Nếu giấy lọc quá ướt sẽ cản trở khuẩn lạc tiếp xúc với không khí.. nên chuy ển m àu ch ậm, tạo n ên âm tính gi ả...[r]
(1)GIÁO TRÌNH SINH HỌC
(2)CÁC ĐẶC ĐIỂM SINH HÓA CẦU KHUẨN – Phần 1
3.1 Xét nghiệm oxidaza
Mục đích: phân biệt nhóm vi khuản dựa hoạt tính cytochrom oxidaza
Pha dung dịch Tetramethyl-p-phenylen diamin dihydrochlorid (TPPDD)
1% nước, bảo quản lọ màu tối C, sử dụng tuần
Đặt miếng giấy lọc nắp hộp Petri sạch, nhỏ dung dịch TPPDD
1% lên miếng giấy lọc cho vừa đủ ẩm, không để ướt
Dùng que cấy có đầu que làm sợi platin hay dùng đũa thủy tinh
(không dùng đầu que cấy sợi kim loại sắt, niken ) lấy vi khuẩn hoạt hố (18-24 giờ) bơi lên miếng giấy lọc
Sau 10 giây vi khuẩn chuyển sang màu hồng tức có oxydaza
dương tính; sau 60 giây chuyển màu oxydaza âm tính
Chú ý: dung dịch tự chuyển sang màu hồng khơng
sử dụng Nếu giấy lọc ướt cản trở khuẩn lạc tiếp xúc với khơng khí
nên chuyển màu chậm, tạo nên âm tính giả
(3)3.2. Xét nghiệm catalaza
Mục đích: kiểm tra khả phân huỷ H2O2 vi sinh vật nhờ sản sinh
enzyme catalaza
Chuẩn bị dung dịch H2O2 nồng độ 3-10%, nhỏ giọt lên phiến kính
Dùng đầu que cấy platin lấy vi khuẩn hoạt hoá (24 giờ) trộn
vào giọt H2O2 phiến kính
Nếu thấy sủi bọt dương tính, khơng sủi bọt âm tính
Có thể nhỏ trực tiếp dung dịch H2O2 lên khuẩn lạc thạch đĩa
cho kết tương tự
Hình 3.1. Phản ứng sủi bọt tiếp xúc với dung dịch H2O2 vi khuẩn có
catalaza dương tính
3.3. Khả lên men/ơxy hóa glucoza
(4)Môi trường I:
Pepton g
NaCl g
K2HPO4 0,2 g
Glucoza 10 g
Thạch g
Dung dịch BTB 1% ml (pha cồn 95%, sau thêm nước để thành dung dịch 1%)
Nước cất 1000 ml
pH = 7,0 - 7,2
Phân môi trường vào ống nghiệm (4-5 ml), khử trùng 115 0C 20 phút
Môi trường II:
NH4H2PO4 0,5 g
K2HPO4 0,5 g
(5)Glucoza 10 g
Thạch 5-6 g
Dung dịch BTB 1% ml (pha trên)
Nước cất 1000 ml
pH = 7,0 - 7,2
Phân môi trường vào ống nghiệm khử trùng
Lấy vi khuẩn hoạt hố (18-24 h) cấy chích sâu vào mơi trường
que cấy thẳng (mỗi chủng vi khuẩn cấy vào ống) Bịt kín ống nút bơng
bằng vaselin-paraffin (lấy vaselin làm chảy ra, thêm 1/3 dầu paraffin) để
cách ly với khơng khí Ngồi lấy thêm ống không cấy vi khuẩn làm đối
chứng Theo dõi kết sau 1,2,3,7 14 ngày
Kết quả: - Nếu có ống khơng bịt kín sinh axit (chuyển màu vàng)
tức vi khuẩn thuộc dạng ơxy hóa
- Nếu ống khơng bịt ống bịt kín sinh axit (chuyển màu vàng) tức vi khuẩn thuộc dạng lên men
(6)Kết quả: phần môi trường chuyển màu nâu phản ứng IPA dương tính, khơng phản ứng âm tính
Sau nhỏ thêm thuốc thử Kovac vào quan sát Nếu mặt
thạch xuất màu đỏ đào phản ứng Indol dương tính
Hình 3.11. Ví dụ minh hoạ phản ứng Indol dương tính
Tài liệu tham khảo :
(7)2 Hans Trueper & Karl-Heinz Schleifer, 2000 Prokaryote Characterization and Identification In: Dworkin W., Falkow S., Rosenberg E., Schleifer K.-H & Stackebrandt E (ed.) The Prokaryotes: an Evolving electronic resource for the microbiological community Springer-Verlag, New York
3 Vũ Thị Minh Đức, 1998 Thực tập Vi sinh vật NXB GD, ĐHTH Hà Nội
4 Krieg N.R & Holt J.G (ed.) 1984 Bergey’s manual of systematic bacteriology Williams & Wilkins, Baltimore, USA
5 Đông Tú Châu et al.,2001, Thường kiến tế khuẩn hệ thống giám định thủ