Bài giảng di truyen nst o ca

KYÕ THUAÄT DI TRUYEÀN I- NGUYÊN TẮC KỸ THUẬT CHUYỂN GEN II- BỘ CÔNG CỤ III- CÁC BƯỚC CỦA KỸ THUẬT CHUYÊN GEN IV- ỨNG DỤNG KỸ THUẬT CHUYỂN GEN I-NGUYÊN TẮC SV CHO gen VECTOR DNA TÁI TỔ HỢP CHUYỂN VÀO TB ĐÍCH BIỂU HIỆN GEN MONG MUỐN SƠ ĐỒ CHUYỂN GEN • Một số thuật ngữ: ∀ • DNA tái tổ hợp = DNA lai in vitro từ 2 DNA khác nhau (đoạn DNA người “ghép” trên DNA virus hay plasmid vi khuẩn). ∀ • Tạo dòng gene: quá trình cô lập và thu nhận nhiều bản sao của một gene hay một đoạn gene. ∀ • Dòng: một số lớn tế bào hay phân tử giống nhau sinh ra từ một tế bào hay phân tử ban đầu. ∀ • Ngân hàng (thư viện): bộ sưu tập của nhiều dòng khác nhau. ∀ • cDNA: bản sao bổ sung của mRNA (không intron, nhờ retrotranscriptase) • II. BỘ CÔNG CỤ II.1- Các loại Enzyme: enzyme giới hạn, ligase, Phosphatase alkaline, Taq polimerase… II.2- Các loại Vector: Plasmid, Phagemid, Cosmid, Nhi m s c th ễ ắ ể nhân t oạ II.1- CÁC LOẠI ENZYME II.1.1- RESTRICTASE ENZYME (Enzym cắt hạn chế) ∀ • Enzyme giới hạn • Cắt DNA sợi kép ở những vùng 4-6 cặp- base = vò trí giới hạn = trình tự thuận nghòch theo hướng 5’→ 3’ (RADAR). • • TÊN GỌI CÁC ENZYME GIỚI HẠN • Chữ đầu viết hoa: Tên giống vi khuẩn (ly trích enzyme) • Hai chữ kế không viết hoa: Tên loài VK • Chữ số La Mã: Thứ tự RE được phát hiện • Đôi khi có thêm chữ viết hoa sau tên loài VK là tên chủng • Ví dụ: Eco RI (Eco: Escherichia coli , chủng Ry13), Eco RV Bacterial genus species strain type Named (e.g., EcoRI) for bacterial genus, species, strain, and type. [...]... polymerase: - DNA polymerase: DNA polymerase I, T4 DNA polymerase,Taq polymerase, Reverse transcriptase - RNA polymerase DNA POLYMERASE ENZYME - Xúc tác sự tổng hợp DNA theo chiều 5' → 3 ‘ - Các DNA polymerase gồm: DNA polymerase I, T4 DNA polymerase, Taq polymerase, Reverse transcriptase (RT), Terminal transferase Tổng hợp DNA RNA POLYMERASE - Xúc tác sự tổng hợp RNA theo chiều 5' →3‘ - Các RNA polymerase... RNA polymerase như: SP6 RNA polymerase (có nguồn gốc từ phage xâm nhiễm Salmonella typhymurium) , T3 và T7 RNA polymerase (có nguồn gốc từ phage xâm nhiễm vi khuẩn E.coli), RIBONUCLEASE ENZYME - Ribonuclesae là nhóm enzyme phân cắt RNA - Gồm các enzyme: Ribonuclease A ( RNase A), Ribonuclease H ( RNase H), VECTOR 1- PLASMID 2- COSMID 3- PHAGEMID 4- NST NHÂN T O VECTOR Vector chuyển gen là 1 phân tử DNA... MỘT SỐ CÁCH CẮT CỦA ENZYM GIỚI HẠN - HpaI cắt thẳng - EcoRI cắt so le - HindIII cắt so le - PstI cắt so le CÁCH CẮT CỦA ENZYM GIỚI HẠN ( restriction enzyme) double stranded DNA digested DNA SẢN PHẨM CỦA CÁC ENZYME GIỚI HẠN Cohesive ends (sticky ends) COHESIVE ENDS EcoRI 5’…GAATTC…3’5’…G 3’…CTTAAG…5’3’…CTTAA AATTC…3’ G…5’ PstI 5’…CTGCAG…3’5’…CTGCA 3’…GACGTC…5’3’…G G…3’ ACGTC…5’ Blunt ends (flush ends)... trong tế b o và mang được gen cần thiết Vector cần có các đặc điểm: có các trình tự khởi đầu sự tự nhân đôi Ori, có các trình tự nhận biết (nơi cắt của RE), các trình tự điều hòa (promoter giúp phiên mã gen lạ), có các gen đánh dấu, đảm b o sự bền vững của DNA tái tổ hợp trong TB đích Gen INSULIN của người xen v o plasmid Vi khuẩn II.2.1- VECTOR LÀ PLASMID Small DNA molecule Circular DNA molecule Can... Small DNA molecule Circular DNA molecule Can be considered as a minichromosome able to self-replicate Allows antibiotic resistance • Plasmid: là những o n DNA ngắn(25kb), dạng vòng, nằm ngoài NST, tim thấy đầu tiên ở VK • Đặc điểm plasmid: có khả năng tự nhân đôi, có điểm khởi đầu Ori, có mang các gen kháng kháng sinh hay gen dùng đánh dấu • Chuyên chở o n gen có kích thước 510 kb • Thí dụ: pPR322,... Enzym cắt t o đầu dính Cohesive ends ( restriction enzyme) double stranded DNA digested DNA • II.1.2- ENZYME LIGASE • Xúc tác phản ứng nối hai đầu của 2 trình tự DNA (DNA ligase) hay RNA (RNA ligase) • Ví dụ: T4 DNA ligase Enzyme ligase Xúc tác phản ứng nối hai đầu của 2 trình tự DNA II.1.3- Enzyme Alkaline Phosphatase Xúc tác sự loại bỏ nhóm 5‘ phosphate của DNA, RNA và các nucleotide tự do II.1.4- . EcoRI cắt so le - HindIII cắt so le - PstI cắt so le ( restriction enzyme) digested DNA double stranded DNA CÁCH CẮT CỦA ENZYM GIỚI HẠN Cohesive ends. viết hoa sau tên loài VK là tên chủng • Ví dụ: Eco RI (Eco: Escherichia coli , chủng Ry13), Eco RV Bacterial genus species strain type Named (e.g., EcoRI)