích sinh trưởng đến khả phát sinh phôi trực tiếp từ tế bào soma o Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả phát sinh phôi qua giai đoạn phôi soma o Nghiên cứu khả nhân chồi phôi. .. dòng tiêu bệnh - Là nguồn nguyên liệu cho việc tạo hạt nhân tạo, chuyển gen 1.2.2 Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu hình thành tế bào soma từ tái sinh tế bào soma thành hoàn chỉnh tái sinh để tạo phôi