C¸c tµi liÖu viÖn dÉn sau lµ rÊt cÇn thiÕt cho viÖc ¸p dông tiªu chuÈn... Gi÷ mÉu trong b×nh thuû..[r]
(1)TCVN T I ª U C H U È N V I Ö T N A M
TCVN 7408 : 2004 EN 1784 : 1996
Xuất lần
Thực phẩm Phát thực phẩm chiếu xạ
đối với loại thực phẩm có chứa chất bộo
Phân tích hydrocacbon sắc ký khí
Foodstuffs − Detection of irradiated food containing fat − Gas chromatographic analysis of hydrocarbons
(2)(3)TCVN 7408 : 2004
3
Lời nói đầu
TCVN 7408 : 2004 hoàn toàn tơng đơng với EN 1784 : 1996;
TCVN 7408 : 2004 TiÓu ban kü thuËt TCVN/TC/F5/SC1
(4)(5)TCVN 7408 : 2004
5
T I ª u c h u È n v I Ö t n a m tcvn 7408 : 2004
Xuất lần 1
Thc phm Phát thực phẩm chiếu xạ loại
thùc phÈm cã chøa chÊt bÐo − Ph©n tÝch hydrocacbon
b»ng s¾c ký khÝ
Foodstuffs − Detection of irradiated food containing fat − Gas chromatographic analysis of hydrocarbons
1 Phạm vi áp dụng
Tiờu chun ny qui định ph−ơng pháp phát thực phẩm chiếu xạ loại thực phẩm có chứa chất béo Ph−ơng pháp dùng sắc ký khí (GC) để phát hydrocacbon (HC) đ−ợc tạo xạ Ph−ơng pháp thử nghiệm thành công phép thử liên phịng thí nghiệm thịt gà, thịt lợn thịt bò nguyên liệu [1] đến [4] nh− thử nghiệm phomát Camembe, lê tàu, đu đủ xồi [5], [6]
2 Tµi liƯu viÖn dÉn
Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm ban hành áp dụng phiên đ−ợc nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm ban hành áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi
TCVN 4851– 89 (ISO 3696 : 1987), N−ớc dùng để phân tích phịng thí nghiệm Yêu cầu kỹ thuật ph−ơng pháp thử
3 Nguyên tắc
Trong sut quỏ trỡnh chiu x, tr−ớc tiên liên kết hoá học bị phá vỡ xảy phản ứng Trong axit béo nửa triglyxerit, vết gãy xuất chủ yếu vị trí α β nhóm cacbonyl, tạo Cn−1 HC
1)
vµ Cn−2:1 HC 2)
t−ơng ứng Để dự đoán sản phẩm phân giải chiếu xạ, cần phải biết thành phần axit béo mẫu (xem bảng A.1 A.2)
1) C
n−1 : HC có nguyên tử cacbon axit béo gốc 2) C
(6)TCVN 7408 : 2004
Sử dụng axit béo đ−ợc tách khỏi mẫu cách đun nóng chảy chiết dung môi để phát HC Dùng phép sắc ký hấp thụ tr−ớc tách sắc ký khí để thu lấy phần HC phát detectơ ion hoá lửa (FID) đo quang phổ khối (MS) [7] đến [12]
Cách khác, HC đ−ợc phát sắc ký khí lỏng GC kết hợp với sắc khí khí (LC−GC) [13] đến [15]
4 Thuèc thử
4.1 Yêu cầu chung
Tt thuốc thử vật liệu sử dụng phải đạt chất l−ợng tinh khiết phân tích, độ tinh khiết chúng đ−ợc kiểm tra th−ờng xuyên phân tích cácmẫu trắng, vàsử dụng n−ớc có chất l−ợng cấp hạng TCVN 4851 − 89 (ISO 3696 :1987)
4.2 Natri sunfat, khan, đ−ợc nung nhiệt độ 650
C
4.3 Florisil 3)
, cỡ từ 150 àm đến 250 àm (60 mesh đến 100 mesh) khử hoạt tính cách thêm n−ớc Nung nhiệt độ 550
C để qua đêm bảo quản vật chứa có nắp đậy kín khí Nếu ch−a đ−ợc sử dụng ngày tiếp, đốt Florisil nhiệt độ 130
C để nguội bình hút ẩm (5.10), tr−ớc cho phần n−ớc vào 100 phần chất hấp thụ tính theo khối l−ợng để khử hoạt tính Lắc hỗn hợp 20 phút bảo quản vật chứa có nắp đậy từ 10 đến 12 để cân Sử dụng chất hấp thụ khử hoạt tính đ−ợc bảo quản tiếp ngày vật chứa có nắp đậy, sau đốt lại đến 130
C khử hoạt tính lại cách thêm nớc nh mô tả
4.4 n - Pentan.
4.5 n - Hexan4)
(7)TCVN 7408 : 2004
7
4.10 Dung dịch tiêu chuẩn HC, có nồng độ khoảng từ àg/ml đến àg/ml đ−ợc chuẩn bị cách hoà tan chất sau đây:
1-®o®exen (tuú chän): 1-12:1;
n-tri®ecan (tuú chän): 13:0;
1-tetra®exen: 1-14:1;
n-penta®ecan: 15:0;
n-hexa®ecan (tuú chän): 16:0;
1-hexa®exen: 1-16:1
1,7-hexa®ecadien5): 1,7-16:2;
n-hepta®ecan: 17:0;
8-hepta®exen5)
: 8-17:1;
n-octa®ecan (tuú chän): 18:0;
1-octađexen (tuỳ chọn): 1-18:1; sẵn có:
1,7,10-hexa®ecatrien: 1,7,10-16:3;
6,9-hepta®ecan®ien: 6,9-17:2;
trong dung môi (n-pentan, n-hexan isooctan), nh chất chuÈn
4.11 Dung dịch n-Eicosan (dung dịch chuẩn nội), có nồng độ dung mơi khoảng từ àg/ml đến àg/ml (n-pentan, n-hexan hoặc isooctan)
5 ThiÕt bÞ, dơng
Sử dụng thiết bị, dụng cụ phịng thử nghiệm thơng th−ờng đặc biệt loại sau:
5.1 Máy trộn đồng hố điện
5.2 M¸y li tâm, có rôto quay ống ly tâm thích hợp, tạo lực hớng tâm 900 g đầu ống
5.3 Ni cỏch thuỷ, trì đ−ợc nhiệt độ 50
C +
C
(8)TCVN 7408 : 2004
5.4 Thiết bị Soxhlet, có bình cầu đáy trịn dung tích 250 ml chiết 100 ml
5.5 èng chiÕt xenluloza, vÝ dô 25 mm x 100 mm
5.6 Thiết bị đối l−u, bình cầu dung tích 250 ml có ng−ng
5.7 ống đong chia độ, có nắp đậy, ví dụ: dung tích 100 ml
5.8 ống thuỷ tinh đựng mẫu đậy kín đ−ợc, ví dụ: dung tích 10 ml 5.9 Lị nung, trì đ−ợc nhiệt độ 650
C
5.10 B×nh hót Èm
5.11 ống sắc ký, thuỷ tinh, có chiều dài từ 200 mm đến 300 mm đ−ờng kính 20 mm, đ−ợc
®Ëy b»ng nắp polyterafluoroetylen (PTFE) khớp nối thuỷ tinh mài
5.12 Phễu nhỏ giọt đ−ợc chia độ, ví dụ: dung tích 100 ml có bù áp suất
5.13 B×nh cÇu, vÝ dơ dung tÝch 100 ml
5.14 ống thử đáy hình tam giác đ−ợc chia độ, ví dụ: dung tích 10 ml 5.15 Bình định mức bình sắc ký khí, ví dụ: dung tích ml
5.16 Bộ cất quay, có bình làm bay nồi cách thuỷ kiểm sốt đ−ợc nhiệt độ 45
C
5.17 Thiết bị,đểcơ dung dịch d−ới dịng khí nitơ
5.18 ThiÕt bị sắc ký khí (GC), đợc gắn với detectơ ion hoá lửa (FID) quang phổ khối (MS)
5.19 Cột mao dẫn, có tính thích hợp (xem phô lôc B)
6 Kü thuËt lÊy mÉu
(9)TCVN 7408 : 2004
9 Chuẩn bị thuốc thử trắng cho dãy phân tích Các tạp chất th−ờng gặp HC bão hoà, đ−ợc phát đặc biệt Florisil, dung môi, giấy lọc ống chiết (đối với cách chiết thiết bị Soxhlet) Để loại bỏ tạp chất này, cần rửa giấy lọc ống chiết dung mơi khơng cịn phát thấy tạp chất Cô đặc dung dịch dung mơi trắng tr−ớc phân tích nhiễm bẩn chúng Không sử dụng dụng cụ chất dẻo để phân tích Chỉ sử dụng dụng cụ thuỷ tinh
7.2 ChiÕt chÊt bÐo tõ mẫu thịt 7.2.1 Yêu cầu chung
Thái mẫu thành miếng (thịt gà, thịt bò thịt lợn) đồng hoá chúng thiết bị trộn (5.1) Có thể sử dụng ph−ơng pháp chiết d−ới ph−ơng pháp cụ thể đ−ợc sử dụng không ảnh h−ởng đến phân loi
7.2.2 Chiết cách làm nóng chảy
Qui trình đặc biệt thích hợp mẫu có hàm l−ợng chất béo cao (thịt gà, thịt lợn) Các nguy bị nhiễm bẩn (7.1) đ−ợc coi thấp
Sau đồng hoá mẫu (7.2.1), đặt l−ợng thích hợp (xem 7.5) (d−ới 50 g, tuỳ thuộc vào hàm l−ợng chất béo) vào ống ly tâm thuỷ tinh 100 ml (5.2) đun nồi cách thuỷ (5.3) nhiệt độ 50
C Việc tách pha đ−ợc thực dễ dàng cách thêm l−ợng nhỏ (ví dụ từ ml đến ml) n−ớc giai đoạn Thỉnh thoảng khuấy đũa thuỷ tinh, nhìn thấy pha chất béo đ−ợc tách hồn tồn
Để tách pha, ly tâm 10 phút dịch đồng hoá đ−ợc gia nhiệt 900 g, sau dùng pipet Pasteur để lấy lớp chất béo phía trên, ý khơng để lẫn pha n−ớc (mặt khác cần phải ly tâm mẫu lần nữa) Nếu l−ợng chất béo chiết đ−ợc thấp, sử dụng đũa thuỷ tinh làm tơi pha rắn (thịt), lặp lại trình gia nhiệt ly tâm nh− mô tả
7.2.3 ChiÕt b»ng n-Pentan/2-propanol
Đồng hoá phần mẫu đ−ợc thái (7.2.1) (d−ới 100 g, tuỳ thuộc vào hàm l−ợng chất béo) hỗn hợp n-pentan/2-propanol (3+2 phần theo thể tích) trộn, chuyển chất đồng hố sang ống ly tâm thuỷ tinh 100 ml (5.2) ly tâm 10 phút 900 g Thu lấy pha chất béo rõ phía và, cần, chiết l−ợng cịn sót lại lần sử dụng phần ba l−ợng dung môi đ−ợc lấy tr−ớc
(10)TCVN 7408 : 2004
ít giờ, có lắc Lọc để loại bỏ natri sunfat (4.2) loại bỏ hoàn toàn dung môi cất quay nhiệt độ không 45
C
7.2.4 ChiÕt thiÕt bÞ Soxhlet
Cân 10 g natri sunfat (4.2) cho vào ống chiết (5.5) Trộn khoảng 20 g mẫu đ−ợc trộn kỹ mẫu đồng hoá (7.2.1) với 10 g natri sunfat cho vào ống chiết (trong tr−ờng hợp mẫu có hàm l−ợng n−ớc cao l−ợng natri sunfat phải đ−ợc tăng lên để hút hết n−ớc)
Rót 100 ml dung mơi (n-hexan n-pentan) vào bình cầu 250 ml (5.4), 40 ml dung môi vào chiết (5.4) Đối l−u nhẹ vòng Tháo phận gia nhiệt chiết gần đầy dung môi Tháo ống chiết dung môi chiết Chuyển dung môi bình cầu sang ống đong chia độ có nắp đậy (5.7) pha lỗng dung mơi đến thể tích định tr−ớc Thêm khoảng g đến 10 g natri sunfat (4.2) đậy nắp ống đong, khuấy nhẹ để yên cho natri sunfat lắng xuống
7.2.5 Chiết n-hexan d−ới dòng đối l−u
Trộn 20 g mẫu đ−ợc đồng hoá (7.2.1) với 20 g natri sunfat (4.2) Đối với mẫu có hàm l−ợng n−ớc cao, tăng l−ợng natri sunfat để hút hết n−ớc Chuyển hỗn hợp sang bình cầu 250 ml đối l−u 100 ml n-hexan (4.5) (5.6) Thêm g natri sunfat, khuấy nhẹ sau 15 phút lọc dung dịch qua giấy lọc Rửa bình cầu natri sunfat lần 25 ml n-hexan Thu lấy dung dịch lọc loại n-hexan cất quay đến thể tích nhỏ 100 ml Chuyển dung dịch sang ống đong chia độ có nắp đậy (5.7) pha lỗng đến thể tích định (ví dụ 50 ml đến 100 ml) cách thêm n-hexan Thêm khoảng g đến 10 g natri sunfat, đậy nắp ống đong, lắc nhẹ để yên nhiệt độ phòng qua đêm
7.3 ChiÕt chÊt bÐo tõ mẫu phomát 7.3.1 Đồng hoá
7.3.1.1 Phom¸t Camembe